龟甲胶对肾阴虚大鼠抗氧化活性和Bax、Bcl-2蛋白表达的影响＊

目的 探讨龟甲胶对肾阴虚大鼠抗氧化活性及Bax（Bcl-2同源二聚体X，Bcl2-Associated X）、Bcl-2（B淋巴细胞瘤-2，B-cell lymphoma-2）蛋白表达的作用机制。方法 60只SPF级雌性SD大鼠适应性喂养3天后，随机分为正常组，模型组、给药组（龟甲胶低剂量组、龟甲胶中剂量组、龟甲胶高剂量组）和阳性（六味地黄丸）组，给药21天。除正常组外，其余大鼠通过灌胃甲状腺素建立肾阴虚大鼠病理模型；于造模同时正常组及模型组每天灌胃等体积生理盐水。给药期间，观测大鼠脏器（肝脏、肾脏）指数、体质量、肛温、饮水量和进食量的变化；运用酶联免疫（ELISA）法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、雌二醇（E2）、睾酮（T）水平；免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白表达变化；RT-qPCR（荧光定量聚合酶链式反应，Real-time quantitative PCR）法检测Bax、Bcl-2蛋白mRNA相对表达量，并进行组间比较。结果 龟甲胶各给药组均能明显缓解大鼠的阴虚状态，龟甲胶中、高剂量组能显著增加肾阴虚大鼠体质量及肝脏指数（P < 0.05，P < 0.01），龟甲胶高剂量组能升高大鼠肾脏指数（P < 0.01）；龟甲胶各剂量组均能降低肾阴虚大鼠肛温（P < 0.05，P < 0.01）。龟甲胶中、高剂量组大鼠血清中SOD、GSH-Px、E2水平升高（P < 0.05，P < 0.01），MDA含量降低（P < 0.05）；龟甲胶高剂量组大鼠血清中T含量显著升高（P < 0.05，P < 0.01）。龟甲胶低、高剂量组大鼠肾组织中Bax表达水平降低（P < 0.05）；龟甲胶高剂量组大鼠肾组织中Bcl-2表达水平显著升高（P < 0.01）。结论 龟甲胶具有传统滋阴功效，能增强阴虚状态下机体抗氧化能力，提高SOD活力、降低MDA含量；同时下调Bax以及上调Bcl-2等衰老相关因子的蛋白表达，从而延缓机体的衰老。     

川楝子配伍对一贯煎抑制荷H22小鼠肝癌细胞增殖的影响＊

目的 对比研究一贯煎，一贯煎去川楝子，川楝子对荷H22小鼠肝癌细胞增殖及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-celllymphoma/Leukemia-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞色素C（Cyt-c）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达的影响。方法 小鼠随机分为模型组，环磷酰胺（cyclophosphamide， CTX）组（50 mg·kg^-1），一贯煎组（23 g·kg^-1），一贯煎去川楝子组（21 g·kg^-1），川楝子组（0.1 g·kg^-1）。雄性KM小鼠每组10只右侧腋下皮下注射H22细胞构建肝癌荷瘤模型，CTX组造模后腹腔注射给药，隔日一次，共7次，余组造模前后14天均灌胃给药，统计各组瘤重。原位末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡；蛋白免疫印记法（Western blot）检测Bax、Bcl-2、Cyt-c、Caspase-3蛋白表达。结果 与模型组比较，CTX组，一贯煎组，一贯煎去川楝子组，川楝子组瘤重均降低（P<0.01），肝癌细胞凋亡率均升高（P<0.01），Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达均升高（P<0.05或P<0.01），CTX组、一贯煎组Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）；与一贯煎组比较，一贯煎去川楝子组、川楝子组瘤重、Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05），肝癌细胞凋亡率和Bax、Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）；与一贯煎去川楝子组比较，川楝子组肝癌细胞凋亡率，Cyt-c、Caspase-3蛋白表达均升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）。结论 一贯煎中川楝子配伍能明显增强该方抑制肝癌细胞增殖的功效，其机理可能与升高Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达，降低Bcl-2蛋白表达，进而促进肝癌细胞凋亡有关。     

桔梗皂苷D通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路抑制细胞凋亡保护急性肺损伤的机制研究＊

目的 探讨桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的保护机制。方法 35只雄性SPF级SD大鼠，随机分为假手术组、桔梗皂苷D对照组、模型组、桔梗皂苷D给药组和地塞米松组，每组7只。除假手术组和桔梗皂苷D对照组外，其余各组采用脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型。造模24 h后，牺牲大鼠并称体重及两肺重量，计算肺指数；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡并计算凋亡指数（Apoptosis Index，AI）；透射电镜下观察大鼠肺组织超微结构的改变；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3），多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP1）蛋白及活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cleaved Caspase-3），Cleaved PARP1的表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠肺指数显著升高（P < 0.01），肺组织细胞凋亡指数（AI）显著升高（P < 0.01），肺组织Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著下调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著升高（P < 0.01）；透射电镜下可见到凋亡小体，影响并改变了肺组织细胞超微结构；与模型组比较，桔梗皂苷D给药组及地塞米松组肺指数明显降低（P < 0.01），肺组织AI明显降低（P < 0.01），肺组织中Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著上调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著降低（P < 0.01）；透射电镜下，桔梗皂苷D给药组和地塞米松组肺组织细胞超微结构状态较好。结论 桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤具有保护作用，其作用机制与抑制Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路，减轻肺组织细胞凋亡密切相关。     

补肾壮督方对大鼠退变髓核组织中miR-155-5p及凋亡相关蛋白的影响

目的 观察大鼠退变椎间盘髓核组织miR-155-5p及凋亡相关蛋白表达差异，及补肾壮督方对其的影响。方法 SD雄性大鼠，采用纤维环全层针刺造模，随机分为空白对照组，模型组，低剂量中药组、中剂量中药组及高剂量中药组。中药干预4周后，TUNEL法检测退变椎间盘中髓核细胞凋亡率，qRT-PCR检测miR-155-5p及Bax、Bcl-2、Cytc mRNA的表达；Western Blot检测髓核组织中active Caspase-3，Bcl-2、Cytc及Bax蛋白表达水平。结果 模型组大鼠髓核细胞凋亡率明显增加(P < 0.05)，Cytc和Bax mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P < 0.05)，Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著下降(P < 0.05)，Bax/Bcl-2比值显著增加(P < 0.05)。中药干预后检测，髓核细胞凋亡率明显减少(P < 0.05)，Cytc和Bax mRNA及其蛋白表达量均明显下降(P < 0.05)，Bcl-2 mRNA及其蛋白显著增加(P < 0.05)，Bax/Bcl-2比值显著减小(P < 0.05)。结论 补肾壮督方可能通过减少active Caspase-3、Cytc和Bax蛋白表达，增加Bcl-2蛋白表达，抑制线粒体凋亡通路，从而改善椎间盘退变；miR-155-5p可能参与髓核细胞凋亡的线粒体凋亡通路。     

补肾养血方对卵巢早衰小鼠凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的：探讨补肾养血方对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠卵巢凋亡调节基因B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。方法：以小鼠透明带3（Zp3）为抗原,皮下多点注射免疫 BALB/c雌性小鼠,14 d后强化免疫,建立免疫性卵巢早衰模型。设补肾养血方低、中、高剂量（5.1,10.2,20.4 g·kg^-1）进行治疗,以补佳乐（戊酸雌二醇0.6 mg·kg^-1）为阳性对照,于造模后15 d开始灌胃给药1次/d,连续6周（每1周休息1 d）。放射免疫法检测小鼠血清激素水平,Western法检测卵巢组织 Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果：与空白对照组相比,模型组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达减少,Bax蛋白表达增加,（P<0.05）,模型组小鼠卵巢Bcl-2/Bax下降（P<0.01）,提示模型组卵泡Bcl-2蛋白的低表达、Bax蛋白的高表达可能加速了卵泡的凋亡,导致卵巢早衰;与模型组相比,补肾养血方高、中、低剂量组及西药组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达明显增加（P<0.01,P<0.05）,卵巢Bax蛋白的表达均减少（P<0.05）,Bcl-2/Bax明显降低（P<0.05）。结论：卵泡凋亡过快可能导致卵巢早衰,补肾养血方可能通过上调卵泡及卵巢间质Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制卵泡的过快凋亡,从而改善卵巢功能。     

天麻破壁粉、冻干粉对戊四唑诱导的惊厥大鼠海马组织GABA mRNA及蛋白表达影响

目的探讨天麻不同加工方法(普通粉、破壁粉、冻干粉)对戊四唑诱导的惊厥大鼠海马组织的神经保护作用并对普通粉、破壁粉、冻干粉的效应进行对比。方法建立戊四唑(PTZ)惊厥模型,SD大鼠随机分为正常组、模型组、天麻(普通粉、破壁粉、冻干粉)分别对应的低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0g/kg),阳性组。用苏木素伊红(HE)染色观察不同天麻加工方法对戊四唑诱导的惊厥大鼠的海马CA1病理形态学改变情况,用荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)法检测不同天麻加工方法对戊四唑诱导的惊厥海马组织GABA mRNA表达影响情况;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同天麻加工方法对戊四唑诱导的惊厥海马组织GABA蛋白表达情况。结果模型组有大量的神经细胞变性坏死,与模型组比,阳性组与天麻冻干粉高剂量组未见明显病变、治疗效果较好,天麻普通粉低、中剂量组和天麻破壁粉低剂量组的组织病变较重,显示治病疗效果欠佳,其余各组治疗效果介于之间。与正常组比较,模型组海马组织GABA mRNA和蛋白相对表达量显著下降(P0.05);与模型组比较,阳性组和天麻不同加工方法组均可显著升高海马组织GABA mRNA和蛋白相对表达量(P0.05),且天麻冻干粉及破壁粉不同程度的优于普通粉。结论天麻破壁粉、冻干粉均可以保护大鼠海马CA1组织学结构,其神经保护作用与天麻不同加工的方法及剂量相关,三种的天麻同等剂量对大鼠神经保护作用基本上呈:冻干粉破壁粉普通粉。三种不同加工方法的天麻对大鼠的神经保护作用机制与调节大鼠海马组织GABA mRNA及蛋白表达水平有关。     

天麻普通粉、破壁粉、冻干粉对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织GABA-T mRNA及蛋白表达的影响

目的:研究天麻普通粉、破壁粉、冻干粉对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织γ-氨基丁酸转氨酶(7-Aminobutyrate transaminase,GABA-T) mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨天麻破壁粉、冻干粉对神经细胞的保护作用机制,并对3种不同加工工艺的天麻的效应差异性进行对比,为合理使用不同加工工艺的天麻提供实验参考。方法:利用戊四唑惊厥模型,将SD大鼠随机分为正常组,模型组,阳性对照组,天麻(普通粉、破壁粉、冻干粉)低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 g/kg)。用荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测不同工艺的天麻对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织GABA-T mRNA表达的情况;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同工艺的天麻对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织GABA-T蛋白表达情况。结果:RT-PCR和WB检测显示,模型组大鼠海马组织GABA-T mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P0.05);与模型组比较,阳性对照组和天麻各组均可显著降低大鼠海马组织GABA-T mRNA和蛋白相对表达量(P0.05),天麻冻干粉和破壁粉抗惊厥效果不同程度优于天麻普通粉,其中冻干粉的效果优于破壁粉,破壁粉的效果优于普通粉,且在一定范围内呈量效关系。结论:天麻冻干粉和破壁粉对戊四唑诱导惊厥大鼠的神经保护作用效果强于普通粉,与加工方式有关,且呈量效关系,其作用机制可能与大鼠海马组织GABA-T mRNA及蛋白表达水平有关。     

基于PI3K/Akt信号通路研究升降通癃方中空栓对前列腺增生大鼠的影响

目的 通过观察升降通癃方中空栓对前列腺增生大鼠前列腺中双氢睾酮（DHT）的水平、及前列腺中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路相关蛋白的影响，探究升降通癃方中空栓治疗前列腺增生大鼠的机制。方法 从60只SD雄性大鼠中随机选取10只为假手术组，其余大鼠经去势后连续4周皮下注射丙酸睾丸酮造前列腺增生大鼠模型，采用随机数字表法随机分为模型组、非那雄胺（0.45 mg·kg^-1）组、升降通癃方中空栓高、中、低剂量（3.98、1.99、0.99 g·kg^-1）组，每组10只。去势7 d后，假手术组及模型组选用空白中空栓、非那雄胺组及升降通癃方中空栓组选用相应中空栓，连续肛塞直肠给药28 d。杀检大鼠，分离并称量前列腺组织，观察药物对各组大鼠前列腺指数的影响，苏木素-伊红（HE）染色前列腺组织进行病理观察，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测DHT的水平，并采用蛋白免疫印迹法检测前列腺组织PI3K/Akt信号通路蛋白及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、αB-晶状体蛋白（CRYAB）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠前列腺指数显著升高，光镜下模型组大鼠前列腺明显增生，DHT水平明显升高，CRYAB、Bcl-2、PI3K及Akt蛋白表达水平上升，Caspase-3及Bax蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，升降通癃方中空栓高剂量组大鼠前列腺指数下降（P<0.05），升降通癃方中空栓各剂量组大鼠前列腺中DHT水平、CRYAB、Bcl-2、PI3K及Akt蛋白表达水平下降，Caspase-3及Bax蛋白表达水平上升（P<0.05，P<0.01）。结论 升降通癃方中空栓可通过降低CRYAB蛋白表达，负性调控PI3K/Akt信号通路，下调DHT水平，Bcl-2、PI3K及Akt蛋白表达水平，上调Caspase-3及Bax蛋白表达水平，抑制细胞增殖和促进细胞凋亡，从而发挥对BPH的治疗作用；高剂量升降通癃方中空栓改善大鼠前列腺增生效果显著。     

通心络对高脂饮食诱导内质网应激致小鼠血管内皮细胞凋亡的保护作用＊

目的 探讨通心络（TXL）对高脂喂养小鼠肥胖模型内质网应激（ERs）相关蛋白的调节及细胞凋亡的干预作用。方法 将5-6周龄C57BL/6J小鼠随机分为低脂对照组（LFD + CMC）、模型组（HFD + CMC）和通心络组（HFD + TXL），18周后检测小鼠体重和血脂水平。制备小鼠离体肠系膜动脉血管环，进行血管张力测试，比较各组血管张力的变化。RT-PCR检测小鼠肠系膜动脉内质网应激相关因子GRP78、PERK、CHOP及凋亡相关因子Bax、Bcl-2 mRNA表达；用同型半胱氨酸（Hcy）建立细胞损伤模型，将HUVEC分为正常对照组（control group）、模型组（Hcy group，2 mmol·L^-1 Hcy）、通心络组（TXL组，200 μg·mL^-1通心络），检测各组GRP78，Caspase-3，Caspase-7，Caspase-9蛋白表达情况。结果 与LFD组比较，HFD组小鼠血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平显著升高（P < 0.01）；与HFD组比较，TXL组小鼠TC、TG、LDL-C水平显著降低（P < 0.05）；在加入去甲肾上腺素（NE）诱发最大收缩程度后，按浓度依次加入Ach，与LFD组相比，HFD组小鼠肠系膜动脉舒张功能明显受损， TXL组小鼠肠系膜动脉舒张功能较HFD组有明显改善（P < 0.01）；与HFD组相比，TXL组的GRP78、PERK、CHOP、Bax mRNA表达下调（P < 0.05），Bcl-2 mRNA表达上调（P < 0.01）；与正常对照组比较，Hcy组细胞生存活性明显降低；HUVEC细胞Caspase-3，Caspase-7， Caspase-9蛋白表达上调（P < 0.05）；与模型组比较，通心络组GRP78及凋亡相关蛋白表达下调（P < 0.05）。结论 通心络可改善肥胖小鼠血脂水平，缓解内质网应激，并通过抗凋亡途径发挥血管保护作用。     

乌灵菌粉对大鼠戊四唑点燃癫痫及点燃后记忆障碍的作用

 目的 研究乌灵菌粉对大鼠戊四唑点燃癫痫形成过程的作用和慢性癫痫诱发记忆障碍的作用及机制。方法 将SD大鼠随机分为4组：戊四唑点燃模型组（模型对照组），低剂量乌灵菌粉（0.3 g·kg^-1， ig）组，高剂量乌灵菌粉（0.6 g·kg^-1， ig）组和空白对照组。各组大鼠隔日腹腔注射亚惊厥剂量（35 mg·kg^-1）的戊四唑（空白对照组注射生理盐水），共12次。乌灵菌粉在每次注射戊四唑前0.5 h灌胃。采用穿梭箱被动回避试验测定大鼠的记忆能力，化学荧光法测定脑内组胺含量。结果 乌灵菌粉能延缓大鼠戊四唑点燃癫痫的形成过程，但不能阻断点燃的最终形成。戊四唑点燃癫痫使大鼠在穿梭箱中的被动回避时间缩短，乌灵菌粉明显逆转了这种被动回避时间的缩短。戊四唑点燃癫痫使大鼠脑内组胺含量明显下降，乌灵菌粉部分逆转了这种下降，在海马和下丘脑达到了统计学显著性意义。结论 乌灵菌粉能延缓大鼠戊四唑点燃癫痫的形成过程，改善癫痫诱发的记忆障碍，其作用可能与增强脑内组胺能神经的功能有关。     

PBNA-413对心肌缺血/再灌注损伤大鼠凋亡相关蛋白及基因表达的影响

目的:探讨拳参正丁醇提取物-413(Bistortae Rhizoma n-butyl alcohol extract,PBNA-413)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)细胞凋亡的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为5组,假手术组,MI/R模型组,PBNA-413低剂量组(0.1 mg·kg~(-1)),PBNA-413中剂量组(0.3 mg·kg~(-1)),PBNA-413高剂量组(1.0 mg·kg~(-1))。采用结扎左冠状动脉前降支40 min,恢复血流60 min,复制MI/R模型,记录肢体Ⅱ导联心电图。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9 mRNA及蛋白表达。结果:大鼠心肌缺血后,模型组大鼠心电图ST段及T波较假手术组明显升高(P0.05,P0.01),PBNA-413处理后ST段及T波降低(P0.01),以中剂量和高剂量的效果好。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织Bax,Caspase-3及Caspase-9蛋白表达升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,PBNA-413中剂量组Bax及Caspase-3和Caspase-9蛋白表达降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P0.01)。除Caspase-9外,Bax,Bcl-2和Caspase-3的基因水平出现与蛋白类似变化。结论:PBNA-413可能通过抑制细胞凋亡从而有效保护MI/R心肌。     

基于"异类相制"的雷公藤复方对小鼠精母细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨雷公藤复方单体成分对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:建立体外培养小鼠精母细胞体系,实验分为空白组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+梓醇3 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+三七总皂苷12 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+草酸铵1.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+青藤碱0.75 mg·L~(-1)组。流式细胞仪测定药物作用24 h后精母细胞凋亡率,Western blot测定精母细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况。结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,与雷公藤甲素比较有明显差异(P0.05),草酸铵和青藤碱组与雷公藤甲素组相比无明显差异;雷公藤甲素促使Bax,Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与正常比较差异显著(P0.01),雷公藤甲素配伍梓醇、三七总皂苷后Bax,Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,与雷公藤甲素比较较有明显差异(P0.05)。而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显。结论:雷公藤甲素可引起精母细胞凋亡,并通过Bax/Bcl-2,Caspase-3系统启动精母细胞凋亡。而雷公藤复方组成中其他药物组分可不同程度抑制雷公藤甲素引起的精母细胞凋亡,减轻其雄性生殖毒性。     

黄芪失笑散对急性心肌梗死大鼠Caspase-3、Bax及Bcl-2表达的影响

目的:观察不同剂量黄芪失笑散对大鼠急性心肌梗死后细胞凋亡及Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达的影响。方法:120只雄性SD大鼠随机分为5组:模型组、对照组、黄芪失笑散高剂量组(28g.kg-1.d-1)、中剂量组(14g.kg-1.d-1)、小剂量组(7g.kg-1.d-1)。连续灌胃7天后,结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型,对照组不结扎,手术后4.5h留取心脏标本,TTC染色法检测心肌梗死面积,Western blot法检测Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达量。结果:与对照组比较,黄芪失笑散组可明显减少心肌梗死面积和Caspase-3、Bax蛋白表达量,升高Bcl-2蛋白表达量,P0.01。不同剂量组间差异有统计学意义P0.05,黄芪失笑散大剂量组效果最好。结论:黄芪失笑散能够保护缺血心肌、降低心梗面积,机制与降低梗死边缘区Bax/Bcl-2比值、活化Caspase-3蛋白水平有关。     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg·L~(-1)干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L~(-1))干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6 h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析。结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg·L~(-1)干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P0.05,P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P0.05,P0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关。     

地黄饮子对脑缺血再灌注模型大鼠 Bax,Bcl-2,Caspase-3 蛋白表达的影响

目的:探讨地黄饮子对脑缺血再灌注模型大鼠Bax蛋白、Bcl-2蛋白、Caspase-3蛋白表达的影响及其保护大脑损伤的机制.方法:SD大鼠60只,随机分为6组,即假手术组、模型组、阳性药尼莫地平组(1 mg·kg-1)和地黄饮子高、中、低(32,16,8g·kg-1)剂量组,每组10只,用药7d后造模.用结扎大鼠双侧颈总动脉方法建立脑缺血再灌注模型,观察地黄饮子对大鼠脑缺血再灌注120 min后脑组织Bax蛋白、Bcl-2蛋白、Caspase-3蛋白的表达的影响.结果:模型组大鼠Bax蛋白表达升高、Bcl-2蛋白表达降低、Caspase-3蛋白表达升高,与假手术组有显著差异(P＜0.05),各药物治疗组能显著降低Bax蛋白表达、升高Bcl-2蛋白表达、降低Caspase-3蛋白表达,与模型组有显著差异(P＜0.05).结论:地黄饮子能通过下调Bax蛋白、上调Bcl-2蛋白和下调Caspase-3蛋白表达,抑制脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡,从而对脑缺血再灌注损伤起到保护作用.     

垂盆草总黄酮影响肝星状细胞凋亡的作用机制研究

目的:研究垂盆草总黄酮(SSTF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响及其作用机制。方法:将不同质量浓度的SSTF与HSC-T6细胞共培养不同时间后,MTT法检测SSTF对HSC-T6细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪Annexin-V/PI双染方法检测SSTF对HSC-T6细胞凋亡的影响;应用Western blotting和Real-time PCR方法观察药物对凋亡相关细胞因子Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白及mRNA表达的影响。结果:SSTF能显著抑制HSC-T6细胞增殖、诱导细胞凋亡,且呈剂量和时间依赖;Western blotting结果显示,SSTF通过抑制Bcl-2,促进Bax和Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡;进一步采用Real-time PCR研究发现,Bcl-2能够从mRNA水平抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3表达。结论:SSTF具有促进HSC-T6凋亡的作用,这种作用的发挥主要是通过抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3蛋白和mRNA的表达实现的。     

脑康Ⅱ号对糖尿病大鼠认知功能及海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的:探讨脑康Ⅱ号对2型糖尿病大鼠认知功能,海马CA1区Caspase-3,Bcl-2和Bax蛋白表达的影响及其治疗糖尿病认知障碍的可能作用机制.方法:高糖高脂饮食结合腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病大鼠模型,并用3种不同剂量的脑康Ⅱ号治疗4周.采用Morris水迷宫法进行行为学检测,用免疫组化法检测海马CA1区凋亡相关蛋白Caspase-3,Bcl-2和Bax的表达水平.结果:与正常对照组相比,糖尿病模型组Morris水迷宫平均逃避潜伏期和游泳距离均明显延长(P＜0.01),空间探索实验中在原平台所在象限游泳时间明显缩短(P＜0.01),表明学习记忆能力显著下降;模型组海马CA1区凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax表达增多(P＜0.01),Bcl-2表达减少(P＜0.01).经过脑康Ⅱ号各剂量组(分别含生药0.5,1.0,2.0 g·mL-1)灌胃治疗4周,糖尿病大鼠学习记忆能力显著改善(P＜0.01或P＜0.05),海马CA1区Bcl-2表达显著上调(P＜0.01或P＜0.05),Caspase-3和Bax表达明显减少(P＜0.01或P＜0.05).结论:脑康Ⅱ号对2型糖尿病大鼠脑神经细胞的保护作用可能是通过上调Bcl-2蛋白、下调Caspase-3和Bax蛋白的表达,抑制细胞凋亡而实现,进而改善2型糖尿病大鼠的学习记忆能力.     

莱菔承气汤对重症急性胰腺炎大鼠肾脏细胞凋亡的影响

[目的]探讨中药莱菔承气汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响。[方法]健康Wistar大鼠72只,随机分为空白对照组(24只)、SAP模型组(24只)和莱菔承气汤治疗组(24只)。3组大鼠均于术后6 h,12 h,24 h心脏采血,检测血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)。Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测肾脏细胞凋亡指数,RT-PCR检测肾脏组织Bax、Bcl-2 mRNA的表达。[结果]与对照组相比较,随着时间变化,SAP模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显升高(P0.01),肾脏细胞凋亡指数趋于升高,Bax mRNA表达明显升高(P0.01),Bcl-2 mRNA表达明显下降(P0.01)。与SAP模型组相比较,莱菔承气汤治疗组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降(P0.01),肾脏细胞凋亡指数下降,Bax mRNA表达明显下降(P0.01),Bcl-2 mRNA表达明显升高(P0.01)。[结论]中药莱菔承气汤可能通过调节凋亡相关基因,减少肾脏细胞凋亡以减轻肾脏病理损伤,从而改善SAP时并发的急性肾功能障碍。