木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549 凋亡和G2 周期阻滞

目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制。方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化。Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制。结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2μmol.L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组。Western blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-κB(p65)的磷酸化水平。免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡。结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性。     

莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法体外培养肺腺癌细胞A549,MTT比色法测定莪术油对A549细胞作用24、48、72 h后抑制率;流式细胞术分析莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测莪术油对A549细胞作用24 h后细胞凋亡与坏死情况。结果莪术油对A549细胞增殖的抑制率随时间延长明显升高,随药物浓度增加抑制作用增强;莪术油对A549细胞作用24 h后,细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期;细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死比例随着莪术油浓度的增加而增加,且坏死细胞的比例高于凋亡细胞。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期及诱导凋亡和坏死来实现的。     

七叶皂苷对肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用

目的 研究七叶皂苷(aescine)对肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用,及对细胞周期分布和细胞凋亡的影响.方法 采用MTT方法观察药物对A549的增殖抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期的变化;Annexin-FITC/PI双标记检测细胞凋亡.结果 七叶皂苷能明显抑制A549的生长,且呈时间剂量依赖性;流式细胞仪结果表明,七叶皂苷能明显的将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡.结论 七叶皂苷对A549细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导A549细胞凋亡.     

草苁蓉苯丙素苷对肺癌细胞周期分布和凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉苯丙素苷(PGBR)对肺癌细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法:采用MTT法观察PGBR对A549肺癌细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测对A549细胞周期分布和细胞凋亡的影响,采用TUNEL染色法检测对A549细胞凋亡的影响,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白p53,Fas,Bax,Bc1-2蛋白的表达。结果:PGBR可时间和浓度依赖性地抑制肺癌细胞增殖,200 mg.L-1 PGBR作用于A549细胞12,24,48 h时,抑制率分别为(20.4±2.1)%,(27.1±2.0)%,(30.7±2.2)%。PGBR改变肺癌细胞周期分布,使G0/G1期细胞由(45.3±4.1)%增至(57.4±4.0)%,表现出G0/G1期阻滞;同时诱导肺癌细胞凋亡,凋亡率由(2.4±0.90)%增至(7.8±1.2)%。PGBR明显增加p53和Fas表达,增加Bax表达和降低Bc1-2表达。结论:PGBR可通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡而发挥抗肺癌作用。     

走马胎中三萜皂苷成分H1对6株肿瘤细胞增殖及对A549肺癌细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究紫金牛科紫金牛属植物走马胎Ardisia gigantifolia中的三萜皂苷成分H1对不同肿瘤细胞株增殖的影响,并检测H1对A549肺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:以细胞密度为3×107/L细胞悬液每孔90μL接种于96孔板中,培养24 h后,各组分别加入不同浓度(终浓度分别为0,1.25,2.5,5,10,20μmol·L-1)的H1药液分别作用于MCF-7,HepG2,HeLa,A549,Bel-7402,BGC-823肿瘤细胞株24,48,72 h,并设阴性对照组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT比色法)检测H1对肿瘤细胞株增殖的影响,筛选对H1敏感的细胞株,用荧光倒置生物显微镜观察细胞形态学变化、采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果:H1作用于MCF-7,HepG2,HeLa等6株肿瘤细胞24,48,72 h后的IC50为4.26~6.45μmol·L-1,其中A549细胞株对H1最为敏感。终浓度为0,1.25,2.5,5μmol·L-1的H1干预A549细胞24 h后,中、高剂量组的细胞凋亡形态明显,发生早期凋亡;总凋亡率分别为2.2%,7.0%,14.2%,56.4%,各剂量组与正常组比较均有统计学意义;细胞阻滞发生在G2期,使S期急剧增加。结论:H1对6种肿瘤细胞株有一定程度的抑制作用,对A549细胞增殖的抑制作用较显著,其诱导A549细胞的凋亡机制可能与对细胞周期阻滞有关。     

仙慈丹有效部位对小鼠Lewis肺癌的抑制作用及机制

目的:探讨仙慈丹对小鼠Lewis肺癌的生长抑制,免疫调节,细胞周期及凋亡的影响,并对其抗癌作用机制进行探讨.方法:选择C57BL/6小鼠移植性Lewis肺癌为实验模型进行试验,造模5d后,分为模型对照组、顺铂给药组、仙慈丹高、中、低剂量组、联合用药组,给药13d,给药剂量(mg·kg-1)分别为0,2.0(ip),0.648(ig),0.324(ig),0.162(ig),0.162(ig)+2.0(ip);观察仙慈丹有效部位对小鼠肺癌的抑制、免疫调节的影响,同时采用流式细胞仪检测肿瘤组织的细胞周期、凋亡率,应用免疫蛋白印记法(Western blot法)观察仙慈丹有效部位对p53,Bcl-2表达的影响.结果:①抑瘤率:阳性药物顺铂组、仙慈丹高、中、低各给药组、联合给药组分别为(63.02 ±3.21)％,(46.59±2.60)％,(42.48±2.77)％,(15.74±1.94)％,(64.56±1.62)％;②脾脏指数:仙慈丹高、中、低各给药组指数较高,与阳性药物组比较具有显著性差异(P＜0.01);③荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡率:模型对照组、阳性药物组、仙慈丹高、中、低各给药组、联合给药组分别为0.04％,30.40％,14.80％,17.98％,16.04％,20.34％;④阳性药物组、仙慈丹高、中给药组、联合用药组的G0/G1细胞所占百分比与模型组比较具有显著性差异(P＜0.01);⑤p53及Bcl-2表达量:仙慈丹高、中、低给药组及顺铂仙慈丹联合用药组表达量均降低,与模型组比较具有显著性差异(P＜0.01).结论:仙慈丹有效部位可以抑制Lewis肺癌生长,其抗癌作用与诱导细胞凋亡,调节细胞周期有关.     

蛇葡萄素诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的:研究蛇葡萄素对人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡的影响。方法:MTT比色法测定细胞的增殖抑制率,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI双染检测蛇葡萄素33.3,50,75 mg.L-1作用下SGC-7901细胞的凋亡及各细胞周期。结果:蛇葡萄素作用于SGC-7901 48 h后,可明显促进细胞早期凋亡,50,75 mg.L-1细胞凋亡率为(29.03±6.21)%,(43.43±1.00)%,明显高于空白组(11.83±4.67)%(P<0.05,P<0.01)且呈剂量依赖关系。蛇葡萄素33.3,50,75 mg.L-1作用于SGC-7901细胞48 h后,G1期细胞分别为(52.07±4.41)%,(57.07±2.70)%,(58.43±2.66)%明显高于空白对照组(42.00±3.04)%(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论:蛇葡萄素能诱导SGC-7901细胞凋亡并使细胞周期阻滞在G1期。     

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞增殖的影响;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;Western Blot 检测药物作用后的Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 白花蛇舌草乙醇提取物抑制A549细胞增殖呈时-效和量-效关系;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞后可见凋亡细胞;40 mg/ml白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞12,24,36,48h,药物组G1～G0期细胞百分比分别为(42.82±3.95)%,(51.84±6.37)%,(54.76±8.85)%和(64.94±7.56)%,药物组细胞凋亡率分别为(5.72±0.98)%,(7.10±2.08)%,(19.89±4.25)%,(32.55±6.51)%,均高于对照组(P均﹤0.05),且G1～G0期细胞百分比和凋亡率随药物作用时间增加而增加;Western Blot显示,白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞,Bax的表达随作用时间增加而增加,Bcl-2的表达随作用时间增加而减低.结论 白花蛇舌草乙醇提取物随着药物浓度和作用时间的增加对肺腺癌A549细胞的体外抑制效应增加;其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G1～G0期和通过上调Bax和下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的.     

丹参水提液对肺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的:探讨不同浓度的丹参水提液对体外培养的人肺癌细胞系A549细胞增殖及凋亡的影响。方法:不同浓度的丹参水提液作用于人肺癌细胞A549细胞株24,48,72h后,MTT法观察药物对肺癌A549细胞生长的抑制效应;作用于细胞48h后倒置显微镜观察细胞形态学的改变;应用AO/EB荧光染色法观察不同浓度丹参水提液作用细胞48h后对细胞凋亡的影响;AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测经药物作用24h后A549细胞凋亡情况。结果:丹参水提液可剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖,抑制增殖作用以48h效果最佳;通过倒置显微镜可观察到细胞的形态学改变;细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞,表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征性的形态学改变;流式细胞仪检测结果显示丹参水提液可诱导细胞凋亡。结论:丹参水提液可对人肺癌细胞系A549细胞具有显著的体外增殖抑制作用,其主要作用可能与诱导细胞凋亡有关。     

木蹄复方体外抗肿瘤作用的实验研究

目的:筛选木蹄复方抗肿瘤活性提取物,初步分析其化学成分并观察其体外抗肿瘤效应.方法:常规水提和醇提的方法提取复方中水溶和醇溶性组分.MTT法测定木蹄复方水提取物(distilled water extract of compound Fomes fomentarius,WECF)和木蹄复方乙醇提取物(ethanol extract of compound F.fomentarius,EECF)对体外培养肿瘤细胞A549,Hela,QGY生长的抑制效应.系统预试法分析WECF化学组成.流式细胞术检测WECF对A549细胞凋亡的影响.结果:WECF对A549,Hela,QGY 3种细胞的IC50分别为(0.28±0.02),(0.40 ±0.06),(0.28±0.05) g·L-1;EECF对3种细胞的IC50分别为(0.50±0.04),(0.50±0.03),(0.60 ±0.06)g·L-1,WECF对肿瘤细胞的生长具有较强的抑制作用.WECF含有有机酸,氨基酸、多肽和蛋白质,糖、多糖和苷类,皂苷,内酯、香豆素及其苷类,植物甾醇、三萜成分以及挥发油和油脂,多糖含量为(16.1±0.5)％.WECF对A549,Hela,QGY,DU145,MDA-MB-435S,SGC-79016种细胞的IC50分别为0.29,0.45,0.32,0.32,0.83,0.23g·L-1; WECF 1 g·L-1作用于A549 24 h后,细胞凋亡率为22.0％.结论:WECF具有较强的体外抗肿瘤效果,对多种肿瘤细胞的生长具有非常明显的抑制作用,并可诱导A549细胞凋亡.     

新疆阿魏树脂不同分离部位对结肠癌细胞HCT116的抑制作用

目的: 分析新疆阿魏树脂不同分离部位对结肠癌细胞HCT116抑制作用的活性,并确定其有效活性部位。 方法: 通过磺酰罗丹明B比色法（SRB）与流式细胞术以细胞密度1×10⁵个mL,药物质量浓度250,125,62.5,31.25,15.6 mg·L^-1（流式细胞术药物浓度为62.5 mg·L^-1）,检测新疆阿魏树脂不同分离部位（石油醚部位、乙酸乙酯部位,甲醇部位）对结肠癌细胞 HCT116药物作用24 h后的增殖抑制与凋亡作用,以IC₅₀和总凋亡率作为指标衡量其各分离部位抑制肿瘤的活性效能。 结果: 石油醚部位:对结肠癌细胞HCT116增殖抑制IC₅₀ 68.7 mg·L^-1,总凋亡率为（43.4±1.1）%;乙酸乙酯部位:IC₅₀43.7 mg·L^-1, 总凋亡率为（56.2±0.9）%;甲醇部位:IC₅₀59.6 mg·L^-1,总凋亡率为（46.7±3.1）%。 结论: 新疆阿魏树脂乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位对结肠癌细胞HCT116细胞毒性作用较强并能促进其大量凋亡,初步确定为新疆阿魏树脂抗肿瘤活性部位。     

叶酸修饰水飞蓟宾固体脂质纳米粒的制备及其对A549细胞抑制作用研究

目的 制备一种通过叶酸受体途径作用于肿瘤细胞的叶酸修饰水飞蓟宾固体脂质纳米粒(FA-SIL-SLN),考察FA-SIL-SLN对A549细胞抑制作用.方法 酰化反应合成膜材(FA-PEG3350-DSPE),采用乳化-超声分散法制备FA-SIL-SLN,并研究其理化性质.MTT法测定FA-SIL-SLN对A549细胞的抑制率;流式细胞分析仪分析其对细胞周期的影响.结果 合成了膜材FA-PEG3350-DSPE;制备的FA-SIL-SLN外观圆整、平均粒径为(103±21) nm,包封率为(90.73±0.33)％、载药量为(2.13±0.17)％,体外释药实验表明其具有良好的缓释特性;对A549细胞的抑制作用呈现明显的量效和时效关系;阻滞细胞增殖.结论 本实验为叶酸介导的抗肿瘤给药系统研究提供了依据.     

榄香烯注射液对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响

目的:探讨榄香烯注射液对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响.方法:分别用20,10,5,2.5,0g·L-1榄香烯注射液处理CNE1细胞12,24,48 h后,Prestoblue法检测细胞的增殖抑制率,光镜观察细胞形态变化,Hoeehst-PI双染、流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果:榄香烯注射液对CNE1细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,处理12,24,48 h的IC50值分别为(10.70±0.26),(7.06±0.11),(5.52±0.10) g·L-1;光镜下显示,给药后细胞大量凋亡,折光性下降;榄香烯注射液可诱导CNE1细胞凋亡.结论:榄香烯注射液能抑制CNE1细胞增殖并诱导其凋亡.     

苦参碱抑制Akt信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:研究苦参碱对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制。方法:噻唑蓝比色法(MTT)测定苦参碱对SW480细胞株增殖的影响;Hoechst33258染色检测苦参碱对SW480细胞凋亡的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱对SW480细胞中总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用。结果:苦参碱(0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L~(-1))能浓度和时间依赖性地抑制SW480细胞增殖。作用24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.72,1.08,0.67 g·L~(-1),Hochest33258染色和流式细胞术结果显示苦参碱能显著诱导细胞凋亡(P0.01),随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升。Western blot检测显示,SW480细胞加入苦参碱后,胞内总Akt的含量无显著变化,但p-Akt的生成被显著抑制,凋亡抑制性蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高(P0.05)。结论:苦参碱能够诱导SW480细胞凋亡,该药理作用可能与苦参碱对Akt信号通路的抑制有关。     

肠胃清药物血清协同奥沙利铂对人结肠癌耐药细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨肠胃清药物血清协同奥沙利铂(L-OHP)对HCT116/L-OHP细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用MTT法检测L-OHP联合肠胃清药物血清对HCT116/L-OHP细胞的生长抑制情况,流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布及Annexin V-FITC试剂盒监测对HCT116/L-OHP凋亡的影响.结果:HCT116/L-OHP细胞对L-OHP的耐药指数为9.17倍,48 h L-OHP作用于HCT116和HCT116/L-OHP的IC50分别为(9.88 ±0.42),(85.81 ±2.76) mg·L-1,联用肠胃清药物血清后HCT116/L-OHP的IC50降至(35.2±2.8) mg·L-1,逆转指数为2.44倍(P＜0.05).联用前后细胞周期分别停滞在G1,G2期及G1期,其中G1,G2期各组间两两比较P＜0.001,S期组间除奥沙利铂组与奥沙利铂联用肠胃清组比较P＜0.05外,余P＜0.001.联用前后细胞凋亡率分别为(8.6±0.31)％,(23.73±2.36)％,各组间除空白组与奥沙利铂组比较P＜0.05外,余P ＜0.001.结论:肠胃清药物血清能有效地逆转人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L-OHP对奥沙利铂的耐药,诱导HCT116/L-OHP凋亡,改变细胞周期分布.     

玉竹高异黄酮抑制人肺癌细胞A549增殖的作用及机制

目的:以人肺癌A549细胞为研究对象,探讨玉竹中提取的高异黄酮对A549细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法:从玉竹中提取高异黄酮,作用于肺癌细胞A549;噻唑蓝(MTT)比色法观察高异黄酮12.5,25,50,100 mg·L~(-1)作用于A549细胞6,12,24 h对细胞存活率的影响。通过流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,并通过蛋白免疫印迹法(Western blot)分析与细胞凋亡相关半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤(白血病)-2(Bcl-2),Bcl-2对抗杀伤性蛋白(Bak)和与细胞周期相关的磷酸化周期素依赖激酶2(p-Cdc 2),细胞周期蛋白依赖性激酶2(Cdc 2)及p38蛋白表达。结果:与空白组比较,高异黄酮呈剂量和时间依赖性抑制A549细胞的增殖(P0.05,P0.01),高异黄酮对A549细胞处理12 h后,细胞周期阻滞于G2/M期(P0.05);与空白组比较,25,50,100 mg·L~(-1)高异黄酮可显著促进凋亡蛋白Caspase-3和Bak表达,抑制Bcl-2表达(P0.01),可显著促进细胞周期蛋白p-Cdc 2和p38表达,抑制Cdc 2表达(P0.01)。结论:玉竹中提取的高异黄酮对A549细胞增殖具有抑制作用,能使A549细胞阻滞于细胞周期G2/M期,其机制与线粒体介导的细胞凋亡和p38 MAPK通路相关。