肠道病毒性脑膜炎基因诊断的研究

肠道病毒（ＥＶＳ）感染是无菌性脑膜炎和脑炎常见的病因之一，由于其临床表现及脑脊液（ＣＳＦ）检查无特异性，故临床难与其它细菌性或病毒性感染相鉴别。本文用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了临床诊断的２４例病毒性脑膜炎及２０例其它神经疾病（ＯＮＤ）对照组患者的ＣＳＦ中ＥＶｓ－ＲＮＡ。所用的引物选自ＥＶｓ基因组中高度保守的５＇－非编码区（５＇－ＮＣＲ），这些引物已被证明能够检测出ＥＶｓ广泛的型别。结果在２４例病毒性脑膜炎患者ＣＳＦ中检出ＥＶｓ－ＲＮＡ阳性者７例，而对照组全部阴性。提示经ＲＴ－ＰＣＲ的早期诊断有助于对ＥＶｓ脑膜炎采取早期特异的抗病毒治疗。     

HPVl6L1蛋白血清学诊断宫颈癌临床效果观察

目的：探讨基因重组人乳头瘤病毒（HPV）16L1蛋白的血清学诊断宫颈癌的临床意义。方法：选择63例宫颈癌患者，采用PCR方法检测宫颈癌组织的HPV型别；并采用重组原核表达系统制备HPV16L1蛋白，检测其血清HPV16L1抗体。结果：宫颈癌HPV通用型DNA阳性率50．8％，HPV16DNA阳性率46％，HPV18DNA阳性率3．2％。宫颈癌组血清HPV16L1抗体阳性率44．4％，与健康对照组和尖锐湿疣组比较，差异非常显著（P〈0．01）。HPV16DNA检测法与HPV16L1ELISA血清抗体检测法两者间相关显著（P〈0．05）。结论：宫颈癌患者以HPV16感染为多见，HPV16L1血清ELISA抗体检测可用作HPV16感染的血清学诊断和宫颈癌的免疫学研究。     

HPV16L1晚期基因诱导表达的实验研究

目的：可为ＨＰＶ１６Ｌ１重组蛋白疫苗及诊断试剂盒的研制打下基础。方法：含有ＨＰＶ１６Ｌ１ｐＰＩＣ３．５重组质粒的ＧＳ１１５阳性菌株，经甲醇诱导在甲醇营养型酵母菌中表达ＨＰＶ１６Ｌ１蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，对所表达蛋白进行分析、鉴定。结果：ＨＰＶ１６Ｌ１－ｐＰＩＣ３．５重组质粒经甲醇诱导产生５５ＫＤ大小的Ｌ１靶蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明，诱导第四天Ｌ１蛋白表达量最大。结论：甲醇可诱导ＨＰＶ１６Ｌ１靶蛋白的表达，并且在第四天表达量最大。     

从执业医师考试探讨医学微生物学教学改革

通过分析基础医学教学模式的现状和存在的问题,确认在教学改革中引入执业医师资格考试,将培养医师专业能力作为教学目标,以提高教学效能,促进基础阶段综合型课程的开展。在前期实践基础上设计教学流程,提出在医学微生物学教学中注重学科基本知识点和理论体系,强化与其他医学学科的联系。将课堂讲授法与改造PBL结合,将课外小组学习和课堂PBL结合,增加考核量化的指标,建立具有高效能的医学教学模式。     

人乳头瘤病毒16型晚期蛋白在昆虫细胞中的表达

目的 构建HPV16型晚期蛋白重组杆状病毒，并使其在昆虫细胞中获得高效表达。方法 首先用线性化的杆关病毒DNA与重组杆关病毒转移共杂sf9昆虫细胞进行同源重组，获得2株重组杆状病毒。结果 经鉴定该重组病毒中有目的DNA存在且可表达晚期蛋白；电镜观察发现重组杆关病毒感染的sf9细胞核内有乳头瘤病毒VLPs。结论 HPV16型晚期蛋白在昆虫细胞中的成功表达为HPV16型预防性基因工程亚单位疫苗的研制和诊断试剂的研究开发奠定了基础。     

开展PBL教学法，在分子病毒学教学中培养学生的学习能力

为了加强对七年制学生综合素质和学习能力的培养，我们在分子病毒学的教学过程中．采取了PBL(problem based learning)教学法，即以问题为中心的教学模式。这种方法不仅给学生提供了展示教学新理念的机会，同时也对指导教师提出了挑战。现把我们对七年制学生的分子病毒学课程进行PBL教学的尝试与体会介绍如下。     

免疫状态对Fv—4基因抗Friend MuLV作用的影响

通过检测免疫抑制的Ｆ１小鼠和杂合子Ｆ２裸鼠对Ｆｒｉｅｎｄ小鼠白血病病毒（Ｆｒ．ＭｕＬＶ）感染的敏感性,探讨免疫状态对Ｆｖ－４基因（特别是对Ｆｖ－４基因杂合子）抗ＦｒｉｅｎｄＭｕＬＶ作用的影响,经腹腔接种Ｆｒ．ＭｕＬＶ病毒液攻击小鼠或Ｆ２裸鼠后,检查其计中Ｆｒ．ＭｕＬＶ的增主其发病情况,结果表明,免疫抑制的Ｆ１小鼠和杂合子Ｆ１裸鼠都可被Ｆｒ．ＭｕＬＶ脾脏中有病毒增殖,并用约２／３的杂合子Ｆ２裸鼠与Ｂ     

一氧化氮供体和他汀对B组柯萨奇病毒感染的实验研究

目的研究硝酸酯类和他汀类等一氧化氮（NO）供体的抗柯萨奇病毒B组3型（CVB3）的作用及其特点和机制。方法用TCID50和空斑形成实验测定CVB3的毒力；MTT法确定NO供体药物的无毒性浓度；利用细胞病变效应（CPE）抑制实验和空斑形成抑制实验分析NO供体药物对CVB3在HeLa细胞和ECV．304细胞中增殖的抑制作用；并分析硝酸甘油（GRIN）不同给药次数、NO浓度变化以及NO浓度与GTN对CVB3抑制效应间的相关性。结果硝酸酯类药物GTN、硝酸异山梨酯可明显抑制CVB3所致的CPE及空斑形成（P〈0．05），他汀类药辛伐他汀、洛伐他汀均未显示抑制CVB3所致的CPE（P〉0．05）；CVB3接种前预先与GTN作用、CVB3接种同时加入GTN两种条件下CPE抑制率差异无统计学意义（P〉0．05）；CVB3攻击后多次给予GTN的组间CPE抑制率差异无统计学意义（P〉0．05），但在CVB3攻击前不同时间点给予GTN的组间CPE抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）；NO浓度与不同时间点给予GrIN的CPE抑制结果呈正相关（r=0．97，P〈0．01）。结论NO供体类药物硝酸酯类具有明确的抗CVB3感染作用，其抗CVB3增殖的作用与NO浓度呈正相关；他汀类药物在本实验条件下未观察到抗CVB3增殖作用，原因可能是细胞类型与他汀不匹配。     

人缺血脑组织中TNF-α和IL-1β的表达

目的 :检测人缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。 方法 :将 13例脑梗死的死亡病例按发病时间分成 <2d、3～ 5d、 >5d3个组 ,以非缺血侧半球作为对照 ,用免疫组化染色法检测缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。结果 :人脑缺血后缺血病灶中TNF α和IL 1β呈高表达 ,与正常侧脑组织相比较有极显著差异。TNF α和IL 1β表达细胞的分布与缺血灶相一致 ,呈局灶性分布。TNF α的表达高峰在病后 2d内。IL 1β表达高峰在病后 3～ 5d。在病后 5d ,缺血侧TNF α和IL 1β的表达与正常侧无显著差异。结论 :人类脑缺血组织中TNF α和IL 1β的表达与动物实验的结果相似 ,提示TNF α和IL 1β参与了脑缺血损伤 ,有助于临床建立新的有针对性的治疗措施