攀登鱼藤异黄酮脂质体有较好的物理性能及抗乳腺癌细胞的增殖活性

目的 制备和鉴定攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体并研究其抗乳腺癌作用。方法 MTT法检测攀登鱼藤异黄酮、大豆异黄酮和金雀异黄酮对人乳腺癌细胞（MDA-MB-231、MCF7、SKBR3）增殖活性影响;克隆形成实验探讨攀登鱼藤异黄酮对三阴性乳腺癌细胞（MDA-MB-231）克隆形成的影响;细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移;蛋白印迹法检测MDA-MB-231细胞迁移和侵袭蛋白MMP2,MMP9表达量;薄膜水化法制备温敏脂质体及攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体;透射电子显微镜、动态光散射扫描仪以及紫外分光光度计分别鉴定攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体形貌、粒径、包封率及稳定性,并用MTT法检测攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体抗小鼠乳腺癌细胞（4T1）增殖活性。结果 攀登鱼藤异黄酮可显著抑制人乳腺癌细胞（MDA-MB-231、MCF7、SKBR3）增殖,且效果优于大豆异黄酮和金雀异黄酮;攀登鱼藤异黄酮显著减少三阴性乳腺癌细胞（MDA-MB-231）克隆形成量,降低其划痕面积的愈合速度,并下调MMP2和MMP9的表达。薄膜水化法制备得到的温敏脂质体呈均质不规则球形,其粒径为56.23±0.61 nm、聚合物分散指数为0.241±0.014、Zeta电位为-40.40±0.46 mV、包封率为（87.68±2.41）%、稳定性较好,且抗小鼠乳腺癌增殖活性增强。结论 攀登鱼藤异黄酮通过抑制乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭发挥其抗癌活性,攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体具有较好的物理性能及抗乳腺癌活性。     

丁酸钠通过Ca~(2+)-CaMKK β信号通路诱导结直肠细胞自噬

目的研究丁酸钠(sodium butyrate,Na B)诱导结直肠癌细胞HCT-116自噬的分子机制。方法免疫印迹法和实时荧光定量PCR检测Na B诱导结直肠癌细胞自噬标志蛋白微管相关蛋白1A和1B(microtubule-associated protein1A/1B-light chain 3,LC3)的蛋白与m RNA表达水平,以及免疫印迹法检测钙调素依赖蛋白激酶的激酶β(Ca~(2+)/calmodulin-dependent protein kinase kinaseβ,Ca MKKβ)的磷酸化蛋白表达水平;免疫印迹法检测RNAi下调Ca MKKβ表达对Na B诱导结直肠癌细胞自噬的影响;免疫印迹法和荧光定量PCR检测细胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)对Na B诱导结直肠癌细胞自噬的影响,以及免疫印迹检测其对p-Ca MKKβ蛋白表达水平的影响。结果Na B可上调LC3-II蛋白与m RNA表达水平,即诱导结直肠癌细胞自噬;Na B可诱导Ca MKKβ蛋白磷酸化;RNAi下调Ca MKKβ表达可显著抑制Na B诱导的LC3-II蛋白的表达,即抑制Na B诱导的结直肠癌细胞自噬;BAPTA-AM预处理可抑制Na B诱导的Ca MKKβ蛋白磷酸化以及下调LC3-II蛋白与m RNA表达水平。结论 Na B可通过Ca~(2+)-Ca MKKβ信号通路诱导结直肠细胞自噬。     

丁酸钠对DSS诱导小鼠炎症性肠病的作用及对Nrf2/NFκB表达影响

目的 探讨丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导的炎症性肠病模型小鼠保护作用及其机制.方法 将36只6 w龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组(Control)、模型组(Model)、NaB(500 mg/kg.d ip)干预...     

肠道产丁酸菌防治炎症性肠病的机制研究进展

炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)是一组难以控制的慢性炎症性肠道疾病,包括克罗恩病(crohn's disease, CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC).近年来,亚洲国家的IBD发病率明显上升,尤其是在我国.最近的研究中发现IBD患者体内存在肠道产丁酸菌数量和构成的改变,提示产丁酸菌与IBD的发生和发展存在一定联系.本综述着重介绍了产丁酸菌通过产生丁酸及丁酸盐发挥的抗炎作用,以及Roseburia intestinalis, Faecalibacterium prausnitzii和Clostridiumbutyricum三种产丁酸菌通过菌体本身的结构和免疫特性发挥的抗炎作用.这些机制的发现可为防治IBD提供新的思路和研究线索.     

丁酸钠通过自噬途径降解HIF-1α抑制结直肠癌细胞生长北大核心

目的:研究丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞生长的影响及可能机制。方法:不同浓度NaB(0、1、2、5、10 mmol/L)处理结直肠癌HCT116细胞24 h后,MTT和平板克隆实验检测细胞生长情况,实时荧光定量PCR和Western blot检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase-A,LDHA)的表达。3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)或氯喹(chloroquine,CQ)抑制自噬后NaB处理HCT116细胞,Western blot检测LC3Ⅱ蛋白表达。环己酰亚胺(cycloheximide,CHX)抑制蛋白质合成后NaB处理HCT116细胞,Western blot检测HIF-1α蛋白表达。蛋白酶体抑制剂MG132、氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)或CQ抑制泛素蛋白酶体途径和自噬后NaB处理HCT116细胞,Western blot检测HIF-1α和LDHA的表达,MTT检测细胞活力。结果:2 mmol/L NaB即可显著抑制HCT116细胞活力和克隆形成能力(P<0.01)、下调HIF-1α和LDHA的表达(P<0.01)。5 mmol/L3-MA可阻断LC3Ⅱ生成(P<0.05),抑制NaB对LC3Ⅱ的上调(P<0.05);50μmol/L CQ可促进LC3Ⅱ在细胞内的蓄积(P<0.01),上调NaB促发的LC3Ⅱ蛋白水平的表达(P<0.05)。200μmol/L CHX处理HCT116细胞5 h可下调HIF-1α的表达(P<0.05),联用NaB将下调HIF-1α的时间提前至1 h(P<0.01)。CQ逆转了NaB对HIF-1α、LDHA和细胞活力的抑制作用(P<0.05),MG132与CoCl2无法逆转(P>0.05)。结论:NaB通过自噬途径下调HIF-1α蛋白稳定性,进而抑制其下游信号LDHA表达来达到抑制结直肠癌细胞生长的目的。     

不同浓度EPA和DHA对C2C12肌管细胞IL-6表达及TRPV1/PKC/Ca2+信号通路的影响

目的 探讨不同浓度二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）对C2C12肌管细胞IL-6表达与分泌的调节作用和机制。方法 采用25、50、100、200、400μmol/L EPA或DHA处理C2C12肌管细胞12、24、36 h，设立BSA对照组。MTT检测细胞活性，PCR与Western blot分别检测IL-6的mRNA与蛋白表达水平，ELISA测定IL-6分泌水平，检测TRPV1、PKC的mRNA表达水平及TRPV1、PKC、p-PKC蛋白表达水平，Fluo-4 AM钙离子荧光探针检测胞内Ca2+浓度。结果 IL-6表达与分泌方面，100μmol/L EPA或DHA干预24h可显著提高肌管细胞IL-6 mRNA表达；100μmol/LEPA或DHA干预24h、36h可显著促进IL-6分泌；100μmol/L EPA或DHA可呈时间梯度上调IL-6蛋白表达水平。各浓度EPA或DHA干预肌管细胞24h后，IL-6 mRNA表达水平与分泌均呈浓度梯度增加，其中200、400μmol/L效果最为...