氟化钠诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及其机制研究

目的 研究氟化钠(NaF)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤及致凋亡作用,并初步探讨NaF致神经毒性的作用机制.方法 取对数生长期的SH-SY5Y细胞(1×107/ml),先加入0(对照)、20、40、80mg/L的NaF溶液对SH-SYSY细胞染毒24h;再选择40 mg/L的NaF溶液与380.40 mg/L的乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)溶液或38.23 mg/L的胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)溶液(提前30 min加入)联合染毒24h.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和胞内钙离子([Ca2+]i)水平,并用激光共聚焦(laser scanning confocal microscopy,LSCM)技术,从单个细胞水平检测NaF对胞内游离Ca2+瞬间动态变化的影响.结果 与对照组比较,40、80 mg/L NaF染毒组SH-SY5Y细胞的存活率较低,凋亡率较高,差异均有统计学意义(P＜0.05);各NaF染毒组SH-SY5Y细胞的[Ca2+],水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).且随着NaF染毒浓度的升高,SH-SY5Y 细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率和[Ca2+]i水平均呈上升趋势.LSCM连续扫描显示,40和80 mg/L NaF染毒组SHSY5Y细胞[Ca2+]i的FI值达到峰值的时间分别为6 000～7 000 s和1 000-2 000 s,20 mg/L NaF染毒组未见明显的峰值;且NaF的浓度越高,[Ca2+]i达到峰值的时间越短.析因分析表明,胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)与NaF对SH-SY5Y细胞凋亡和[Ca2+]i升高存在交互作用(F值分别为10.69、366.14,均P＜0.05),BAPTA-AM可拮抗NaF对SH-SY5Y细胞的损伤作用;胞外钙离子螯合剂乙二醇双四乙酸(EGTA)与NaF对SH-SY5Y细胞凋亡和[Ca2+]i升高无交互作用(F值分别为0.02、0.03,均P＞0.05).结论 NaF对SH-SY5Y细胞的升钙作用可能参与了NaF的致细胞损伤和诱导凋亡作用,[Ca2+]i的升高可能与胞内钙库的释放有关.     

三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡中Caspase-3活力的研究

目的 观察三氯乙烯(TCE)诱导离体培养的人角质形成细胞(KC)Caspase-3活力变化及细胞凋亡情况,探讨TCE诱导KC凋亡的可能信号通路.方法 以不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mmol/L)TCE对离体分离培养的KC分别染毒至4、8、12、24 h;Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)预处理组,先用100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理细胞1 h,然后再用2.000 mmol/L TCE染毒12 h.用分光光度法检测细胞Caspase-3活力变化,借助Annexin-V/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 与空白对照相比,TCE染毒4 h,各TCE剂量组Caspase-3活力无明显变化(P>0.05);染毒8 h,1.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力和2.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);TCE染毒12 h和24 h,各TCE剂量组Caspase-3活力明显升高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且呈剂量-效应关系.各TCE剂量组,在TCE浓度达到0.250 mmol/L以后,细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且明显呈剂量-效应关系.Z-DEVD-FMK预处理组,与2.000 mmol/L TCE组比较,Caspase-3活力和细胞凋亡率明显得到抑制(P<0.01),而与空白对照相比差异无显著性(P>0.01).结论 在TCE诱导离体培养的KC凋亡中,Caspase-3的活化可能发挥了重要的作用.     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞超微结构及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞超微结构及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。方法实验设染毒组,10、20μmol/L醋酸铅处理体外培养的人股动脉内皮细胞24 h后,用透射电镜观察细胞超微结构的变化;细胞免疫化学法、Western blot法检测Caspase-3的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。设不加醋酸铅为对照组。结果经染醋酸铅24 h后电镜观察发现染毒组细胞染色质固缩、边移,核质间隙增宽,20μmol/L醋酸铅染毒组凋亡小体形成;细胞免疫化学、Western blot结果显示醋酸铅组的Caspase-3阳性表达较对照组明显升高;流式细胞仪检测发现醋酸铅染毒组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0.05）。结论醋酸铅可诱发人股动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与Capase-3的活化有关。     

阿特拉津对大鼠支持细胞凋亡的影响

目的探讨阿特拉津对雄性SD大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响及其作用机制。方法选用18~21日龄雄性SD大鼠,建立支持细胞原代培养模型。设溶剂对照组和阿特拉津10、50、100和200μmol/L 4个染毒剂量组,对支持细胞染毒24 h后,采用MTT法检测细胞活性,免疫荧光法观察波形蛋白的表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,Real time-PCR与ELISA分别检测Fas L、caspase-3与caspase-8的mRNA表达及蛋白含量。结果阿特拉津50、100和200μmol/L染毒组细胞活力分别为82.47%、75.23%和53.76%,与溶剂对照组比较分别降低17.53%(P<0.05)、24.77%(P<0.05)、46.24%(P<0.01)。波形蛋白表达受抑制。阿特拉津50、100和200μmol/L染毒组细胞凋亡率分别为8.53%、13.07%和14.45%,与溶剂对照组比较分别升高86.86%(P<0.01)、186.13%(P<0.01)、216.06%(P<0.01)。Fas L、caspase-3、caspase-8的mRNA表达及蛋白含量上调(P<0.05或P<0.01)。结论阿特拉津可影响大鼠支持细胞活性,可通过Fas L途径诱导支持细胞凋亡。     

多溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡的影响

目的观察2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株氧化应激和凋亡的影响及活性氧在细胞凋亡中的作用。方法实验共分4组,PDDE-47终浓度为0、2、4、8μg/ml,分别作为对照组,低、中、高剂量组。用2、4、8μg/ml PBDE-47对培养的SH-SY5Y细胞染毒,24 h后检测细胞存活率、活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量及凋亡率。结果与对照组比较,低剂量组细胞存活率略有上升,中、高剂量组细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P相似文献   

镉诱导293细胞凋亡与Caspase-3和p53表达关系

目的研究镉致细胞凋亡过程中Caspase-3和p53表达的变化,探讨Caspase-3和p53基因在镉致细胞凋亡中的作用。方法离体培养的转化人胚肾293细胞以40μmol/L氯化镉分别处理0~24h,N-乙酰半胱氨酸(NAC)和Caspase-3特异性三肽抑制剂(Z-DEVD-fmk)预处理组分别在镉处理前以5mmol/LNAC和10μmol/LZ-DEVD-fmk预处理24h和1h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法测Caspase-3和p53水平,流式细胞Anexin-V-PI双染法检测细胞凋亡率。结果40μmol/L镉处理293细胞,6~24hCaspase-3基因mRNA水平显著增高,0~24h内p53基因mRNA无显著变化。40μmol/L镉处理293细胞,6~24h内Caspase-3相对分子质量20000的活性亚单位条带显著增强,与镉处理24h组比较,NAC预处理组Caspase-3相对分子质量20000的活性亚单位条带显著减弱(P<0·01),Z-DEVD-fmk预处理组无明显变化(P>0·05);40μmol/L镉处理293细胞,p53蛋白在6~24h表达增强(P<0·01),与单纯镉处理24h组比较,NAC和Z-DEVD-fmk预处理组p53蛋白表达无显著变化(P>0·05)。结论Caspase-3基因在镉诱导细胞凋亡过程中起着重要的作用。     

硒对染T-2毒素软骨细胞表达P53、Bcl-xL和Caspase-3的影响

目的研究T-2毒素对软骨细胞P53、Bcl-xL和Caspase-3表达的影响以及硒对T-2毒素致软骨细胞损伤的保护作用。方法胎儿软骨细胞体外培养5d,向培养液中加入硒(100μg/L)和不同浓度的T-2毒素(1、10、20μg/L),采用Western blot分析软骨细胞P53、Bcl-xL和Caspase-3蛋白表达水平;用RT-PCR法检测软骨细胞P53、Bcl-xL和Caspase-3 mRNA的表达。结果各T-2毒素组与对照组比较,不同浓度的T-2毒素(1～20μg/L)均能引起P53蛋白表达水平明显升高和Bcl-xL蛋白表达水平下降(P<0.05);当T-2毒素浓度达10～20μg/L时,Caspase-3蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.05);当T-2毒素浓度达20μg/L时,P53的mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。各T-2毒素组与T-2毒素加硒组比较,硒可部分对抗T-2毒素引起的P53表达的升高和Bcl-xL表达的下降,同时,降低Caspase-3表达水平(P<0.05)。结论T-2毒素诱导的凋亡与其上调软骨细胞P53、Caspase-3表达,同时下调Bcl-xL表达水平有关...     

交通相关细颗粒物对CEM-6T细胞凋亡不同信号通路的影响

目的 探讨交通相关细颗粒物对CEM-6T细胞凋亡的影响,为研究交通相关细颗粒物的免疫毒性机制提供实验依据.方法 使用不同剂量(0、20、80、320 μg/ml)交通相关细颗粒物染毒CEM-6T细胞24和48 h,用RT-PCR测定CEM-6T细胞中Caspase-3的mRNA表达,以Western Blot测定Caspase-9、Cyt-c、Fas-L、Caspase-8和TNF-α蛋白表达.结果 320 μg/ml交通相关细颗粒物染毒细胞24 h和48 h后,Caspase-3基因表达高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).80、320 μg/ml细颗粒物染毒细胞24和48 h后,细胞内Cyt-C、Caspase-9、Fas-L、Caspase-8、TNF-α蛋白表达升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 交通相关细颗粒物可通过线粒体通道和死亡受体通道诱导CEM-6T细胞凋亡.     

PBDE-47对人神经母细胞瘤细胞凋亡和线粒体膜电位及细胞色素C蛋白表达的影响

目的探讨PBDE-47对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响及其与细胞凋亡的关系。方法将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分别加入终浓度为0(溶剂对照组)、1、5、10μmol/L的PBDE-47暴露24 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用Western blot技术检测胞浆与线粒体细胞色素C蛋白表达的水平。结果与溶剂对照组相比,10μmol/L PBDE-47染毒组SH-SY5Y细胞凋亡率和5、10μmol/L PBDE-47染毒组胞浆内细胞色素C蛋白表达水平均明显升高,10μmol/L PBDE-47染毒组线粒体膜电位和各浓度PBDE-47染毒组线粒体内细胞色素C蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着PBDE-47染毒浓度的升高,SH-SY5Y细胞凋亡率和胞浆内细胞色素C蛋白表达水平呈升高趋势,线粒体内细胞色素C蛋白表达水平呈下降趋势。结论 PBDE-47可通过引起线粒体膜通透性转运孔开放和细胞色素C的释放介导SH-SY5Y细胞凋亡,从而对SH-SY5Y细胞产生损伤。     

2,2’,4,4’-四溴联苯醚对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的研究PBDE-47对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期、凋亡和p53蛋白表达的影响。方法用低、中、高剂量(0、0.5、2.5、5μg/ml)的PBDE-47对体外培养的SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后采用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Westernblot检测p53蛋白的表达水平。结果与对照组相比,低、中、高剂量染毒组G0/G1期细胞数均明显增加,S期细胞数均明显减少(P0.001)。与对照组相比,高剂量染毒组细胞凋亡率明显升高(P0.001),中、高剂量染毒组p53蛋白表达水平均明显升高(P0.01)。结论 PBDE-47可导致SH-SY5Y细胞在G0/G1期发生阻滞及细胞凋亡,并诱导p53蛋白表达增加,PBDE-47导致的细胞周期阻滞与凋亡可能与p53蛋白表达水平增加有关。     

热疗对宫颈癌Caski细胞Caspase-3表达的影响

目的 探讨不同温度热疗后Caspase-3在宫颈癌Caski细胞中的表达变化.方法 采用实时荧光定量PCR技术和westem Blot检测43℃、45℃、47℃实验组和37℃对照组24 h后宫颈癌Caski细胞中Caspase-3的表达.结果 Caspase-3 mRNA在37℃、43℃、45℃、47℃处理后24 h的表达倍数分别为1、(2.738±0.156)、(1.35±0.071)、(0.78±0.093).Caspase-3蛋白的灰度值在对照组、43℃、45℃、47℃分别为(0.894±0.064)、(1.237±0.182)、(1.196±0.104)、(0.401±0.051).在43℃和45℃其蛋白表达量明显增加(P<0.05),而47℃的表达明显降低(P<0.05). 结论 43℃和45℃热疗可以在mRNA的水平调节宫颈癌Caski细胞中Caspase-3表达,导致Caspase-3蛋白表达明显增加.     

急性脑缺血大鼠海马CA1区细胞凋亡与Caspase-3及Caspase-10蛋白表达的相关性

目的探讨急性脑缺血大鼠海马CA1区细胞凋亡与Caspase-3及Caspase-10蛋白表达的关系。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型。应用原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组化法及Western-blotting蛋白印记技术分别检测Caspase-3及Caspase-10蛋白表达。结果①脑缺血大鼠海马CA1区3h出现凋亡阳性细胞,48 h达到高峰,72 h凋亡阳性细胞的数量开始下降。②脑缺血大鼠海马CA1区3 h可见Caspase-3及Caspase-10蛋白阳性细胞,48 h表达达高峰,72 h表达开始减少。③脑缺血大鼠海马CA1区Caspase-3及Caspase-10蛋白表达的变化与细胞凋亡数呈正相关(r=0.976,P﹤0.01;r=0.986,P﹤0.01)。结论脑缺血大鼠海马CA1区存在细胞凋亡,且与Cas-pase-3及Caspase-10蛋白表达的变化一致,Caspase-3及Caspase-10蛋白可促进细胞凋亡发生。     

Caspase-3在二硫化碳染毒小鼠心肌细胞中的表达

目的 探讨二硫化碳染毒对小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 将48只小鼠随机分为4组，其中低剂量组、中剂量组、高剂量组分别采用不同浓度的二硫化碳进行染毒，空白对照组不吸入二硫化碳。染毒5周后，分别取以上各组小鼠心肌组织，用免疫组织化学S-P法检测各组小鼠心肌组织中Caspase-3的表达。结果 低剂量组、中剂量组和高剂量组心肌组织中Caspase-3的表达呈阳性表达。结论 二硫化碳对小鼠心肌组织有毒性作用，可诱导小鼠心肌细胞的凋亡。     

铅对小鼠睾丸TGFβ1及Caspase-3表达的影响

目的 探讨不同浓度和时间醋酸铅染毒对小鼠睾丸转化生长因子β1（Transforming growth factor β1，TGFβ1）、半胱天冬酶3（Caspase-3）表达的影响，进一步阐明醋酸铅所致睾丸毒性的作用机制。方法 45只雄性小鼠分为空白对照组和0．2％，0．4％醋酸铅染毒组，每组15只。并在第2，4，6周分别处死每组小鼠各5只，取其睾丸组织，免疫组化检测TGFβ1、Caspase-3表达的差异。结果 染铅后不同周TGFβ1、Caspase-3的表达较空白对照组增强，差异有统计学意义（P〈0．05）。且随着染毒时间的延长，表达越强（P〈0．05）。但在0．2％与0．4％不同周染铅组之间TGFβ1、Caspase-3的表达差异并无统计学意义（P〉0．05）。结论 醋酸铅使睾丸TGFβ1 Caspse-3的表达增强，从而促使生殖细胞发生凋亡。     

ASC与Caspase-1在结肠癌中的表达及临床意义

目的 探讨ASC与Caspase-1在结肠癌组织及癌旁组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化LSAB法对30例术前无放化疗的结肠癌标本及其相应的癌旁组织进行ASC、Caspase-1检测，并结合各指标进行分析。结果癌旁组织及肿瘤组织中ASC阳性率分别为60．00％（18／30）和13．33％（4／30），组间阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．01）；Caspase-1阳性率分别为60．00％（18／30）和30．00％（9／30），组间阳性表达率差异有显著性（P〈0．05）。ASC与Caspase-1两指标在肿瘤组织中的表达呈负相关，但无统计学意义（P〉0．05），在癌旁组织中表达高度正相关（P〈0．01）。结论结肠癌中有ASC、Caspase-1的低表达，且显著低于癌旁组织，提示ASC、Caspase-1在结肠癌的凋亡、发生及发展过程中有重要作用。     

Caspase-3及Survivin与心肌细胞凋亡的研究进展

Caspase-3是细胞凋亡的关键元件,Survivin具有抑制细胞凋亡的功能,而细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤发病机制中的重要环节。本研究对Caspase-3及Survivin与细胞凋亡进行综述,以期在分子水平控制细胞凋亡,达到保护心肌的目的。     

半胱氨酸天冬氨酸特异性酶-1诱导的Pyroptosis及其在感染性疾病中的作用

半胱氨酸天冬氨酸特异性酶-1 (Caspase-1)的激活可诱导细胞通过一种称为Pyroptosis的方式死亡.Pyroptosis是一种程序性细胞死亡方式,其形态学特征有别于细胞凋亡或坏死,主要表现为包膜破裂,胞内容物外流.在许多感染性疾病中,Caspase-1诱导产生的细胞因子和细胞死亡可促进机体清除病原体;但在一些病原体感染中,Caspase-1活化引起的炎症反应和细胞死亡可能和病原体的致病机制有关.此文就细胞Pyroptosis时的形态学特征、机制及其在感染性疾病中的作用进行综述.     

Caspase-3及Survivin与心肌细胞凋亡的研究进展

Caspase-3是细胞凋亡的关键元件,Survivin具有抑制细胞凋亡的功能,而细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤发病机制中的重要环节。本研究对Caspase-3及Survivin与细胞凋亡进行综述,以期在分子水平控制细胞凋亡,达到保护心肌的目的。     

Caspase-3蛋白在尖锐湿疣组织中的表达及临床意义

目的:探讨尖锐湿疣组织中Caspase-3的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法分别检测39例女性宫颈尖锐湿疣组织和35例慢性宫颈炎组织中Caspase-3的表达。结果:Caspase-3在尖锐湿疣组织和慢性宫颈炎组织中均呈阳性表达,但前者显著低于后者(χ2=6.02,P<0.05)。结论:Caspase-3的表达下调在尖锐湿疣的发生发展中起一定作用。     

重度子痫前期胎盘组织中Bcl-2和Caspase-3的表达及意义

目的:探讨重度子痫前期患者胎盘组织中Bcl-2和Caspase-3的表达及其与重度子痫前期发生、发展的关系。方法:采用免疫组织化学染色方法检测20例正常晚期妊娠孕妇(对照组)、40例重度子痫前期患者(重度子痫前期组,其中早发型20例,晚发型20例)的胎盘组织进行Bcl-2和Caspase-3的定位,并用计算机图像分析系统进行定量分析。结果:与对照组比较,重度子痫前期组Bcl-2的表达显著降低和Caspase-3的表达显著升高,且两者呈负相关(r=-0.334,P=0.009),早发型重度子痫前期与晚发型重度子痫前期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在胎盘组织中Bcl-2低表达和Caspase-3的高表达,可能与重度子痫前期的发生有关。