抗痛风胶囊对急性痛风性关节炎大鼠的抗炎作用及机制探讨

目的:观察抗痛风胶囊对急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)大鼠的抗炎作用及其作用机制。方法:大鼠足踝关节注射尿酸钠悬液诱导AGA,容积法检测足踝关节肿胀程度,ELISA法测定血清及关节液中白介素-1β(IL-1β)含量,免疫组织化学和图像分析观测踝关节软骨组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果:尿酸钠混悬液注射后1～5 d,与正常组比较,AGA模型大鼠足踝关节肿胀度明显增高;与模型组比较,抗痛风胶囊低、高剂量(0.3,1.2 g.kg-1)与阳性药秋水仙碱(8×10-4g.kg-1)组大鼠足踝关节肿胀度显著降低(P<0.05和P<0.01);第5天,抗痛风胶囊高剂量与秋水仙碱组大鼠足踝关节肿胀度已降低至正常组水平。模型组大鼠足踝关节液IL-1β水平明显高于正常组,抗痛风胶囊和秋水仙碱组大鼠足踝关节液IL-1β水平均显著低于模型组。模型组大鼠踝关节软骨组织TNF-α蛋白表达水平增高(P<0.01);抗痛风胶囊组踝关节软骨组织TNF-α蛋白表达水平明显降低,与正常组无显著差异。结论:抗痛风胶囊治疗急性痛风性关节炎的作用机制可能与降低关节组织局部的炎症因子IL-1β和TNF-α水平有关。     

大豆异黄酮对膝骨关节炎大鼠关节软骨组织的保护作用

目的 研究大豆异黄酮对膝骨关节炎大鼠关节软骨组织的保护作用及机制。方法 大鼠关节腔内注射木瓜蛋白酶法建立膝骨关节炎模型,并随机分为模型组及大豆异黄酮低、中、高剂量(100、200、400 mg/kg)组,另设空白组,每组15只。各组灌胃给予相应剂量药物,每天1次,28 d后检测足肿胀度、痛阈值、关节活动度、滑膜厚度,HE及番红固绿染色观察软骨组织病理变化并进行Mankin评分,ELISA法检测血清基质金属蛋白酶(MMPs)及炎症因子水平,RT-qPCR、Western blot法检测软骨组织NF-κB p65、IκB-α mRNA及蛋白表达。结果 与模型组比较,大豆异黄酮组大鼠足肿胀度,滑膜厚度,Mankin评分,血清MMP-1、MMP-3、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,软骨组织NF-κB p65 mRNA及p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),压痛阈值、关节活动度、软骨组织IκB-α mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01)。结论 大豆异黄酮对膝骨关节炎大鼠关节软骨组织具有保护作用,该作用...     

芪桂痛风片对痛风性关节炎模型的抗炎作用研究

目的:观察芪桂痛风片对痛风性关节炎大鼠、肉芽肿大鼠、耳肿胀小鼠的抗炎作用。方法:灌胃给予芪桂痛风片5 d后,采用大鼠右后踝关节腔内注射尿酸钠混悬液,制备急性痛风性关节炎模型,测量造模后1h、3h、5h的大鼠足容积,并对踝关节组织进行病理组织学检查;同时采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型、纽扣植入引起的大鼠肉芽增生模型,观察芪桂痛风片的抗炎作用。结果:芪桂痛风片3个剂量组均能明显降低急性痛风性关节炎大鼠给药后3h、5h的足肿胀度和肿胀率,病理组织学检查显示,给药后关节组织水肿和炎性细胞浸润、变性坏死有不同程度的减轻,8.10g/kg组病变评分明显低于模型组。芪桂痛风片8.10g/kg、4.05g/kg组肉芽组织湿重、干重均比模型组明显减轻。芪桂痛风片11.70g/kg、5.85g/kg组小鼠耳廓肿胀度及肿胀率与模型组比较明显降低。结论:芪桂痛风片可降低急性关节炎模型大鼠的关节肿胀,减轻关节病理变化的程度,抑制肉芽组织生长、小鼠耳廓肿胀,具有较强的抗炎作用。芪桂痛风片对大鼠的无效剂量是2.03g/kg,有效剂量是4.05g/kg;对小鼠无效剂量是2.93g/kg,有效剂量是5.85g/kg。     

豨桐丸对大鼠痛风性关节炎的影响及机制

目的:观察豨桐丸对尿酸钠晶体诱导的大鼠痛风性关节炎的影响及其药理机制。方法:分别给予大鼠豨桐丸(200,400,800 mg·kg-1)及秋水仙碱(4 mg·kg-1)灌胃用药7 d。第5天大鼠踝关节腔注射尿酸钠晶体诱导痛风性关节炎模型。检测大鼠足肿胀和步态评分,苏木素-伊红(HE)染色法检测关节组织学评分,抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测破骨细胞形成,免疫组化法分析关节组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析NLRP3炎性体表达。结果:注射尿酸钠晶体导致了大鼠明显的足肿胀,并使步态评分和组织学评分均明显增高,关节组织中的破骨细胞数量及TNF-α,IL-1β,IL-6和NLRP3炎性体表达也都明显增加((P0.05,P0.01)。给予400,800 mg·kg-1豨桐丸治疗后,大鼠足肿胀显著减轻,步态评分和组织学评分均显著减少,同时关节组织中的破骨细胞数量及TNF-α,IL-1β,IL-6和NLRP3炎性体表达也都显著降低(P0.05,P0.01)。结论:豨桐丸可抑制尿酸钠晶体诱导的大鼠痛风性关节炎的发展,其机制与抑制炎性介质的表达密切相关。     

电针干预佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜细胞凋亡的MMP-3、MMP-9分子调节机制

目的观察电针干预对佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜细胞凋亡和相关蛋白基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法32只雄性SD大鼠被随机分为生理盐水组、模型组、电针干预组和假电针干预组,每组8只。生理盐水组大鼠在双侧足垫部注射模拟造模,其余大鼠用弗氏完全佐剂在双侧足垫部注射造模。电针干预组大鼠予以电针干预。假电针干预组予以假电针刺激处理。HE染色观察模型大鼠踝关节炎症进展情况,Tunnel法检测模型大鼠踝关节滑膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测踝关节滑膜的MMP-3、MMP-9的mRNA表达,Western blot检测踝关节滑膜的MMP-3、MMP-9的蛋白表达。结果HE染色显示,电针干预组大鼠的关节炎症显著轻于模型组。Tunnel法检测,电针干预可以促进关节炎大鼠的滑膜细胞凋亡。RT-PCR和Western blot检测结果显示,电针干预可以显著降低关节炎大鼠踝关节滑膜组织中的MMP-3、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论电针干预可以显著减轻佐剂性关节炎大鼠的关节炎症和增殖的滑膜细胞数量,其分子机制可能和电针降低局部的MMP-3、MMP-9蛋白的表达有关。     

艾灸对佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜组织低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察艾灸对佐剂性关节炎(AA)大鼠踝关节滑膜组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响,探讨艾灸抑制类风湿关节炎关节滑膜血管新生、改善关节症状的作用机制。方法:60只健康成年雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组和甲氨蝶呤组,每组15只。采用右后足跖皮下注射弗氏完全佐剂法制备AA大鼠模型。艾灸组予双侧“足三里”“关元”和“阿是穴”艾灸治疗,每次20 min,每日1次,连续干预3周;甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤(0.35 mg/kg)灌胃给药,每周2次,连续干预3周。采用足趾容积测量仪检测大鼠足跖容积;HE染色法观察大鼠踝关节滑膜组织病理情况;免疫组织化学法和Western blot法检测大鼠踝关节滑膜组织HIF-1α、VEGF蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠的足趾容积和踝关节滑膜组织HIF-1α、VEGF蛋白表达均明显升高(P<0.01),滑膜组织出现明显增生且有大量新生血管形成;与模型组比较,艾灸组和甲氨蝶呤组大鼠的足趾容积和踝关节滑膜组织HIF-1α、VEGF蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),滑...     

电针对大鼠胶原诱导型关节炎的缓解效应及作用机制

目的:观察电针对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎性反应及骨质破坏的缓解效应,探讨针刺防治类风湿性关节炎的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,每组10只。采用大鼠尾根部多点皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂法诱导建立CIA模型。电针组取双侧"足三里""三阴交"穴进行电针干预,疏密波,2 Hz/100 Hz,强度1 mA,30 min/次,1次/d,连续28 d。每周监测各组大鼠关节炎指数和足容积;干预结束后通过HE染色、番红O-固绿染色和酒石酸酸性磷酸酶染色观察大鼠踝关节病理学改变;酶联免疫吸附法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)含量;Western blot法检测大鼠滑膜组织中基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3、MMP-13和核因子κB受体激活因子配体(RANKL)蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠足容积增大、关节炎指数升高(P0.01);踝关节滑膜增生,伴有大量炎性细胞浸润,关节软骨与骨部分损毁,破骨细胞数量增加(P0.01);血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量升高(P0.05);膝关节滑膜组织中MMP-1、MMP-3、MMP-13及RANKL蛋白表达上调(P0.01,P0.05)。与模型组比较,电针组大鼠足容积减小、关节炎指数降低(P0.05);踝关节面较完整,滑膜组织增生不明显,炎性细胞浸润减少,软骨层较厚,破骨细胞数量减少(P0.01);血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量降低(P0.05);膝关节滑膜组织中MMP-1、MMP-3、MMP-13及RANKL蛋白表达下调(P0.01,P0.05)。结论:电针干预"足三里""三阴交"穴对CIA大鼠关节炎性反应与骨质破坏具有较好的缓解效应,该作用可能是通过抑制滑膜细胞分泌炎性因子和骨破坏相关蛋白来实现的。     

五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠Jak2/Stat3信号通路的调控作用

目的:研究五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠Jak2/Stat3信号通路的调控作用,探讨其对AA大鼠发挥治疗作用的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊0. 8 g/kg、1. 6 g/kg、3. 2 g/kg剂量组和雷公藤多甙片40 mg/kg组,复制AA大鼠模型。造模后第12天,灌胃给予相应药物,1次/d,共12天。HE染色观察踝关节软骨损伤情况,ELISA法测定血清IL-6和IL-10的含量,免疫组化和Western blot技术检测p-Jak2、Jak2、p-Stat3、Stat3蛋白的表达,RT-PCR检测Jak2、Stat3 mRNA的变化。结果:与空白组比较,模型组大鼠足肿胀度增加,关节病理损伤明显,血清IL-6含量增高,IL-10含量降低,关节滑膜中p-Jak2、p-Stat3蛋白和基因均上调。相比于模型组,五味温通除痹胶囊各剂量不仅可改善AA大鼠关节软骨损伤程度,降低血清IL-6含量,增加IL-10的水平,还可下调Jak2、Stat3 mRNA和p-Jak2、p-Stat3蛋白的表达。结论:抑制Jak2/Stat3通路的激活,降低炎症反应,是五味温通除痹胶囊治疗RA的可能作用机制。     

痛风饮对实验性急性痛风性关节炎大鼠抗炎镇痛作用机制的研究

目的研究民间验方痛风饮1付对急性痛风性关节炎的抗炎镇痛作用机制。方法通过对痛风模型大鼠应用痛风饮观察急性痛风性关节炎大鼠患肢压力及步态积分;踝周径变化值;检测白细胞,中性粒细胞,血清IL-1β、IL-6水平;以及右踝关节组织HE染色。结果痛风饮能明显减轻实验性大鼠踝关节肿胀程度,以及患肢站立及行走时压力积分,能降低白细胞、中性粒细胞及IL-1β、IL-6水平,具有改善致炎关节滑膜细胞增生和减轻炎细胞浸润的作用。结论痛风饮具有抗炎镇痛作用。     

秦艽寒热不同配伍药对对风湿热痹类风湿关节炎大鼠MMP-3、TIMP-1表达及踝关节病理学改变的影响

目的研究秦艽寒热不同配伍药对对风湿热痹类风湿关节炎(RA)大鼠基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,并观察其踝关节病理学改变,探讨药性-病证-疗效之间的关系及中药治疗RA的机制。方法将80只健康SD大鼠随机分为对照组、Ⅱ型胶原(CⅡ)组、病证模型组、雷公藤多苷组、秦艽组、秦艽-威灵仙(秦-威)组、秦艽-桑寄生(秦-桑)组和秦艽-防己(秦-防)组8组,采用CⅡ诱导加风湿热环境因素刺激制备风湿热痹RA大鼠模型,各给药组ig给予制备的对应药液。实验中每3天测1次足跖厚度,计算足跖肿胀度;实验前期、中期、后期各进行1次关节炎指数(AI)评分。免疫组化法检测大鼠踝关节MMP-3和TIMP-1的表达,HE染色观察踝关节组织的病理学改变。结果与对照组比较,CⅡ组和病证模型组的足跖肿胀度、AI评分及MMP-3表达量均明显升高,TIMP-1表达量明显降低,CⅡ组和病证模型组大鼠关节面毛糙、破损,关节软骨破坏严重,大量肉芽组织增生,伴有大量的炎性细胞浸润和新生血管。经药物治疗后,与病证模型组比较,各给药组足跖肿胀度、AI和MMP-3表达量均有不同程度的降低,其中秦-防组降低最为显著;TIMP-1表达量均有不同程度的升高,其中秦-防组升高最为显著。HE染色结果显示,各给药组关节软骨破坏面积及破坏程度均有所减轻,炎性细胞及新生血管减少,修复纤维增多,瘢痕组织增多。结论对于风湿热痹RA,平寒相配效果优于平温、平平相配,实验结果与中医临床"疗热以寒药"的治疗原则是一致的,该配伍治疗风湿热痹RA的作用机制可能与其能够降低MMP-3表达、升高TIMP-1表达、减轻关节软骨破坏以及减少炎性细胞浸润和血管增生有关。     

甘草附子汤对大鼠骨关节炎及关节软骨蛋白质组学的影响

采用碘乙酸钠膝关节腔注射复制大鼠骨关节炎模型,探究甘草附子汤对大鼠骨关节炎防治作用及关节软骨蛋白质组的影响。将60只体质量230~250 g的SD大鼠随机分为正常组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组以及甘草附子汤高、中、低剂量组。除正常组外其余各组均进行碘乙酸钠(每侧腿给药3 mg)膝关节腔注射诱导骨关节炎模型。造模后,各给药组灌胃1个月,给药期间每周进行关节疼痛测试、关节宽度测量,观察大鼠自主行为。应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠关节灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的含量;应用苏木精-伊红(HE)染色法观察骨关节形态;应用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测关节软骨蛋白。结果显示,与模型组比较,甘草附子汤能显著改善骨关节炎大鼠的关节疼痛和关节肿胀;显著降低关节腔灌洗液中TNF-α,IL-1β,MMP-3的含量,升高TIMP-1的含量;减轻关节腔间隙变大、软骨边缘破裂粗糙、软骨层厚薄不一、软骨细胞排列紊乱等炎性病变;各组之间的蛋白进行比较后筛选出差异蛋白273个,KEGG分析发现上述差异蛋白共涉及systemic lupus erythematosus等43条信号通路,其中与骨关节炎相关的信号通路有11条。以上结果表明,甘草附子汤对骨关节炎有防治作用,其作用机制可能是通过调节骨关节炎相关信号通路的蛋白表达来完成的。     

威灵仙注射液关节腔离子导入对骨关节炎软骨和滑膜组织形态以及软骨MMP-1的影响

目的：研究威灵仙注射液关节腔离子导入对OA的软骨和滑膜组织形态和软骨MMP-1细胞凋亡的影响。方法：新西兰兔40只,除保留10只作为正常组外,余均采用木瓜蛋白酶关节腔注射复制OA模型。造模4周后,根据模型动物关节肿胀度随机分为模型组、Wlx组、Qand组。实验结束时,取模型动物关节软骨和滑膜进行病理形态学检查,同时观察软骨细胞凋亡情况。结果：威灵仙关节腔离子导入能明显降低模型动物关节软骨和滑膜的病理总积分,同时亦能明显降低软骨 MMP-1细胞的阳性表达率。结论：威灵仙关节腔离子导入可能具有抑制骨关节炎的软骨退行性改变的作用,能够延缓OA的炎症进程。     

川芎嗪对鼠骨关节炎软骨组织病理学和IL-1β表达的影响

目的：观察关节内注射川芎嗪对鼠骨关节炎（Osteoarthritis,OA）模型关节软骨组织病理学及白细胞介素-1β（IL-1β）表达的影响,探讨川芎嗪对OA的修复作用。方法：50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、透明质酸钠组、丹参组、川芎嗪组5组,每组10只,除空白组外,其余各组作左侧跟腱切除建立右膝OA模型。造模后4周,每组随机处死动物2只,以检测动物模型是否成功;剩余40只于造模后第5周开始,空白组、模型组右膝关节内注射生理盐水,透明质酸钠组、丹参组、川芎嗪组右膝关节内分别注射相应药物。于第12周末全部处死动物,取股骨外髁软骨标本,进行苏木精-伊红、Masson染色,光镜下观察其病理改变,以免疫组织化学法检测关节软骨中的IL-1β水平。结果：与模型组比较,川芎嗪组关节软骨破坏减轻,Ⅱ型胶原脱失轻微,Mankin’s评分明显改善（P〈0.01）,IL-1β的表达水平显著降低（P〈0.01）。结论：川芎嗪能明显降低OA软骨退变的程度,阻止软骨中正常Ⅱ型胶原向Ⅰ型胶原的转变,明显降低OA软骨中IL-1β的水平,具有保护和修复早期OA关节软骨的作用。     

火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎鼠关节形态及软骨LOXL2的影响

目的:探讨火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)大鼠行为学、关节形态及软骨中赖氨酰氧化酶相关蛋白2(LOXL2)影响性。方法:选择30只健康雄性大鼠,10只作为对照不作任何处理。20只大鼠建立KOA模型,成模后随机分成2组,分别予普通针刺和火针膝周密刺,1次/3 d,连续6次。观察各组大鼠Leauesne MG评分、关节软骨细胞情况,外周血及关节软骨转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、LOXL2水平变化。结果:治疗后火针组Leauesne MG评分中的局部疼痛刺激反应、步态、关节活动范围、关节肿胀度较对照组、模型组差异有统计学意义(P<0.05)。血清及关节软骨MMP-3、TGF-β1、TNF-α含量水平显著低于模型组(P<0.05),LOXL2显著高于模型组(P<0.05)。火针组电镜下软骨细胞形状规则、细胞核完整且饱满,微绒毛少量存在,内质网丰富,有散在的染色质。结论:火针膝周密刺能减轻K0A关节软骨损伤,降低炎性反应,改善软骨LOXL2水平,这可能是火针治疗KOA一个作用机制。     

青鹏软膏外用对AA大鼠滑膜血管新生的影响

目的:探讨外用藏药奇正青鹏软膏局部应用对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜血管新生及软骨破坏的影响及机制.方法:50只雄性大鼠随机抽取10只作为空白组,其余40只注射弗氏完全佐剂造模后随机分为模型组、青鹏软膏高、低剂量组(1.6,0.4 g·kg-1),将药物涂抹于右后肢踝关节周围,连续用药4周.为观察该药作用特点,本实验设置用药足与非用药足的自身对照及与模型组的对照,观察该药不同剂量对滑膜病理及血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α( HIF-1α)、基质金属蛋白酶-3( MMP-3)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.结果:青鹏软膏高、低剂量显著降低用药足滑膜血管新生的数量,与模型组及非用药足比较有显著性差异;青鹏软膏高剂量显著降低用药足VEGF,HIF-1α,iNOS的表达(P＜0.05).低剂量显著降低了用药足VEGF,iNOS的表达(P＜0.05),对用药足HIF-1α的表达有降低趋势,但与非用药足及模型组比较无显著性差异;青鹏软膏对MMP-3表达未见显著影响.结论:青鹏软膏局部外用减轻类风湿关节炎滑膜血管新生,对关节软骨有保护作用.     

内热针通过调控Bcl-2/Bax平衡改善大鼠膝骨关节炎损伤

目的:观察内热针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠的疗效并探究其相关分子机制。方法:32只大鼠随机分为常组、模型组、电疗组和治疗组4组各8例。经过3周治疗后,采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察大鼠膝关节软骨组织病理变化,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠滑膜液中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-17(interleukin-17,IL-17)的分泌水平,RT-qPCR及Western blot分别检测软骨组织中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2-Associated X(Bax)mRNA及蛋白表达水平,TUNEL染色观察各组大鼠膝骨关节中软骨细胞凋亡情况。结果:与模型组比较,内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠软骨组织的病理学变化,下调滑膜液中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-17的表达水平(P<0.01);上调软骨组织中Bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),下调Bax在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),且能显著抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡。结论:内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠的病理学变化,缓解炎症反应,抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡,这可能与其对Bcl-2/Bax平衡的调控密切相关。     

温针灸对膝骨性关节炎兔行为学及关节软骨肿瘤坏死因子-α、基质金属蛋白酶-3含量的影响

目的:观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔行为学及关节软骨中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)含量的影响,探讨温针灸治疗KOA的作用机制。方法 :将雄性日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、治疗组,每组10只。采用关节机械制动法造成KOA模型,造模后对各组兔进行Lequesne MG行为学评估。治疗组选用"内膝眼""犊鼻""血海""阳陵泉"进行温针灸干预,每次干预20min,每日1次,共干预4周。4周后再次进行行为学评估,HE染色后观察膝关节软骨病理形态变化,并采用放射免疫分析法测定各组兔膝关节软骨中TNF-α、MMP-3水平。结果:造模后模型组与治疗组行为学评分明显高于正常组,治疗前后行为学评分差值治疗组明显高于模型组(均P0.05);HE染色结果显示,模型组与正常组相比有明显炎性反应细胞聚集现象,治疗组炎性反应现象较模型组有显著改善;模型组膝关节软骨中TNF-α、MMP-3水平均明显高于正常组(均P0.05),治疗组膝关节软骨中TNF-α、MMP-3水平明显低于模型组(均P0.05)。结论:温针灸可有效治疗兔KOA并降低关节软骨中TNF-α、MMP-3水平,发挥抗炎作用可能是其起效的一个重要机制。     

基于纤溶酶途径介导的软骨细胞外基质损伤机制研究温针灸治疗膝骨性关节炎的作用机理

目的通过观察温针灸干预后膝骨性关节炎(KOA)兔关节软骨尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)因子表达的变化,探索温针灸治疗KOA的作用机制。方法将40只新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组、u PA抑制剂组,每组10只,采用右后肢石膏管型固定法制备KOA模型,空白组不予处理,模型组每天于兔架上固定15 min,温针灸组予以温针灸治疗,u PA抑制组每两日于关节腔注射u PA抑制剂稀释液1 m L/kg,干预结束后取兔关节软骨行TUNEL、RT-PCR、Western blot检测。结果 TUNEL细胞凋亡检测发现:较空白组,模型组软骨细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组及u PA抑制剂组软骨细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。RT-PCR检测结果发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);Western blot检测发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05) u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);相关性分析显示u PA与MMP-1、MMP-13均由相关关系。结论 (1)温针灸可抑制软骨细胞的过度凋亡;(2)温针灸可有效抑制软骨细胞中u PA、MMP-1、MMP-13的表达,且可通过抑制u PA的生成进而阻断MMP-1、MMP-13的活化,发挥保护关节软骨最终达到治疗KOA的作用。     

加味宣痹汤对急性痛风性关节炎大鼠TLR4/MyD88/IRAK4通路的作用机制

目的:探讨加味宣痹汤治疗急性痛风性关节炎(AGA)的效果及相关作用机制。方法:采用高尿酸血症(HUA)联合AGA的造模方法,以加味宣痹汤对照秋水仙碱作为干预手段。评测干预后各组大鼠左踝关节炎症指数、足肿胀情况;并在取材后,观察大鼠左踝关节滑膜组织形态学炎性病理情况,检测血清中尿酸(SUA)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,以及左踝关节液中TLR4、MyD88、IRAK4 mRNA表达水平。结果:治疗4次后,加味宣痹汤各剂量组大鼠炎症指数、足肿胀水平均显著低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,加味宣痹汤各剂量组大鼠血清SUA、CRP、IL-1β、TNF-α水平和关节液TLR4、MyD88、IRAK4 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),且加味宣痹汤中、高剂量组大鼠上述指标均低于秋水仙碱组(P<0.05)。HE染色病理切片显示,秋水仙碱组和加味宣痹汤各剂量组大鼠踝关节滑膜组织中炎性细胞数量和血管充血现象明显较少,其中高剂量组与正常组最接近。结论:加味宣痹汤对HUA合并AGA大鼠具有一定的抗炎、消肿、降尿酸作用,其可能是通过抑制TLR4、MyD88、IRAK4的活化,使TNF-α、IL-1β等炎症因子减少释放,从而发挥作用。     

断藤益母汤对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用及对血清IL-1β和MMP-1表达影响

目的探讨断藤益母汤对类风湿关节炎的治疗作用及可能的作用机制。方法取SPF级DBA/1雄性小鼠48只,随机分为空白对照组、模型组、甲氨蝶呤组,断藤益母汤高剂量组、断藤益母汤中剂量组、断藤益母汤低剂量组,除空白组外,其它组建立胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠模型,所有小鼠连续灌胃28 d,观察各组小鼠足肿胀度变化,记录小鼠关节炎评分,检测小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的水平,用苏木素伊红(HE)染色法观察小鼠足踝关节滑膜病理改变。结果与模型组小鼠比较,甲氨蝶呤组及断藤益母汤不同剂量组小鼠的足肿胀度均明显降低,足关节炎评分下降,病理显示用药组小鼠踝关节病理炎性细胞浸润少,滑膜增生明显减少,软骨及骨侵蚀减弱,病理评分降低(P<0.05),血清IL-1β、MMP-1炎症因子水平对比模型组明显下降(P<0.05),其中断藤益母汤高剂量组显示更好的治疗效果。结论断藤益母汤对CIA模型小鼠关节炎症有良好治疗效果,可能是与降低血清IL-1β、MMP-1的水平有关。