复方鳖甲软肝方对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞增殖的影响

目的：探讨复方鳖甲软肝方对LPS诱导的人近端肾小管上皮细胞增殖的影响。方法：由UUO大鼠制备含药血清作为药源加入离体反应系统，MTF比色法检测各组血清对LPS诱导的肾小管上皮细胞增殖的影响。结果：于24h、48h及60h，阳性药物组及复方鳖甲软肝方各组OD值均低于模型组，而阳性药物组OD值与复方鳖甲软肝方各组相比无显著差异。结论：复方鳖甲软肝方可抑制LPS诱导的肾小管上皮细胞增殖。从而延缓肾间质纤维化进程。     

复方鳖甲软肝方对LPS刺激肾小管上皮细胞MMP9／TIMP1表达的影响

目的:研究复方鳖甲软肝方对肾小管上皮细胞LPS刺激不同时段表达MMP9、TIMP1的影响。方法:制备含药血清,将5％含药血清培养基加入体外培养的肾小管上皮细胞,分别于LPS刺激 24 h及48 h采用免疫组化及Western blot方法检测各组MMP9、TIMP1的表达。结果:LPS刺激肾小管上皮细胞12 h后,细胞胞浆内MMP9活性逐渐增强;24h达到高峰;TIMP1于LPS刺激24 h逐渐增强,48 h达到高峰上。复方鳖甲软肝方降低24h时MMP9的表达,同时也降低48h时TIMP1的表达。结论:复方鳖甲软肝方含药血清能抑制细胞早期MMP9的表达,可降低MMP9早期对基膜的破坏引起的上皮细胞转化,同时又降低后期TIMP1的表达,从而促进细胞外基质的降解,其双向调节作用可能是其防治肾间质纤维化的机制之一。     

复方鳖甲软肝方对LPS刺激肾小管上皮细胞MMP9/TIMP1表达的影响

目的：研究复方鳖甲软肝方对肾小管上皮细胞LPS刺激不同时段表达MMP9、TIMP1的影响.方法：制备含药血清,将5%含药血清培养基加入体外培养的肾小管上皮细胞,分别于LPS刺激24 h及48 h采用免疫组化及Western blot方法检测各组MMP9、TIMP1的表达.结果：LPS刺激肾小管上皮细胞12 h后,细胞胞浆内MMP9活性逐渐增强;24h达到高峰;TIMP1于LPS刺激24 h逐渐增强,48 h达到高峰上.复方鳖甲软肝方降低24h时MMP9的表达,同时也降低48h时TIMP1的表达.结论：复方鳖甲软肝方含药血清能抑制细胞早期MMP9的表达,可降低MMP9早期对基膜的破坏引起的上皮细胞转化,同时又降低后期TIMP1的表达,从而促进细胞外基质的降解,其双向调节作用可能是其防治肾间质纤维化的机制之一.     

丹红软肝胶囊药物血清对肝星状细胞增殖的干预作用

目的观察丹红软肝胶囊含药血清对肝星状细胞(HSC)增殖及分泌的相关细胞因子的干预作用。方法 15只SD大鼠按随机数字法分为3组,即丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组和正常对照组,各5只,通过灌胃制备丹红软肝胶囊及复方鳖甲软肝片药物血清。将HSC-6细胞分为3组,分别加入含丹红软肝胶囊、复方鳖甲软肝片药物血清及正常小鼠血清的培养基,培养24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HSC的增殖率,收集培养上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Ⅰ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组吸光度(OD)值均低于正常血清对照组(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组HSC细胞增殖的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量与正常血清对照组比较均降低(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹红软肝胶囊可抑制活化的HSC产生TGF-β1,并对HSC分泌胶原产生抑制作用,进而抑制HSC的增殖,这可能是其抗纤维化作用机制之一。     

复方鳖甲软肝方防治大鼠肾间质纤维化作用机理的实验研究

目的:采用单侧输尿管结扎（UUO）肾间质纤维化模型,探讨复方鳖甲软肝方对肾间质纤维化大鼠血生化及肾组织病理形态学的影响。方法:将大鼠随机分为7组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方低、中、高剂量组。UUO术后4周处死大鼠,并应用HE、六胺银染色及Mallory染色,观察肾组织病理学改变。结果:模型组肾小管结构严重破坏,管腔塌陷,上皮细胞大量坏死;有些部位肾小管和间质的结构基本消失,间质中出现弥漫性细胞增殖,并广泛间质纤维化。复片鳖甲软肝方组和苯那普利组纤维化病理改变明显减轻,其中以复片鳖甲软肝方中剂量组作用明显。结论:复方鳖甲软肝方可减少炎细胞的浸润、减轻肾小管的损伤,进而延缓肾间质纤维化的病程进展。     

复方鳖甲软肝方防治大鼠肾间质纤维化作用机理的实验研究

目的：采用单侧输尿管结扎（UUO）肾间质纤维化模型，探讨复方鳖甲软肝方对肾间质纤维化大鼠血生化及肾组织病理形态学的影响。方法：将大鼠随机分为7组，正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方低、中、高剂量组。UUO术后4周处死大鼠，并应用HE、六胺银染色及Mallory染色，观察肾组织病理学改变。结果：模型组肾小管结构严重破坏，管腔塌陷，上皮细胞大量坏死；有些部位肾小管和间质的结构基本消失，间质中出现弥漫性细胞增殖，并广泛间质纤维化。复片鳖甲软肝方组和苯那普利组纤维化病理改变明显减轻，其中以复片鳖甲软肝方中剂量组作用明显。结论：复方鳖甲软肝方可减少炎细胞的浸润、减轻肾小管的损伤，进而延缓肾间质纤维化的病程进展。     

加味四逆散含药血清对HSC凋亡影响的实验研究

目的:观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响。方法:以不同浓度的加味四逆散含药血清作用于体外培养的HSC-T6细胞,分别作用12h、24h、48h后,采用流式细胞仪和TUNEL法检测加味四逆散对HSC-T6凋亡的影响。结果:(1)流式细胞仪分析结果显示:加味四逆散各浓度组、复方鳖甲软肝片组与HSC作用12h、24h、48h后,细胞凋亡与空白对照组比较均有差异(P<0.05);与鳖甲软肝片组比较,除加味四逆散低浓度组作用12h时细胞凋亡无差异外(P>0.05),其余各浓度组细胞凋亡均优于鳖甲软肝片组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)TUNEL检测表明:加味四逆散各浓度药物血清作用48h后,细胞凋亡率与空白对照组及鳖甲软肝片组药物血清比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:加味四逆散含药血清可显著促进HSC-T6凋亡,且以高剂量和作用48h最为明显。     

复方鳖甲软肝方对肺纤维化大鼠细胞外基质的影响

目的 :研究复方鳖甲软肝方对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化细胞外基质的影响。方法 :SD雄性大鼠 54只 ,分为假手术对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝方高剂量组、中、低剂量组、强的松组 ,每组 9只。除假手术对照组外其余各组大鼠气管内一次性滴注盐酸博莱霉素 ,假手术对照组大鼠气管内一次性滴注等体积的生理盐水。 28d后给药 ,复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组 ,强的松组分别灌服复方鳖甲软肝方 1.4,0 .7,0 .35g·kg^-1及强的松 0 .56mg·kg^-1,假手术对照组、模型对照组分别灌服等体积的生理盐水。观察 80d时大鼠肺组织羟脯氨酸和血清中Ⅲ (Ⅲ C) ,Ⅳ (Ⅳ C)胶原及层粘连蛋白 (LN)和透明质酸 (HA)的含量 ,同时取肺组织行HE ,Masson染色。结果 :复方鳖甲软肝方可降低肺纤维化大鼠Ⅰ ,Ⅲ胶原 ,层粘连蛋白及透明质酸含量 ,减轻肺组织纤维性增生。结论 :复方鳖甲软肝方可能是通过降低肺纤维化大鼠细胞外基质含量而发挥治疗肺纤维化作用。     

复方鳖甲软肝方防治特发性肺间质纤维化的MMPs表达

目的 研究复方鳖甲软肝方对特发性肺间质纤维化防治的MMPs表达,探讨其机理和疗效.方法 选sD雄性大鼠180只.随机分为假手术组、模型组、阳性药物时照组及复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组,共6组,每组30只.各组分别于7,14,28 d随机抽取10只大鼠,麻醉后取肺组织,MMP-2采用原位杂交及RT-PCR的方法测定.MMP-1和MMP-9采用免疫组化的方法.结果 复方鳖甲软肝方组在早期抑制MMP-9在细胞内表达上调,在中晚期抑制MMP-1在细胞内表达上调,说明两者均有抑制纤维合成的作用.MMP-2的原位杂交和RT-PCR结果一致,在模型组过度表达,在药物组表达被抑制,表明药物对IPF的形成有抑制作用,以中、小剂量组为好.结论 复方鳖甲软肝方在早期抑制MMP-9在细胞内表达上调,在中晚期抑制MMP-1在细胞内表达上调,达到抗纤维化作用;复方鳖甲软肝方通过抑制MMP-2表达发挥抗纤维化的作用.     

血清药理学与药代动力学整合模型的复方鳖甲软肝片日服用次数合理性研究

该课题通过体外观察大鼠含药血清对肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响,结合复方鳖甲软肝片中芍药苷的药物代谢动力学模型,研究复方鳖甲软肝片合理的日服用次数。大鼠每日不同次数灌胃给药,分别于给药前及第1次给药后各时间点眼眶后静脉取血,用于测定大鼠含药血清对HSC-T6增殖的影响以及大鼠血浆中芍药苷的血药浓度。综合分析时量和时效关系,制定复方鳖甲软肝片用于慢性肝炎肝纤维化的合理的日服用次数。结果表明,复方鳖甲软肝片含药血清对HSC-T6抑制的效应与芍药苷血药浓度具有良好的相关性,每日给药2次组对HSC-T6抑制的效应动力学曲线下面积(AUC)及药代动力学AUC均高于每日给药1次组和3次组。因此,复方鳖甲软肝片用于慢性肝炎肝纤维化以每日服用2次为佳。     

大黄䗪丸对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响

目的基于"特发性肺纤维化(IPF)患者存在肺络干血"假说,观察大黄?虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响,探讨其防治特发性肺纤维化的作用机制。方法正常培养并取对数生长期A549细胞,5 ng/mL的TGF-β1对其干预后,Masson染色观察上皮-间充质转化(EMT)过程;选择吡非尼酮作为阳性对照药,采用血清药理学和cck-8法观察不同浓度大黄?虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响。结果成功获取发生EMT的A549细胞;24 h,OD值从高到低依次为:空白对照组(K组)、大黄?虫丸含药血清中剂量组(Z组)、大黄?虫丸含药血清小剂量组(X组)、模型组(M组)、大黄?虫丸含药血清大剂量组(D组)、西药组(P组);48 h,OD值从高到低依次为:K组、M组、Z组、X组、P组、D组;72 h,OD值从高到低依次为:K组、M组、D组、Z组、P组、X组。结论大黄?虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖率有影响,推测大黄?虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β1诱导的EMT有关。     

十全大补汤调整肉桂剂量对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响

目的从细胞分裂周期变化角度探讨十全大补汤调整肉桂剂量促进创面修复及皮肤修复的机理。方法采用体外培养成纤维细胞,造成氧化损伤成纤维细胞模型。以血清药理学方法获取大鼠血清,用以对成纤维细胞模型的干预。并运用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MMT法）及流式细胞仪检测成纤维细胞增殖及分裂周期的变化。结果MMT法结果显示2倍肉桂组和4倍肉桂组对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞具有促进增殖的作用,与模型组比较差异显著（P〈0.01）;流式细胞术结果显示经500 μmol／L的H2O2刺激30分钟的大鼠真皮成纤维细胞中GO／G1期细胞比例显著增高,S期和G2／M期细胞比例显著降低。在药物干预24小时后,四个用药组均可降低G0／G1期细胞比例,S期和G2／M期细胞比例升高;在药物干预48小时后,除了去肉桂组以外,其余三个用药组均能使G0／G1期细胞比例降低,S期和G2／M期细胞比例升高,与模型组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）,而去肉桂组对细胞周期的影响与模型组相比无明显差异。结论十全大补汤对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞具有调控成纤维细胞周期、促进增殖的作用,而适当增加肉桂剂量可以起到增效的作用。     

复方鳖甲软肝片抑制大鼠酒精性肝纤维化作用机制研究

目的探讨复方鳖甲软肝片对实验性大鼠酒精性肝纤维化的抑制作用及机制。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、中药（复方鳖甲软肝片）治疗组和西药（安珐特）治疗组，以“酒精-吡唑-玉米油”混合液灌胃并饲以高脂饮食16周制备大鼠酒精性肝纤维化模型，给药4周后检测肝纤维化指标、肝组织病理学及肝组织中转化生长因子-β1（TGF—β1）蛋白表达变化。结果酒精性肝纤维化模型大鼠肝功能显著异常，肝纤维化明显；经4周治疗，与模型组比较，中药组及西药组血清中透明质酸（HA）含量显著下降（P〈0．01），且中药组能显著下调大鼠肝组织中TGF—β1蛋白含量。结论复方鳖甲软肝片能够有效阻止和逆转酒精性肝纤维化的进程。     

杜仲苷对炎性环境下软骨细胞的增殖和Ⅱ型胶原蛋白分泌的影响

目的：观察杜仲苷对IL-1β刺激大鼠体外软骨细胞的增殖及Ⅱ型胶原蛋白分泌的影响。方法：利用IL-1β刺激建立体外大鼠软骨细胞炎性模型,实验分为空白组、IL-1β组、10μM杜仲苷组、100μM杜仲苷组、500μM杜仲苷组、1000μM杜仲苷组;空白组加入10%FBS培养液,IL-1β组加入10ng/mL IL-1β＋10%FBS培养液,4个不同浓度杜仲苷组分别加入10μM、100μM、500μM、1000μM杜仲苷＋10ng/mL IL-1β＋10%FBS培养液,分别培养48小时,采用CCK8检测软骨细胞增殖活力及Ⅱ型胶原蛋白的分泌。结果：IL-1β组的OD值低于空白组（P〈0.05）;4个不同浓度杜仲苷组的OD值均高于IL-1β组（P〈0.05）,且存在一定的量效关系;4个不同浓度杜仲苷组的Ⅱ型胶原蛋白表达均高于IL-1β组（P〈0.05）,且存在有一定的量效关系。结论：杜仲苷可以提高体外大鼠软骨细胞炎性环境下的增殖活力,促进Ⅱ型胶原蛋白的分泌,表明杜仲苷对体外大鼠软骨细胞有一定的抗炎保护作用。     

枸杞多糖与雷公藤多苷含药血清对生精细胞Caspase3表达的影响

目的：观察枸杞多糖与雷公藤多苷含药血清对生精细胞Caspase3表达的影响。方法：将45只SD大鼠按随机分为无药血清组、雷公藤多苷血清组、雷公藤多苷与枸杞多糖混合血清组,每组各15只,灌胃给药。无药血清组予双蒸水0.5 mL·100 g-1,雷公藤多苷血清组予雷公藤多苷0.9 mg·100 g-1,雷公藤多苷与枸杞多糖混合血清组予雷公藤多苷0.9 mg·100 g-1和枸杞多糖16 mg·100 g-1,均每天1次,连续1周制备含药血清;分离生精细胞并原代培养;将细胞分为4组,分别是无药血清组、胎牛血清组、雷公藤多苷血清组、枸杞多糖与雷公藤多苷混合血清组,加各组相应血清并培养;分别在24 h、48 h后用MTT法检测细胞的增值率、用免疫细胞化学法检测Caspase3表达。结果：24 h、48 h细胞生长增值率组间比较均有显著性差异,枸杞多糖与雷公藤多苷混合血清组OD值均显著高于雷公藤多苷血清组（P〈0.05）,枸杞多糖与雷公藤多苷混合血清组生长增值率几乎接近无药血清组,差异无统计学意义（P〉0.05）;24 h时,混合血清组与FBS组OD值相差不大,差异无统计学意义（P〉0.05）,而48 h时,差异有统计学意义（P〈0.05）;各组表达位置均在支持细胞或生精细胞的胞质或胞核,Caspase3的表达强度雷公藤多苷血清组明显高于其他3组（P〈0.05）;混合血清组与无药血清组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,与FBS组比较有统计学意义（P〈0.05）;各组间比较差异较显著（P〈0.01）。结论：枸杞多糖可以下调生精细胞的Caspase3表达,从而促进生殖损伤的恢复。     

益肾散结复方及其拆方对阿霉素肾病大鼠肾脏组织的影响研究

摘 要 目的:探讨益肾散结复方及其拆方对阿霉素肾病大鼠肾脏组织的影响研究。方法:取健康清洁级SD大鼠70只，随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组、温肾益精化瘀组、滋阴益肾化瘀组、益气化瘀组及全方组。除正常对照组外，其他组建立阿霉素肾病模型。造模成功后，阳性药物对照组给予盐酸贝那普利灌胃；温肾益精化瘀组、滋阴益肾化瘀组、益气化瘀组及全方组给予相应药物连续灌胃，正常对照组与模型对照组，给予等量的0.9%氯化钠溶液灌胃，达疗程后，测定大鼠尿蛋白定量及血清中尿素氮、血肌酐、胆固醇、甘油三酯的浓度，观察电镜下肾脏组织的形态学改变。结果:与模型对照组比较，益肾散结复方全方组及拆方组均能调节脂代谢紊乱、控制蛋白尿、改善肾功能、修复肾脏组织。其中，全方组在控制蛋白尿，改善血清胆固醇、血清甘油三酯、血尿素氮、血肌酐、修复肾脏组织方面显著优于阳性药物对照组。结论:益肾散结复方全方组及拆方组均能有效调节脂代谢紊乱、控制蛋白尿、改善肾功能、修复肾脏组织，为进一步开展细胞实验奠定基础。     

复方苦豆子颗粒对高脂血症大鼠血脂及脂质过氧气化物的影响

目的观察复方苦豆子颗粒对高脂血症大鼠血脂水平的影响和抗脂质过氧化作用。方法采用喂养高脂饲料的方法复制高脂血症大鼠模型,随机分组,实验10周后测定血脂水平、动脉粥样硬化脂数(AI)、血清MDA及肝组织中TC、MDA的含量。结果与高脂模型相比,复方苦豆子颗粒组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平和动脉粥样硬化指数(AI)明显降低(P<0.05~0.01),血清MDA含量显著降低(P<0.01),且呈剂量依赖性;大剂量组可明显升高HDL-C含量(P<0.05);复方苦豆子颗粒各剂量组肝组织TC无显著性差异(P<0.05),中剂量可明显降低肝组织MDA水平(P<0.05),小剂量组和大剂量组无显著性差异(P>0.05)。结论复方苦豆子颗粒具有明显的调血脂、抑制脂质过氧化物MDA形成的作用。