纳米二氧化硅对HaCaT细胞谷胱甘肽还原酶表达及活力的影响

目的探讨经不同粒径纳米二氧化硅处理后,HaCaT细胞内谷胱甘肽还原酶(GR)的表达及其活力的变化。方法将对数生长期HaCaT细胞经15μg/ml的15、30、100nm纳米二氧化硅处理24h后,采用实时荧光定量PCR(RT-Q-PCR)检测GR基因mRNA的表达水平,采用Westernblotting检测GR蛋白的表达水平,采用试剂盒检测GR活力变化。结果不同粒径纳米二氧化硅对GR基因的mRNA水平具有明显影响,纳米二氧化硅粒径越小,mRNA表达水平越低,但均低于对照组;GR蛋白表达量随纳米二氧化硅粒径增大而增大,且15、30nm纳米二氧化硅抑制GR表达,100nm纳米二氧化硅促进GR表达;GR活力随纳米二氧化硅粒径的增大而升高。结论纳米二氧化硅可能通过影响GR的表达及酶活力的变化促进氧化应激反应。     

硫化镍对16HBE细胞中基因的影响

目的 检测结晶型硫化镍(NiS)对K-ras基因和P15基因的改变及基因组不稳定性的影响，从而进一步探讨镍化合物致癌的分子机制。方法 采用限制性片段长度多态性分析和聚合酶链反应一单链构象多态性分析方法探查结晶型NiS在诱导16人气管上皮细胞(HBE)恶变过程中的K-ras基因Exonl第12密码子及第12密码子以外的密码子改变情况。采用PCR-SSCP分析方法探查结晶型NiS在诱导16HBE细胞恶变过程中的P15基因Exon2存在状况。采用随机扩增多态性技术来对结晶型NiS在诱导16HBE细胞恶变过程中的基因组不稳定性进行分析。结果 K-ras基因Exonl和P15基因Exon2未发生改变。本实验所选用的7条随机引物均能扩增出清晰、明显的条带。其中P4、P5、P7两条引物扩增的片段在实验组和对照组之间无差异，其余4条引物均有差异。对于同一随机引物他们都具有特异的带型。结论 P15基因第2外显子和K-ras基因第1外显子(包括第12、13密码子)可能不是结晶型NiS作用的靶部位。在结晶型NiS诱发细胞恶性转化过程中，基因组变得逐渐不稳定。     

纳米氧化钕致16HBE细胞炎症反应中lncRNA差异性表达

目的研究稀土纳米氧化钕致16HBE细胞炎症反应中lncRNA表达的变化。方法以不同剂量纳米氧化钕(0、5、10、20、40、80、160、320μg/ml)处理16HBE细胞24、48和72 h,以CCK-8法测定细胞存活率,以ELISA测定IL-6和IL-8的表达;以10μg/ml纳米氧化钕处理16HBE细胞48 h,以微阵列检测其lncRNA表达,以荧光定量PCR验证10种差异表达明显的lncRNA。结果与对照组相比,纳米氧化钕分别处理16HBE细胞24、48和72 h后,0、5、10、20、40、80μg/ml剂量组细胞存活率无明显改变(P0.05),160、320μg/ml剂量组细胞存活率均明显降低(P0.01)。ELISA检测结果发现与对照组相比,纳米氧化钕处理48和72 h后IL-6和IL-8分泌明显增加(P0.01)。基因微阵列结果显示有925种lncRNA表达发生改变,其中上调lncRNA有326种,下调有599种。与对照组比较,LOC105373796相对表达量上调到206%(P0.01),且胞浆胞核定位显示该基因主要位于细胞核中表达。结论纳米氧化钕致16HBE细胞炎症反应中,lncRNA表达谱发生改变,其中LOC105373796上调明显,可能发挥促炎作用。     

沉默PARP-1对miR-221表达的影响

目的探讨PARP-1沉默TK6细胞miR-221的表达。方法以空载体TK6细胞为对照组,以PARP-1沉默TK6细胞为处理组。免疫印迹法检测PARP-1蛋白表达量,反转录实时荧光定量-聚合酶链反应检测miR-221的表达改变。结果 PARP-1-shRNA组细胞PARP-1蛋白表达量与对照组细胞[(1.00±0.11)倍]相比,下降了75%(P0.05),miR-221表达量与对照组细胞[(1.00±0.07)倍]相比,下降了26%(P0.05)。结论 TK6细胞miR-221表达受PARP-1调节。     

镉对16HBE细胞凋亡及Bal-2、Bax基因表达影响

目的探讨镉恶性转化人支气管上皮细胞(16HBE细胞)过程中细胞凋亡状况以及Bal-2和Bax表达变化。方法采用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE 细胞不同阶段(第5、15、35 代细胞及成瘤细胞)的细胞凋亡和 Bal-2和Bax基因mRNA表达情况。结果16HBE细胞和恶性转化细胞系第5、15、35 代细胞及成瘤细胞的凋亡率分别为0.65%、1.14%、1.87%、3.78%和4.93%;细胞的Bal-2和Bax的mRNA表达量分别为(9.067±0.155)、(8.183 ±0.206)、(5.971±0.015)、(4.533±0.030)、(4.863±0.066)和(5.973±0.026)、(6.012±0.112)、(6.659±0.028)、(7.032±0.045)、(7.519±0.022),随着转化代数增加,Bal-2 mRNA表达量逐渐降低,Bax的mRNA表达量逐渐上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中能引起细胞凋亡,抑止Bal-2基因的表达和上调Bax基因表达。     

miR-148a-DNMT1对汽油添加剂甲基叔丁基醚所致16HBE细胞DNA损伤的影响

目的 探讨miR-148a-DNMT1 对汽油添加剂甲基叔丁基醚（MTBE）所致人支气管上皮细胞（16HBE）DNA损伤的影响。方法 运用Lipofectamine 2000脂质体将miR-148a mimics转染至16HBE细胞;qRT-PCR分析miR-148a及DNMT1 mRNA的表达;Western Blot分析DNMT1蛋白的表达改变;以终浓度为8 µmol/L的MTBE对正常16HBE,16HBE-mimics及16HBE-NC空载体组细胞分别染毒培养48 h;运用单细胞凝胶电泳（SCGE）实验分析各组细胞的DNA损伤程度。结果 转染miR-148a mimics的16HBE细胞中miR-148a表达增强（P < 0.05）,DNMT1 mRNA及蛋白表达降低（均P < 0.05）,MTBE对各组细胞DNA有损伤,损伤程度无明显差异（P > 0.05）。结论 尚未发现miR-148a-DNMT1的表达变化对汽油添加剂MTBE所致DNA损伤的明显影响。     

低剂量甲醛对16HBE细胞的增殖促进及DNA损伤作用

目的观察甲醛在低剂量水平时短期作用对细胞增殖及DNA损伤的影响,为进一步开展甲醛致体外细胞恶性转变的长期试验提供剂量设计依据。方法采用CCK-8法检测细胞活力,采用BrdU掺入法检测S期细胞比例,从而反映细胞增殖潜能,应用单细胞凝胶电泳结合紫外线照射的方法检测细胞DNA损伤程度。结果在24 h的作用时间下,当甲醛浓度在10-9~10-5mol/L范围内时可以增加细胞增殖率,提高16HBE细胞活力,而剂量达到10-4mol/L时可造成细胞死亡增多,降低细胞活力;同时当甲醛浓度超过10-6mol/L时可产生DNA损伤,在10-6~10-5mol/L表现为DNA断裂,当剂量达到或高于10-4mol/L,DNA蛋白质交联严重;甲醛在10-7~10-5mol/L浓度范围内可以显著增加S期细胞含量,从而促进16HBE细胞增殖。结论 10-6~10-5mol/L甲醛可以在造成16HBE细胞损伤的同时,干扰细胞周期、促进细胞增殖。     

纳米二氧化硅和纳米氧化锌对人肝癌细胞凋亡的影响

目的探讨纳米二氧化硅(SiO_2)和纳米氧化锌(ZnO)颗粒对人肝癌(Hep G2)细胞凋亡的影响。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于含终浓度分别为0(对照)~200μg/ml纳米SiO_2、纳米ZnO颗粒的无血清培养基中培养24 h。检测细胞核形态学变化、线粒体膜电位变化和细胞凋亡的情况。结果与对照组比较,各浓度纳米二氧化硅及纳米ZnO染毒组Hep G2细胞的线粒体膜电位均降低,凋亡率均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着染毒浓度的升高,纳米二氧化硅和纳米ZnO染毒HepG2细胞线粒体膜电位均呈下降趋势,而凋亡率均呈上升趋势。与相同浓度纳米二氧化硅相比,纳米ZnO染毒组HepG2细胞粒体膜电位均较高,凋亡率均较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论两种纳米颗粒均可诱导HepG2细胞发生凋亡和线粒体膜电位发生改变,且纳米SiO_2比纳米ZnO颗粒的细胞毒性作用更强。     

纳米二氧化硅细胞毒性影响因素研究进展

纳米二氧化硅由于其独特的理化性质已广泛应用于药物载体、肿瘤治疗、分子成像等众多领域.对于纳米二氧化硅的安全效应已渐渐成为毒理学研究的热点,特别是对于纳米二氧化硅细胞毒性的研究.细胞是人体结构和功能的基本单位,细胞毒性影响因素的研究将为制定人群暴露剂量提供依据.该文综合国内外现有文献,从纳米二氧化硅的理化性质、细胞暴露条件、靶细胞的差异、测试技术对细胞毒性的影响因素逐一进行了综述.通过控制纳米二氧化硅细胞毒性的影响因素,可以降低其毒性,对真正实现广泛应用有很重要的指导意义.     

低剂量电离辐射对HBE细胞氧化应激及损伤修复影响

目的 探讨低剂量电离辐射（LDIR）对HBE细胞氧化应激及损伤修复的影响。方法 将HBE细胞分为0、50、100、200 mGy组,采用X射线照射后分别培养24 h和48 h,检测细胞存活率、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）以及DNA损伤修复相关基因PPP2R2D和TP53基因转录水平。结果 与对照组相比,辐照后24 h,各剂量组细胞存活率差异无统计学意义（P> 0.05）;各剂量组MDA水平均显著升高,GSH水平呈剂量依赖性降低,8-OHdG水平呈剂量依赖性升高,PPP2R2D基因mRNA水平均显著升高,差异具有统计学意义（P <0.05）;50 mGy组TP53基因mRNA表达水平显著升高,差异具有统计学意义（P <0.05）。与对照组相比,辐照后48 h,50 mGy组细胞存活率达到最高,MDA水平显著降低,8-OHdG水平显著降低,PPP2R2D基因和TP53基因m RNA表达水平均显著升高,差异具有统计学意义（P <0.05）;100 mGy组细胞GSH水平显著升高,差异具有统计学意义（P <0.05）。结论...     

纳米二氧化硅对HaCaT细胞中PAPR-1基因表达及其启动子甲基化的影响

目的 研究纳米二氧化硅(nm-SiO2)对人皮肤表皮细胞系(HaCaT)细胞中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1 (poly[ADP-ribose] polymerase 1,PARP-1)基因的表达及其基因启动子区甲基化的影响.方法 分别以2.5、5.0、10.0 μg/ml的nm-SiO2溶液和10 μg/ml的微米级SiO2(micro-SiO2)溶液处理HaCaT细胞24 h;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR,DAC)处理48 h 10 μg/ml的HaCaT细胞为阳性对照(DAC组),并设立溶剂对照组(CTRL组).应用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和蛋白质印迹法(Western-blot法)检测PARP-1在mRNA水平和蛋白水平的表达变化,应用亚硫酸氢盐测序(bisulfite pyrosequence,BSP)法检测PARP-1基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果 HaCaT细胞暴露nm-SiO2 24 h后,经nm-SiO2处理后,micro-SiO2染毒组和2.5μg/ml染毒组PARP-1表达与CTRL组的差异无统计学意义(P＞0.05),与CTRL组比较,5、10 μg/ml染毒组及DAC处理组细胞的PARP-1表达下调,差异有统计学意义(P＜0.05),且其下调水平随着浓度的增大而增高.BSP结果显示PARP-1启动子区-229点甲基化状态升高.结论 nm-SiO2可以降低HaCaT细胞中PARP-1基因的表达,可能与其对PARP-1基因启动子区CpG岛的甲基化影响有关.     

PARP-1在乳腺癌中的表达

聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶是通过碱基切除途径修复DNA单链断裂所必须的酶之一,对维持DNA的稳定性有重要作用。文章综述了聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶的表达水平与乳腺癌预后的关系,以期为临床乳腺癌患者的个体化治疗提供参考。     

纳米二氧化硅细胞毒性效应研究进展

细微颗粒物PM2.5已成为大气污染研究领域的热点和前沿,大气颗粒物中天然和人工超细SiO2颗粒物广泛存在。随着纳米SiO2的生产和应用日益普遍,其向环境的释放亦不可避免。由于纳米SiO2特殊的理化特性,导致其对生物机体的毒理作用与常规颗粒物不尽相同。本文综述报道纳米SiO2对生物机体产生毒性效应的国内外研究成果,即纳米SiO2产生的毒性效应,包括细胞膜毒性、氧化损伤及炎症反应、细胞凋亡和细胞周期的变化、DNA损伤以及基因的表达等,指出纳米SiO2对生物体产生的诸多毒性效应都是由包括粒径和剂量在内的多种因素综合作用的结果,并提出今后应加强对纳米SiO2造成的毒性效应的具体作用机制的相关研究。     

错配修复基因在氯化镉致16HBE细胞转化中作用

目的探讨氯化镉诱发人支气管上皮(16HBE)细胞系恶性转化过程中错配修复基因hMSH2和hMLH1的mRNA和蛋白动态变化情况。方法用反转录一聚合酶链反应(PT-PCR)和免疫组织化学(SP法)检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞系不同阶段(第5,15,35代细胞及成瘤细胞)hMSH2基因和hMLH1基因的mRNA和蛋白的表达情况。结果随着转化代数的增加,hMSH2基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低,至第35代细胞后表达明显下降(P<0.01);而hMLHl基因的mRNA和蛋白表达水平在氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中无明显变化差异(P>0.05)。结论错配修复基因hMSH2表达水平的下调可能是镉化物分子致癌的重要机制。     

三乙胺对HBE细胞的氧化损伤作用

目的探讨三乙胺对永生化人支气管上皮细胞(HBE)的氧化损伤作用。方法体外培养HBE细胞,在6个不同染毒浓度(0、5、7.5、10、15、20mmol/L)和4个不同染毒时间段(6、12、24、48h)的条件下染毒HBE细胞,CCK-8试剂盒检测三乙胺对HBE细胞存活率的影响;收集细胞后装载探针检测细胞活性氧(ROS)的含量;同时通过单细胞凝胶电泳试验(SCGE)检测细胞DNA链断裂情况。结果在相同染毒时间段内,HBE细胞的存活率随着染毒浓度的增加而下降,各浓度组与对照组的差异有统计学意义(P0.05),且呈明显的剂量-效应关系;随着染毒浓度的增加,HBE细胞ROS含量明显上升,与相同染毒时间段对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);SCGE实验结果表明,各组HBE细胞Olive尾距随染毒浓度增加明显增加,呈现明显的剂量—反应关系,与相同染毒时间段对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论三乙胺可降低HBE细胞存活率,诱导HBE细胞产生自由基从而引起DNA损伤。     

纳米二氧化硅对职业接触人群健康影响

目的探讨纳米二氧化硅(nano-Si O2)对职业接触人群健康的影响。方法采用判断抽样方法,以某nanoSi O2材料有限公司28名职业接触nano-Si O2的工人为接触组,以同企业27名工作中不接触nano-Si O2及其他职业病危害因素的人员为对照组;收集2组人员职业健康检查资料,测量工作场所空气中nano-Si O2粉尘水平,对2组人员进行肺功能及神经行为功能检测。结果接触组工作场所空气中nano-Si O2粉尘水平为8.30~36.70 mg/m3。接触组人群尿胆原、尿白细胞计数和尿比重的异常率均高于对照组(59.5%vs 40.5%、21.4%vs 0.0%和46.4%vs18.5%,P0.05)。接触组人群限制性、阻塞性、混合性通气功能障碍的检出率分别与对照组比较,差异均无统计学意义(57.1%vs 29.6%,35.7%vs 11.1%,25.0%vs 11.1%,P0.05)。结论 nano-Si O2对职业接触人群通气功能障碍减退有一定影响。     

二羟环氧苯并芘诱导16HBE细胞转化最佳实验方案

目的　采用客观又简单的软琼脂细胞集落形成率的指标来探索二羟环氧苯并芘诱导 16 HBE细胞转化的理想实验方案 ,构建恶性转化的细胞模型。方法　根据细胞存活率试验及克隆形成率试验确定诱导的剂量 ,以不同剂量二羟环氧苯并芘 1次或多次处理细胞 ,观察培养的不同阶段转化灶出现情况 ,用软琼脂培养鉴定其锚着依存性生长的恶性特征 ,比较各组转化细胞的集落形成率。结果　以 0 .1、0 .5、1.0、2 .0 μmol/ L的剂量 ,对细胞多次间断染毒 ,传代 15次 ,是二羟环氧苯并芘诱导 16 HBE细胞恶性转化的理想方案 ,其集落形成率分别为 2 .0‰、5 .5‰、7.0‰、10 .5‰ ,剂量 -反应关系呈现良好的直线相关 ,r=0 .9741,P<0 .0 5。结论　二羟环氧苯并芘能诱导人支气管上皮细胞 16 HBE转化 ,构建理想的恶性转化的细胞模型     

siRNA对人支气管上皮细胞(16HBE)NF-κ Bp65表达的抑制作用

[目的]探索RNA干扰(RNA interference RNAi)技术在抑制人支气管上皮(16HBE)NF-κBp65表达的抑制效应,为后续研究NF-κBp65在环境化学污染物诱导DNA损伤修复中的作用提供实验模型。[方法]设计针对NF-κBp65的siRNA,构建NF-κBp65-shRNA的表达载体,采用阳离子脂载体Lipofectamine2000TM和siPORTTMXP-1两种转染系统比较其抑制率,选择抑制效果较高的转染系统,优化转染条件,从而达到最优的NF-κBp65的抑制模型。[结果]阳离子脂载体Lipofectamine2000TM和siPORTTMXP-1两种转染系统进行比较,siPORTTMXP-1转染系统NF-κBp65的抑制效率更高,约为40%。优化质粒的浓度和转染时间,荧光定量PCR结果质粒浓度为0.4μg,转染48h时NF-κBp65的mRNA抑制率较高,为62.9%。Westernblot检测蛋白质表达水平降低约为60.2%。[结论]RNAi技术可以有效地抑制16HBE细胞中的NF-κBp65表达,该模型的建立有利于后续实验的进行。     

马尾松针提取物对镉毒16HBE细胞保护作用

目的研究马尾松松针提取液对氯化镉(CdCl2)致16HBE细胞毒性的保护作用。方法用萃取法提取马尾松松针乙醇提取物(PMNE),分别用1、100和500μg/mL的PMNE(低、中、高浓度组)预处理16HBE细胞6 h,随后用25μmol/L CdCl2毒染至48 h,同时设阴性对照组(正常培养16HBE细胞)及空白对照组(无细胞组),用CCK8法检测细胞相对生存率,硫代巴比妥酸(TBA)法检测各组细胞内丙二醛(MDA)含量,qPCR法检测各组细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax相对表达量。结果与阴性对照组相比,CdCl2单独作用组细胞相对生存率下降(P 0.05),细胞内MDA表达量升高(P 0.05);低、中、高浓度PMNE预处理组细胞与CdCl2单独处理组相比,细胞相对生存率均升高(P 0.05),MDA含量均降低(P 0.05),且浓度越高细胞相对生存率越高(P 0.05),MDA含量越低(P 0.05)。与CdCl2单独作用组相比,低、中、高浓度PMNE预处理组抑凋亡基因Bcl-2相对表达量均上调(P 0.05),促凋亡基因Bax相对表达量均下调(P 0.05),且浓度越高Bcl-2相对表达量越高(P 0.05)。结论 PMNE对CdCl2所致的细胞毒性有一定程度的保护作用。