ShRNA靶向干扰BHRF1基因抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的观察BHRF1 shRNA质粒载体转染对人鼻咽癌CNE2细胞中的BHRF1基因沉默及细胞增殖和凋亡的影响,以及肿瘤细胞对放射敏感性的变化。方法利用RNAi技术将负载BHRF1 shRNA的质粒载体转染至人鼻咽癌CNE2细胞,一组为BHRF1 shRNA质粒载体转染过的CNE2细胞（观察组）,未进行转染的CNE2细胞确定为对照组,经RT-PCR扩增人鼻咽癌组织中BHRF1 cDNA片段,RT-PCR和Western blot检测BHRF1基因的蛋白水平的表达。并且利用顺铂进行实验,观察使用顺铂后,BHRF1 shRNA转染后的肿瘤细胞是否对放射敏感性有变化。结果 BHRF1 shRNA转染鼻咽癌CNE2细胞后,细胞内BHRF1 mRNA表达量（2.02±0.53）,对照转染前明显下调,明显下调,与对照组的（29.82±0.64）比较,差异有显著性意义（P〈0.01）;DDP和8G放疗作用24 h以后,被转染的细胞的中的蛋白表达大大降低（P〈0.05）,癌细胞凋亡率上升,明显比对照组癌细胞的凋亡率高（P〈0.05）。结论利用RNA干扰技术对人鼻咽癌治疗具有潜在应用价值,BHRF1 shRNA质粒载体不仅仅能调控细胞基因的表达,而且还能够提高癌细胞对顺铂的敏感性。     

子痫前期胎盘组织TGF—β1高表达对滋养细胞凋亡的影响

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）在正常妊娠和子痫前期患者胎盘组织中的分布和表达及与滋养细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学法检测30例子痫前期（轻、重度）和10例正常孕妇胎盘中TGF-β1的分布和表达,采用TUNEL法检测3组胎盘滋养细胞凋亡的情况。结果TGF—β1在正常妊娠和予痫前期患者胎盘的滋养细胞、内皮细胞、基质细胞中均有表达,以滋养细胞表达为主。TGF—β1在对照组、实验组1和实验组2的积分光密度逐渐增高,实验组1与对照组比较差异有统计学意义（t=10．834,P〈0．01）;实验纽2与实验组1比较差异有统计学意义（t=13．056,P〈0．01）。正常妊娠和子痫前期患者胎盘的滋养细胞、内皮细胞、基质细胞均存在凋亡,以滋养细胞凋亡为主。实验组1和组2均较对照组凋亡率明显增高（,值分别为18．42、48．87,均P〈0．01）;随着病情加重,实验组1、实验组2细胞凋亡率呈上升趋势（χ2=7．70,P〈0．01）。滋养细胞TGF—β1表达与胎盘绒毛细胞凋亡率在实验组2、实验组1均具有相关性（r值分别为0．910、0．520,均P〈0．01）。结论子痫前期患者胎盘组织中的TGF-β1高表达可能与其滋养细胞凋亡增加有关。     

COX-2和Mcl-1在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

目的 探讨环氧合酶-2（COX-2）和髓细胞白血病-1（Mcl-1）蛋白在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B—NHL）中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化SP法检测43例B—NHL和10例良性淋巴结病变组织中COX-2和Mcl—1蛋白的表达情况。结果 COX-2和Mcl-1蛋白在B—NHL中的阳性表达率分别为55．8％（24／43）和65．1％（28／43），明显高于对照组（P〈0．05）。Ⅲ／Ⅳ期B—NHL患者COX-2蛋白的表达要高于Ⅰ／Ⅱ期患者（P〈0．05），侵袭性B—NHL患者Mcl-1蛋白的表达要高于惰性组（P〈0．05）。Spearman相关分析表明COX-2的表达与Mcl-1蛋白的表达呈正相关（r=1．000，P=0．004）。结论 COX-2和Mcl-1蛋白在B—NHL中表达上调以及两者之间的阳性表达密切相关，表明COX-2和Mcl-1蛋白在B—NHL的发生和发展中具有协同作用。     

系统性硬皮病患者外周血CD4^＋T细胞中CD40L表达水平的研究

目的研究系统性硬皮病（SSc）患者外周血CD4^＋T细胞中CIM0配体（CIMOL）的表达水平。方法应用密度梯度离心法分离26例SSc患者（女16例,男10例）和25例正常对照者（女15例,男10例）的外周血单个核细胞,磁珠分选CD4^＋T细胞。RT—PCR检测CD4^＋T细胞中CD40L mRNA的表达水平;流式细胞术检测CD40L蛋白在CD4^＋T细胞中的表达水平。结果SSc女性患者CD4^＋T细胞中CD40L mRNA和CD40L蛋白的表达水平均显著高于正常女性对照组[5．61±1．86vs2．80±0．94,P〈0．01;（6．70±3．55）％vs（2．37±1．39）％,P〈0．05];SSc男性患者CD40L mRNA和CD40L蛋白的表达水平与正常男性对照组相比差异均无统计学意义[2．59±0．89vs1．92±0．56,P〉0．05;（2．06±1．09）％vs（2．13±0．87）％,P〉0．05]。结论女性SSc患者CD^＋T细胞中CD40L表达显著增高,而男性患者无明显改变,提示CD40L仅在女性SSc发病中起着重要的作用。     

EB病毒EA-D抗原在毕赤酵母中的表达及产物在鼻咽癌血清学诊断中的应用

目的合成适合酵母表达的EB病毒(EBV)早期弥散型抗原(EA-D)基因BMFR1,在毕赤酵母中表达;探讨表达产物在鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)血清学诊断中的应用。方法选用酵母偏爱的密码子合成BMFR1基因转入毕赤酵母菌株表达;将重组EA-D作为包被抗原,用ELISA检测IgA;收集NPC患者以及健康体检者血清进行检测。结果 SDS电泳、免疫印迹显示EBV EA-D在毕赤酵母表达;早期和晚期NPC患者EA-D-IgA阳性检出率分别为60.0%和68.8%,高于对照组5.0%,差异具有统计学意义(P0.05)。早期NPC患者组与晚期患者组之间差异无统计学意义(P0.05)。该方法诊断NPC的灵敏性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为(早期NPC组/晚期NPC组):60.0%/68.8%、95.0%/95.0%、47.4%/76.7%、96.9%/92.7%。结论毕赤酵母表达出重组EBV EA-D抗原,用表达产物建立的EA-D-IgA抗体检测方法可作为NPC诊断的辅助手段。     

定量PCR检测热性惊厥患儿外周血单个核细胞ICAM-1／LFA-1 mRNA表达水平

目的探讨细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及其配体淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）对热性惊厥（FS）患儿的神经免疫调节作用。方法40例FS患几分为单纯性FS（SFS）组20例和复杂性FS（CFS）组20例;对照组19例。分别采用实时荧光定量PCR、RT-PCR方法检测外周血单个核细胞（PBMC）ICAM-1／LFA-1 mRNA的表达水平。结果SFS组患儿ICAM—1 mRNA水平为（0．63±0．39）基因copy数,明显高于对照组（0．46±0．20）和CFS组患儿（0．41±0．20）基因copy数（P〈0．05）;CFS组ICAM—1 mRNA水平与对照组儿童比较有下调趋势,但差异无统计学意义（P〉0．05）。SFS组LFA—1 mRNA表达水平为（0．73±0．11）灰度值比。明显高于对照组（0．60±0．15）和CFS组（0．54±0．17）灰度值比（P〈0．05）;CFS组患儿LFA-1 mRNA水平与对照组儿童比较亦有下调趋势,但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PBMC ICAM-1／LFA-1基因表达水平在SFS和CFS是不同的,ICAM-1／IFA-1 mRNA表达增高所介导的炎性免疫病理损害在SFS患儿发病机制中有一定的作用,而CFS患儿ICAM-1／LFA-1 mRNA表达反而下调可能有一定的神经保护作用。     

Nogo基因多态性与鼻咽癌相关性的病例对照研究

目的 探讨Nogo基因rs2255393和rs968998多态性与鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）易感性关系。方法 SNaPshot技术和DNA测序法检测276例NPC患者与276例健康对照者的rs2255393和rs968998基因型。用统计学分析两组基因型、等位基因与NPC易感性的关系。结果 rs968998位点基因型及等位基因在两组中比较差异均无统计学意义（均有P>0.05）。但rs2255393位点TT基因型（OR=0.58,95% CI:0.34~0.97,P=0.039）和显性模型（AA+TA）（OR=0.62,95% CI:0.44~0.87,P=0.006）在NPC组和对照组中的分布差异有统计学意义。此外,T等位基因在NPC组的频率低于对照组,分布差异也有统计学意义（OR=0.72,95% CI:0.56~0.92,P=0.009）。而rs2255393多态性和NPC患者临床分期,淋巴转移和远处转移比较,差异均无统计学意义（均有P>0.05）。结论 Nogo基因rs2255393位点多态性与NPC发病风险存在关联,但与临床肿瘤分期无关。     

kankl在非小细胞肺癌中的表达研究

目的探讨kankl基因在非小细胞肺癌（non—small cell lung cancer,NSCLC）中的表达及意义。方法本实验共选择74例NSCLC标本。选取20例正常肺组织作为对照组。采用组织芯片技术和免疫组织化学sP法检测KANKl蛋白的表达。结合患者临床资料分析kankl与非小细胞肺癌发生发展的相关性。结果kankl主要表达于细胞质,在非小细胞肺癌和正常肺组织中的阳性表达率分别为50．0％（37／74）,90．0％（18／20）,差异有统计学意义（P〈0．05）。kankl在NSCLC中与不同年龄、性别、病理类型、分化程度及是否有淋巴结转移差异无统计学意义（P〈0．05）。结论kankl在非小细胞肺癌组织中表达下调或蛋白失活,说明kankl在非小细胞肺癌的发生发展中可能具有重要作用。     

GSTM1、GSTT1基因缺失与肺癌易感性的关系

目的探讨谷胱苷肽S转移酶M1（GSTM1）、谷胱苷肽S转移酶T1（GSTT1）基因缺失与肺癌发病之间的关系及其与P16表达降低的相关性在肺癌发生中的作用。方法采用PCR技术检测77例肺癌患者和107例健康对照人群中GSTM1、GSTT1基因缺失的频率，以十二烷基磺酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白印迹（WeStern—blot）技术测定P16蛋白在正常组织中的表达。结果病例组GSTM1基因缺失频率为58．4％，显著高于对照组缺失频率为42．1％（X^2=4．811，P=0．028），危险度分析OR=1．938，95％CI=1．070～3．509；病例组GSTT1基因缺失频率为57．1％，接近对照组50．5％缺失频率的水平（X^2=0．802，P=0．371）。联合分析表明，2种基因在肺癌发生中具有协同作用。GSTM1空白基因型与GSTM1非空白基因型个体相比、GSTM1／GSTT1联合空白基因型与其他联合多态基因型相比P16表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GSTM1基因缺失或GSTM1、GSTT1基因联合缺失在肺癌患者中发生频率增高，可增加个体患肺癌的易感性；GSTM1基因缺失及GSTM1／GSTT1联合缺失可能与抑癌基因p16的蛋白表达减低有关。     

鼻咽癌患者白细胞EBV—DNA和血浆VCA—IgA的检测比较研究

目的探讨联合检测鼻咽癌（NPC）患者血液白细胞EB病毒DNA（EBV—DNA）和血浆EB病毒壳抗原抗体（EBVCA—IgA）的l临床应用。方法分别采用实时荧光定量PCR法和酶联免疫吸附法检测34例NPC患者和30例健康体检者的EBV—DNA和EBVCA—IgA。结果34例NPC患者EBV—DNA阳性率为58．82％（20／34）,EBVCA—IgA阳性率为44．12％（15／34）,两者同时阳性为32．35％（11／34）;30例健康体检者EBV—DNA阳性率为10．00％（3／30）,EBVCA—XgA阳性率为3．33％（1／30）,两者同时阳性为3．33％（1／30）。结论NPC患者血液白细胞EBV—DNA作为EB病毒的一种抗原物质,比EBVCA—IgA更能反映EBV在患者体内的实际情况,更适合在临床实验室使用。     

鼻咽癌细胞株Syk基因启动子甲基化的研究

目的:探讨鼻咽癌细胞株Syk基因启动子甲基化与其mRNA和蛋白质表达情况之间的关系。方法:培养鼻咽癌细胞株CNE-1(高分化)、CNE-2(低分化)和永生化非癌性人鼻咽黏膜上皮细胞株(NP69),采用MS-PCR和Q-RT-PCR及Western Blot方法检测各细胞株中Syk基因的甲基化和Syk mRNA及Syk蛋白表达。结果:MS-PCR法检出CNE-1和CNE-2细胞Syk启动子甲基化率分别为36%±3.6%和62%±4.5%,而NP69未检测到甲基化;Q-RT-PCR法检出Syk mRNA在CNE-1和CNE-2的表达水平均低于NP69细胞,分别为42%±3.5%和28%±2%;WesternBlot法检出Syk蛋白在CNE-1和CNE-2的表达水平均低于NP69细胞,分别为36%±4.5%和16%±2.5%。均有统计学意义(P<0.01)。结论:在分化程度较低的鼻咽癌细胞中,Syk基因启动子甲基化程度较高,则Syk基因mRNA与蛋白的表达较低。Syk基因mRNA和蛋白的表达与Syk基因启动子甲基化程度呈负相关。     

CD105和VEGF在水泡状胎块中的表达与意义

目的:研究CD105及VEGF在水泡状胎块与水肿性流产的绒毛滋养细胞中的表达差异及意义。方法:采用免疫组化SP法检测20例正常妊娠(NP),30例水肿性流产(HA),20例部分性水泡状胎块(PHM)和20例完全性水泡状胎块(CHM)患者绒毛滋养细胞中CD105和VEGF的表达水平。结果:①CD105在NP、HA、PHM和CHM中的阳性表达率分别是55.00%、36.67%、85.00%、95.00%,CD105在HM中阳性表达率明显高于HA和NP(P<0.05);②VEGF在NP、HA、PHM和CHM中的阳性表达率分别是50.00%、33.33%、25.00%、15.00%,VEGF在HM中阳性表达率低于HA和NP(P<0.05);③经Spearman等级相关检验,CD105和VEGF在HA与HM中表达呈负相关(r=-0.447,P<0.05)。结论:CD105和VEGF可作为标记绒毛滋养细胞的免疫组化标记物,用于水泡状胎块和水肿性流产的鉴别诊断。     

Survivin蛋白和PCNA在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的　研究survivin蛋白和PCNA在鼻咽癌 (NPC)组织中的表达 ,探讨它们之间的关系 ,并了解其临床意义。方法　应用免疫组织化学SP法检测 96例鼻咽癌组织中survivin和增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白的表达水平。结果　鼻咽癌组织中有survivin蛋白的表达 ,其阳性表达率为 75 0 % (72 /96) ;survivin蛋白表达阳性的鼻咽癌细胞PCNA的标记指数高于survivin蛋白表达阴性者 ;有颈淋巴结转移的鼻咽癌中survivin蛋白阳性率高于无颈淋巴结转移者 ;生存年限 <5年的survivin蛋白阳性表达率比生存年限 >5年的高。结论　鼻咽癌组织中有survivin蛋白的表达 ,其表达与PCNA有关 ;survivin蛋白能促进鼻咽癌颈淋巴结转移 ;survivin蛋白阳性表达者的预后较差     

抑癌基因ING_1、P21/WAF_1、P53蛋白在宫颈癌中的表达

目的: 研究ING1、P21 /WAF1、P53基因蛋白在宫颈癌组织中的表达、意义及相互关系。方法: 对 69例宫颈癌鳞状上皮组织、21例宫颈原位癌组织、18例宫颈不典型增生组织应用免疫组化法, 检测P33ING1、P21 /WAF1 和P53的表达情况,并选择 10例正常宫颈组织作对照。分析各指标间的相关性。结果: P33ING1在正常宫颈组织中表达全部为阳性, 而宫颈不典型增生组织中P33ING1的阳性表达率为 72 2% (13 /18); 宫颈原位癌组织中P33ING1的阳性表达率为 57 1% (11 /21); 宫颈浸润癌组织中P33ING1的阳性表达率为 59 4% ( 41 /69 )。PING1在原位癌、浸润癌的表达明显低于正常组织和不典型增生 (P<0 01 )。P33ING1与P21 /WAF1、P53表达有相关性 (P<0 01)。结论: ING1 是抑癌基因, 其蛋白P33ING1在宫颈癌中低表达, 对宫颈癌的发生、发展起重要作用。P33ING1、P21 /WAF1、P53表达具有相关性。     

CD4+ and CD8+ mediated cellular immune response to recombinant influenza nucleoprotein

The stimulatory properties of soluble recombinant influenza nucleoprotein (NP) on purified CD4(+) and CD8(+) T cells from young and elderly individuals were studied. Recombinant influenza NP failed to induce proliferation of resting CD4(+) and CD8(+) T cells in the absence of IL-2. Addition of small amounts of IL-2, however, led to strong proliferation of resting CD4(+) and CD8(+) T cells from young and elderly donors. NP-reactive CD4(+) and CD8(+) T cell lines from both age groups grew equally well under long-term culture conditions. T cell lines raised to live influenza virus could recognize recombinant influenza NP and showed a substantial proliferative response. Stimulation of CD8(+) T cells is presumably due to cross-presentation, as EBV-transformed MHC class I-positive cell lines, which are incapable of antigen processing, stimulated live influenza virus-reactive CD8(+) T cell lines when loaded with NP-derived immunodominant peptides but not following loading with the whole NP molecule. Vaccines containing recombinant influenza NP might confer cross-protective immunity and could therefore be especially useful in cases of major epidemics or pandemics.     

微RNA-22在甲状腺乳头状癌中的表达及与化疗敏感性的关系

目的 研究微RNA(miRNA,miR)-22在甲状腺乳头状癌组织、血清和细胞系中的表达及其与化疗敏感性的关系.方法 收集21例临床确诊为甲状腺乳头状癌病例资料、组织、血清样本,同时收集21例健康体检者和21例甲状腺结节患者血清样本作为对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应的方法检测miR-22在癌组织、癌旁组织、血清、人甲状腺正常细胞系和人甲状腺乳头癌细胞系中的表达并进行统计学分析,利用生物信息学软件预测miR-22的靶基因及参与的信号通路.结果 miR-22在癌组织中的表达显著低于癌旁组织,在癌患者血清中的表达显著高于健康体检者和甲状腺结节患者,在癌组织中的表达与血清中表达呈负相关(r=-0.851,P＜0.01).miR-22在T3～T4期癌组织中的相对表达量为0.45±0.08,低于T1～T2期的0.61±0.18(t=-2.809,P＜0.01),在N-期癌组织中的相对表达量为0.64±0.16,高于N+期的0.48±0.10 (t=2.789,P＜0.01);在T3～T4期患者血清中的相对表达量为12.76±1.60,高于T1～T2期的9.91±2.74(t=2.806,P＜0.01);在化疗高敏感组患者癌组织中的相对表达量为0.71±0.14,高于化疗低敏感组的0.42±0.13(t=4.575,P＜0.01).利用生物信息学软件预测SIRT1和HMGB1为miR-22的靶基因,其参与细胞内吞作用、肌动蛋白细胞骨架调节、丝裂原活化蛋白激酶和癌症等多个信号通路.结论 miR-22在甲状腺乳头状癌组织和细胞系中的表达量显著降低,且与肿瘤T、N分期和化疗敏感性有关,但在血清中的表达量显著升高;miR-22参与多个信号通路,可能通过靶向调控SIRT1和HMGB1影响甲状腺乳头状癌的发生发展.     

中山市EB病毒筛查阴性人群12年追踪研究

目的探讨EB病毒在人体内的变化规律及其与鼻咽癌发病的关系.方法通过前瞻性方法对中山市1986～1987年鼻咽癌首次筛查EB病毒抗体阴性人群(38 550人)随访12年的资料以及首次筛查阳性人群(2 921人)随访7年的资料进行比较,观察上述人群EB病毒VCA/IgA的变化规律及其与鼻咽癌发病的关系.结果 EB病毒抗体VCA/IgA阴性队列每年都有一定的转阳率(22.8%),其头3年鼻咽癌发病风险仅为一般人群的11%左右,以后逐渐增加,但仍低于一般人群;与阴性队列鼻咽癌发病比较,阳性队列鼻咽癌发病风险高,相对危险度达23.22(P＜0.05).结论一定比例的VCA/IgA阴性人群可转为VCA/IgA阳性;在较长的时间内VCA/IgA阴性队列鼻咽癌发病风险较一般人群及阳性人群低;EB病毒可能是鼻咽癌发病因素,对EB病毒检测可预测鼻咽癌发生的风险,且通过抑制EB病毒活性可能达到预防鼻咽癌的目的.     

新疆阿魏菇提取物对不同肿瘤细胞p53、fas基因表达的调节

目的 从细胞凋亡角度探讨新疆阿魏菇提取物抗肿瘤机制。方法 采用肿瘤细胞体外培养技术及RT—PCR技术，观察阿魏菇不同剂量的水提物及醇提物对体外培养的四种肿瘤细胞p53及fas基因表达的影响。结果 以β—actin的表达及表达量作为内对照，四种类型肿瘤细胞均出现不同程度的p53基因、fas基因表达水平的上调。结论 受试物可能通过诱导促进肿瘤细胞凋亡基因(p53基因、fas基因)的转录及表达，从而发挥抗肿瘤作用。     

三氧治疗对鼻咽癌放疗患者血清HIF-1α和VEGF水平的影响

目的探讨三氧治疗对鼻咽癌放疗患者血清HIF-1α和VEGF水平的影响。方法 40例鼻咽癌患者随机分为三氧联合调强放疗组(实验组)和调强放疗组(对照组),每组20例。应用ELISA法检测两组治疗前、中、后的HIF-1α和VEGF水平。结果实验组治疗后HIF-1α与治疗前相比差异无统计学意义(p>0.05),治疗后VEGF低于治疗前水平(p<0.05)。对照组治疗后HIF-1α和VEGF均高于治疗前,具有显著统计学差异(p<0.01)。实验组治疗后HIF-1α和VEGF均低于对照组,且具有显著统计学差异(p<0.01)。结论三氧治疗可降低鼻咽癌放疗患者血清HIF-1α和VEGF水平。     

卵巢上皮性肿瘤中RIZ1基因表达缺陷的临床意义

目的:探讨抑癌基因RIZ1在卵巢上皮性肿瘤组织及卵巢癌细胞系中的表达及其表达变化与卵巢癌发生的关系。方法:以卵巢肿瘤组织及卵巢癌细胞系为研究对象。RT-PCR检测RIZ1 mRNA水平;蛋白印迹检测RIZ1蛋白表达。结果:卵巢癌组织、卵巢癌细胞系、良性肿瘤组织及正常卵巢组织中RIZ1 mRNA相对含量的平均值分别为0.42±0.16、0.34±0.12、0.68±0.12及1.17±0.08,RIZ1蛋白相对含量的平均值分别为0.48±0.11、0.38±0.08、0.82±0.11及1.56±0.14。卵巢癌组织、卵巢癌细胞系、良性卵巢肿瘤组织分别与正常卵巢组织比较,RIZ1基因的表达差异均有统计学意义(P<0.05);良性卵巢肿瘤组织与卵巢癌组织比较,RIZ1基因的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RIZ1基因表达缺陷与上皮性卵巢癌的发生密切相关。