三种脾虚模型小鼠线粒体超微结构改变的比较研究

对番泻叶泻下法、劳倦过度法和番泻叶泻下加劳倦过度法研制的脾虚小鼠在线粒体超微结构改变方面进行了比较研究.旨在探讨单因素和复合因素造模法对脾虚动物模型生物膜结构的影响.结果表明,三种脾虚小鼠模型均出现了线粒体形态的破坏,且各具特征.     

三种脾虚模型小鼠线粒体超微结构改变的比较研究

对番泻叶泻下法、劳倦过度法和番泻叶泻下加劳倦过度法研制的脾虚小鼠在线粒体超微结构改变方面进行了比较研究，旨在探讨单因素和复合因素造模法对脾虚动物模型生物膜结构的影响。结果表明，三种脾虚小鼠模型均出现了线粒体形态的破坏，且各具特征。     

外湿对造模脾虚小鼠过氧化与抗氧化影响的实验研究

目的:探讨单纯环境因素——外湿对正常小鼠和脾虚造模小鼠生物膜结构和功能改变的规律及其机制,从分子生物学角度揭示湿邪作用机体产生损伤的机理,同时探讨脾虚生湿与外湿的关系。方法:对劳倦过度加饮食失节法研制的脾虚小鼠模型、模拟潮湿环境因素研制的外湿小鼠模型及脾虚兼外湿小鼠模型在机体过氧化与抗氧化方面进行了比较研究。结果:3组模型小鼠均出现了体重的下降,丙二醛(malondialdehyde,MDA)和共轭双烯(conjugated dienes,CD)指标的升高,过氧化氢酶(Catalase,Cat)、超氧化物歧化酶(superoxid dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxide,GSH-Px)指标的下降,说明各组模型小鼠均出现了脂质过氧化损伤和抗氧化酶活性的下降。三组模型小鼠MDA、CD升高程度及Cat、SOD、GSH-Px降低程度均以脾虚兼外湿组(D组)最为明显,说明脂质过氧化损伤程度和抗氧化酶活性下降程度以D组为最。结论:外因即外湿与内因即脾虚协同作用,导致机体脂质过氧化损伤和抗氧化酶活性下降是机体发病的关键。     

党参米炒前后醇溶性浸出物、党参炔苷测定及其健脾止泻作用对比

目的测定党参米炒前后醇溶性浸出物、党参炔苷的含量及其健脾止泻作用的比较。方法按照《中国药典》方法测定党参米炒前后醇溶性浸出物,采用HPLC法测定党参米炒前后党参炔苷含量。以番泻叶泻下、番泻叶加劳倦过度2种方法复制小鼠脾虚泄泻模型,考察党参米炒前后对脾虚泄泻小鼠体质量、血常规、血清淀粉酶(AMS)、乳酸脱氢酶(LDH)和脏器指数的影响。结果党参米炒后,醇溶性浸出物含量明显降低,党参炔苷含量基本无变化。党参米炒前后,均能明显升高番泻叶致脾虚泄泻小鼠和番泻叶加劳倦过度致脾虚泄泻小鼠的体质量、AMS、LDH、脾脏和胸腺指数水平,以米炒后作用更明显。与番泻叶致脾虚泄泻模型比较,番泻叶加劳倦过度模型更能体现中医脾虚证证候,效果更优。结论党参米炒后健脾止泻作用增强,建议临床应用该药材治疗脾虚泄泻时应予以考虑。     

大黄泻下与劳倦过度单复脾虚模型免疫学研究

对大黄泻下与劳倦过度单复因素脾虚模型在免疫学方面的改变,进行了比较研究,研究结果表明大黄泻下与劳倦过度脾虚造模在特异玫瑰花结形成率、ＩｇＧ含量、Ｔ细胞亚群比例、ＩＬ－２活性、ＮＫ活性、淋巴细胞转化率八项指标上,存在着差异。劳倦过度虽较大黄泻下所致脾虚程度为轻,但却不失为一种确切有效的、便于长期施加的脾虚造模因素。同时,亦说明了复合因素在脾虚造模上占有绝对的优势。     

大黄泻下与劳倦过度单复脾虚型免疫学研究

对大黄泻下与劳倦 过度单复因素脾虚模型在免疫学方面的改变，进行了比较研究，研究结果表明大黄泻下与劳倦 过度脾虚造模在特异玫瑰花结形成率、ＩｇＧ含量、Ｔ细胞亚群比例、ＩＬ－２活性、ＮＫ活性、淋巴细胞转化率八项指标上，存在着差异。     

4种脾虚造模法的横向对比研究

[目的]通过对4种常见脾虚小鼠造模方法进行横向对比研究,评价各造模法脾虚损伤程度及其适用性。[方法]100只小鼠随机分为空白对照组(去离子水每只每天0.5 mL)、苦寒泻下组(100%番泻叶水浸液每只每日0.5 mL)、饮食失节组(喂饲甘蓝并每2日加喂猪脂1次)、劳倦过度组(每日捆尾力竭游泳1次)、利血平组(1%利血平,每日2 mL/kg,皮下注射),每组20只。持续造模10 d后,每组随机抽取10只取材,做相关指标检测,10只自然恢复10 d,通过对宏观体征、进食量、体质量及游泳时长的测定,观察各组宏观指标的稳定性。计算各组胸腺、脾脏指数,血液分析仪检测血液学指标,比色法测定血清D-木糖水平,碘-淀粉酶比色法测定血清淀粉酶活性,实时荧光定量PCR法检测相对mtDNA拷贝数及线粒体自噬相关蛋白Pink1、Parkin mRNA的表达,对各组小鼠进行线粒体功能评价。[结果]与空白对照组相比:1)苦寒泻下组、饮食失节组,利血平组宏观指标表现差异明显(P<0.05),以利血平组最为显著,指标稳定性以苦寒泻下组显著(P<0.05),差异均具有统计学意义。2)苦寒泻下组、劳倦过度组、利血平组胸腺指数明显降低(P<0.05),差异具有统计学意义,劳倦过度组变化显著;苦寒泻下组与利血平组脾脏指数明显降低(P<0.05),差异具有统计学意义,利血平组变化显著。3)利血平组和苦寒泻下组红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。4)各模型组小鼠血清D-木糖水平均降低(P<0.05),差异具有统计学意义。5)苦寒泻下组、饮食失节组、利血平组血清淀粉酶活性均有所降低(P<0.05),差异具有统计学意义,利血平组最为显著。6)苦寒泻下组、饮食失节组、劳倦过度组mtDNA拷贝数均有所降低(P<0.05),差异具有统计学意义,饮食失节组最为显著;苦寒泻下组和饮食失节组线粒体自噬相关蛋白Pink1 mRNA转录水平均有所降低(P<0.05),差异具有统计学意义;利血平组Parkin mRNA转录水平有所上升(P<0.05),差异具有统计学意义。[结论]利血平组宏观指标和理化指标变化明显,但宏观指标稳定性差,其造模法为短期造模的首选。苦寒泻下组宏观指标、理化指标及线粒体功能变化明显,宏观指标稳定性好,其造模法,适合多种脾虚指标的广泛研究使用。饮食不节组理化指标和线粒体功能变化较明显,但宏观指标表现不明显,其造模法可以作为长期造模研究的脾家损伤,更贴近临床实际的一种方法。劳倦过度造模法,可用于多因素造模法复制脾虚损伤模型进行相关研究。     

三种脾虚证模型小鼠消化吸收功能改变的比较研究

目的 对3种脾虚证模型小鼠在消化吸收方面的改变进行比较。方法 实验动物分为4组,即对照组、大黄组、力竭游泳组和劳倦过度组。观察各组小鼠一般体征、D-木糖排泄率、血清淀粉酶活性、胃排空、肠推进速度、血清胃泌素含量、脏器指数等指标的变化。结果 3种方法塑造的脾虚小鼠模型均出现了D-木糖排泄率降低、胃排空、肠推进速度加快。与对照组比较,劳倦过度组的所有指标均有显著变化,而力竭游泳组的血清淀粉酶活性、脾脏指数降低不显著,大黄组的血清胃泌素含量变化、胸腺指数变化不显著。结论 劳倦过度法塑造脾虚证动物模型各指标的变化显著,大黄泻下法和力竭游泳法变化不显著。     

两种脾虚证模型对小鼠骨骼肌形态和功能的影响

目的探讨脾虚证与骨骼肌收缩功能的关系。方法将36只ICR小鼠按体重配对原则随机分成3组,即对照组、劳倦过度组及大黄组,每组12只。其中劳倦过度组及大黄组应用大黄泻下法和力竭游泳加剥夺睡眠的方法制备两种脾虚证动物模型;采用m-ATPase酶组织化学方法测定3组小鼠趾长伸肌(extensor digitorum longus,EDL)和比目鱼肌(soleus,SOL)m-ATPase酶活性的变化,计算Ⅰ型和Ⅱ型肌纤维的比例;Power Lab系统测定EDL和SOL等长收缩和强直收缩的最大张力。结果劳倦过度组及大黄组小鼠的体重、体温与一般健康状况均明显下降;脾脏、胸腺脏器指数亦低于对照组;等长收缩最大张力和强直收缩最大张力明显下降;EDL和SOL的肌纤维横截面积减小,细胞排列松散;EDL中Ⅰ型肌纤维比例增加,Ⅱ型肌纤维比例降低,SOL中Ⅰ型和Ⅱ型肌纤维比例无变化。结论劳倦过度组及大黄组小鼠的EDL和SOL均出现明显萎缩,劳倦过度组SOL中Ⅰ型肌纤维萎缩更加明显。     

苦寒泻下两种脾虚模型的免疫学比较研究

本实验对大黄泻下与番泻叶泻下两种脾虚模型在免疫学方面的改变进行了比较研究，研究结果表明两种苦寒泻下脾虚造模在特异玫瑰花结形成率，ＩｇＧ、ＩｇＭ含量，Ｔ细胞亚群比例，ＩＬ－２活性，ＮＫ活性，淋巴细胞转化率指标上存在着明显差异。这既表明脾虚泄泻证的机理与免疫功能的下降有着极为密切的联系，又表明大黄与番泻叶两种药物在药动学和药理学上同中存异，不尽相同，且认为番泻叶是苦寒泻下脾虚造模的首选药物     

益气固表方对于肺脾气虚型免疫低下RRTIs小鼠IgA、IgG、IgM和SIgA的干预作用＊

目的 探究益气固表方对肺脾气虚型免疫低下RRTIs小鼠IgA、IgG、IgM和SIgA的干预作用，为益气固表方临床治疗小儿反复呼吸道感染提供一定的理论依据。方法 ICR小鼠腹腔注射环磷酰胺水溶液复制免疫功能低下，然后采用刨花烟熏加番泻叶颗粒灌胃建立肺脾气虚型小鼠模型。以匹多莫德为阳性药，益气固表方为治疗药干预小鼠3周，检测外周血白细胞数、血清免疫球蛋白A、G、M（Immunoglobulin A，IgA；Immunoglobulin G，IgG；Immunoglobulin M，IgM）的表达和肺组织分泌型免疫球蛋白（Secretory immunoglobulins A，SIgA）的水平。结果 益气固表方组与匹多莫德组较模型组白细胞总数降低（P < 0.05），IgA、IgG、IgM和SIgA升高（P < 0.05）。结论 益气固表方能够通过调节IgA、IgG、IgM和SIgA分泌，来提高机体免疫力，降低呼吸道感染。     

腹可安片的胃肠道药理作用

本文探讨了腹可安片对胃肠道的药理作用。结果表明:腹可安片可对抗番泻叶和大黄的致泻作用,显著减少番泻叶致泻模型及大黄致泻模型NIH小鼠的排便点数;显著延长番泻叶致泻模型及大黄致泻模型NIH小鼠粪便中炭末排出时间;还显著抑制番泻叶模型小鼠的炭末推进率;腹可安片能抑制离休肠管的自发性收缩和乙酰胆碱引起的痉挛性收缩(降低收缩的强度和蠕动频率)。腹可安片治疗急性胃肠道疾病的药理基础是止泻,抑制小肠推进作用以及抑制肠道平滑肌收缩。     

下法对脑出血大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：探讨中医下法对实验性脑出血大鼠神经凋亡细胞的保护作用。方法：雄性SD大鼠随机分为对照组、脑出血组、大黄治疗组、番泻叶治疗组,采用自体血缓慢注射法制作大鼠急性脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）模型,观察大鼠神经症状评分和脑组织病理学改变,以及大黄、番泻叶对神经细胞凋亡影响。结果：①脑出血组、大黄治疗组、番泻叶治疗组的神经症状评分较对照组大鼠显著增高（P〈0．01）;大黄治疗组、番泻叶治疗组较脑出血组显著降低（P〈0．01）;大黄治疗组较番泻叶治疗组显著降低（P〈0．05）。②病理观察结果显示：脑出血组、大黄治疗组、番泻叶治疗组脑组织均发生了不同程度的损伤,大黄治疗组、番泻叶治疗组与脑出血组比较,脑组织病理损伤减轻,正常神经元细胞数目显著增加。（3）大黄治疗组、番泻叶治疗组发生表达的TUNEL阳性细胞较脑出血组均显著减少（P〈0．05）。结论：中医下法对实验性脑出血损伤神经细胞凋亡具有神经保护作用。     

冷水束缚应激下脾虚大鼠胃黏膜H~+,K~+-ATP酶活性及mRNA的表达变化

目的观察脾虚大鼠模型在冷水束缚应激负荷下,胃黏膜损伤程度与H+,K+-ATP酶活性及基因表达的变化。方法 SD大鼠随机分为正常组、脾虚组、应激组、脾虚应激组。采用100%大黄水煎液灌胃10 d造成脾虚模型。冷水束缚应激负荷6 h后观察各组大鼠胃黏膜损伤指数,用无机磷法测定胃黏膜H+,K+-ATP酶的活性;用RT-PCR法检测胃黏膜H+,K+-ATP酶mRNA的表达。结果脾虚大鼠胃黏膜肉眼未见明显损伤,应激及脾虚应激组大鼠胃黏膜均出现点状及条索状损伤,且脾虚应激组损伤程度更为显著。脾虚组H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达率较正常组低(P均<0.05);应激及脾虚应激组H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达较正常组高(P均<0.05);且脾虚应激组大鼠H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达增高幅度有所增大。结论脾虚大鼠在冷水束缚应激状态下胃黏膜易损伤性增高,其机制之一可能与脾虚应激后胃黏膜H+,K+-ATP酶功能升高有关。     

辽参对脾虚与免疫抑制小鼠IL-4和脾细胞活性影响的比较研究

目的:比较辽宁人参对脾虚和免疫抑制小鼠IL-4和脾细胞活性的影响。方法:免疫抑制模型方法为皮下注射氢化可的松,70mg/kg,连续7天。脾虚造模方法为每只小鼠每日灌胃100%番泻叶水煎剂0.5mL,连续10天。造模后,空白组和两种模型组正常饲养;辽宁人参治疗组以辽宁人参水煎剂0.2mL ig,5g/kg,1次/d,连续14天。ELISA法检测血清IL-4含量,CCK-8法检测脾细胞活性。结果:免疫抑制模型IL-4含量下降比脾虚模型下降要明显(P<0.05)。但是辽参提高两种模型小鼠血清IL-4含量的能力无差别(P>0.05)。脾虚和免疫抑制模型组小鼠脾细胞活性较空白组均明显下降(P<0.01),两种模型无差异(P>0.05),但是辽参提高脾虚模型小鼠脾细胞活性的能力要优于免疫抑制模型(P<0.01)。结论:辽宁人参可以有效改善两种免疫低下模型所导致的血清IL-4含量和脾细胞活性的降低。     

一种肺脾两虚型慢阻肺动物模型的建立

目的:寻求建立肺脾两虚型慢性阻塞性肺病(COPB)大鼠模型的新方法。方法:用熏香烟30天联合两次气管内滴入脂多糖(LPS 2001μg/次)建立肺虚型COPD大鼠模型,并配合番泻叶泻下法建立脾虚型动物模型,从而建立肺脾两虚型COPD大鼠模型。结果:模型组动物有慢性支气管炎、阻塞性肺气肿的特征性病理改变,有肺脾两虚的症状体征表现;气道壁厚度高于正常对照组(P<0.01)。结论:烟熏法联合气管内滴入脂多糖并配合番泻叶泻下法可以成功建立肺脾两虚型COPD大鼠模型。     

结肠宁颗粒抗结肠炎作用实验研究

目的:研究结肠宁颗粒抗结肠炎的作用。方法:选用苦寒泻下的番泻叶和化学刺激物冰乙酸复制大鼠脾虚型溃疡性结肠炎模型,观察结肠宁颗粒抗溃疡性结肠炎的作用;选用大黄致脾虚型小鼠模型,观察结肠宁颗粒的益肠补脾,涩肠止泻的作用。结果:结肠宁颗粒能显著减轻脾虚型溃疡性结肠炎模型大鼠的结肠大体形态损伤、组织学损伤及体重减轻程度;延长大黄致脾虚型小鼠的排便时间、减少2 h内排黑便点数,减少脾虚模型小鼠体重减轻的程度。结论:结肠宁颗粒具有抗大鼠脾虚型溃疡性结肠炎作用,同时能改善脾虚型小鼠的症状,对结肠炎有一定的治疗作用。     

辽宁、吉林和朝鲜三地人参对脾虚小鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨辽宁、吉林和朝鲜三地人参对小鼠脾细胞凋亡的影响并对三地人参的药效进行比较。方法:将80只昆明种小鼠随机分为空白对照组、脾虚模型组、正常三地人参灌胃组和脾虚三地人参治疗组,共8组,每组10只。空白对照组灌服生理盐水;脾虚模型组及脾虚三地人参治疗组以番泻叶浸泡液灌胃建立脾虚模型,模型建立后,脾虚三地人参治疗组及正常三地人参灌胃组分别以辽宁、吉林和朝鲜三地人参煎剂灌胃。给药14天后,流式细胞仪测定各组小鼠的脾细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,正常三地人参灌胃组小鼠的脾细胞凋亡率均有不同程度的提高,但没有统计学意义(P>0.05);正常三地人参灌胃组间比较差异不显著(P>0.05);与空白对照组比较,脾虚模型组的脾细胞凋亡率明显下降,两者间有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,辽宁和吉林人参治疗组结果显著,有统计学意义(P<0.05);与模型组比较朝鲜人参治疗组治疗效果不显著,两者无统计学意义;三地人参治疗组间比较无统计学意义(P>0.05)。结论:辽宁、吉林和朝鲜三地人参对正常小鼠的脾细胞凋亡率无明显影响;脾虚状态下机体的脾细胞凋亡率降低,辽宁、吉林人参可使其提高至正常水平,朝鲜人参对其影响不显著;三地人参对脾虚小鼠脾细胞凋亡的影响相似,无产地差异。     

超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠影响的实验研究

目的：探讨超微铁皮石斛对脾虚便秘的疗效。方法：将42只实验小鼠随机分为模型组、正常组和治疗组（铁皮石斛传统剂量组、超微全量组、超微50%量组、超微25%量组）,每组7只。对模型组和治疗组大鼠采用灌胃番泻叶水煎液7d后控制饮食、饥饱失常8d的方法制备小鼠脾虚便秘模型。造模结束后,模型组和正常组灌胃无菌水,治疗组分别灌胃给药铁皮石斛传统汤剂、超微全量汤剂、超微50%量汤剂和超微25%量汤剂,共7d。观察小鼠的毛发、活力和粪便等一般特征的变化情况;分别于造模开始前、治疗开始前和治疗完成后称量小鼠体质量,比较各组小鼠经铁皮石斛治疗前后体质量变化及体质量变化率。结果：模型组脾虚便秘症状无显著改善,体质量变化和体质量变化率较正常组低,各治疗组的脾虚便秘症状均有不同程度的改善。结论：铁皮石斛传统汤剂、超微全量汤剂和超微50%量汤剂对脾虚便秘均有很好的疗效。