广西狂犬病病毒与狂犬病疫苗株N基因序列分析

目的了解广西狂犬病病毒（RABV）街毒株与疫苗株N基因序列的差异,为疫苗使用提供理论依据。方法采用直接免疫荧光法（DFA）和巢式RT—PCR法检测,测定病毒N基因序列全长,同时根据N基因序列同源性及系统进化树比较,分析广西近年流行的RABV与国内外10株疫苗代表株N基因序列之间的差异。结果DFA法阳性率为8．84％（350／3961）,RT—PCR法检测阳性率1．29％（51／3961）,获得N基因全序15份;15份N基因核苷酸与氨基酸序列同源性为89．40％。100％和98．40％~99．80％;广西15份（RABV）与国内外10株疫苗代表株N基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为85．70％～99．70％和94．90％～99．80％,与中国CTN疫苗株N基因的核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为89．60％,99．70％和98．40％。99．80％。N基因系统发生树分为两大分支,15份（RABV）与中国人用CTN株构成第一分支,其余的疫苗毒株构成第二分支。结论广西犬间流行的RABV与中国人用CTN疫苗株N基因序列同源性最高、亲缘关系最近,在广西地区使用CTN疫苗株效果可能较好。     

广西玉林市2005—2012年狂犬病病原学监测及病毒N基因特征分析

目的分析2005—2012年广西玉林市狂犬病病原学监测结果及病毒N基因遗传变异特征,为狂犬病防控提供科学依据。方法 2005—2012年在广西玉林市采集犬脑组织及临床诊断人狂犬病病例的唾液进行病原学检测,检测阳性标本进行N基因核苷酸序列测定、同源性比较和种系发生分析。结果共采集、检测外观健康犬脑组织728份、临床诊断人狂犬病病例唾液33份,RT-PCR检测阳性率分别为0.96%(7/728)和51.52%(17/33)。获得5条犬源、6条人源狂犬病病毒株N基因全序列。该11条序列之间的核苷酸同源性为94.7%~100.0%,与广西以往分离株GX01的核苷酸序列的同源性为94.5%~98.4%,与疫苗株CTN株的同源性为94.6%~99.7%。进化树分析显示,犬源株和人源株病毒N基因亲缘进化关系很近,处于同一分支,都属于基因Ⅰ型狂犬病病毒。结论从病原学和病毒分子水平证实玉林市外观健康犬携带狂犬病毒及17例临床诊断病例为确诊病例,其病原为狂犬病病毒基因I型,阳性带毒犬的流动是造成本病传播和扩散的主要因素,也是造成该地区疫情高发的重要原因之一。     

麻疹病毒分离及现行疫苗免疫效果分析

目的 分离麻疹流行病毒,与现用麻疹减毒活疫苗(Measles Vaccine,Live;MV)株病毒进行基因比较和交叉中和试验,以分析现行MV的免疫保护性.方法 由江苏省疾病预防控制中心提供2005年麻疹局部流行时急性期病人的咽拭子标本,用Veto/Slam细胞分离病毒,同时提取分离病毒和疫苗病毒核糖核酸,用逆转录-聚合酶链反应扩增血凝素蛋白(H)和核蛋白(N)基因,并进行核苷酸测序分析;另用MV免疫者的血清和麻疹病人的恢复期血清与分离野毒株和疫苗株进行交叉中和试验.结果 一次成功分离到4株麻疹野病毒,对其中1株(JS/26-05)作基因测序,N基因进化树分析为H1基因型;与疫苗株病毒基因比较,H基因核苷酸同源性为94.8%,氨基酸同源性为95.1%;N基因核苷酸同源性为94.4%,氨基酸同源性为96.2%,但碳末端150个氨基酸的同源性为90.0%.疫苗免疫者产生的中和抗体水平低于自然感染者,两者的抗体几何平均滴度分别为:针对野毒株1:9.56和1:22.40,针对疫苗株1:40.05和1:65.41,相差2.9～4.2倍;疫苗免疫产生的抗体中和野毒株的能力平均低于疫苗株4.2倍.结论 2005年江苏省局部地区麻疹流行时分离的病毒为H1基因型,麻疹分离株与现用疫苗株在基因水平上的差异明显,现用MV的免疫保护作用有所减弱,可能已影响到MV的免疫持久性.     

福州市麻疹病毒分离株基因特性研究

目的:探究福州市麻疹病毒基因的遗传变异特点及种系进化分布,为控制和消除麻疹提供科学依据。方法:应用Vero/slam细胞进行麻疹病毒分离,用RT-PCR方法扩增分离株病毒的N基因C末端450个核苷酸片段,扩增产物经纯化后,进行N基因核苷酸序列测定并推导出其aa序列,然后用DNASTAR MegAlign序列分析软件进行基因种系进化特性分析。结果:福州市麻疹分离株均为H1a基因亚型,3株病毒核苷酸同源性为99.3%～100%,在遗传树图中分属于1个独立分支,与疫苗株S191相比核苷酸同源性为87.5%,aa同源性为91.9%～92.1%。结论:福州麻疹野病毒与疫苗株S191在核苷酸与aa序列均存在较大差异,在麻疹监测工作中应进一步加强麻疹病原学的监测和麻疹遗传变异特性的研究。     

福建省2015年一起流行性腮腺炎暴发的病原学分析北大核心

目的分析福建省2015年一起流行性腮腺炎暴发的病原学特征及基因变异情况。方法通过Vero/Slam细胞进行病毒分离;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增小疏水蛋白基因片段进行病毒鉴定;应用序列分析软件对病毒基因特征进行比较分析。结果成功分离到9株腮腺炎病毒,均属于G基因型。9株分离株核苷酸序列同源性为99.0%-100%,氨基酸序列同源性为98.0%-100%;与国内其他省流行的F基因型代表株核苷酸与氨基酸差异均〉13.0%;与疫苗株的核苷酸及氨基酸平均差异分别为15.3%和34.5%;同2003年流行于英国的G2亚型病毒代表株核苷酸序列同源性最高（96.8-97.2%）。腮腺炎病毒分离株SH基因的核苷酸存在8个特异性突变位点,其中CNT68、ANT199、TNT271是新发现的突变位点;部分氨基酸保守位点也发生了变化。结论此起暴发是由G基因型腮腺炎病毒引起的。     

四川省1株输入性麻疹病毒基因特征分析

目的分析四川省1麻疹病毒分离株的基因特征。方法病毒分离和核苷酸测序后,与麻疹病毒基因型参考株编码核蛋白羧基末端的456个核苷酸序列做进化树分析。结果该病毒分离株（MVi/Sichuan.CHN/7.09/1）与D9基因型参考株聚集在同一进化分枝上,bootstrap值为91%。与D9基因型参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.9%和96.6%;与其他22个基因型参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为89.9%～96.2%和90.7%～98.0%。结论现有的麻疹实验室网络数据表明,该病毒分离株为我国大陆首次分离到的D9基因型麻疹病毒,证实为输入性病毒。     

广东省流行麻疹野病毒的核蛋白基因序列分析

广东省 2 0 0 0～ 2 0 0 1年分离到 7株麻疹病毒 ,通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增出该 7株麻疹病毒核蛋白 (N)基因碳末端 5 90个核苷酸。其中碳末端 45 0个核苷酸的序列测定和分析提示 ,该 7株病毒为麻疹野病毒H1基因型。 7株病毒之间核苷酸同源性为 96 .7%～ 10 0 0 %,和其它基因型相比 ,碳末端 45 0个核苷酸水平变异可达 12 0 %,提示氨基酸水平上的变异在 12 .4%。     

浙江省2005年麻疹病毒流行株基因特性分析

目的分析浙江省2005年麻疹病毒流行株的基因特性.方法对暴发疫情中分离的4株麻疹病毒采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增血凝素蛋白（H）和核蛋白（N）基因,纯化产物进行核苷酸序列测定.结果浙江省2005年分离到的4株麻疹病毒流行株均为麻疹H1基因型,属于中国麻疹病毒优势基因型.各分离株之间H基因氨基酸同源性为99.2%～99.7%,N基因氨基酸同源性为99.8%;与中国疫苗株沪191株的H基因和N基因比较,其氨基酸水平上的同源性分别为95.2%～95.5%和95.5%.结论浙江省2005年分离到的麻疹病毒流行株属于同一性状毒株,均为H1基因型;与中国疫苗株沪191株相比较,两者在基因特性上存在明显差异.     

南康市2007年一起麻疹暴发的分子生物学研究

[目的]分析南康市麻疹暴发的分子生物学特征,掌握麻疹病毒的基因特性.[方法]采用Vero/SLAM细胞对2007年暴发疫情患者咽拭子标本进行麻疹病毒分离,通过RT-PCR方法扩增麻疹病毒分离株核蛋白(nucleoprotein,N)基因,并对扩增出的核苷酸序列进行测定和分析.[结果]2007年南康市麻疹病毒分离株为麻疹H1基因型,属于我国麻疹病毒的优势株.两株分离株之间N基因氨基酸的同源性为98.7%;与中国疫苗株沪191株的N基因氨基酸序列比较,其同源性分别为94.7%和96.O%.[结论]南康市此次麻疹暴发疫情病毒分离株为H1基因型,并与中国疫苗株沪191株在基因特性上有明显差异.     

我国首例输入性D_9基因型麻疹病毒的分离和鉴定

目的分离并鉴定我国首例输入性D9基因型麻疹病毒。方法使用Vero/SLAM细胞（非洲绿猴肾细胞/淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞）分离病毒,使用逆转录-聚合酶链反应扩增出编码核蛋白羧基末端450个核苷酸片段,通过对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,构建基因亲缘性关系树,进行遗传距离分析。结果四川省D9基因型麻疹病毒分离株MVi/Sichuan.CHN/07.09/1和世界卫生组织D9基因型代表株Victoria.AUS（维多利亚？澳大利亚）/12.99在基因亲缘性关系树上同属一个分支,核苷酸同源性为96.9%;和2008年流行于泰国和荷兰的D9基因型麻疹野病毒的核苷酸和氨基酸同源性分别为99.8%～100%和99.3%～100%;和中国大陆目前所使用的麻疹疫苗株沪191相比对,其核苷酸和氨基酸同源性分别为92.3%和90.7%;和中国目前流行的麻疹病毒绝对优势本土基因型H1基因型代表株相比对,其核苷酸和氨基酸同源性分别为90.8%和92.1%。结论输入中国四川省的麻疹病毒株为D9基因型。     

湖南省武岗市洞口县狂犬病流行病学研究

目的分析2003-2004年间在湖南省武岗市与洞口县发生的狂犬病并探讨局部地区流行的因素.方法对狂犬病进行个案调查,用直接免疫荧光法检测犬脑组织中的狂犬病毒抗原,用RT-PCR法扩增N基因片段,测定核苷酸序列并构建系统发生树进行遗传特征分析.结果自1991-2002年武岗市与洞口县仅各报告1例人狂犬病,但2003-2004年间,分别报告30例人狂犬病.62例狂犬病患者中61例被犬所伤,1例被猫所伤.在有完整记录的50例患者中,平均潜伏期为44.18天.其中7例（14%）狂犬病患者的潜伏期≤15天,16例（32%）潜伏期≤20天.在疫点周围采集的99只犬脑组织中,13只犬脑组织狂犬病毒抗原阳性,阳性率为13.13%.将Wg13与Dk13株病毒的部分N基因核苷酸序列与已报道中国病毒株比较,发现2株病毒与广西及安徽的毒株有最高的同源性,构建的系统发生树也分在同一分支.用全N基因核苷酸序列分析发现,Wg13与Dk13毒株全为Ⅰ型狂犬病毒,2株病毒之间的同源性为99.4%以上.比较分析2株病毒N基因编码的氨基酸序列,发现包括第Ⅳ抗原位点区在内的多个氨基酸位点发生了氨基酸的替代.结论引起武岗市与洞口县的狂犬病流行的病毒不是新型狂犬病毒,犬饲养量大与病毒携带率高是狂犬病暴发的直接原因.     

Genetic and antigenic analysis of street strains of rabies virus in GuangxiP.R.China

ＲａｂｉｅｓｗａｓａｓｅｒｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅｉｎＧｕａｎｇｘｉ．Ｉｔｈａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｆａｔａｌｉｔｙｒａｔｅｓａｎｄｎｏｅｆｆｅｃｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｓｉｎｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｏｓｔｅｘｐｏｓｕｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ,ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ,ｓｔｉｌｌｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｗａｙｆｏｒｈｕｍａｎｒａｂｉｅｓｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｔｙｐｉｎｇ ｗｉｔｈｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄｒｅｃｅｎｔｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅ ｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｉｎＮｇ…     

广西狂犬病毒野毒株的基因和抗原分析（英文）

Analyse the genetic and antigenic variant of rabies virus in Guangxi with epidemiological method, monoclonal antibodies reaction pattern and molecular biological technique. Rabies incidence has increase in recent three years in Guangxi, especially in mountainous areas. Investigation into the human rabies found that there are about 20％ vaccinated defeat cases.On the basis of their reactivity to monoclonal antibodies against the viral nucleocapsid protein(mAb-N),4 street strains isolated from different areas where enzootic rabies is shown had different reaction patterns compared with Chinese vaccine strain(3aG). The nucleotide and amino acid sequence of street strain(GX89_1) G and N gene were compared with 3aG, the overall nucleotide homology of GX89_1 with 3aG was 84.5％ and amino acid homology of GX89_1 with 3aG was 89.5％ in G gene.The overall nucleotide homology of GX89_1 with 3aG was 86％ in N gene and they were not in the same group.There are several amino acid replacement in AA 243_268 of G protein that can affect the antigenicity of rabies virus.The findings suggest that there are different street strains of rabies virus in Guangxi.     

狂犬病病毒浙江街毒株糖蛋白基因序列分析

目的 测定狂犬病病毒浙江株(鼬獾源和犬源)糖蛋白(GP)基因组全序列,从分子水平比较狂犬病病毒浙江株与其他地区代表性街毒株和疫苗株GP之间的差异.方法 乳鼠接种分离狂犬病病毒,RT-PCR反应测定狂犬病病毒浙江株GP基因核苷酸序列,并进行序列和编码蛋白的比较分析.结果测序获得浙江5株鼬獾源狂犬病病毒和9株犬源狂犬病病毒GP基因序列,全长1575个核苷酸,编码524个氨基酸.浙江病毒株与其他地区街毒株、疫苗株核苷酸和氨基酸序列相似性在82.3%～99.9%和85.1%～99.8%之间,种系分析显示浙汀株均为基因1型,GP编码蛋白无重组,主要抗原位点未出现较大的变异.结论 对GP基因一级结构综合分析表明,在某些区域存在优势抗原表位的可能性较大,可能出现潜在的蛋白质抗原决定簇,浙江株GP基因变异较小,与国内其他地区流行的代表性街毒株相似,但高于其他疫苗株,在基因结构及种系进化关系上存在一定的距离.     

宁波市狂犬病病毒NB0901株核蛋白基因的序列分析

目的通过RT-PCR方法对2009年宁波市狂犬病病毒分离株（NB0901）的N基因扩增并测序,了解宁波地区狂犬病病毒的流行特点。方法运用RT-PCR方法和序列测定方法获得NB0901株的N基因序列,并在核苷酸和氨基酸水平与疫苗株（3aG和CNT-1）进行同源性比较,同时进行遗传进化分析。结果狂犬病病毒NB0901株与疫苗株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别在86.6%～90.1%和95.5%～98.8%之间。NB0901株N蛋白的抗原表位与疫苗株相比后发现在NⅠ和NⅡ抗原表位存在突变。而在Th细胞表位上,NB0901株与CNT-1株完全一致,与3aG株相比变异较大。进化结果表明NB0901株属于狂犬病病毒Ⅰ群中的A亚型。结论狂犬病病毒NB0901株和当前疫苗株虽同属于Ⅰ群,但是与疫苗株相比存在差异,从氨基酸序列水平上分析,CNT-1株较3aG株更能有效保护流行毒株感染。     

江苏省盐城市1999-2008年狂犬病流行病学研究

目的 分析盐城市狂犬病的流行病学特征.方法 收集狂犬病疫情资料,开展犬密度、犬免疫率、犬伤人率及狂犬病处置门诊工作调查;检测犬脑中狂犬病毒并进行相关分子生物学研究.结果 1999-2008年盐城市共报告135例人狂犬病,形成自1958年以来的第二次流行高峰,其中2003年报告40例狂犬病.135例患者中114例为农民.监测点调查发现盐城市犬密度为每100人中约豢养犬3～6只,每年平均100只犬伤人6.37人次,2008年犬的免疫率只有20%,暴露人群狂犬病疫苗接种率为77%.狂犬病处置门诊中抗狂犬病血清(球蛋白)的使用率仅为5%～10%.在采集108份犬脑标本中,4份狂犬病毒阳性,扩增、测序并分析病毒的N和G基因显示,这些病毒为基因Ⅰ型狂犬病毒,与目前使用的狂犬疫苗株CTN同源性最高.结论 盐城市人间狂犬病的持续流行与当地犬的饲养量大、免疫率低以及农村地区群众受动物伤害后的处理不及时规范及处理率低密切相关.     

2006年河北省麻疹病毒分子流行病学监测

目的了解2006年河北省流行的麻疹病毒基因型特征。方法对2006年分离的30株麻疹野病毒进行分子流行病学研究。结果 30株麻疹野病毒均为H1a基因亚型,其核蛋白(N)基因碳末端456个核苷酸同源性为99.7%～98.0%之间,氨基酸同源性为96.0%～100%之间;与S191株核苷酸同源性为91.4%～92.3%之间,氨基酸同源性在86.7%～89.4%之间。2006年分离到的30株麻疹病毒存在3个分支(传播链)。结论 H1a基因亚型为2006年河北省优势流行基因型,H1b基因亚型可能已经终止,麻疹野病毒与现行疫苗株S191之间变异仍在加大。     

Development of combined vaccines for rabies and immunocontraception

Rabies prevention and appropriate population management of free-ranging animals have an important role to play in the eventual elimination of rabies in dogs. An effective sterilant based on rabies vaccines has the potential to create a supportive measure of public acceptability and to reduce associated clinic visit costs. We inserted the coding sequence of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) into different locations within the rabies virus ERA glycoprotein (G) gene, and demonstrated that the amino terminus (N), antigenic site IIa, and the junction between the ecto- and cytoplasmic domains (C) of the G were suitable sites for GnRH insertion. The rescued recombinant rabies viruses ERA-N-GnRH and ERA-C-GnRH grew as well as the parental ERA virus, reaching 1 × 10⁹ ffu/ml in cell culture. Insertion and expression of the GnRH were stable in the viruses after multiple passages in vitro. To increase immunogenicity of the GnRH peptide, two copies of GnRH, aligned in tandem, were fused to the N terminus of the G. The recombinant rabies virus ERA-N-2GnRH was recovered and grown to high titers in cell culture. All GnRH-carrying rabies viruses induced antibodies against GnRH in immunized mice and protected 100% of the animals after rabies virus challenge. The recombinant viruses reacted strongly with the serum from a GonaCon™-immunized animal. The GnRH-carrying rabies viruses have significant potential in rabies and animal population control.     

云南省2007--2009年流行性腮腺炎病毒SH和HN基因的遗传特征分析

目的 分析2007-2009年云南省腮腺炎病毒(MuV)分离株的SH和HN遗传特征.方法 采用反转录-聚合酶链反应从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出SH基因和HN基因,测序后用Mega4.1软件分析其遗传特征.结果 云南省分离14株MuV的SH基因其核苷酸和氨基酸同源性为98.3%～100.0%和96.5%～100.0%,与其他省份比较其同源性为92.6%～99.4%和87.7%～100.0%,其中Wsh1和Wsh2与其他F基因型差异较大;与疫苗株同源性为84.5%～85.1%和77.2%;与其他基因型同源性为83.4%～90.9%和70.1%～86.0%.6株MuV分离株的HN基因与核苷酸和氨基酸同源性分别为99.3%～99.5%和99.1%～99.7%;与中国分离株SP株的核苷酸和氨基酸同源性均为99.8%;与其他基因型同源性为94.7%～96.8%和95.5%～99.1%;与疫苗株的同源性为92.4%～93.2%和95.5%～96.4%.结论 2007-2009年云南省流行的MuV均为F基因型;其HN基因比SH基因保守.

Abstract：

Objective To analyze genetic characterization of the small hydrophobic and hemagglutinin-neuraminidase genes of mumps virus(MuV)isolated in Yunnan province,China from 2007 to 2009.Methods Fourteen MuV strains were isolated in Yunnan,China from 2007 to 2009.Using RT-PCR,the SH gene fragments contained 316 nucleotides in all strains and HN gene of six strains were sequenced.The sequences were aligned with other mumps virus sequences downloaded from GenBank using Mega 4.1 software.Results Fourteen isolated strains were closely related to other reference strains of F genotypes.In SH gene,the homology of nucleotide and amino acid among the fourteen isolated strains were 98.3%-100.0%and 96.5%-100.0%,respectively,and 92.6%%-99.4%and 87.7%-100.0% of homology when compared with that of strains isolated from other provinces in China,respectively.Wsh1 and Wsh2 strains had less homology when compared to other strains of F genotypes.The fourteen strains had homology of 84.5%-85.1%and 77.2%compared to vaccine strains on nucleotide and amino acid,respectively,and had homology of 83.4%-90.9% and 70.1%-86.0% compared to that of other genotypes.In HN gene,the homology of nucleotide and amino acid among the six isolated strains were 99.3%-99.5% and 99.1%-99.7%,respectively,and also 99.8% and 99.8% of homology respectively when compared to the SP strain in China.All the six strains had homology of 92.4%-93.2% and 95.5%-96.4% when compared to the vaecine strains on nucleotide and amino acid,respectively,and had homology of 94.7%-96.8% and 95.5%-99.1%compared to other genotypes.Conclusion Fourteen strains isolated in Yunnan from 2007 to 2009belonged to F genotype of MuV while the HN gene seemed more conservative than SH gene.