新疆阿魏菇粗提物抗肿瘤效应研究

研究新疆阿魏菇粗(水、醇)提物中可能的抗肿瘤有效成分,探讨粗提物抗肿瘤作用的分子生物学机制。方法: 采用天然植物化学分离、分析及鉴定技术,对阿魏菇醇提物进行了有效成分的初步分离、鉴定;运用形态学观察、流式细胞技术及RT-PCR技术,从诱导肿瘤细胞凋亡角度探讨粗提物抗肿瘤机制。结果: 1. 分离所得组分1号、2号及3号结晶可能为同一种物质─山梨醇,4号组分为一氨基酸混合物;2. 分离组分的体外抗肿瘤作用明显低于粗提物;3. 荧光染色实验结果显示,不同剂量的阿魏菇粗提物分别作用12及24 h后,四种类型肿瘤细胞的凋亡细胞百分比均明显高于阴性对照组(P<0.05, P<0.01);4. 流式细胞术及RT-PCR实验结果,(1)阿魏菇醇提物及水提物作用后,Q3、Hela细胞P53蛋白表达水平明显上调,尤以Q3细胞醇提物作用24h最为明显;(2)以-actin的表达及表达量作为内对照,四种类型肿瘤细胞均出现P53蛋白表达水平的提高,p53基因、fas基因mRNA表达水平亦上调(P<0.05, P<0.01)。结论: 阿魏菇粗提物可能通过诱导促进肿瘤细胞凋亡基因(p53基因、fas基因)的转录及表达而发挥抗肿瘤作用,至于p53、fas基因通过何种途径促进肿瘤细胞凋亡,尚待进一步探讨。     

阿魏蘑菇提取物对肿瘤细胞p53表达的影响

目的 探讨新疆阿魏蘑菇提取物对体外培养的肿瘤细胞p53蛋白表达的影响，从细胞凋亡角度研究其抗肿瘤机制。方法 采用肿瘤细胞体外培养技术及流式细胞技术，观察阿魏蘑菇不同剂量的水提物及醇提物对体外培养的4种肿瘤细胞p53蛋白表达的影响。结果 MTT实验结果显示，受试物对4种类型肿瘤细胞均具有较强的杀伤作用，尤其以0．1g／m1剂量组为明显；HT实验结果表明，经受试物处理后，4种类型肿瘤细胞均观察到细胞核固缩，DNA浓缩并向核膜靠拢形成浓染致密颗粒，并有典型凋亡小体出现。提示，受试物可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用；流式细胞仪检测结果显示，受试物处理后，4种类型肿瘤细胞p53蛋白表达水平均有不同程度的上调，尤其以醇提物作用24h后对Q3细胞p53蛋白表达水平的影响最为明显。结论 阿魏蘑菇提取物中的各组分可协同作用诱导肿瘤细胞促凋亡基因的表达，从而达到抗肿瘤的目的，有关阿魏蘑菇通过何种途径提高p53蛋白表达水平尚待深入探讨。     

工频磁场对人绒毛滋养细胞凋亡相关基因表达的影响

目的研究50Hz工频磁场对人早孕绒毛滋养细胞凋亡相关基因表达的影响，探索工频磁场对人生殖健康影响的可能机制。方法体外分离培养人早孕绒毛滋养细胞。以50Hz、0．4mT强度的正弦磁场分别辐照处理6、48、72h，同时设立相应的平行对照组，用实时荧光定量逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测工频磁场辐照对bcl-2、bax、caspase-3、p53、fas基因表达的影响。结果辐照6、48、72h后bcl-2、bax、caspase-3、p53、fas基因表达变化倍数平均值均接近1，暴露组与对照组的差异均没有统计学意义（P〈0．05）。结论72h内，0．4nat工频磁场体外辐照不会影响人早孕绒毛滋养细胞bcl-2、bax、caspase-3、p53、fas等凋亡相关基因的表达水平。     

“卡宁”抗骨肿瘤的机理初探

目的体外观察抗癌中药“卡宁”对人成骨肉瘤细胞株MG-63的凋亡诱导基因fas影响,探讨其抗肿瘤治疗的作用机制。方法采用MTT比色法观察含药血清对体外培养的人骨肿瘤细胞株的抑制能力,PCR检测对凋亡诱导基因fas的影响。结果体外实验显示中药组fas的活性明显高于对照组(p=0.038),MTT结果显示细胞生长抑制率与含药血清作用时间及浓度呈正相关,p<0.05,在15%含药血清72h时作用最强。体外实验表明,“卡宁”对MG-63细胞的fas活性有促进作用。结论对肿瘤细胞fas的促进可能是抗癌中药“卡宁”诱导肿瘤细胞凋亡作用机制的一部分。     

肿瘤特异性基因对黑色素瘤细胞凋亡诱导作用

近年来的研究发现．鸡贫血病毒(Chicken anemia virus．CAV)VP3基因编码的一种蛋白质,可能通过独立于p53作用途径，不被Bcl-2抑制的方式，诱导人肿瘤细胞或转化细胞发生凋亡，而对人正常细胞没有毒性作用，故称之为肿瘤特异性凋亡因子（Apoptin）。其独特的诱导凋亡作用，有望成为一种新的有产的抗肿瘤药物。我们在克隆和构建VP3基因真核表达载体的条件下，     

胃肠道间质细胞瘤p53基因表达与细胞增殖、凋亡及血管形成的关系

目的 研究胃肠道间质细胞瘤(GIST)中p53基因表达与细胞增殖、凋亡及血管形成的关系.方法 检测86例GIST中p53基因表达,同时检测核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)、增殖细胞核抗原(PCNA)、抗人增殖细胞抗体Ki-67(Ki-67)反映细胞的增殖,检测细胞凋亡指数(API)反映细胞的凋亡,检测微血管密度(MVD)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)反映血管形成.结果 p53基因阳性表达47例(p53阳性表达组),阴性表达39例(p53阴性表达组). p53阳性表达组的AgNORs、PCNA、Ki-67表达明显高于p53阴性表达组(P<0.01);p53阳性表达组的API明显低于p53阴性表达组(P<0.01);p53阳性表达组的MVD、VEGF表达明显高于p53阴性表达组(P<0.01).结论 突变型p53基因能够促进GIST增殖、抑制凋亡、增加血管形成,与肿瘤的形成、发生与发展密切相关.     

妊娠肝内胆汁淤积症胎盘细胞凋亡及其机制的研究

目的通过观察妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘细胞凋亡及fas基因mRNA在胎盘中的表达,探讨ICP围产儿死亡率升高的原因和机制。方法采用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交法分别检测20例ICP患者和20例正常产妇胎盘细胞凋亡和fas基因mRNA表达情况。结果ICP患者胎盘细胞凋亡指数明显高于正常妊娠组,而fas基因mRNA的表达在两组中无显著差异。结论ICP患者围生儿死亡率升高可能与胎盘组织细胞凋亡水平升高有关,但其细胞凋亡的发生可能与fas基因表达无关。     

细胞凋亡及相关基因联合检测对胃黏膜癌前病变的诊断及癌变预测的意义

目的探讨细胞凋亡及相关基因的表达在胃黏膜癌变中的作用及对胃癌的预测和早期诊断的意义。方法对胃镜活检确诊为胃癌（胃癌组）及不典型增生（分为轻、中、重度不典型增生组）的标本应用TUNEL法检测细胞凋亡，应用免疫组化法检测p16、bcl-2、raa、c—myc、p53基因的表达。结果p16、bcl-2、ras、c-myc和p53基因表达率在轻、中、重度不典型增生组和胃癌组分别为69．23％，30．77％，38．46％，23．08％，7．69％；50．00％，37．50％，81．25％，43．75％，18．75％：36．36％．63．64％．81．82％．72．73％，45．45％：27．50％，67．50％，95．00％。90．00％，60．00％。轻度不典型增生组与胃癌组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；ras、c—myc和p53基因表达率轻度不典型增生组与重度不典型增生组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；p53与c—myc基因表达率中度不典型增生组与胃癌组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。p16、bcl-2、ras、c—myc和p53基因表达存在相关性。细胞凋亡指数胃癌组最低，轻、中度不典型增生组与胃癌组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。轻度不典型增生组与重度不典型增生组比较，差异也有统计学意义（P〈0．01）。结论细胞凋亡指数减少及ras、bcl-2、c—myc、p16、p53基因的异常表达在胃黏膜癌变过程中发挥重要作用。中、重度不典型增生为重要的癌前病变。     

Apoptin基因对小鼠S180荷瘤细胞抑制作用

目的研究肿瘤物异性凋亡基因（apoptingene）对肿瘤细胞的抑制作用。方法以S-180肉瘤细胞的荷瘤小鼠为模型，用克隆的肿特异性凋亡基因的真核表达载体直接进行基因抑制，分别测定小鼠体内的肿留大小、荷瘤小鼠生存期和肿瘤细胞的凋亡。结果与对照组相比，基因抑制组小鼠一般生长状态良好、体内肿瘤生长明显减缓（P〈0．01）、生存期延长、体重增加，在基因抑制的肿瘤组织中可检测到肿瘤特异性凋亡基因mRNA的表达及肿瘤细胞的7岗亡。结论肿瘤特异性凋亡基因在体内具有明显的抗肿瘤作用，对开展肿瘤的基因治疗有一定意义。     

紫外线照射表皮细胞后凋亡机制的研究进展

紫外线照射皮肤表皮细胞后可引起细胞凋亡，本文综述报道此条件下细胞凋亡过程和凋亡机制相关的因子（fas／fas—L、p53／p21、TNF-α、galectin-7、bcl-2、bcl—X1、p38 MAPK、E2F1）在凋亡中的作用及它们之间的相互作用，它们部分参与诱导表皮细胞凋亡的某些环节，部分则具有相反的作用。     

Expression profile of apoptosis related genes and radio-sensitivity of prostate cancer cells

Radio-resistant or recurrent prostate cancer represents a serious health risk for approximately 20%-30% of patients treated with primary radiation therapy for clinically localized prostate cancer. In the present study, we investigated the expression profiles of 84 genes involved in various apoptosis pathways in two prostate cancer cell lines LNCaP (P53+ and AR+) and PC3 (P53- and AR-). We also studied the effect of monensin, an apoptosis inducing reagent, in X-ray-induced cell killing. Comparison of gene expressions between unirradiated LNCaP and PC3 cells revealed distinguished gene expression patterns. The data showed a significantly higher expression level of genes involved in the caspase/card family and the TNF ligand/receptor family in PC3 cells, whereas, LNCaP cells exhibited higher expressions in the p53 related genes. At 2 and 4 hrs post a 10 Gy X-ray exposure, changes of gene expressions were detected in a significant fraction of the genes in LNCaP cells, but no significant changes were found in PC3 cells. There was no significant apoptosis-inducing effect of X-rays (up to 10 Gy) in both cell lines; however, monensin was shown to be effective in inducing apoptosis in LNCaP, but not in PC3 cells. In addition, the effect of combined treatment of monensin and X-rays in LNCaP cells appeared to be synergistic. Our results suggest that monensin may be effective for both cancer cell killing and radiosensitizing, and the different expression profiles in apoptosis related genes in cancer cells may be correlated with their sensitivity to apoptosis inducing reagents.     

Analysis of apoptosis-related gene expression after X-ray irradiation in human tongue squamous cell carcinoma cells harboring wild-type or mutated p53 gene

Mutations in the p53 tumor suppressor gene have recently been reported to have an impact on clinical trials of several human tumors, including head and neck cancers. To confirm the p53-dependence of X-ray induced apoptosis, we used two cell lines derived from a human squamous cell carcinoma (SAS) with identical genetic backgrounds, except for the p53 gene, which are SAS/mp53 cells with mp53 and SAS/neo cells with wtp53. We previously reported that the radiosensitivity, Caspase-3 activity and apoptosis frequency in SAS/neo cells were clearly high as compared with SAS/mp53 cells. In order to elucidate the expression of apoptosis-related genes after irradiation, we used cDNA array analysis. The expressions of apoptosis-inductive genes, such as DFF40, Caspase-3, Caspase-8, Caspase-9, Caspase-10 and CRADD, were increased by X-ray irradiation in SAS cells with wtp53, but not in SAS cells expressing mp53. These results suggest that the X-ray sensitivity of wtp53 cells may come from the expression of these apoptosis-related genes.     

过量碘对甲状腺细胞凋亡的影响

目的通过研究观察过量碘对甲状腺细胞凋亡相关基因的影响,探讨过量碘促进甲状腺细胞凋亡的机制。方法选取FRTL细胞系为研究对象,正常对照组培养基内不加碘,过量碘组分别含碘(碘化钾)1、5、10、50和100mmol/L,培养24h,流式细胞术测定凋亡细胞的比例,荧光定量PCR法测定5、10、50mmol/L碘剂量组fas、fasL、Bcl-2和Bax的 mRNA水平。结果与正常对照组比较,10、50和100mmol/L碘剂量组FRTL细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。5mmol/L碘组各项指标与正常对照组比较差异无显著性。10mmol/L和50mmol/L碘组fasL和Bax mRNA水平较正常对照组显著升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA水平较正常对照组显著下降(P<0.05)。10mmol/L碘组fas与正常对照组比较差异无显著性,50mmol/L碘组fas较正常对照组显著升高(P<0.05)。结论过量碘可通过调节fas、fasL、Bcl-2及Bax的表达而促进影响甲状腺细胞凋亡的发生。     

阿魏蘑菇提取物抗肿瘤作用的实验研究

目的系统测试阿魏蘑菇提取物抗肿瘤的效应,探讨其抗癌机制。方法应用MTT法检测提取物对泌尿生殖系统中4个肿瘤细胞株生长的抑制作用;分别检测提取物对S180小鼠实体瘤生长的抑制率和S180小鼠腹水瘤小鼠的生命延长率;以肿瘤细胞凋亡为切入点,研究提取物抗肿瘤机制。结果提取物高浓度具有明显抑制肿瘤细胞生长作用(P<0.01),极低浓度未见抑制肿瘤细胞生长作用。阿魏蘑菇提取物高中低剂量均有抑制S180实体瘤小鼠肿瘤生长的作用,均可明显延长S180腹水瘤小鼠的生存时间,且其延长小鼠生存时间呈剂量依赖关系。形态学观察发现提取物诱导了4种肿瘤细胞的凋亡;提取物诱导4种肿瘤细胞早期凋亡率明显高于未处理肿瘤细胞;提取物处理T24细胞后,baxc、aspase-3蛋白表达明显增强,bcl-2表达降低。结论阿魏蘑菇提取物有抗肿瘤作用,其机制可能与下调bcl-2表达和上调bax的表达,从而高表达caspase-3诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

CYP2B1新型自杀基因的真核表达载体的构建和瞬时表达

目的构建一种新型的CYP2B1自杀基因表达载体并检测其在肿瘤细胞中的表达。方法根据gene bank中鼠CYP2B1基因的核苷酸序列设计一对引物，以pc3／2B1为模板进行PCR扩增，将PCR CYP2B1基因产物定向插入到pcDNA3．0中．构建CYP2B1基因表达载体pcDNA3．0／CYP2B1；通过酶切、PCR及测序鉴定重组体。采用脂质体介导法将pcDNA3．0／CYP2B1转染三种肿瘤细胞株，RT—PCR检测CYP2B1基因在各细胞株中的表达。结果目的片段均成功插入相应的载体中，CMV启动子调控下的CYP2B1基因在不同的肿瘤细胞株中实现了表达。结论CMV启动子调控的CYP2B1真核基因表达栽体是肿瘤基因治疗中一种新型、高效的治疗载体、     

Diallyl disulfide (DADS) induces the antitumorigenic NSAID-activated gene (NAG-1) by a p53-dependent mechanism in human colorectal HCT 116 cells

Garlic is appealing as an anti-carcinogenic agent due to its ability to induce apoptosis in vitro and inhibit the formation and growth of tumors in animals in vivo. Diallyl disulfide (DADS) is a constituent of garlic that suppresses neoplastic cell growth and induces apoptosis. We examined the effects of DADS on various cancer cell lines to better understand its effect on apoptosis and apoptosis-related genes. The nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID)-activated gene (NAG-1) has proapoptotic and antitumorigenic activities and is upregulated by anticancer agents such as NSAIDs. In this study, human colorectal HCT-116 (wild-type p53), HCT-15 (p53 mutant) and human prostate PC-3 (p53 mutant) cells were exposed to DADS. DADS inhibited cell proliferation in all cell lines albeit to a lesser extent in HCT-15 and PC-3 cells at 11.5 and 23 micromol/L. In HCT-116 cells, DADS induced p53 and NAG-1 in a dose-dependent manner and the induction of p53 preceded that of NAG-1. In HCT-116 cells, NAG-1 protein expression was increased 2.4-fold +/- 0.6 at 4.6 micromol/L and 6.1-fold +/- 1.7 at 23 micromol/L DADS, whereas p53 was induced 1.5-fold +/- 0.1 and 2.3-fold +/- 0.4. DADS did not induce NAG-1 or p53 in p53 mutant cell lines; however, NAG-1 expression was induced by sulindac sulfide. HCT-116 cells treated with 4.6 and 23 micromol/L DADS resulted in a 1.9- and 2.9-fold increase in apoptosis, respectively. In contrast, 23 micromol/L DADS induced apoptosis only 1.8-fold in HCT-15 cells and not at all in PC-3 cells. Thus, DADS-induced apoptosis and NAG-1 protein expression appear to occur via p53.     

肺鳞癌组织中MMP-2表达的研究

目的　探讨肺鳞癌中MMP - 2的表达水平与肿瘤侵袭转移性的关系 ,研究在肺鳞癌中MMP - 2与 p5 3蛋白的相互关系。方法　应用免疫组化法 (SP法 )检测 5 0例肺鳞癌患者术后的石蜡包埋标本中MMP - 2、p5 3的表达情况。结果　MMP - 2在肺鳞癌组织中呈高表达 (76 .0 % ) ,MMP - 2的表达与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移明显相关 ,而与肿瘤部位、患者年龄无关。MMP - 2过度表达与 p5 3基因的突变有关。结论　MMP - 2的表达与肺鳞癌的侵袭转移性有关。p5 3基因突变后MMP - 2表达增强