用多基因PCR检测和区分不同群型霍乱病原菌

目的 建立一种快速、敏感的诊断方法,用于检测和区分霍乱弧菌Ｏ１群古典型（ＣＶＣ）,埃尔托型（ＥＶＣ）、Ｏ１３９群和非Ｏ１和Ｐ１３９群,方法 分别针对霍乱弧菌肠毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因,Ｏ１３９群特异基因、霍乱弧菌溶血素Ａ亚单位（ｈｌｙＡ）基因和毒力协同调节菌毛Ａ亚单位（ｔｃｐＡ）基因设计引物,建立多基因ＰＣＲ方法。ＰＣＲ产物经电泳,根据扩增条带的大小和数目,可检测和区分ＣＶＣ、ＥＶＣ,Ｏ１３９     

随机引物PCR方法用于霍乱分子流行病学研究

研究建立了随机引物ＰＣＲ方法用于霍乱分子浒病学研究,其中两组引物针对霍乱弧菌重复插入序列设计,一组引物为任意序列。对２株霍乱弧菌Ｏ１群古典型（ＣＶＣ）、８１株魂尔托型（ＥＶＣ）和１０株Ｏ１３９群进行了分析,上述菌株经ＰＣＲ鉴定,均携带霍乱肠毒素（ｃｔｘ）基因和毒力协同调节菌毛（ｔｃｐ）基因。３株ＣＶＣ分为２个类型,８１株ＥＶＣ分为１４个类型,１０株Ｏ１３９群分为３个类型。其中１０株分离于一次霍乱暴     

3组套式PCR用于检测及区分霍乱弧菌O1群古典型,埃尔托型和O139群

针对霍乱弧菌肠毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因设计两对引物,建立套式ＰＣＲ,可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群;针对霍乱弧菌毒力协调菌毛Ａ亚单位（ＴｃｐＡ）基因设计两对引物,外引物可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群,内引物只能特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群埃尔托型和Ｏ１３９群;针对Ｏ１３９群特异基因设计两对引物,建立套式ＰＣＲ,可特异扩增Ｏ１３９群。先利用针对ｃｔｘＡ基因设计的套式ＰＣＲ进行初筛,再进一步用另外两组套式ＰＣＲ,可检测及区分霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群。对４８株ＥＶＣ,２株ＣＶＣ,６株Ｏ１３９群和３３株非Ｏ１非Ｏ１３９群进行检测,扩增结果与设计均一致。套式ＰＣＲ检测的敏感性可达到１～１０ＣＦＵ。本文建立的方法简单、快速、特异和敏感,有较大的应用价值。     

CPB-ST融合基因的构建及表达研究

用限制性核酸内切酶ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ双酶切含有大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１前体蛋白基因的质粒ｐＸＳＴ１，回收３２５ｂｐ的ＳＴ基因片段，然后，通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的带有产气荚膜梭菌β－毒素基因（ＣＰＢ）的重组质粒ｐＥＣＢ２中ＣＰＢ基因的下降，转化受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ酶切反应鉴定重组质粒，得到了理想重组质粒ｐＥＣＢ－ＳＴ１。重组菌株Ｂｌ２１（ＤＥ３）（ｐＥＣＢ－ＳＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后，其表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ及ＥＬＩＳＡ检测，结果表明重组菌株可以表达ＣＰＢ－ＳＴ融合蛋白，而且该融合蛋白无天然β－毒素和ＳＴ１的生物毒性。     

福建发现有毒力产色素的Ｏ１３群霍乱弧菌

１９９８年１０月作者在对本省外环境监测分离的霍乱菌株进行纯化鉴定中,发现一株能稳定产生铁锈色水溶性色素,携有ｃｔｘＡ霍乱毒素基因并且有产肠毒素能力的Ｏ１３９群霍乱弧菌（Ｏ１３９ＶＣ）。生物学性状与毒力检测结果报告如下。１材料与方法： 产色素Ｏ１３９群霍乱弧菌菌号为９８２２１,系监测点外环境水体中分离。生物学鉴定方法与药敏试验方法参照１９９９年中华人民共和国卫生部第五版《霍乱防治手册》中有关项目进行;诊断用血清有霍乱０１群Ｏ多价、霍乱Ｒ因子、霍乱Ｏ１３９群、０２２群诊断和药敏纸片均购自中国药品生物…     

ADVANTX LCV＋血管造影机微动开关等器件替换2例

１床旁控制面板（ＴＡＢＬＥＳＩＤＥＰＡＮＥＬ）上微动开关及旋钮的替换。ＧＥ公司生产的ＡＤＶＡＮＴＸＬＣＶ +血管造影机（ＤＳＡ）使用了人机一体的设计理念 ,术者可以通过设在床边的床旁控制器（ＴＡＢＬＥＳＩＤＥＰＡＮＥＬ）、智能手柄（ＳＭＡＲＴＨＡＮＤＬＥ）和遥控器（ＲＥＭＯＴＥＣＯＮＴＲＯＬＤＥＶＩＣＥ） ,在床旁完成对设备的全部操作。使用非常方便。但是 ,设在床旁控制器上的光栅控制钮（ＩＲＩＳＣＯＮＴＲＯＬＫＮＯＢ）和轮廓滤波控制钮（ＣＯＮＴＯＵＲＦＩＬＴＥＲＣＯＮＴＲＯＬＫＮＯＢ）设计得非常单薄 ,极…     

０１２年长沙市手足口病病原学分析

摘要：目的　了解２０１２年长沙市手足口病（ｈａｎｄ ｆｏｏｔ ａｎｄ ｍｏｕｔｈｄｉｓｅａｓｅ,ＨＦＭＤ） 的病原构成。方法　采
集ＨＦＭＤ 患者咽拭子或粪便样本,提取病毒核酸,实时荧光ＲＴ ＰＣＲ 检测人肠道病毒（ｈｕｍａｎｅｎｔｅｒｏｖｉｒ
ｕｓ,ＨＥＶ）、肠道病毒７１型（ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ７１,ＥＶ７１） 和柯萨奇病毒Ａ１６型（ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＡ１６,ＣＶＡ１６）
核酸;兼并引物扩增非ＥＶ７１、非ＣＶＡ１６型肠道病毒ＶＰ１区,序列测定和ＢＬＡＳＴ 比对确定其型别。结果
　２０１２年共采集ＨＦＭＤ 病例样本７４６例,实时荧光ＲＴ ＰＣＲ 检测２０１例ＥＶ 核酸阴性,５４５例阳性,核酸
阳性率为７３．０６％;ＥＶ 核酸阳性样本中,３６４ 例为ＥＶ７１ 阳性, 占６６．７９％;８４ 例为ＣＶＡ１６ 阳性, 占
１５．４１％;９７例为非ＥＶ７１、非ＣＶＡ１６型肠道病毒,占１７．８０％。２０１２ 年全年均可检测到阳性病例,主要
集中在４～６月,共检出阳性样本２２０例,占ＥＶ 阳性的４０．３７％;其中,有４９８例患者为年龄５岁以下的
婴幼儿,占９１．３８％,为主要感染人群。非ＥＶ７１、非ＣＶＡ１６型肠道病毒经普通ＲＴ ＰＣＲ 扩增,４４例样本
扩增出目的片段,ＢＬＡＳＴ 比对确定病毒型别分别为：ＣＶＡ６２２ 例,ＣＶＡ１０１９ 例, 分别占阳性样本的
４．０４％ 和３．４９％;而ＣＶＡ１２、ＣＶＢ３、ＥＣＨＯ１６目前各检出１例。结论　２０１２年引起长沙市ＨＦＭＤ 的病原
型别多样,但以ＥＶ７１为优势型别。
关键词：手足口病;肠道病毒７１ 型;柯萨奇病毒Ａ１６型;病原学
中图分类号：Ｒ５１２．５　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０８ ０７１７ ０３     

O157：H7血清型大肠杆菌的基因和表型特征

1　引言Ｏ157:Ｈ7血清型大肠杆菌(ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｓｅｒｏｔｙｐｅＯ157:Ｈ7,ＥＣＯＨ)能引起腹泻、出血性肠炎(ＨＣ)、溶血性尿毒综合征(ＨＵＳ)等一系列人类疾病,该菌毒力因子包括志贺毒素(Ｓｈｉｇａｔｏｘｉｎｓ,Ｓｔｘ)、溶血素(ｈｌｙｓ)、编码与附着抹平肠上皮微绒毛有关称为ＬＥＥ的致病岛的ｉｎｔｉｍｉｎ(ｅａｅＡ)蛋白质。ＥＣＯＨ菌株与大多数大肠杆菌分离株相异的是不发酵山梨醇(ＳＯＲ-)且无β-葡萄糖醛酸酶活性(ＧＵＤ-)。ＥＣＯＨ与Ｋ-12大肠杆菌(ＥＣｏｌｉ)编码ＧＵＤ的基因(ＵｉｄＡ)几乎相同,二者间具…     

人乳头瘤病毒16型L1基因重组表达质粒的构建及在E.Coli宿主中的表达与鉴定

构建ｐＧＥＸ４Ｔ－１－ＨＰＶ１６Ｌ１重组表达系统。为进一步研制基因工程疫苗奠定基础,采用ＰＣＲ方法扩增ＨＰＶ１６中国分离株Ｌ１外源基因片段,ｐＧＥＸ４Ｔ－１为表达载体。构建ｐＥＧＸ４Ｔ－１－ＨＰＶ１６Ｌ１重组表达系统,在大肠杆菌宿主ＢＬ（２１）中,经ＩＰＴＧ诱导,表达融合蛋白ＧＳＴ－Ｌ１,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ进行鉴定结果表明,成功构建ｐＥＧＸ４Ｔ－１－ＨＰＶ１６Ｌ１重组     

维生素A缺乏大鼠红系祖细胞表面N连接型糖链结构改变的机理研究

目的：阐明维生素Ａ缺乏（ＶＡＤ）引起大鼠红系祖细胞（ＥＰＣ）表面Ｎ连接型糖链结构改变从而导致ＥＰＣ增殖分化障碍的机理。方法：经３Ｈ－甘露糖掺入和结合外切糖苷酶的系列凝集素柱层析和凝胶过滤，研究ＶＡＤ大鼠骨髓基质细胞和脾细胞条件培养液（ＢＭＳＣＭ和ＳＣＭ）对正常大鼠ＥＰＣ表面Ｎ糖链结构的影响。结果：ＶＡＤ大鼠的ＢＭＳＣＭ和ＳＣＭ可致：３Ｈ－苷露糖掺入ＥＰＣ表面Ｎ糖肽的总量减少；高甘露糖型和杂合型糖链结构比例增大，复杂型的糖链结构比例下降；而在复杂型糖链中，二天线糖链的比例和不含分叉型Ｎ－乙酰基葡萄糖（Ｂ－Ｇｎ）和核心岩藻糖（Ｃ－Ｆｕｃ）的组分降低，含Ｂ－Ｇｎ或Ｃ－Ｆｕｃ或同时含Ｂ－Ｇｎ和Ｃ－Ｆｕｃ的组分增大。结论：ＶＡＤ可能影响造血生长因子（ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦ等）的表达／活性，因而导致ＥＰＣ表面糖链的异常以及ＥＰＣ增殖分化障碍。     

2006-2010年高密市小肠结肠炎耶尔森菌调查

目的了解高密市食品中小肠结肠炎耶尔森菌及动物带菌情况。方法 2006-2010年采集家畜家禽粪便、冷冻食品共2 097份,4℃冷增菌后用选择性培养基进行病原菌分离培养并作生化鉴定,将可疑菌株做进一步的血清学鉴定和生物分型及毒力检测。结果 2 097份标本中分离出131株小肠结肠炎耶尔森菌,总的检出率为6.25%,其中O∶3(携带毒力基因ail+、ystA+、rbfc+)和O∶9血清型的检出率分别为0.76%和1.52%。108株仅携带ystB基因(82.44%);26株不携带任何基因(19.85%)。131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在3个生物型,其中生物1A型占74.80%;生物3型占1.52%;生物4型占0.76%。结论本地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌,有感染人和动物及引起食源性型疾病的可能,因此必须加大该菌的监测力度,以预防小肠结肠炎耶尔森菌病的感染流行。     

随机扩增多态性DNA技术用于鼠疫耶尔森氏菌基因分型的研究

目的 对来自全国不同疫源地、不同生态型的１０３株鼠疫耶尔森氏菌进行基因分型研究。方法 用随机扩增多态性ＤＮＡ技术（ＲＡＰＤ）。结果 将鼠疫耶尔森氏菌分成两种基因型别：全国大部分菌株为ＲＡＰＤ－１型,青海省境内的大部分菌株为ＲＡＰＤ－２型。结论 不同生态型的鼠疫耶尔森氏菌基因结构存在差异,为鼠疫耶尔森氏菌的基础研究和防治提供依据。     

我国九省（市、区）82株嗜肺军团菌血清1型菌株的序列分型

目的 了解我国环境水中嗜肺军团菌血清1型（Lp1）菌株的序列分型特征,并初步建立我国军团菌序列分型数据库。方法 采用序列分型(SBT)方法,对我国9个省（市、自治区）2005-2008年间环境水中分离的82株Lp1菌株进行分型,同时采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对这些菌株进行分型,并采用BioNumerics 5.1软件对2种方法的分型结果进行聚类分析和比较。结果 82株Lp1菌株分为22种序列(ST)型,其中17种ST型是新序列型,新发现1个等位基因;ST-1型为主要的序列型,在8个省（市、自治区）均有发现,该型菌株占所有菌株的46.3％ (38/82);ST-1、ST-150、ST-154、ST-159、ST-160和ST-630出现于2个以上的分离地点,5个分离位点(B4、B5、B6、S3和S8)发现2种以上ST型;通过聚类分析,15种ST型被分为3个序列群（ST-1序列群、ST-154序列群和ST-149序列群）,其余7种ST型没有序列群归类。采用PFGE分型方法,这些菌株可被分为46种带型。SBT和PFGE两种方法结合可将82株菌株分为54种分子型别。两种方法的聚类分析结果具有良好的一致性。结论 我国环境水中Lp1菌株具有独特的SBT分布;通过研究,初步建立了我国军团菌序列分型数据库。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因检测及同源性

目的探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药基因型及同源性。方法收集某院2015年9月—2016年2月临床标本分离的38株CRKP,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测耐药基因型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性。结果 38株CRKP主要来源于重症监护病房(ICU)及外科重症监护病房(SICU),分别占39.48%、34.21%。38株CRKP均检出blaKPC和blaSHV耐药基因,6株检出blaCTX耐药基因。PFGE显示共分成A、B、C、D4个谱型,其中以C型为主(65.78%,25/38)。A型菌株中菌株14、15、16携带blaKPC-2型、blaSHV型、blaCTX-M-15耐药基因,此3株细菌均是SICU患者分离的,菌株14和15分离自同一天,菌株16分离时间延后一周;C型菌株中,菌株10、18、25、28的同源性为100%,菌株10、18分离自ICU患者,菌株25、28分离自神经内一科患者(均从ICU转出),均是在ICU住院期间检出,且分离时间相差1 d。结论该院CRKP耐药基因型以blaKPC及blaSHV为主,存在克隆株医院内流行。     

江苏省2012-2014年柯萨奇病毒A组16型分子流行病学特征分析

目的 了解江苏省2012-2014年柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）流行毒株基因型概况。方法 收集江苏省2012-2014年儿童手足口病标本并送样,进行病毒分离培养获取相应毒株,用CA16特异性引物通过反转录聚合酶链反应技术进行VP1区基因片段扩增和测序,利用生物信息学软件对序列进行分析,并与CA16参比株序列进行同源性比较并构建基因进化树。结果 分离得到82株CA16毒株,测序结果显示全部属于基因亚型B1,VP1基因分析显示其中9株毒株序列的基因亚型为B1a,另外73株毒株序列的基因亚型为B1b。CA16分离株VP1区核苷酸和氨基酸同源性分别为87.8%～100.0%和97.5%～100.0%;与CA16国际标准株G10核苷酸和氨基酸同源性分别为75.2%～78.2%和90.5%～91.9%。结论 江苏省2012-2014年分离获得CA16毒株属于基因亚型B1,以B1a和B1b两个分支共同进化和流行,其中又以B1b为优势亚型。     

宁夏地区2008年柯萨奇病毒A组16型VP1区基因特征分析

目的 研究宁夏地区2008年引起手足口病(HFMD)暴发的柯萨奇病毒A组16型(CVA16)的基因特征.方法 对宁夏地区2008年HFMD患者临床标本中分离到的CVA16,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行VP1编码区基因扩增,对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析.根据VP1区核苷酸序列与国内其他省份以及国际报道的CVA16株序列(来源于基因库)构建基因亲缘关系树.结果 共分离到70株CVA16,其在VP1区核苷酸和氨基酸同源性分别为90.8%～100.0%和98.9%～100.0%.亲缘进化树显示全部CVA16株可分为A和B两个基因型,B基因型又可分为B1和B2两个基因亚型.宁夏地区CVA16全部属于B1基因亚型,同时包含B1a和B1b两条进化分支,提示存在两大传播链.结论 宁夏地区分离的CVA16株与国内其他地区CVA16株类似,有B1a和B1b两个进化分支在共同循环,且与周边国家和地区流行的CVA16在基因亲缘关系和流行时间关系上都很接近,存在共同进化和循环.     

182株儿童患者肺炎链球菌的分子生物学鉴定及分型

目的对来自患儿的肺炎链球菌进行分型,为肺炎链球菌疫苗的正确选择提供科学依据。方法收集2014年来自河北省儿童医院的182株肺炎链球菌,普通PCR对肺炎链球菌进行种属鉴定,应用多重PCR方法对菌株进行菌型分析。结果经PCR检测182株菌的cpsA基因扩增均为阳性;经多重PCR检测,除8株未分型菌株外,其余174株肺炎链球菌中,以19F、19A和6A/6B型数量最多,分别为68株(37.36%)、33株(18.13%)和26株(14.28%),其余型别有35B型、14型、6C/6D型、23F型、15B/15C型等。结论 182株肺炎链球菌的菌型主要为19F、19A和6A/6B,为该省肺炎链球菌疫苗的正确选择和制订使用策略提供了科学依据。     

2015-2016年贵州省手足口病非EV71、非CVA16肠道病毒型别鉴定和分析

目的 探讨2015-2016年贵州省手足口病非EV71(Enterovirus 71,EV 71)、非CVA16(Coxsackievirus A16,CVA16)肠道病毒株的病原构成及优势型别。方法 共收集2015-2016年贵州省儿童手足口病疑似患者肛拭子350例标本,应用实时荧光定量PCR法筛选出非EV71、非CVA16型肠道病毒,采用 RT-PCR法扩增病毒VP1区序列,PCR阳性扩增产物进行测序,对测得序列进行型别鉴定并与国内外各型代表株进行核苷酸同源性分析,构建系统进化树。结果 从收集到的手足口病疑似患者肛拭子标本中,共分离到21株其他肠道病毒,分别为:CVA5、CVA7、CVA9、CVB3(Coxsackievirus B3,CVB3)、 CVB4 、E11(Echovirus11,ECHO11)、 E17各1株,CVA10 、CVB1各2株,CVB5、E7各5株。通过系统发育树揭示,分离到的同型别毒株之间具有同源性,而非同型别的毒株与国内外各代表株之间具有同源性。结论 贵州省引起手足口病的非EV71、非CVA16型肠道病毒型别分布较广,包括CVB组,CVA组和ECHO病毒,其中CVB5、E7为非EV71、非CVA16型肠道病毒主要病原体。     

辽宁地区伤寒沙门菌的扩增片段长度多态性分析

目的：分析辽宁省不同城市和大连地区2000～2004年伤寒沙门菌的同源性以及在遗传学上的关系。方法：实验采用EcoRI／MseⅠ型限制性内切酶、选择7种引物组合对25株不同地区和不同时间的伤寒沙门菌菌株进行AFLP分型。结果：25株伤寒沙门菌分为16个基因类型，不同来源的菌株呈现多态性分布；大连地区不同年份的15株菌存在多达14个多态型性；而其他3个城市共10株菌仅存在2个多态性，且遗传距离非常相近。结论：AFLP可以通过对内切酶组合的选择和特异性引物上选择性碱基组合的设计优化实验条件；AFLP是伤寒沙门菌的分子流行病学研究中一种十分有效的手段。     

小学生伤害的流行病学特征分析

20 0 1年 9月在杭州市区对随机抽取的 3所小学进行有关伤害的调查和流行特征分析 ,结果报告如下。1.对象与方法 :采用分层、多阶段抽样方法 ,随机抽取 3个城区 ,每城区抽取 1所小学 ,再从每个年级抽取 1个班。共抽取 3所学校 ,18个班 ,96 4人。采用一人一表的问卷调查方式 ,询问 2 0 0 0年 9月至 2 0 0 1年 9月期间的伤害发生情况。在向学生和家长讲清调查目的、填表方法及注意事项后 ,由经过统一培训的防疫医师、校医及班主任在家长的协助下指导学生完成。凡有下列情况之一者纳入伤害统计范围 :①到医院或校医务室诊治 ;②由家长或老师作过…