反义寡核苷酸对精氨酸升压素诱导心脏成纤维细胞β1整合素表达的抑制作用

目的　探讨反义寡核苷酸对精氨酸升压素 (AVP)诱导心脏成纤维细胞 (CFs) β1整合素表达及细胞增殖的影响 ,为防治AVP诱导的心肌纤维化提供理论依据。方法　设计合成反义、正义及错配 β1整合素寡核苷酸片段 ,转入体外培养的CFs中 ,采用原位ELISA技术检测不同状态下 β1整合素表达水平 ,应用四氮唑盐 (MTT)比色法检测细胞增殖。结果　 (1)随着AVP浓度的增加 ,CFs表面β1整合素表达水平呈上升趋势 ,各实验组之间吸光度比较差异有显著意义 (F =4 93;P <0 0 1)。其中 1× 10 -7mol/LAVP和 1× 10 -6mol/LAVP组的CFsβ1整合素表达水平分别为 (0 2 5± 0 0 1)A值和(0 30± 0 0 4 )A值 ,均明显高于对照组的 (0 2 1± 0 0 2 )A值 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;(2 )反义链 +AVP组的CFsβ1整合素表达水平为 (0 19± 0 0 2 )A值 ,反义链与AVP共同作用组明显低于AVP组的 (0 2 5± 0 0 1)A值 ,并有非常显著性差异 (P <0 0 1)。正义链 +AVP组和错配链 +AVP组的CFsβ1整合素表达水平分别为 (0 2 5± 0 0 1)和 (0 2 5± 0 0 2 )A值 ,均明显高于反义链与AVP共同作用组 (P <0 0 1)。 (3)空白对照组、AVP组、反义链 +AVP组、正义链 +AVP组和错配链 +AVP组CFsMTT法分别为 (0 36± 0 0 1)OD值、(0     

反义β_1整合素寡核苷酸对精氨酸加压素促胶原凝胶收缩的抑制作用

目的 :探讨精氨酸加压素 (AVP)对心肌成纤维细胞 (CFs)与胶原构成的凝胶系统收缩的影响和 β1 整合素反义寡核苷酸的干预作用。方法 :设计合成反义、正义和错配 β1 整合素寡核苷酸片段 ,建立体外培养的成纤维细胞与胶原构成的凝胶三维培养体系 ,计算凝胶块的收缩指数。结果 :1AVP浓度≥ 1× 10 - 7m ol/ L 时 ,CFs的胶原凝胶收缩指数明显高于对照组 (P<0 .0 1) ;2 1× 10 - 7mol/ L AVP作用 4h凝胶收缩指数即大于对照组 (P<0 .0 1) ,并可持续 48h以上 ;3反义 β1 整合素寡核苷酸与 AVP共同作用组的胶原凝胶收缩指数明显低于 AVP组、正义链 AVP组和错配链 AVP组 ,并均有非常显著性意义 (P<0 .0 1)。结论 :β1 整合素反义寡核苷酸具有特异性抑制AVP刺激 CFs胶原凝胶收缩的作用。说明 β1 整合素在 AVP促 CFs迁移中起介导作用。     

V1受体拮抗剂对精氨酸升压素诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的探讨V1受体拮抗剂[d(CH2)5-Tyr2(Me)]AVP对精氨酸升压素(AVP)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响. 方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley (SD)大鼠心脏成纤维细胞(CFs),以3H-TdR掺入法测定CFs的DNA合成功能,MTT比色法测定CFs数目,并应用流式细胞仪进行CFs细胞周期分析. 结果①CFs的3H-TdR掺入率随着AVP干预浓度的增加而增高,其中10-7mol/L AVP和10-6mol/L AVP组每5000个细胞的3H-TdR掺入率分别为(243±61)cpm和(328±68)cpm,均明显高于对照组3H-TdR掺入率(117±32)cpm(P<0.01);②MTT比色法吸光度(A490 nm)值随AVP浓度的增加而增高,其中10-7mol/L AVP、10-6mol/L AVP组的A490 nm值分别为0.24±0.01和0.29±0.02,均较对照组A490 nm值(0.16±0.01)显著增高(P<0.01);③10-7mol/L AVP组CFs细胞周期S期百分率显著高于对照组(30.20±0.88)% vs (26.86±1.06)%( P<0.01);④10-7mol/L AVP+10-7 mol/L [d(CH2)5-Tyr2(Me)]AVP组的每5000个细胞的3H-TdR掺入率、MTT比色法A490 nm值和S期百分率分别为(143±40)cpm、0.17±0.01和(25.02±0.51)%,均显著低于10-7mol/L AVP组(分别P<0.05,P<0.01,P<0.01). 结论 AVP可诱导CFs的DNA合成功能增强和细胞数目增加,其作用可被V1受体拮抗剂[d(CH2)5-Tyr2(Me)] AVP所阻断,表明V1受体可能介导了AVP促CFs增殖效应.     

小窝蛋白-1反义寡核苷酸在AVP诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖erk1/2信号转导中的作用及辛伐他汀的干预效应

目的 研究小窝蛋白-1反义寡核苷酸(cav1-AS ODN)在血管加压素(AVP)诱导的成年大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖erk1/2信号转导中的作用及辛伐他汀(Sim)对cav1表达的干预效应.方法 采用脂质体导入法将cav1-AS ODN导入离体培养的成年大鼠CFs,用3H-TdR掺入法定量观察CFs增殖,蛋白免疫印迹法分析cav1-AS ODN对AVP诱导大鼠CFs增殖后磷酸化erk1/2 (p-erk1/2)、p21和细胞周期蛋白A(cyclin A)表达变化及Sim对cav1表达的影响.结果 cav1-AS ODN与10-7 mol/L的AVP共同干预组,大鼠CFs内3H-TdR掺入率和p-erk1/2蛋白表达量分别相当于空白对照组的(212±6)% 和(7.9 ± 0.3)%,10-7mol/L的AVP单独干预组的3H-TdR掺入率和p-erk1/2表达量分别相当于空白对照组的(172±4)%和(5.7±0.2)%,两组比较差异非常显著(P<0.01).cav1-AS ODN单独干预或与10-7mol/L的AVP共同干预大鼠CFs 24 h后,两组CFs内p21表达丰度均较空白对照组下降,cyclin A表达丰度升高.β-环糊精、黄体酮或Sim可减少CFs胞膜上cav1蛋白表达.用10、15或20 μg/ml胆固醇分别与10-7 mol/L Sim共同干预CFs 24 h后,CFs胞膜上cav1蛋白表达量分别相当于对照组的(86±3)%、(91±4)%和(94±5)%,与10-7mol/L Sim单独作用CFs组(66±4)%比较,均有显著的统计学差异(P<0.05,P<0.01).结论 cav1-AS ODN可增强AVP促CFs增殖的作用,Sim降胆固醇作用影响CFs胞膜上cav1蛋白表达,从而影响CFs增殖.     

钙调神经磷酸酶调控精氨酸升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的作用

目的　探讨钙调神经磷酸酶 (CaN)信号通路对精氨酸升压素 (AVP)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的调控作用。方法　采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley大鼠CFs,MTT比色法测定细胞数目 ,应用流式细胞仪分析细胞周期 ,CaN活性通过分光光度计测定。结果　 (1)CFs的MTT比色法吸光度A490 值随着AVP作用浓度的升高而增加 ,其中10 -7mol/LAVP和 10 -6mol/LAVP组A490 值(分别为 0 17±0 0 1和 0 18± 0 0 1)与空白对照组 (0 11± 0 0 1)比较有显著差异 (P <0 0 1) ;不同浓度的AVP CsA组A490 值均较相应的AVP组降低 ,其中 10 -7mol/LAVP CsA组和 10 -6mol/LAVP CsA组分别为 0 13± 0 0 1和 0 15± 0 0 1,与 10 -7mol/LAVP和 10 -6mol/LAVP组比较显著降低 ,并有统计学意义 (P <0 0 1)。(2 ) 10 -7mol/LAVP作用下CFs细胞周期S期百分率为 17.86± 3.18,与空白对照组 (12 .10± 2 .38)比较明显升高 ,并有统计学意义(P <0 0 1)。 10 -7mol/LAVP CsA组CFs细胞周期S期百分率 (13 76± 2 5 2 )与 10 -7mol /LAVP组比较有显著差异(P <0 0 5 )。 (3) 10 -7mol/LAVP组CFs的CaN活性为 0 30± 0 0 6kU/mg,与对照组 (0 14± 0 0 3kU/mg)比较差异显著(P <0 0 1)。结论　C     

钙调神经磷酸酶调控精氨酸升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的作用

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路对精氨酸升压素(AVP)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的调控作用.方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley大鼠CFs,MTT比色法测定细胞数目,应用流式细胞仪分析细胞周期,CaN活性通过分光光度计测定.结果 (1)CFs的 MTT比色法吸光度A490值随着AVP作用浓度的升高而增加,其中10-7 mol/L AVP和10-6 mol/L AVP组A490值(分别为0.17±0.01和0.18±0.01)与空白对照组(0.11±0.01)比较有显著差异(P<0.01);不同浓度的AVP+CsA组A490值均较相应的AVP组降低,其中10-7mol/L AVP+CsA组和10-6 mol/L AVP+CsA组分别为0.13±0.01和0.15±0.01,与10-7mol/L AVP和10-6 mol/L AVP组比较显著降低,并有统计学意义(P<0.01).(2)10-7mol /L AVP 作用下CFs细胞周期S期百分率为17.86 ±3.18,与空白对照组(12.10±2.38)比较明显升高,并有统计学意义(P<0.01).10-7mol /L AVP +CsA组CFs细胞周期S期百分率(13.76±2.52)与10-7mol /L AVP组比较有显著差异(P<0.05).(3)10-7 mol/L AVP组CFs的CaN活性为0.30±0.06 kU/mg,与对照组(0.14±0.03 kU/mg)比较差异显著(P<0.01).结论 CaN的特异性抑制剂环孢素A(CsA)可抑制AVP诱导的CFs增殖,AVP可升高CFs内CaN活性,表明CaN信号通路在AVP诱导CFs增殖过程中起到了重要的调控作用.     

拉西地平对AVP诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响及其与ERK1/2的关系

目的观察拉西地平对血管加压素（AVP）诱导的大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响及其与细胞外信号调节激酶（ERK）1/2的关系。方法以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,采用四氮唑盐比色法测定细胞数目;用流式细胞术分析细胞周期;用蛋白免疫印迹法测定总细胞外信号调节激酶（t-ERK）1/2和磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）1/2在细胞内的表达。实验按照给予CFs干预因素的不同,分为对照组、10-7mol/L AVP处理组、10-910-6mol/L拉西地平+10-7mol/L AVP干预组和10-7mol/L拉西地平单独干预组。结果①10-7mol/LAVP干预24 h后,CFs的A490值（0.232±0.013）较对照组（0.132±0.008）显著增高（P<0.01）。在10-910-6mol/L拉西地平和10-7mol/L AVP共同干预下,拉西地平可呈浓度依赖性地下调CFs的A490值,分别为0.216±0.01、0.203±0.01、0.176±0.01和0.160±0.01,均显著低于AVP组（P<0.01）。②细胞周期分析显示,AVP组CFs在S期的百分率和增殖指数（PI）分别为13.06±0.83和21.70±1.55,与对照组（分别为4.60±0.60和8.97±1.56）比较显著增高（P<0.01）。在10-7mol/L拉西地平干预下,细胞在S期的百分率（8.84±0.80）和PI（15.46±1.84）较AVP组显著降低（P<0.01）。③AVP组CFs的p-ERK1/2表达显著高于对照组（P<0.01）,10-9、10-8、10-7和10-6mol/L拉西地平组CFs中p-ERK1/2的表达与AVP组比较呈浓度依赖性地降低（P<0.01）。结论拉西地平可抑制AVP诱导的大鼠CFs增殖,提示拉西地平对预防和逆转心脏重构具有一定的作用,其机制可能与ERK1/2的磷酸化有关。     

精氨酸加压素诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的作用

目的 :探讨精氨酸加压素 （AVP）对大鼠心脏成纤维细胞 （CFs）胶原合成的影响。方法 :采用胰酶消化法分离、培养新生 SD大鼠 CFs,3H-脯氨酸掺入法和羟脯氨酸比色法分别观察不同浓度 AVP及其 V1 受体拮抗剂 [d（CH2 ） 5 Tyr2 （Me） ]AVP对 CFs的影响。结果 :1CFs3H-脯氨酸掺入率随着 AVP浓度的增加而增高 ,其中 10 - 7mol/ L,10 - 6 mol/ L AVP组的 3H-脯氨酸掺入率分别为 （5 41± 96 ） cpm/ 5 0 0 0 cells和 （5 6 5± 72 ） cpm/ 5 0 0 0 cells,较对照组 （16 6± 31） cpm/ 5 0 0 0 cells明显增高 （均 P<0 .0 1） ;10 - 7m ol/ L AVP+ 10 - 7mol/ L[d（CH2 ） 5 Tyr2 （Me） ]AVP组3H -脯氨酸掺入率 （2 6 8± 6 4） cpm/ 5 0 0 0 cells较 10 - 7m ol/ L AVP组明显降低 （P<0 .0 1）。 2 CFs培养上清光吸收值（A值 ）随着 AVP浓度的增加而增高 ,其中 10 - 7m ol/ L ,10 - 6 m ol/ L AVP组的培养上清 A值分别为 0 .2 2± 0 .0 1和0 . 2 4± 0 .0 1,明显高于对照组 0 .2 0± 0 .0 1,有统计学意义 （均 P <0 .0 1） ;10 - 7m ol/ L AVP+ 10 - 7mol/ L [d（CH2 ） 5 Tyr2 （Me） ]AVP组的 A值为 0 .19± 0 .0 1,明显低于 10 - 7mol/ L AVP组 （P<0 .0 1）。结论 :AVP促进 SD大鼠 CFs胶原合成 ,其作用可能与 V1 受体介导有关     

TGF-β1在AVP诱导的心肌成纤维细胞表型转化中的作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在精氨酸加压素(AVP)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFs)转化中的作用。方法:用胰酶消化法分离培养SD仔鼠的CFs,将CFs分别与不同浓度的AVP、不同浓度的TGF-β1或添加了不同浓度的抗TGF-β1中和抗体的1×10-6mmol/L AVP共同孵育48 h后,用3H-脯氨酸掺入法检测CFs胶原合成的功能,用Western blot检测CFs中平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的表达量,用ELISA法检测CFs中TGF-β1的合成。结果:AVP可浓度依赖性地诱导CFs的3H-脯氨酸掺入率和α-SMA的表达量增加,其中1×10-6mmol/L AVP组CFs的3H-脯氨酸掺入率和α-SMA的表达量显著高于对照组(P<0.05)。AVP也可浓度依赖性地诱导CFs中内源性TGF-β1的合成增加,其中在1×10-6mmol/L AVP刺激下,CFs合成显著增加的内源性TGF-β1刚好达到外源性TGF-β1诱导CFs向MFs转化所需要的剂量(>2 ng/ml)。抗TGF-β1中和抗体虽然能够显著抑制在10-6mmol/L AVP诱导下CFs的3H-脯氨酸掺入率和α-SMA的表达量(P<0.05),但却不能将其抑制到与对照组相近的水平(P<0.05)。结论:AVP刺激下CFs中内源性TGF-β1合成的增加可部分地介导AVP诱导的CFs向MFs转化。     

IL-1β对鼠心肌成纤维细胞增殖和p27蛋白表达的影响

目的 :观察 IL - 1β对基础状态及精氨酸加压素 （AVP）诱导心肌成纤维细胞 （CFs）增殖和 p2 7蛋白表达的影响。方法 :采用胰酶消化 ,差速贴壁法培养 CFs,四氮唑盐 （MTT）比色法检测细胞增殖 ,碘化丙啶 （PI）标记细胞DNA,间接免疫组化染色标记细胞内的 p2 7蛋白 ,用流式细胞分析仪 （FCM）技术测定细胞周期和 p2 7蛋白表达的阳性率。结果 :11× 10 - 7mol/ L AVP组 MTT法测定的 CFs的吸收 （A）值 （0 .386± 0 .0 11）较基础状态 （0 .32 4± 0 .0 0 7）明显升高 （P<0 .0 1） ;1× 10 5 U/ L IL - 1β单独作用组 （0 .2 98± 0 .0 30 ）和 AVP+IL - 1β组 （0 .332± 0 .0 41）的 A值均分别较基础状态和 AVP组显著降低 （均 P<0 .0 1） ;2 IL- 1β组和 AVP+IL- 1β组 CFs的 S期细胞百分率和细胞增殖指数 （PI）分别较基础状态组和 AVP组明显降低 ,而 G0 / G1 期细胞百分率则分别高于上述两组 （均 P<0 .0 1） ;3IL- 1β组和 AVP+IL- 1β组 CFs的 p2 7蛋白表达阳性率分别为 （95 .0 3± 1.0 2 ） % ,（88.2 3± 2 .87） % ,分别高于基础状态 （78.45± 1.91） %和 AVP组 （6 3.30± 1.85 ） % ,并且有统计学意义 （均 P<0 .0 1）。结论 :IL - 1β通过升高细胞内 p2 7蛋白表达水平参与 CFs增殖的负调控过程。     

辛伐他汀对血管加压素诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其与小窝蛋白-1表达的关系

目的研究辛伐他汀（simvastatin,Sim）对精氨酸血管加压素（arginine vasopressin,AVP,简称血管加压素）诱导成年大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖的影响及其与小窝蛋白-1（caveolin-1,cav1）的关系。方法离体培养成年大鼠CFs,以四氮唑盐（MTT）比色法检测CFs的增殖,流式细胞分析仪测定其细胞周期,蛋白免疫印迹法检测cav1蛋白的表达。观察cav1在AVP诱导大鼠CFs增殖前后及Sim干预后的变化。结果10-7mol/LAVP干预24 h后,MTT比色法检测CFs的吸光值（A）（0.24±0.03）较对照组（0.15±0.02）显著增高（P<0.01）;给予10-810-5mol/L的Sim和AVP共同干预后,CFs的A值呈递减趋势,分别为0.22±0.03、0.21±0.02、0.19±0.02和0.17±0.02,均较AVP组降低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。以10-7mol/L的AVP干预24 h后,CFs S期的百分率（19.52±1.07）和增殖指数（48.25±1.27）较对照组（分别为7.02±0.27和18.93±3.03）均显著增高（均P<0.01）;10-710-5mol/L Sim与10-7mol/L AVP联合干预组CFs S期的百分率和增殖指数均较AVP单独干预组降低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。10-7mol/L的AVP分别与10-810-5mol/L的Sim共同干预后,cav1蛋白的表达呈浓度依赖性地减少。甲羟戊酸（MVA）可逆转Sim对CFs增殖的抑制效应,并拮抗Sim诱导的cav1蛋白表达的降低。结论Sim可抑制AVP诱导的CFs增殖,Sim的干预效应可能受到cav1蛋白表达的调节。     

精氨酸升压素对大鼠心肌成纤维细胞诱导型一氧化氮合酶-一氧化氮系统活性的影响

目的　研究精氨酸升压素 (AVP)对大鼠心肌成纤维细胞诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) 一氧化氮 (NO)系统活性的影响。方法　胰酶消化法分离培养Sprague Dawley仔鼠心肌成纤维细胞 ,采用硝酸还原酶法、蛋白质印迹和逆转录 聚合酶链式反应观察AVP对心肌成纤维细胞的NO含量、iNOS蛋白水平和iNOSmRNA表达的影响。结果　 (1)不同浓度AVP干预下 ,心肌成纤维细胞的NO含量、iNOS蛋白水平和iNOSmRNA表达都随AVP浓度的增高而增加。其中 10 -7mol/LAVP组和 10 -6mol/LAVP组的NO含量 [(6 9 0 5± 5 5 6 ) μmol/L和 (6 2 86± 6 0 5 ) μmol/L]、iNOS蛋白水平 (0 73± 0 0 6和 0 6 4± 0 0 5 )和iNOSmRNA表达 (0 70± 0 0 3和 0 6 6± 0 0 6 )都显著高于对照组 [(2 9 34± 5 34)μmol/L ,0 2 0± 0 0 5 ,0 2 5± 0 0 4 ]、10 -9mol/LAVP组 [(31 79± 6 5 9) μmol/L ,0 2 4± 0 0 7,0 30±0 0 6 ]和 10 -8mol/LAVP组 [(36 87± 7 89) μmol/L ,0 30± 0 0 9,0 31± 0 0 3]。但 10 -6mol/LAVP组的NO含量、iNOS蛋白水平和iNOSmRNA表达都低于 10 -7mol/LAVP组。 (2 ) 10 -7mol/LAVP干预下CFs的NO含量、iNOS蛋白水平和iNOSmRNA表达都随培养时间的延长而增加。其中 2 4h组和 36h组的NO含量 [(6 5     

精氨酸加压素及其V1a受体对心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的:探讨精氨酸加压素(AVP)及其V1a受体对体外培养的SD仔鼠心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFs)转化的影响。方法:胰酶消化法分离培养SD仔鼠CFs,将CFs分别与不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6 mmol/L)AVP,或添加了不同浓度(0、10-9、10-8、10-7 mmol/L)AVP V1a特异性受体拮抗剂[d(CH2)5Tyr2(Me)]AVP的10-6 mmol/L AVP共同孵育48h后,用3 H-脯氨酸掺入法检测CFs胶原合成功能,Western blot检测CFs平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)表达量,α-SMA免疫荧光染色观察CFs形态。结果:AVP浓度依赖性地诱导CFs的3 H-脯氨酸掺入率和α-SMA表达量增加,其中10-6 mmol/L AVP组CFs的3 H-脯氨酸掺入率和α-SMA表达量均显著高于对照组(均P<0.05),且10-6 mmol/L AVP作用下CFs体积明显增大,胞质荧光染色亮度显著增强,胞质中有明显的张力丝样结构。而[d(CH2)5Tyr2(Me)]AVP可以浓度依赖性地抑制10-6 mmol/L AVP诱导下CFs 3 H-脯氨酸掺入率和α-SMA表达量的增加,其中10-8、10-7 mmol/L[d(CH2)5Tyr2(Me)]AVP组中CFs的3 H-脯氨酸掺入率显著低于10-6 mmol/L AVP组(均P<0.05),10-9、10-8、10-7 mmol/L[d(CH2)5Tyr2(Me)]AVP组中CFs的α-SMA表达量显著低于10-6 mmol/L AVP组(均P<0.05),且10-7 mmol/L[d(CH2)5Tyr2(Me)]AVP能够将10-6 mmol/L AVP诱导下CFs的3 H-脯氨酸掺入率、α-SMA表达量和形态学变化都抑制到对照组水平(均P>0.05)。结论:AVP通过其V1a受体诱导CFs向MFs转化。     

丝裂原活化蛋白激酶在醛固酮诱导心室成纤维细胞增殖中的作用

目的:探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的信号转导机制.方法:用胰酶消化法分离、培养新生大鼠CFs,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、western-blotting技术从DNA合成、蛋白表达等方面观察MAPK活化与醛固酮促CFs增殖的关系.结果:①醛固酮剂量依赖性促CFs DNA合成,10-5mol/L PD98059 [(782±152)个·min-1] 可逆转 10-7mol/L醛固酮 [(1879±169)个·min-1]的作用;②10-7mol/L醛固酮对活化MAPK蛋白表达有显著增强作用,在4 h达峰作用(8.11±0.46),10-7mol/L 醛固酮的作用(8.11±0.46)被10-5mol/L PD98059 (1.21±0.10, P<0.01)阻断.结论:醛固酮能激活CFs的MAPK,MAPK表达及活化参与醛固酮诱导的CFs增殖.     

缓激肽β2受体介导卡托普利抑制心脏成纤维细胞的增殖作用

目的探讨卡托普利(Captopril)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖中的作用及缓激肽(BK)β2受体对此作用的影响及机制.方法经差速贴壁法培养的新生大鼠CFs,随机分为6组空白对照组,卡托普利组,AngⅡ组,AngⅡ+卡托普利组,Hoe-140组和AngⅡ+卡托普利+Hoe-140组.采用四氮唑盐(MTT)比色法测细胞数目,流式细胞仪技术(FCM)检测细胞周期,硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定培养CFs细胞上清液中NO含量和细胞内cGMP水平.结果与空白对照组比较,AngⅡ10-7mol/L孵育细胞48 h后可显著增加CFs S期细胞百分率和MTT比色法测定的CFs吸光度(A490nm)值(分别P＜0.01,P＜0.05);ACEI类药物卡托普利10-5mol/L可明显降低AngⅡ作用下的CFs S期细胞百分率和A490nm值,而NO含量和细胞内cGMP水平均显著高于AngⅡ组(均P＜0.05);缓激肽β2受体阻断剂Hoe-140 10-6mol/L可部分阻断卡托普利的作用.结论缓激肽β2受体部分介导了卡托普利抑制AngⅡ诱导的CFs增殖作用,BK该作用与NO、cGMP生成有关.     

p27蛋白表达对精氨酸加压素介导心脏成纤维细胞增殖的影响

目的 :观察精氨酸加压素 （AVP）作用下 p2 7蛋白表达在心脏成纤维细胞 （CFs）中的变化 ,探讨 p2 7蛋白调控AVP促 CFs增殖的作用。方法 :以培养的新生 SD大鼠 CFs为实验动物模型 ,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFs,四氮唑盐 （MTT）比色法检测细胞增殖 ,碘化丙啶标记细胞 DNA ,p2 7蛋白的单抗和标记了 FITC的二抗标记细胞内的 p2 7蛋白 ,采用流式细胞分析仪技术测定细胞周期及 p2 7蛋白表达的阳性率。结果 :1随 AVP浓度的增加 ,MTT法测得的 CFs的 A值呈递增趋势 ,其中 10 - 7,10 - 6 m ol/ L AVP组分别为 0 .30 7± 0 .0 0 9,0 .337± 0 .0 0 7,均明显地高于对照组 （0 .2 98± 0 .0 0 9） ,并有统计学意义 （分别 P<0 .0 5 ,P<0 .0 1） ;2随 AVP浓度的增加 ,CFs的 S期细胞百分率和细胞增殖指数 （PI）逐渐增加 ,G0 / G1 期百分率下降 ,10 - 7,10 - 6 mol/ L AVP组与对照组比较差异非常显著 （P<0 .0 1） ;3CFs的 p2 7蛋白表达阳性率随 AVP浓度的增加而呈递减趋势 ,其中 10 - 7,10 - 6 m ol/ L AVP组 （分别为 71.6 %± 2 .2 % ,6 3.1%± 2 .3% ）明显低于对照组 （86 .5 %± 2 .3% ） ,并有统计学意义 （P<0 .0 1）。结论 :p2 7蛋白是 AVP促 CFs增殖过程的重要负性调节因子 ,AVP通过下调 p2 7蛋白发挥促 CFs增殖作用 ,这可     

血管紧张素（1～7）对血管加压素诱导心脏成纤维细胞增殖的影响及其与钙调神经磷酸酶的关系

目的探讨血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]对血管加压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与钙调神经磷酸酶(CaN)的关系。方法分离培养SD仔鼠CFs,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,采用流式细胞分析仪技术测定细胞周期,发色底物法测定细胞内CaN的活性。结果(1)10-7mol/LAVP干预24h后,CFs的MTT吸光度值(0.24±0.01)较对照组(0.14±0.01)明显增高(P<0.01);给予10-9～10-6mol/LAng(1～7)和AVP共同干预后,CFs的吸光度值呈递减趋势,分别为0.22±0.01、0.21±0.01、0.18±0.01和0.16±0.01,均较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)AVP刺激后,CFs的S期百分率(14.00±0.94)和增殖指数(23.4±1.8)较对照组(分别为5.4±0.7和10.8±2.4)明显增高(P<0.01);10-7mol/LAng(1～7)和AVP共同作用后S期百分率(8.5±0.7)和增殖指数(16.2±2.0)较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)AVP组CFs内CaN活性(0.27±0.02kU/mg)较对照组(0.12±0.01)kU/mg明显增加(P<0.01),给予10-9～10-6mol/LAng(1～7)和AVP共同干预后,CaN活性分别为0.25±0.01、0.20±0.02、0.17±0.01和0.15±0.02(kU/mg),均较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Ang(1～7)能抑制AVP诱导CFs增殖,CaN活性降低可能是其分子生物学机制之一。     

卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪对SHR心肌成纤维细胞增殖作用的对比研究

目的观察卡维地洛(carvedilol)、比索洛尔(bisoprolol)、哌唑嗪(prazosin)对培养的SHR和Wistar大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响.方法采用胰酶消化法培养CFs,用 3H-TdR法、MTT比色法分别观察carvedilol、bisolol、prazosin干预下CFs的增殖情况.结果 SHR、Wistar大鼠CFs 3H-TdR掺入及OD值随carvedilol浓度的增加而减低,呈剂量和时间依赖性.10-5 mol /L carvedilol分别干预SHR和Wistar大鼠CFs 72 h其 3H-TdR掺入分别减低52.1%和47.5%,OD值分别减低41.5% 和 35.3%, bisolol(10-8 mol/L～10-5mol/L )和prazosin(10-8 mol/L～10-5 mol/L)则无此作用.结论 Carvedilol抑制心肌成纤维细胞增殖,并呈浓度及时间依赖性,高血压时,CFs对Carvedilol更为敏感.而Bisoprolol和Prazosin则对CFs细胞增殖无影响.     

IL-1β抑制精氨酸升压素促心脏成纤维细胞胶原凝胶的收缩

目的 探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对精氨酸升压素(AVP)诱导下心脏成纤维细胞(CF)胶原凝胶收缩的作用。方法 以胰蛋白酶消化法分离、培养SD大鼠的CF,建立成纤维细胞与胶原构成的三维培养体系,测定基础状态下不同浓度的IL-1β作用下,CF胶原凝胶收缩指数,以及IL-1β对AVP作用后CF胶原凝胶收缩指数的影响。实验共分为8个组,即不同浓度（0、50、100、200及400 kU/L）的IL-1β组、不同浓度（0、1×10-7 mol/L）的AVP干预组及100 kU/L IL-1β+1×10-7 mol/L AVP组,每组各设8个孔（n=8）。结果 在基础状态下,以50～400 kU/L IL-1β作用后,CF胶原凝胶收缩指数随着IL-1β干预浓度的增加呈下降趋势,各实验组胶原凝胶收缩指数均明显低于对照组(P<0.01),各实验组之间两两比较的差异也非常显著(P<0.01)。1×10-7 mol/L AVP组CF胶原凝胶收缩指数明显高于0 mol/L AVP组(P<0.01);而100 kU/L IL-1β组CF胶原凝胶收缩指数明显低于0 kU/L IL-1组(P<0.01)。IL-1β与AVP共同作用后,CF胶原凝胶收缩指数介于AVP组和IL-1β组之间,并且与二者之间的差异均有非常显著的意义(P<0.01)。结论 IL-1β可抑制基础状态下CF胶原凝胶收缩,并对AVP促CF胶原凝胶收缩具有明显的拮抗作用。     

血管紧张素(1～7)对血管加压素诱导心脏成纤维细胞增殖的影响及其与钙调神经磷酸酶的关系

目的探讨血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]对血管加压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与钙调神经磷酸酶(CaN)的关系.方法分离培养SD仔鼠CFs,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,采用流式细胞分析仪技术测定细胞周期,发色底物法测定细胞内CaN的活性.结果 (1)10-7 mol/L AVP干预24 h后,CFs的MTT吸光度值(0.24±0.01)较对照组(0.14±0.01)明显增高(P<0.01);给予10-9～10-6 mol/L Ang(1～7)和AVP共同干预后,CFs的吸光度值呈递减趋势,分别为0.22±0.01、0.21±0.01、0.18±0.01和0.16±0.01,均较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01).(2)AVP刺激后, CFs 的S期百分率(14.00±0.94)和增殖指数(23.4±1.8)较对照组(分别为5.4±0.7和10.8±2.4)明显增高(P<0.01);10-7 mol/L Ang(1～7) 和AVP共同作用后S期百分率(8.5±0.7)和增殖指数(16.2±2.0)较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01).(3)AVP组CFs内CaN活性(0.27±0.02 kU/mg)较对照组(0.12±0.01)kU/mg明显增加(P<0.01),给予10-9～10-6 mol/L Ang(1～7) 和AVP共同干预后,CaN活性分别为0.25±0.01、0.20±0.02、0.17±0.01和0.15±0.02(kU/mg),均较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Ang(1～7)能抑制AVP诱导CFs增殖,CaN活性降低可能是其分子生物学机制之一.