不同浓度EPA和DHA对C2C12肌管细胞IL-6表达及TRPV1/PKC/Ca2+信号通路的影响

目的 探讨不同浓度二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）对C2C12肌管细胞IL-6表达与分泌的调节作用和机制。方法 采用25、50、100、200、400μmol/L EPA或DHA处理C2C12肌管细胞12、24、36 h，设立BSA对照组。MTT检测细胞活性，PCR与Western blot分别检测IL-6的mRNA与蛋白表达水平，ELISA测定IL-6分泌水平，检测TRPV1、PKC的mRNA表达水平及TRPV1、PKC、p-PKC蛋白表达水平，Fluo-4 AM钙离子荧光探针检测胞内Ca2+浓度。结果 IL-6表达与分泌方面，100μmol/L EPA或DHA干预24h可显著提高肌管细胞IL-6 mRNA表达；100μmol/LEPA或DHA干预24h、36h可显著促进IL-6分泌；100μmol/L EPA或DHA可呈时间梯度上调IL-6蛋白表达水平。各浓度EPA或DHA干预肌管细胞24h后，IL-6 mRNA表达水平与分泌均呈浓度梯度增加，其中200、400μmol/L效果最为...     

视黄酸对肠道树突状细胞成熟分化及其功能的影响

目的研究视黄酸对粘膜树突状细胞(DC)的成熟分化及其功能的影响,从免疫应答的初始环节探讨维生素A影响肠粘膜免疫的作用及其机制。方法大鼠肠粘膜体外培养,加入全反式视黄酸(RA)和/或视黄酸受体α(RARα)拮抗剂(Ro41-5253),于培养24h、48h收获后,1.采用流式细胞仪检测大鼠DC表面分化标志OX62、OX6和CD86的荧光强度,观察RA对DC成熟分化的影响;2.抽提RNA,采用荧光定量PCR法测定细胞因子和RARαmRNA表达水平,分析其对粘膜免疫的作用及途径。结果体外培养中加入RA,DC数目未受影响,但可明显促进DC成熟,并且RARαmRNA水平上调,该作用于培养24h显著。RA还可下调Th1细胞因子IL-12和IFN-γmRNA表达,对Th2细胞因子IL-4的产生无明显影响,可促进调节性细胞因子IL-10的mRNA表达。Ro41-5253可逆转RA的上述作用。结论对DC的调节作用可能是维生素A影响肠道粘膜免疫的重要机制之一,RARα参与介导了RA的调节作用。     

煤焦沥青对中国仓鼠肺细胞周期和凋亡的影响

目的探讨煤焦沥青对中国仓鼠肺(CHL)细胞c-jun、fos和表皮生长因子受体(EGFR)m RNA表达和细胞周期和凋亡的影响。方法常规培养CHL细胞,常规消化细胞后,将细胞接种于6孔板中,待其融合度达到40%左右时,加入含有煤焦沥青的培养液,调整浓度至0、20、40 mg/L,分别于作用24、72 h后提取细胞总RNA,采用半定量RT-PCR技术检测c-jun、fos和EGFR m RNA的表达水平;将等量的细胞接种在50 ml的培养瓶中,待细胞融合度达到40%左右时,加入含煤焦沥青的培养液,调整浓度为0、20、40 mg/L,每组设置6个重复样品,分别加入谷胱甘肽(GSH)和N-乙酰半胱氨酸(NAC),调整浓度至0、2.5、10 mmol/L,作用120 h后收集细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和S期细胞的构成比。结果在20 mg/L煤焦沥青作用24 h后,CHL细胞的fos、c-jun和EGFR m RNA的表达水平均高于0 mg/L剂量组,差异均有统计学意义(P0.05);作用72 h后c-jun和EGFR的表达水平显著高于0 mg/L剂量组(P0.05)。在40 mg/L剂量组作用24和72 h后,fos、c-jun和EGFR m RNA的表达水平均高于0 mg/L剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。煤焦沥青作用后,细胞凋亡率降低,在GSH作用下,凋亡率有所增加,NAC作用下的凋亡率增加的幅度更加明显,但以上差异均无统计学意义(P0.05);20 mg/L的煤焦沥青作用120 h后,S期的细胞构成显著增加(P0.05);GSH和NAC可以显著抑制S期的细胞构成改变,差异有统计学意义(P0.05)。结论煤焦沥青可以诱导fos、c-jun和EGFR m RNA的表达水平和S细胞周期的构成增加、抑制细胞凋亡率,而GSH和NAC可以抑制这种诱导效应。     

结缔组织生长因子对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞释放IL-17A的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞(16HBE)表达白介素17A(IL-17A)水平的影响。方法采用0、12.5、25、50、100μg/ml石英粉尘染毒人支气管上皮细胞(16HBE)24、48 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,以荧光定量PCR方法检测细胞内CTGF mRNA相对表达水平;用CTGF siRNA干扰16HBE细胞12 h后,加入0、25、50μg/ml石英粉尘染毒48 h,并设同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞为对照组,收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-17A的含量。结果与24 h染尘组比较,石英粉尘染毒16HBE细胞48 h后细胞毒性作用更明显,其细胞存活率随石英粉尘浓度的增加逐渐降低(P0.05);同时细胞内CTGF mRNA相对表达水平和细胞分泌IL-17A的水平均显著升高(P0.05),且呈剂量-效应关系,50μg/ml染毒组细胞内表达CTGF mRNA和分泌IL-17A的水平达到最高;与同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞相比,25、50μg/ml石英粉尘诱导CTGF siRNA干扰组细胞分泌IL-17A的水平显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论抑制CTGF可显著降低石英粉尘诱导16HBE细胞表达IL-17A的水平,提示CTGF可能参与调节石英粉尘致肺部炎性及纤维化的反应过程。     

Zn~(2+)对人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞IL-8和TNF-α mRNA和蛋白表达水平的影响

目的研究Zn2+对人Ⅱ型肺泡上皮细胞炎性细胞因子IL-8和TNF-α mRNA和蛋白表达水平的影响。方法用含0、50、100和250μmol/L Zn2+的F-12培养基培养人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞,分别于3h和24h用RT-PCR半定量IL-8和TNF-α mRNA表达量,用RIA测定培养上清液中IL-8和TNF-α蛋白浓度。结果A549细胞染Zn2+3h时A549细胞以浓度依赖方式高表达IL-8和TNF-α mRNA和蛋白;24h时IL-8和TNF-α蛋白表达量进一步增高,IL-8 mRNA表达下降,TNF-α mRNA继续保持高表达。结论Zn2+显著提高A549细胞IL-8和TNF-α表达量,Ⅱ型肺泡上皮细胞可能是Zn2+导致的呼吸系统损伤中炎性细胞因子的重要来源。     

微囊藻毒素-LR对活性氧产生及细胞色素P450各亚型表达的影响

[目的]探讨低剂量微囊藻毒素-LR（MCLR）诱导细胞内活性氧（ROS）产生的潜在来源。[方法]采用转染有机阴离子转运多肽OATP1B3的人胚肾细胞株HEK293-OATPIB3,设3个浓度的MCLR处理组（10、20、50nmol／L）和未处理对照组（0．1％二甲基亚砜）。染毒4、24h后,测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,用荧光探针法检测细胞内ROS水平,采用实时荧光定量聚合酯链反应检测细胞色素P4501A1（CYP1A1）、1A2、2E1 mRNA的表达水平。[结果]低浓度（10-50nmol／L）的MCLR作用HEK293-OATP1B3细胞4h未产生明显细胞毒性;24h后,LDH漏出率随着处理浓度的增加而增加。50nmol／LMCLR处理细胞4h后引起ROS水平明显升高（P〈0．01）。同时,MCLR还上调了CYP2E1的mRNA表达水平（P〈0．01）;但未影响CYP1A1 mRNA的表达;对照组和MCLR处理组的CYP1A2 mRNA表达水平均非常低。[结论]低剂量MCLR可诱导细胞内ROS产生和上调CYP2E1 mRNA表达,提示CYP2E1可能是MCLR诱导ROS产生的一个潜在来源。     

纳米二氧化硅对16HBE细胞存活率及PARP-1表达的影响

目的探讨纳米二氧化硅(SiO_2)对人支气管上皮细胞(16HBE细胞)存活率和聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)表达的影响。方法 (1)以质量浓度为0~100 mg/L纳米SiO_2处理16HBE细胞24.0 h,以CCK-8法检测细胞存活率。(2)将16HBE细胞分为6组:溶剂对照组(予等体积溶剂处理)、微米SiO_2对照组(予终质量浓度为20 mg/L微米SiO_2处理),5、10、20 mg/L纳米SiO_2组(予相应终质量浓度的纳米SiO_2处理),姜黄素组(先予终浓度为10μmol/L的姜黄素处理2.0 h,再予终质量浓度为20 mg/L的纳米SiO_2处理)。各组细胞经处理后,分别于培养4.0、12.0和24.0 h时间点收获细胞。采用荧光实时定量聚合酶链式反应检测细胞中PARP-1 mRNA的相对表达水平,以免疫印迹法检测PARP-1蛋白的相对表达水平。结果 (1)随着纳米SiO_2处理剂量的增加,细胞存活率下降,呈剂量-效应关系(P0.01)。(2)在12.0和24.0 h时间点,纳米SiO_2刺激后,16HBE细胞的PARP-1 mRNA和蛋白相对表达水平均出现剂量依赖性下降(P0.01);与同时间点溶剂对照组比较,5、10、20 mg/L纳米SiO_2组16HBE细胞在该2个时间点的PARP-1 mRNA和蛋白相对表达水平均下降(P0.05)。在12.0和24.0 h时间点,20 mg/L纳米SiO_2组16HBE细胞的PARP-1 mRNA和蛋白相对表达水平均低于同时间点的微米SiO_2对照组(P0.05);姜黄素组16HBE细胞的12.0 h时间点上述2个指标均高于20 mg/L纳米SiO_2组(P0.05)。结论纳米SiO_2刺激可导致16HBE细胞存活率下降并呈剂量依赖性;PARP-1表达的下调可能是纳米SiO_2致16HBE增殖抑制的机制之一。姜黄素对纳米SiO_2诱导的16HBE的细胞损伤具有一定的保护作用。     

DEHP对小鼠淋巴细胞分泌IL-2影响

目的 通过邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)影响小鼠淋巴瘤细胞(EL4)分泌白细胞介素-2(IL-2)蛋白影响机制研究,探讨DEHP对辅助性T细胞1(Th1)型细胞因子影响.方法 不同浓度DEHP染毒以25 ng/mL佛波酯(PMA)+1μg/mL离子霉素(Ion)激活的EL4细胞,并用钙调神经磷酸酶抑制剂FK506进行干预;实验6 h用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测活化T细胞核因子(NFAT)的mRNA表达;实验48 h用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中IL-2蛋白表达.结果 与激活剂组的(72.59±9.05)pg/mL比较,10,50 μmol/L DEHP染毒组的IL-2蛋白分泌量为(36.00±5.10),(32.00±1.86)pg/mL,明显降低EL4细胞分泌IL-2蛋白(P<0.01);50μmol/L DEHP明显升高了EL4细胞中NFAT2 mRNA相对含量,且降低了NFAT1 mRNA相对含量(P<0.05);0.05,0.5 μmol/L FK506未明显影响IL-2蛋白表达;Spearman相关分析表明,DEHP影响IL-2蛋白与NFAT mRNA表达元相关.结论 DEHP可能是通过NFAT非依赖途径影响EL4细胞分泌IL-2蛋白.     

ERK/JNK信号通路在炭黑诱导细胞因子IL-6、IL-8表达改变中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在炭黑诱导人胚肺成纤维细胞(HELF)白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)表达改变中的作用。方法分别在含0、15、30、60、120或240μg/mL炭黑的RPMI-1640培养液中培养HELF细胞24 h,用噻唑蓝比色法确定炭黑致HELF细胞毒性的剂量。100μg/mL炭黑分别处理HELF细胞(炭黑组)、转染ERK显性失活突变体质粒(DN-ERK)HELF细胞(CB-DN-ERK)和转染JNK显性失活突变体质粒(DN-JNK)HELF细胞(CB-DN-JNK),同时设立不做任何处理的对照组。在染毒16 h时取炭黑组和对照组HELF细胞,采用扫描电子显微镜观察细胞的形态和是否有炭黑颗粒;在0、1、2、4、8、16、24和36 h时取炭黑组和对照组HELF细胞上清液,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测其IL-6和IL-8的表达水平;在24 h时采用ELISA法检测CB-DN-JNK和CB-DN-JNK组HELF细胞IL-6和IL-8的表达水平。结果炭黑染毒HELF细胞16 h时未观察到炭黑颗粒,但其细胞表面突起增多。炭黑组HELF细胞在2 h(44.86±3.65 ng/L)和4 h(76.52±3.15 ng/L)时的IL-6表达水平低于对照组(分别为96.78±2.82和147.32±3.26 ng/L),而在16 h(202.64±7.20 ng/L)、24 h(200.38±6.20 ng/L)和36 h(183.54±4.54 ng/L)时则高于对照组(分别为105.54±6.10、101.27±5.84和97.15±5.12 ng/L),差异均有统计学意义(P<0.001);炭黑组HELF细胞在24 h(136.75±3.81 ng/L)和36 h(149.12±2.74 ng/L)时的IL-8表达水平高于对照组(分别为75.16±2.84和73.44±2.15 ng/L),差异有统计学意义(P<0.001)。与炭黑组HELF细胞相比,CB-DN-ERK和CB-DN-JNK组HELF细胞IL-6和IL-8表达水平均显著降低(P<0.05)。结论在炭黑诱导HELF细胞IL-6和IL-8表达水平改变的过程中,ERK和JNK均正调控IL-6和IL-8表达水平。     

卡介苗干预对IL-4诱导的巨噬细胞炎症细胞因子和粘附分子表达的影响

目的探究卡介苗(BCG)干预对IL-4诱导的巨噬细胞炎症细胞因子(IL-12、IL-6、IL-10、MRC-1)和粘附分子(CCL-2)表达的影响。方法应用PMA(10 ng/m L)与IL-4(10 ng/m L)刺激巨噬细胞,使其向M2转型,并将溶于DMSO的0 mg/L、20 mg/L、50 mg/L及100 mg/L的BCG作用24 h,应用PCR的方法测定各组中IL-12、IL-6、IL-10、MRC-1及CCL-2 mRNA的表达。结果 IL-4刺激后IL-12、IL-6、IL-10、MRC-1及CCL-2 mRNA含量均有显著升高(P0.01),而给予不同浓度的BCG后,IL-12、IL-6、IL-10、MRC-1及CCL-2 mRNA含量均有显著下降(P0.01),100 mg/L的BCG作用最为明显。结论卡介苗能够抑制IL-4刺激的巨噬细胞炎症细胞因子和粘附分子的表达。