SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性

①目的 了解SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。②方法 分别将具有明确致病性的22种冠状病毒(包括6株SARS病毒)S蛋白编码序列和22种冠状病毒全基因序列(包括11株SARS病毒)进行对排并绘制系统发生树，观察具有不同组织嗜性和宿主范围的冠状病毒所处的位置，预测SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。③结果 在依据编码S蛋白序列和全基因序列所绘制的系统发生树中各冠状病毒的分支明确，与其在美国国立医学图书馆(NCBI)中的分类相一致。④结论 SARS病毒县需特病毒的一个新的变种，具有呼吸道上皮嗜性。     

基因变构IL-2重组克隆的构建

①目的 构建基因变构IL-2（88ArgIL-2)的重组克隆。②方法 将正常人的扁桃体细胞经PHA刺激后，获得cDNA文库，并以此为模板，经套式PCR扩增得IL-2的基因编码序列。测序确认正确后，设计含有突变位点的引物，经pCR定点诱变技术获得变构IL-2克隆并进行序列确定。③结果 IL-2基因定点诱变成功，并获得了基因变构IL-2重组克隆。④结论 IL-2重组基因变构克隆的构建为进一步在原核和真核细胞中表达以及研究制备低毒、高效的新型基因变构IL-2奠定了基础。     

SARS冠状病毒刺突蛋白编码基因及氨基酸序列的同源性分析

①目的 分析严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒刺突蛋白(S蛋白)编码基因及氨基酸序列的变异情况，并在GenBank中寻找其同源序列。②方法 将网上公布的具有全基因序列的12株SARS冠状病毒S蛋白的编码基因序列及氨基酸序列应用Clustal W方法对排分析变异情况，并应用GenBank的Blast对排功能寻找被GenBank收录的同源序列。③结果 SARS冠状病毒S蛋白相对比较保守，变异率较低，其氨基酸序列与鼠的肝炎病毒氨基酸序列有较高的同源性，某些核苷酸序列与人的基因组有同源性。④结论 S蛋白编码基因及氨基酸序列相对保守，为预防性疫苗的研发提供了可行性；据其同源基因及蛋白序列可以预测S蛋白的二、三级结构，对推测SARS可能的发病机制有积极作用。     

上海市浦东地区2006～2007年流感病原学监测分析

目的：通过对2006年7月至2007年6月上海浦东地区流行性感冒（流感）的病原学监测数据的分析，了解上海浦东地区流感病原学特征，为今后这一地区的流行性感冒防治提供科学依据。方法：从类流感病人呼吸道采集咽拭子，接种狗肾传代（MDCK）细胞分离培养，进行红细胞凝集抑制试验和亚型的鉴定。结果：自2006年7月至2007年6月采集类流感患者标本199份，分离到61株流感病毒，总检出率为30．7％。其中A（H1N1）亚型、A（H3N2）亚型、B／Y亚型、B／V亚型分别为17株、40株、3株、1株，占总检出率的27．9％、65．6％、4．9％、1．6％。结论：上海浦东地区流感流行高峰期为夏季与冬季，2006年上海浦东地区的流行毒株以A（H1N1）亚型为主，2007年初的冬季流行毒株以A（H3N2）亚型为主。流感发病人群与性别无关。流感病毒的分离率与样本采集的质量有关。     

上海2010—2013年H3N2流感病毒流行特征

[目的]了解上海市2010—2013年流行的甲3流感病毒血凝毒（HA）基因突变及其抗原变异情况与流感流行的关系。[方法]用实时荧光聚合酶链反应（real-time PCR）检测2010—2013年因类流感症状（ILI）到流感哨点医院就诊的监测病例,分析甲3亚型流感病毒流行特征。鸡胚传代甲3亚型阳性标本,收获尿囊腔液用作提取病毒的RNA,进行逆转录聚合酶连扩增,扩增产物纯化后进行测序,用MegAlign软件对血凝素（HA）1区域氨基酸位点进行对比分析,用MEGA软件对HA基因进化树进行分析。[结果]2010—2013年间,上海市甲3亚型流感病毒为2010、2012、2013年主要流行株。流行特征具有明显的年度和季节特点,与全国一致。与2011年世界卫生组织推荐的疫苗株相比,上海市甲3亚型流感病毒HA1区域在2010年发生明显抗原改变,共发生35处氨基酸替代,其中23处位点改变较大,6个氨基酸位点涉及HA1的4个抗原决定簇。2011年后的毒株在进化树上也形成一个独立的分支。[结论]上海市2012年较大规模的甲3亚型流感病毒流行与病毒的抗原性漂移有关。     

上海市儿童下呼吸道感染常见病毒诊断方法比较

目的应用直接免疫荧光法（DFA）和多重逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对呼吸道感染患儿鼻咽分泌物的常见病毒进行检测,比较2种方法的符合率并评估其临床应用价值。方法选取急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物540例,分别用DFA和多重RT-PCR进行检测,分析其结果。结果 DFA检测阳性率为43.9%（237/540）,多重RT-PCR检测阳性率为55.7%（301/540）,多重RT-PCR阳性检出率显著高于DFA的阳性检出率（χ2=29.093,P〈0.01）。DFA和多重RT-PCR同时阳性163例,DFA阳性而多重RT-PCR阴性74例,多重RT-PCR阳性而DFA阴性138例,DFA和多重RT-PCR同时阴性165例。DFA和多重RT-PCR同时为阳性的163例标本中,有15例标本两者检测结果不一致,符合率为91.0%。结论 DFA快速、简便、特异性及敏感性高,适用于临床检测。多重RT-PCR的敏感性高,检测病毒谱广,且可以做亚型鉴定,适用于呼吸道病毒流行病学的调查。     

反转录聚合酶链反应检测水产品中甲型肝炎病毒的研究

目的：建立一种特异、灵敏的RT-PCR方法检测水产品中甲肝病毒。方法：采用抗体捕获RT-PCR和直接RNA提取RT-PCR对细胞传代的甲肝病毒、模拟染毒水产品中甲肝病毒、上海农贸市场水产品中的甲肝病毒进行检测。结果：2种RT-PCR检测细胞传代的甲肝病毒，检测灵敏度无明显区别；而对模拟染毒水产品中甲肝病毒的检测，两者检测灵敏度有显著差异。对农贸市场94份水产品中的甲肝病毒检测，检出率分别为2．13％、13．83％。结论：对于水产品中的甲肝病毒的检测，直接RNA提取RT-PCR要比抗体捕获RT-PCR方法灵敏。     

2006年上海监测点婴幼儿腹泻标本中诺如病毒基因分析

[目的]了解2006年上海监测点婴幼儿病毒性腹泻散发病例中诺如病毒基因型别及核酸变异情况。[方法]应用一步法RT-PCR扩增89份病毒性腹泻标本中诺如病毒核酸,测序后应用基因分析软件包对核酸序列进行分析。[结果]12条核酸序列经测序和比对均属于诺如病毒GII基因组,其中3条核酸测序序列与2006年德国公布的序列同源性相近;其余9条核酸测序序列与2004年中国、2004、2005年日本、2006年荷兰公布的序列同源性相近。[结论]2006年上海地区婴幼儿中存在诺如病毒GII基因组散发病例,并以GII4基因型为主。     

猪乙脑病毒IgG抗体间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

目的建立检测猪血清中流行性乙型脑炎病毒(JEV)IgG抗体的间接免疫荧光试验(IFA)。方法用乙脑病毒感染C6/36白蚊伊蚊细胞制备抗原片,建立检测猪血清中JEV-IgG抗体的IFA方法,并用于猪乙脑血清流行病学调查。结果成功建立特异的猪JEV-IgG的IFA检测方法,并对50份母猪、55份仔猪和65份屠宰猪的血清进行检测。乙脑血清抗体效价≥1:200的分别为88.00%,10.91%和24.62%。结论建立的IFA方法能较好的用于猪血清乙脑流行病学调查。     

SYBR Green Ⅰ实时PCR检测甲肝病毒方法的建立与初步应用

目的建立一种快速、特异的SYBR Green Ⅰ实时PCR方法检测甲肝病毒.方法对SYBR Green Ⅰ实时PCR检测甲肝病毒方法的反应条件、反应体系进行优化,同时与传统RT-PCR方法进行灵敏度比较,提高该方法的特异性、灵敏性.并用该方法对甲肝病毒毒株、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒(1～6型)毒株、贝类水产品标本进行检测.结果SYBR Green Ⅰ实时PCR与传统RT-PCR检测甲肝病毒方法的灵敏度无明显区别,但检测时间缩短了1/2.该方法能特异检测出甲肝病毒,不能扩增脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒(1～6型)毒株,对农贸市场40份贝类水产品进行甲肝病毒核酸检测,检出3份.结论建立的SYBR Green Ⅰ实时PCR方法用于甲肝病毒检测具有特异、灵敏、快速等优点,可用于甲肝的病原学监测.