2005～2006年流感季节河北省甲3亚型流感病毒血凝素重链区基因变异分析

目的：研究2005～2006年流感流行期河北省分离的甲3（H3N2）亚型流感病毒株血凝素重链（HA1）的基因特性,了解H3N2亚型流感病毒株HA1基因的变异及其与流感流行的关系。方法：用狗肾（MDCK）细胞分离培养流感病毒,提取病毒核糖核酸（RNA）,采用RT-PCR法扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件作分析处理。结果：2005～2006年流感流行期在河北省分离到的H3N2亚型流感病毒株HA1与同时期的H3N2亚型流感疫苗株A/Calfornia/7/04相比其抗原性变异不大,核苷酸同源性为96.2%～98.2%,氨基酸同源性为98.7%～99.0%,3个位点发生了氨基酸替换,其中2个在抗原决定簇B区（188N〉D、193S〉F）,1个在受体结合位点（225D〉N）。结论：H3N2亚型流感病毒HA1尚未发生明显变异,与疫苗株同源性较高。人群对其已建立起较好的免疫屏障,这是河北省该流行期H3N2亚型活动水平低的主要原因。     

2010年北京市不同地区儿童甲3亚型流行性感冒暴发疫情的病原学分析

目的:对2010年北京市某两区发生的儿童甲3亚型流行性感冒暴发疫情进行病原学研究。方法:荧光RT-PCR方法检测疫情患者标本,对核酸阳性者进行病毒培养;对毒株血凝素HA1基因进行序列比对和进化分析。结果:两起疫情标本甲3亚型流感病毒核酸阳性检出共14件;毒株共分离到6株。各疫情毒株同源性序列为100%;两起疫情的HA1序列同源性为97.3%。与疫苗株A/Perth/16/2009(H3N2)比较,其中疫情2分离株共有8个氨基酸(aa)变异。结论:两起疫情均为甲3亚型(H3N2)流感所致;同一起疫情均由同一病毒株传播所致;两起疫情甲3亚型(H3N2)毒株的血凝素HA1区存在不同程度的aa变异。     

2007年南宁市A(H3N2)亚型流感病毒抗原性及血凝素重链区基因特性分析

目的:了解南宁市A(H3N2)亚型流感病毒血凝素的抗原性和基因变异情况。方法:对分离到的A(H3N2)亚型流感病毒进行单向HI试验分析抗原性,并按不同时间、不同人群选取35株进行血凝素核苷酸全长序列测定,推导出其氨基酸序列,重点对血凝素重链区进行基因特性分析。结果:单向HI试验表明,2007年度南宁市分离到的A(H3N2)亚型流感病毒抗原性与2004年WHO推荐株A/福建/411/2002(H3)相比,后者HI效价比前者高4倍以上;与2007年国内代表株A/江西东湖/312/2006(H3)相比,HI效价无≥4倍差异。核苷酸和氨基酸序列分析结果表明,与A/福建/411/2002(H3)相比核苷酸和氨基酸同源性分别为97.99%和97.81%,平均替换数分别为19.8个和7.2个,涉及2个抗原决定簇和受体结合位点左侧壁;与A/江西东湖/312/2006(H3)相比核苷酸和氨基酸同源性均为98.40%,平均替换数分别为15.8个和5.2个,涉及2个抗原决定簇。结论:2007年南宁市分离的A(H3N2)亚型流感病毒已发生抗原漂移。     

2007-2009年郴州市H3N2亚型流感病毒HA1基因特性研究

目的了解2007-2009年郴州市H3N2亚型流感病毒流行情况及血凝素基因变异特征。方法 按时间先后顺序随机选择2007-2009年流感病原学监测中分离到的H3N2亚型毒株8株,提取病毒核糖核酸（RNA）,采用RT-PCR法扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定并推导其氨基酸序列进行基因特性分析。结果H3N2亚型流感病毒在2007年为优势株,2008-2009年相对H1N1亚型流感病毒为弱势株;2007年分离株与该年疫苗株（A/Wisconsin/67/2005）比较,变异位点主要为G50E、S138A、K140I、R142G、N144D和L157S,抗原性发生了漂移;2008年分离株与2008-2009年疫苗株（A/Brisbane/10/2007）比较,变异位点主要为R142G、L157S;2009年分离株与该年疫苗株比较,变异位点主要为L157S、K173Q,2008-2009年分离株与该年疫苗株比较未发生明显变异。结论郴州市2007年H3N2亚型流感病毒HA1发生了明显变异,H3N2流感病毒较活跃,当年生产的疫苗预防效果较差;2008-2009年H3N2亚型流感病毒HA1与该年度疫苗株相比未发生明显变异,人群对其建立较好的免疫屏障,这是郴州市2008-2009年H3N2亚型流感病毒活动水平较低的主要原因。     

2006年杭州余杭区甲1亚型流感疫情的应急检测及基因特性分析

目的:对6起流感样疫情进行应急检测并对分离到的流行株的基因特征进行分析。方法:应用荧光RT-PCR的方法对6起流感样疫情进行检测并进行病毒分离,挑选H1N1亚型流感病毒的代表株进行血凝素基因(HA1)片断的核苷酸序列测定,分析基因和氨基酸变异情况。结果:应用荧光PCR检出甲1型流感阳性样本12例;与当前疫苗株A/Newcaledonia/20/1999相比,新分离到的流感株氨基酸序列有较大的差异,两者为不同性状的毒株。结论:H1N1亚型流感病毒重新引起流行并成为优势株,与其抗原性的变异及人群中针对这一病毒的免疫力下降有关。     

2005-2009年大连市流感病毒血凝素基因遗传特性分析

目的分析大连市2005-2009年流感病毒血凝素(HA)基因变异情况。方法采用MDCK细胞分离培养季节流感H1N1亚型28株;H3N2亚型9株;B型(Yamagata系)24株,采用RT-PCR法分节段扩增各毒株血凝素基因,并进一步对各片段进行核苷酸和氨基酸序列测定分析。结果 2005-2009年,大连市分离到的甲型H1N1病毒变异较大,其中2009年分离的一株H1N1亚型毒株A/liaoningxigang/136/2009(H1)与该年WHO推荐的疫苗株相比,抗原决定簇B区上有4个位点发生了突变,属于新的变种。2005、2007年分离的H3N2流感病毒株,与疫苗株相比序列同源性较高,并未发生大的变异;2007-2008年流行的B型Yamagata系病毒与疫苗株B/Shanghai/361/02相比,有7个氨基酸位点发生改变,其中两个位于抗原决定簇,并于196位增加一个糖基化位点。结论各年度WHO推荐的疫苗株与流行株之间匹配性不完全一致,每年由于核苷酸序列的变化而引起了不同程度的抗原性漂移。     

流感病毒H9N2亚型毒株RNA4节段基因序列分析

目的 了解新分离到的禽H9N2亚型流感病毒毒株RNA4节段核苷酸间的关系。方法 病毒RNA经逆转录合成cDNA，经聚合酶链反应（PCR）扩增，产物纯化，采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定。结果 香港鹌讲卫生流感病毒（puHK197)，香港猪流感病毒（swHK998)，香港鸡流感病毒（ckHK997)和禽代表株威斯康星火鸡流感病毒（tywis66)的H9N2亚型RNA4节段长度分别为1672、1670、1651和1683个核苷酸，编码血凝素（HA）蛋白，这3株分离到的禽H9N2亚型之间的同源性在92.7%-96.9%之间，与禽H9N2代表株间的同源性在87.8%-89.0%之间。结论 新分离到的禽H9N2亚型毒株与代表株的同源性差异较大。     

2007～2008年流感监测季北京地区H3N2亚型流感病毒抗原性与HA1基因特性分析

目的:了解2007~2008年流感监测季北京地区分离的H3N2亚型流感病毒抗原性及血凝素基因变异情况。方法:选取2007~2008年流感监测季中分离的首株H3N2亚型毒株及其后不同时间、不同地点共9株毒株,通过单向血凝抑制试验进行抗原性分析;测定血凝素基因的HA1区核苷酸序列并推导出其氨基酸序列,进行基因进化特性分析。结果:与我国代表株A/江西/东湖/312/2006本身的血凝抑制效价相比,9株病毒中3株有4倍及以上差异。HA1区核苷酸序列和氨基酸序列分析表明,有部分毒株的氨基酸发生下述替换:3 L→F、53 D→N、57 Q→H、157 L→S、158 K→R、171 N→K、173 K→N、182 V→I、194P→L、261 R→Q、272 A→V、291 N→D、299 K→R;其中53、157、158、171、173、194位氨基酸位于抗原决定簇。结论:北京地区2007~2008年流感监测季分离的H3N2亚型流感病毒有部分毒株已发生抗原性及基因特性的改变。     

2005-2006年河北省流感病毒监测与毒株变异分析

目的分析2005～2006年河北省流感病毒的流行与毒株变异情况。方法将采集的咽拭子标本用MDCK（Madin—Darby Canine Kidney）细胞培养分离流感病毒，血凝抑制试验鉴定病毒型别；在分离得到的3种型别流感病毒中分别以不同时间点选取分离株，进行血凝素重链（HA1）区核苷酸序列测定，并进行基因进化特性分析。结果2005～2006年分离到流感病毒92株，甲1亚型57株，甲3亚型6株，乙型29株。HA1区核苷酸和氨基酸序列分析表明，甲1亚型流感病毒与A／New Caledonia／20／99比较，1株有5个位点（173V〉A、259W〉R、260Y〉F、281 E〉K、322V〉A）发生氨基酸替换，2株有7个位点（90T〉K、102Y〉H、153R〉K、173V〉A、216R〉K、259W〉R、274T〉N）发生替换。3株甲3亚型与A圯alfornia／7／2004比较3个位点（188N〉D、193S〉F、225D〉N）氨基酸发生同样的替换。3株乙型流感病毒与B／HongKong／330／2001比较有7个位点（48K〉E、80K〉R、116R〉H、121N〉T、129K〉N、164E〉D、197S〉N）发生了相同的氨基酸替换。结论2005～2006年河北省流行甲1、甲3亚型和乙型流感病毒。流行株的基因特性发生了一定程度的变异，但乙型毒株变异更明显。     

铜川市2013-2015年A型流感病毒HA基因特性研究

目的 应用生物信息学数据库和工具,了解2013-2014年铜川市A型H1N1和2013-2015年A型H3N2流感病毒血凝素(HA)基因特性及其抗原变异情况。 方法 收集铜川市哨点医院流感样病例标本,采用MDCK细胞分离流感病毒。用RT-PCR对部分A型H1N1、H3N2流感病毒进行HA基因序列扩增和纯化,序列测定,并用MEGA软件构建种系发生树分析。 结果 2013-2015年铜川市流感核酸检测标本共2 333份,流感阳性476份,阳性率20.40%。4株A型H1N1亚型流感病毒与WHO推荐A/California/07/2009(H1N1)疫苗株氨基酸序列比对,共发生11次氨基酸突变,其中3个氨基酸位点突变发生在抗原决定簇。3株A型H3N2亚型与WHO推荐的北半球2013-2014年A/Victoria/361/2011(H3N2)疫苗株比对共有9个氨基酸位点发生了突变,其中3个氨基酸位点发生在抗原决定簇;与WHO推荐的北半球2014-2015年A/Texas/50/2012(H3N2)疫苗株比对共有10个氨基酸位点发生了突变,有5个氨基酸位点发生在抗原决定簇。 结论 2013-2015年铜川市流行的A型H1N1、H3N2亚型流感病毒氨基酸发生突变导致抗原漂移。     

上海2010—2013年H3N2流感病毒流行特征

[目的]了解上海市2010—2013年流行的甲3流感病毒血凝毒（HA）基因突变及其抗原变异情况与流感流行的关系。[方法]用实时荧光聚合酶链反应（real-time PCR）检测2010—2013年因类流感症状（ILI）到流感哨点医院就诊的监测病例,分析甲3亚型流感病毒流行特征。鸡胚传代甲3亚型阳性标本,收获尿囊腔液用作提取病毒的RNA,进行逆转录聚合酶连扩增,扩增产物纯化后进行测序,用MegAlign软件对血凝素（HA）1区域氨基酸位点进行对比分析,用MEGA软件对HA基因进化树进行分析。[结果]2010—2013年间,上海市甲3亚型流感病毒为2010、2012、2013年主要流行株。流行特征具有明显的年度和季节特点,与全国一致。与2011年世界卫生组织推荐的疫苗株相比,上海市甲3亚型流感病毒HA1区域在2010年发生明显抗原改变,共发生35处氨基酸替代,其中23处位点改变较大,6个氨基酸位点涉及HA1的4个抗原决定簇。2011年后的毒株在进化树上也形成一个独立的分支。[结论]上海市2012年较大规模的甲3亚型流感病毒流行与病毒的抗原性漂移有关。     

上海市浦东地区2007年流感病原学特征分析

[目的]了解上海浦东地区流感病原学特征,为流感防治提供科学依据。[方法]选择浦东2个流感监测点医院,采集类流感病人呼吸道咽拭子,利用病原学、血清学结合流行病学资料进行分析。[结果]2007年采集类流感病人呼吸道咽拭子标本210份,分离到98株流感病毒,总检出率为46.7%。未分离到A(H1N1)亚型。分离到A(H3N2)亚型、B/Y亚型、B/V亚型62、32、4株,分别占总检出数的63.3%、32.6%、4.1%。呈现1—3月和7—9月2个活动高峰。[结论]2007年浦东地区流感病毒优势株亚型不断发生变化,从年初的A(H3N2)优势株亚型逐渐过渡为A(H3N2)亚型与乙型共存,到年末则优势株亚型全部为乙型流感(B/Y,B/V)。流感发病人群在各年龄段均有分布并且与性别无明显相关。     

禽(H9N2)亚型流感病毒感染汕头人群的报告

[目的 ]监测汕头市人群中的禽流感病毒感染情况。 [方法 ]采集流感样患者和鸡咽拭子标本 ,用常规鸡胚双腔法分离流感病毒并进行初步鉴定。对分离出 H9N2亚型流感病毒毒株的患者进行个案调查。同期采集不同年龄组普通人群、职业人群以及鸡血清标本 ,采用微量半加敏血球凝集抑制试验 ,检测 H9亚型毒株抗体。 [结果 ]从 3 3 7例流感样患者咽拭子标本中分离出红细胞凝集阳性标本 1 1份 (2 .9%)。其中 6株为 A(H3 N2 )亚型流感毒株 ,5株为 A(H9N2 )亚型流感毒株。普通人群 H9亚型病毒抗体检出率为 3 4 .0 %,职业人群检出率为 3 7.7%(P>0 .0 5 )。 [结论 ]汕头市人群中发现禽 H9N2亚型流感病毒感染 ,提示禽 H9N2亚型流感病毒能感染人     

无锡地区2007～2010年H3N2亚型流感病毒血凝素基因分子变异研究

[目的]了解2007～2010无锡地区H3N2亚型流感病毒抗原性及血凝素基因变异情况. [方法]选取2007～2010年哨点医院的H3N2亚型流感病毒,提取病毒RNA,经逆转录聚合酶链武反应扩增后测序,测定序列用生物软件进行比较. [结果]对2007～2010年无锡地区分离的42株H3N2流感病毒的HA基因进行分析,核苷酸序列的进化树呈斜长型,进化的路径表现为一主要的进化主干向上发展. [结论]无锡地区2007 ～2010年H3N2亚型流感病毒有部分毒株已发生氨基酸的替换及基因特性的改变.     

石家庄市2009年H3N2亚型流感病毒血凝素重链区基因变异分析

目的:了解石家庄市2009年H3N2亚型流感病毒流行情况,研究2009年分离H3N2亚型流感病毒株血凝素重链(HA1)的基因特性及变异情况。方法:用MDCK细胞分离流感病毒,采用血抑实验分型鉴定。随机选取24株H3N2亚型流感毒株进行RNA提取、逆转录扩增获得HA1基因产物,将其进行基因序列测定,之后用DNAStar软件的MegAlign功能进行序列比对和分析。结果:经MegAlign将24株毒株与WHO疫苗推荐株A/Wisconsin/67/200(07～08)、A/Bris-bane/10/2007(08～10)进行比对,发现与同年疫苗株同源性较高,为98.2%～98.6%,仅有个别位点出现氨基酸替换。结论:2009年石家庄市H3N2亚型流感毒株HA1区与同年疫苗株基因序列符合率较高,尚未形成一个新的变异株。     

上海某哨点医院2007—2009年流感监测分析

[目的]分析本院2007—2009年流感监测结果,探索流感流行特征及规律,为制定预防和控制策略提供依据。[方法]对2007—2009年国家流感监测哨点医院发热门诊流感样病例(ILI)发病动态以及流感病毒分离结果进行监测和分析。[结果]2007年ILI 1 656例,患病率为1.20%,2008年ILI 1 606例,患病率为1.12%,2009年ILI5 486例,患病率为3.10%,明显高于2007、2008年水平。流感病毒监测结果:2007年标本采集330份,阳性标本为45份,分离率为13.6%,优势株A(H3N2)占68.9%,2008年标本采集229份,阳性标本为30份,分离率为13.1%,优势株B型占60%,2009年标本采集713份,阳性标本为250份,分离率为35.1%,优势株甲型H1N1占70.8%,其次为A(H3N2)型,占20.4%。2009年8月标本的阳性率明显上升,优势株为季节性A型(H3N2)流感病毒(58.7%),出现新的亚型即甲型H1N1流感(34.7%)病毒,12月甲型H1N1流感病毒成为优势株(91.4%)。[结论]上海徐汇区哨点医院附近地区流感流行高峰期为夏季与冬季,2007年该地区的流行毒株以A(H3N2)亚型为主,2008年该地区的流行毒株以B型亚型为主,2009年8—10月该地区出现季节性流感A(H3N2)亚型与甲型H1N1流感共同流行,11—12月以甲型H1N1流感流行为主。     

1991～2000年广东省流感监测结果分析

目的 了解流感流行和流感病毒毒株表面抗原性变异情况。方法 用9～11d龄鸡胚和(或)麦克丁氏犬肾(MDCK)细胞分离流感病毒，病毒鉴定用常量红细胞凝集抑制法(HI)；鸡血清流感抗体检测采用微量半加敏红细胞凝集抑制法(HI)。结果 1991～2000年全省未发生流感大流行。期间从人群中共分离流感病毒1008株，以A(H3N2)亚型流感病毒(62．3％)、B型流感病毒(26．6％)为主。从人群中分离出10株H9N2亚型禽流感病毒。从鸡群中分离到H9N2亚型禽流感病毒98株。A(H3N2)亚型病毒的抗原性不断发生漂移。结论 除1993、1995年未分离到A(H1N1)亚型流感病毒外。其它8年均分离到A(H1N1)、A(H3N2)、B型流感病毒。1998、1999年还同时分离到H9N2亚型禽流感病毒。并证实了A(H3N2)亚型病毒表面抗原的易变性；鸡群中有多个A亚型流感病毒同时存在，必须做好流感监测。     

山东省2010年-2011年流感病原学监测分析

目的:通过对山东省2010年4月-2011年3月流行性感冒的病原学监测结果进行分析,了解流感毒株变异情况以及流感病原学特征,为这一地区的流感防治提供科学依据。方法:采集流感样病例(ILI)的咽拭子标本用荧光定量PCR方法和狗肾细胞(MDCK)进行流感病毒检测,病毒分离后采用血凝抑制方法(HI)进行流感病毒型别鉴定。结果:2010年-2011年监测年度共检测鼻、咽拭子标本10218份,检测到阳性标本1025例,阳性率为10.03%,经分型鉴定甲型H1N1流感病毒415例,季节性流感A(H3N2)250例,B型242例和A未分型118例。分离到流感病毒311株,病毒分离率为3%。结论:山东省2010年-2011年监测年度流感流行的优势毒株为新甲(H1)型,但同时有季节性流感A(H3N2)和B型流感存在,未发现流感变异毒株。流感发病人群与性别无关,但与年龄有关。     

2012-2014深圳市龙岗区年流感病原学监测 及病毒基因分析

摘要:目的　了解深圳市龙岗区2012-2014年流感病毒流行特征及基因变异情况。方法　采集流感样标本826份,实时荧光PCR进行初筛,核酸阳性标本用狗肾传代细胞（MDCK）进行流感病毒的分离和鉴定。病毒分离液提取病毒RNA,进行逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）,扩增产物进行纯化及测序,测序结果采用Mega 4.1进行序列分析。结果　共分离到221株流感病毒,分离率为26.76%,其中甲型H3N2 103株（46.60%）。不同年龄组阳性分离率差异有统计学意义（χ2＝35.20,P＜0.001）,分离率最高的为25～60岁组,分离率为45.39%。2012年龙岗区优势流感流行株为甲型H3N2、2013年和2014年为新甲型H1N1。系统进化树分析显示甲型H1N1和B型流感HA基因与疫苗株均处统一分支。结论　深圳市龙岗区2012-2014年流感流行的优势型别有较大的变化。WHO推荐的北半球甲型H1N1和B型流感疫苗能为本区预防这两类病毒引起的流感发生提供有效的保障。     

Generation and characterization of a cold-adapted influenza A H9N2 reassortant as a live pandemic influenza virus vaccine candidate

H9N2 subtype influenza A viruses have been identified in avian species worldwide and were isolated from humans in 1999, raising concerns about their pandemic potential and prompting the development of candidate vaccines to protect humans against this subtype of influenza A virus. Reassortant H1N1 and H3N2 human influenza A viruses with the internal genes of the influenza A/Ann Arbor/6/60 (H2N2) (AA) cold-adapted (ca) virus have proven to be attenuated and safe as live virus vaccines in humans. Using classical genetic reassortment, we generated a reassortant virus (G9/AA ca) that contains the hemagglutinin and neuraminidase genes from influenza A/chicken/Hong Kong/G9/97 (H9N2) (G9) and six internal gene segments from the AA ca virus. When administered intranasally, the reassortant virus was immunogenic and protected mice from subsequent challenge with wild-type H9N2 viruses, although it was restricted in replication in the respiratory tract of mice. The G9/AA ca virus bears properties that are desirable in a vaccine for humans and is available for clinical evaluation and use, should the need arise.