不同前列腺癌细胞株Talin-1表达情况和侵袭能力关系研究

目的探讨踝蛋白1(Talin-1)在不同前列腺癌细胞株中的表达情况和侵袭能力的关系。方法体外培养不同人前列腺癌细胞株(DU-145、PC-3、LNCaP)及人正常前列腺上皮细胞株(RWPE-1)。传代培养后利用MTT法检测各细胞株增殖能力。细胞划痕实验,Transwell小室侵袭和迁移实验检测各细胞株侵袭及迁移能力。RT-PCR技术检测各细胞株中Talin-1的mRNA表达水平。Western-blot技术检测各细胞株中Talin-1的蛋白表达水平。结果与RWPE-1细胞株相比,LNCaP细胞株、PC-3细胞株、DU145细胞株的增殖、侵袭和迁移能力明显增高(P0.05),其中LNCaP、PC-3、DU-145细胞株的增殖、迁移以及侵袭能力依次递增(P0.05)。前列腺癌LNCaP细胞株、PC-3细胞株、DU145细胞株中的Talin-1 mRNA及蛋白表达水平显著高于RWPE-1细胞株(P0.05);其中LNCaP、PC-3、DU-145细胞株中的Talin-1 mRNA以及蛋白表达水平依次递增(P0.05)。结论Talin-1与前列腺癌的增殖、侵袭和迁移能力相关;低表达Talin-1的前列腺癌的增殖、侵袭和迁移能力低,恶性度低;高表达Talin-1的前列腺癌的增殖、侵袭和迁移能力强,恶性度高。Talin-1可作为前列腺癌恶性度的预测指标之一。     

生长抑素受体-2基因逆转上皮-间充质转化抑制肝癌细胞侵袭转移机制的研究

目的 观察生长抑素受体-2(SSTR2)基因对肝癌细胞株MHCC-97H侵袭转移及上皮-间充质转化(EMT)特性的影响.方法 构建慢病毒3FLAG-puromycin-LV及SSTR2-LV,转染肝癌细胞株MHCC-97H,噻唑蓝(MTT)、免疫荧光检测转染效率.采用Transwell侵袭实验和迁移实验分别检测未转染细胞(空白对照组)、转染3FLAG-puromycin-LV细胞(阴性对照组)和转染SSTR2-LV细胞(实验组)侵袭转移能力的强弱.镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫荧光检测转染前后细胞上皮表型蛋白和间质表型蛋白的定位和表达,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后细胞SSTR2的表达,Westem blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达.结果 SSTR2-LV可以有效转染肝癌细胞株MHCC-97H,稳定表达SSTtR2的mRNA和蛋白.转染SSTR2-LV的肝癌细胞株MHCC-97H较空白对照组和阴性对照组侵袭迁移能力明显受到抑制(P＜0.05).镜下观察肝癌细胞株MHCC-97H转染SSTR2-LV后,由成纤维细胞样、排列分散,转变为细胞排列紧密如铺路石.免疫荧光染色结果可见肝癌细胞株MHCC-97H转染后细胞膜表达的E-cadherin荧光由胞质转移至细胞周边浓聚,而Vimentin的荧光强度较前下降.采用Western blot进行蛋白定量分析,转染后MHCC-97H细胞上皮表型标志性蛋白E-cadherin、β-连环蛋白(β-catenin)表达量增高,间质表型标志性蛋白N-cadherin、Vimentin表达量减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 转染再表达SSTR2MHCC-97H细胞可以增加上皮表型蛋白表达,减少间质表型蛋白,从而逆转肝癌细胞EMT,导致肿瘤细胞侵袭能力减弱.     

miR-542-3p对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及机制探讨

目的探讨microRNA-542-3p（miR-542-3p）在人肝癌细胞系及组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响。方法采用RT-PCR检测miR-542-3p在肝癌细胞系（HCCLM3、Hep3B、Huh7、SMMC-7721、MHCC-97H、MHCC-97 L）以及人正常肝细胞LO2中的表达;同时采用RT-PCR检测肝癌及对应癌旁组织中miR-542-3p的表达。分别以转染miR-542-3p mimics的MHCC-97H和HCCLM3细胞作为过表达组,以转染空载体的MHCC-97H和HCCLM3细胞作为阴性对照组;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,采用Transwell法检测各组细胞体外侵袭能力,Western blotting检测各组细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关蛋白的表达,免疫荧光法检测miR-542-3p对肝癌细胞EMT的影响。结果miR-542-3p在肝癌细胞系HCCLM3（0.221±0.034）、Hep3B（0.764±0.059）、Huh7（0.561±0.029）、SMMC-7721（0.688±0.049）、MHCC-97H（0.162±0.031）、MHCC-97L（0.473±0.041）中的表达均低于在人正常肝细胞LO2（1.0）的表达水平（P＜0.05）;在肝癌组织表达低于癌旁组织[（0.208±0.064）vs（0.746±0.093）,P＜0.05]。MHCC-97H和HCCLM3过表达组细胞增殖、侵袭转移能力显著低于阴性对照组,EMT相关蛋白荧光明显低于阴性对照组（P＜0.05）。结论miR-542-3p在肝癌组织及肝癌细胞中低表达,miR-542-3p的过表达可有效抑制肝癌细胞恶性生物学行为,该过程可能与EMT相关通路有关。miR-542-3p有望成为肝癌生物治疗的潜在靶点。     

GRIM-19在肝细胞癌组织中的低表达及对其侵袭能力的影响

目的：检测GRIM-19在肝细咆癌（HCC）中的表达,分析其与HCC生物学行为的关系,并探讨GRIM-19对HCC侵袭能力的影响。方法：应用实时定量PCR技术检测83例HCC及其相对应的癌旁组织和8例正常肝组织中GRIM-19mRNA的表达,分析其与HCC临床病理因素之间的关系。用Westernblot法检测低侵袭力细胞株HL-7702、MHCC-97L和高侵袭力细胞株MHCC-97H、Huh-7中GRIM-19蛋白的表达。应用细胞转染技术将GRIM-19shRNA转入HL-7702和Huh-7,从而构建HL-7702和Huh-7的GRIM-19kd细胞系,并用Westernblot法检测转染效果。应用Transwell细胞迁移实验研究GRIM-19对HCC侵袭能力的影响。结果：实时定量PCR结果显示,83例HCC组织中有52例（62．65％）GRIM-19的表达低于相对应的癌旁组织（P〈O．01）,其表达水平也低于8例正常肝组织（P〈005）。GRIM-19的表达与HCC的TNM临床分期（P=O．011）、微血管浸润（P=O．047）和包膜浸润（P=O．013）密切相关。Westernblot显示HL-7702、MHCC-97L、MHCC-97H、Huh-7细胞系表达GRIM-19蛋白,且低侵袭力细胞株HL-7702、MHCC-97L中GRIM-19表达高于高侵袭力细胞株MHCC-97H、Huh-7。细胞侵袭实验显示GRIM-19低表达促进了HCC的侵袭能力。结论：GRIM-19在HCC的侵袭中起重要作用,可能为检测HCC的侵袭潜能提供新的研究思路。     

ATX-shRNA表达质粒对肝癌细胞体外增殖和运动能力的影响

目的 研究ATX基因短发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体对人MHCC-97肝癌细胞ATX基因表达和增殖、运动能力的抑制作用.方法 应用RT-PCR检测转染后肝癌细胞ATX mRNA的表达,同时应用MTT、细胞运动、侵袭实验检测其对人MHCC-97肝癌细胞增殖、侵袭、运动能力的影响.结果 ATX-shRNA表达载体可以有效的抑制人MHCC-97肝癌细胞中ATX基因的表达,使ATX基因的mRNA表达量显著下降,以转染后第四天下降最明显,并且转染后细胞增殖、侵袭、运动能力均减弱.结论 ATX-shRNA表达载体能有效地抑制ATX基因表达.     

不同侵袭能力人肝癌细胞株中caveolin-1的表达

目的:探讨不同侵袭能力人肝癌细胞株中caveolin-1的表达情况及意义.方法:应用免疫细胞化学、Western blot、RT-PCR和ELISA等技术检测人正常肝细胞株L02、肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721中caveolin-1蛋白及mRNA的表达,同时检测各自血管内皮生长因子(vascular en-dothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:caveolin-1蛋白和mRNA在正常肝细胞株中呈弱表达,在低侵袭肝癌细胞株中表达缺失,而在较高侵袭肝癌细胞株中表达显著上升,且与VEGF关系密切.结论:caveolin-1的表达与肝癌侵袭和血管生成有关,且在肝癌发生的不同阶段作用不同.     

胰蛋白酶抑制剂对人肝癌细胞SK－HEP-1迁移和侵袭的影响

目的 观察尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)对人肝癌细胞株SK-HEP-1迁移和侵袭等肿瘤生物学特性的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测UTI对SK-HEP-1细胞增殖的影响;Transwell法检测不同浓度UTI对细胞迁移和侵袭能力的作用;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测不同浓度UTI作用后,尿激酶型纤溶酶原激活物(UPA)的mRNA和蛋白表达.结果 UTI组对SK-HEP-1细胞的增殖无影响(P＞0.05);与对照组比较,不同浓度的UTI组均能抑制人肝癌细胞SK-HEP-1的体外迁移和侵袭能力,且呈剂量效应关系,差异有统计学意义(P＜0.05);不同浓度的UTI组中SK-HEP-1细胞UPA的mRNA和蛋白表达均明显下降,且呈剂量依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 UTI能抑制人肝癌细胞SK-HEP-1迁移与侵袭,其机制可能与UTI抑制SK-HEP-1细胞UPA表达有关.     

与高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽对人肝癌细胞株体外侵袭表型的影响

目的 研究与高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽(AWYPLPP肽)对不同转移潜能人肝癌细胞株体外侵袭表型的影响.方法 采用侵袭实验探讨AWYPLPP肽对不同转移潜能的人肝癌细胞株体外侵袭表型的影响;利用迁移实验、黏附实验和明胶酶谱实验研究其可能的作用机制,采用单因素方差分析检测结果.结果 在AWYPLPP肽浓度为0.10～100.00 μmol/L时,其能显著促进高转移潜能人肝癌细胞株HCCLM3的侵袭能力,呈剂量效应关系;在浓度为100.00μmoL/L时,其能促进其他高转移潜能人肝癌细胞株MHCC97、MHCC97H和HCCL,M6的侵袭能力(F=4.84,8.19,25.42,P<0.05),对低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L、PLC/PRE/5和Hep3B的侵袭能力无明显影响.迁移实验和黏附实验表明,AWYPLPP肽对HCCLM3的迁移和黏附能力无影响;明胶酶谱实验发现,AWYPLPP肽作用后HCCLM3细胞分泌活性型基质金属蛋白酶9(MMP-9)明显增加.结论 AWYPLPP肽能促进高转移潜能人肝癌细胞株体外侵袭能力,其作用的机制可能与活性型MMP-9分泌增加有关.     

低氧对肝癌细胞上皮间质转化及侵袭转移能力的影响

目的:观察低氧环境下肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)情况和侵袭转移能力的改变。方法:选取2种具有不同侵袭转移能力的人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2,通过1%O2低氧培养建立人肝癌细胞物理缺氧模型。动态观察2种细胞在低氧环境中的形态学改变;应用Westernblot方法检测上皮细胞标志蛋白E-cadherin和间质细胞标志蛋白vimentin表达的变化;应用Transwell小室检测肝癌细胞迁移、侵袭能力。结果:低氧环境中,该2种肝癌细胞均由原来的紧密排列上午上皮样状态转为较松散的纺锤体样改变;Western blot检测显示,2种肝癌细胞株的E-cadherin表达量明显下降(均P<0.01),而vimentin表达量明显升高(均P<0.01);Transwell迁移及侵袭实验显示,2种肝癌细胞的迁移及侵袭能力明显增强(均P<0.01);SMMC-7721细胞的上述变化均较HepG2细胞明显(均P<0.01)。结论:低氧环境可诱导肝癌细胞发生EMT,并增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。     

5-脂氧合酶抑制剂对人肝癌细胞株HepG2体外迁移及侵袭的影响

目的 :观察5-脂氧合酶(5-LOX)抑制剂对人肝癌细胞株HepG2体外迁移及侵袭的影响及其部分机制的探析。方法:将不同浓度5-LOX抑制剂体外培养人肝癌HepG2细胞,通过细胞迁移划痕愈合实验、侵袭实验法检测5-LOX抑制剂对细胞体外迁移、侵袭抑制的情况,同时利用Western blot法检测不同浓度5-LOX抑制剂干预后人肝癌HepG2细胞MMP-9蛋白的表达情况。结果:5-LOX在细胞质中表达,部分在细胞核也有表达,人正常肝细胞5-LOX弱阳性,肝癌细胞HepG2中5-LOX呈强阳性表达;5-LOX抑制剂各组各个时相点的划痕愈合率均显著低于空白对照组(P0.05),并且随着5-LOX浓度的增加降低的趋势逐渐明显;随着5-LOX抑制剂浓度的上调,对人肝癌HepG2细胞的抑制率逐渐上调;不同浓度5-LOX抑制剂可抑制MMP-9蛋白的表达,并随着浓度逐渐上调抑制作用更加明显。结论:5-LOX抑制剂可抑制人肝癌细胞株HepG2迁移及侵袭,这一过程可能与下调细胞MMP-9蛋白的表达有关。     

NADPH氧化酶DUOX1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨NADPH氧化酶DUOX1在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与临床病理指标及预后的关系。方法选取7株人HCC细胞系及1株人正常肝细胞系、30例正常肝组织及103例肝癌标本作为研究对象,采用RT-PCR的方法研究DUOX1mRNA的表达情况,结合临床病理指标及预后进行分析。结果DUOX1mRNA在MHCC-97H、MHCC-97L及BEL7402细胞系中表达,在HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Changliver和L02中无表达。30例正常肝组织中均无表达。在肝癌和癌旁肝组织中表达阳性率分别为53．4％（55／103）和14．5％（15／103）,差异有高度统计学意义（P〈0．01）。相关性统计分析提示肝癌组织中DUOXImRNA表达状态与性别、年龄、有无卫星结节及术前AFP水平相关。单因素分析提示影响肝癌术后总体生存率的因素为性别、年龄、肿瘤直径、有无卫星结节、有无门静脉癌栓、TNM分级以及DUOX1mRNA表达状态。多因素分析提示影响肝癌术后总体生存率的因素为肿瘤直径、有无门静脉癌栓及DUOX1mRNA表达状态。结论肝癌组织DUOX1mRNA表达状态是肝癌术后总体生存的独立预后因素,DUOX1基因可能与肝癌的发生发展有关。     

P38MAPK信号通路抑制剂SB203580对肝细胞缺氧再灌注影响的实验研究

目的 观察P38MAPK抑制剂SB203580在人肝癌细胞系HepG2细胞和人正常细胞系L02细胞缺氧再灌注过程中的作用.方法 实验分为正常对照组、缺氧对照组、SB203580＋正常培养组、SB203580＋缺氧培养组,缺氧培养24h、复氧1h后,分别应用Western Blot、MTT、划痕实验、Transwell实验、AnnexinV-FITC/PI双染实验检测细胞中P38蛋白表达情况和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的变化.结果 与正常对照组相比,缺氧培养组HepG2细胞的凋亡率、P38MAPK磷酸化水平增加;SB203580＋缺氧培养组HepG2细胞的凋亡率相对于缺氧培养组增加,P38MAPK磷酸化水平降低;划痕实验48 h后,缺氧对照组HepG2细胞明显向划痕的中央迁移,而SB203580＋缺氧培养组HepG2细胞迁移受到抑制;侵袭实验24h后,SB203580＋缺氧培养组HepG2细胞的侵袭能力较缺氧对照组降低（P＜0.05）;AnnexinV-FITC/PI双染实验显示与缺氧对照组相比,L02细胞SB203580＋缺氧培养组凋亡率降低,而HepG2细胞SB203580＋缺氧培养组凋亡率则增加（P ＜0.01）;MTT结果显示实验组HepG2细胞和LO2细胞增殖抑制率受到影响,并出现时间浓度依赖关系.结论 SB203580通过特异性阻断P38MAPK信号转导通路,对缺氧培养的正常肝细胞LO2细胞产生保护作用,同时对缺氧培养的肝癌细胞HepG2具有促进凋亡、抑制增殖以及抑制细胞迁移和降低侵袭能力的作用.     

NNMT在肾透明细胞癌的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的:研究NNMT在肾透明细胞癌中的表达情况及对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测正常肾小管上皮细胞株HKC、肾癌细胞株786-O及30例肾透明细胞癌组织、相应癌旁组织中NNMT的mRNA和蛋白的表达水平,并分析NNMT的mRNA水平与临床病理参数的关系。化学合成针对NNMT特异的siRNA序列,应用脂质体Lipofectamine 2000将其转染进786-O细胞中,利用RT-PCR和Western blot法检测NNMT在786-O细胞中的表达水平,用Transwell小室法检测肾癌细胞786-O侵袭能力的变化。结果:NNMT在肾癌细胞786-O中的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常肾小管上皮细胞株HKC(P<0.001);肾透明细胞癌组织和对应的癌旁组织中NNMT的mRNA相对表达量分别为(1.582±0.2145)、(0.1269±0.04279),两组比较P<0.001。NNMT的mRNA水平与肿瘤大小、临床分期有关(P<0.05);Tran-swell法检测结果显示降低NNMT的表达后786-O细胞的侵袭能力明显下降。结论:NNMT在肾透明细胞癌组织和细胞中表达升高,可能在肾癌发生、发展过程中发挥重要作用。     

microRNA-671-5p在肝细胞癌中的表达及其负向调控丝切蛋白2与上皮细胞-间质转化的关系

背景与目的:近年研究发现,microRNA-671-5p(miR-671-5p)参与了多种恶性肿瘤的发生发展,同时与多种病毒介导的肝损伤相关,但其与肝细胞癌(HCC)之间的关系目前仍未见报道。本研究的目的为观察miR-671-5p在HCC中的表达情况,分析其功能及其与HCC生物学行为及临床病理特征的联系,并初步探讨作用机制。方法:用qRT-PCR检测80例HCC组织及癌旁组织样本、不同HCC细胞系(Hep3B、MHCC-97H、HepG2、SMMC-7721)及人正常肝细胞(L02)中miR-671-5p的表达,且在同时分析TCGA数据库中miR-671-5p在HCC组织与癌旁组织的表达差异。分析miR-671-5p表达量与临床病理因素的关系;用miR-671-5p抑制物敲低MHCC-97H细胞系中miR-671-5p的表后,分别采用CCK-8实验及Transwell实验分别检测HCC细胞转染miR-671-5p抑制物后增殖、侵袭及迁移能力的变化。利用TargetScan及Starbase网站预测miR-671-5p的靶基因,并通过Western blot、双荧光素酶实验及TCGA数据库分析验证。用Western blot观察降低miR-671-5p表达对HCC细胞中miR-671-5p靶基因及上皮细胞-间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、vimentin)表达的影响,以及在此基础上同时敲低靶基因的表达后,以上蛋白表达的变化。结果:miR-671-5p的表达在HCC组织中明显高于其癌旁组织,在各种HCC细胞系中均明显高于正常肝细胞,且随着样本肿瘤分期与HCC细胞的侵袭力的增加而升高(均P0.05);TCGA数据库分析也显示,miR-671-5p在HCC组织中的表达量明显高于癌旁组织(P0.05)。miR-671-5p的表达水平与AFP水平、肿瘤数目、静脉侵犯、Edmondson-Steiner分级及TNM分期明显有关(均P0.05)。转染miR-671-5p抑制物后,MHCC-97H细胞的增殖、侵袭及迁移能力均明显降低(均P0.05)。生物信息学分析及双荧光素酶实验均显示丝切蛋白2(CFL2)是miR-671-5p潜在靶基因,TCGA数据库分析也显示miR-671-5p与CFL2的表达呈负相关(均P0.05)。降低MHCC-97H细胞中miR-671-5p的表达后,CFL2蛋白的表达水平升高,同时EMT相关蛋白表达明显降低(均P0.05),但同时干扰CFL2的表达后,以上变化均有明显程度的逆转(均P0.05)。结论:miR-671-5p在HCC中表达上调,且与HCC的不良临床病理特征密切相关。miR-671-5p可促进HCC细胞的增殖、侵袭、迁移,其机制可能与抑制CFL2的表达而促进EMT发生有关。     

S100A6对胃癌细胞侵袭转移的调控机制研究

目的探讨S100A6过表达对胃癌细胞侵袭转移的调控机制。方法收集1995年1月至2001年12月间经病理确诊的166例胃癌标本及其对应的癌旁组织、肝转移组织和淋巴结转移组织标本,采用免疫组织化学染色法检测标本中S100A6蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系：通过ChIP—Chip方法检测胃癌细胞株KAT03中S100A6可能调控的下游因子;将S100A6基因转染入胃癌细胞株AGS,通过细胞侵袭实验、RTQ—PCR方法分别检测转染组、阴性对照组和空白对照组中细胞的侵袭能力和侵袭转移相关因子CDK5和FLJ12438的mRNA表达。结果S100A6蛋白在癌旁组织细胞质中偶有低表达;而在胃癌、肝及淋巴结转移灶组织的肿瘤细胞质和（或）细胞核中均有高表达,且在侵袭边缘的肿瘤细胞的细胞核中表达较高,其高表达率为分别为67．5％（112／166）、92．9％（26／28）和100％（30／30）。S100A6表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、脉管癌栓、远处转移及TNM分期有关（均P〈0．05）。S100A6可能作用于26个细胞侵袭转移有关基因的启动子部位。SIOOA6转染组的过膜细胞数为31．3±5．5,多于阴性对照组的7．7±1．5和空白对照组的9.3±2．1,差异有统计学意义（均P〈0．05）。CDK5mRNA在转染组中的表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组（均P〈0．05）,而FLJ1243mRNA在转染组中的表达水平与另外两组的差异则无统计学意义（均P〉0．05）。结论S100A6可能通过调控下游侵袭相关因子如CDK5的表达,进而影响胃癌细胞的侵袭转移等恶性生物学行为。     

miR-152对前列腺癌细胞株迁移和侵袭能力的影响

目的研究miR-152在前列腺癌、前列腺正常组织中的表达情况及其在前列腺癌细胞系中的作用。方法采用TaqMan荧光定量RT—PCR方法检测8例前列腺癌和8例前列腺正常组织的样本中miR-152的表达水平。运用Transwell细胞迁移实验及侵袭实验评估miR一152对前列腺细胞系PC-3和DU145细胞功能的影响。结果与正常前列腺组织相比,miR-152在前列腺癌组织中的表达水平显著下调（P〈0．05）。体外实验中上调miR152的表达可以显著降低前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力（P〈O．05）。结论miR-152在前列腺癌中可作为一种肿瘤抑制因子,影响前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。     

透明质酸合成酶2在肾癌中的表达及临床意义

目的：研究透明质酸合成酶2在肾癌中的表达,并探讨其潜在的临床意义。方法：运用实时定量聚合酶链反应（qPCR）方法检测五种肾癌细胞（ACHN、Caki-1、OS-RC-2、786-O、SN12PM6）透明质酸合成酶三种亚型（HAs1、HAS2、HAs3）mRNA的表达,运用Westernblot方法进一步检测mRNA表达含量高的HAS亚型在五种肾癌细胞系及肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的蛋白表达。结果：在五种肾癌细胞系中HAS2mRNA表达水平均明显高于正常肾小管上皮细胞（HK-2）,其中在。肾癌SN12PM6细胞系中表达水平最高（均P〈0．05）,HAS1mRNA的表达水平均明显低于正常肾小管上皮细胞（均P〉0．05）,而HAS3mRNA表达水平除肾癌Caki-1细胞系外均低于正常肾小管上皮细胞（P〉0．05）。在五种肾癌细胞系中HAS2蛋白均明显表达,而正常‘肾小管上皮细胞无明显表达。在肾透明细胞癌组织中HAs2蛋白表达也明显高于相应癌旁组织。结论：透明质酸合成酶2在多种肾癌细胞系和肾透明细胞癌组织中均明显表达,提示透明质酸合成酶2可能在肾癌尤其在肾透明细胞癌发生发展过程中起着至关重要的某种作用,并可能成为新的肾透明细胞癌分子标志物。     

黑色素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24促进阿霉素杀伤肝癌细胞MHCC-97L机制的研究

目的 探讨黑色紊瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24(MDA-7/IL-24)基因促进阿霉素(ADM)杀伤肝癌细胞,逆转肝癌细胞多药耐药(MDR)的机制.方法 以人肝癌细胞株MHCC-97L为实验对象,使用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪比较Ad. MDA-7联合ADM处理组与ADM组、Ad. MDA-7组对肝癌细胞MHCC-97L和正常肝细胞L02的作用差异.观察MDA-7/IL-24对多药耐药的逆转作用.荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测MDR-1、STAT-3、bcl-2、bax mRNA的变化.Western blot检测gp-170、STAT-3、bcl-2、bax蛋白的表达的变化.结果 MTT表明Ad. MDA-7对正常肝细胞LO2无生长抑制作用(P>0.05).LO2细胞Ad. MDA-7联合ADM组与ADM组细胞生存率差异无统计学意义(P>0.05).低浓度(100 VP/cell)的Ad. MDA-7联合正常肝细胞的IC50浓度的ADM(1.5 mg/L)使得细胞抑制率从ADM组的17.46%上升到79.50%,生长抑制逆转4.55倍(P<0.05).MDR-1mRNA相对表达量从(16.49±0.11)下降至(5.48±0.05).STAT-3 mRNA相对表达量从(13.17±0.08)上升至(21.57±0.11).bcl-2及BAX表达与其他实验组比较差异均有统计学意义(P<0.05).联合实验组P-170蛋白的表达量较其他组明显降低,而磷酸化STAT-3蛋白的表达量亦增加.结论 Ad. MDA-7具有逆转肝癌细胞MHCC-97L多药耐药的作用,其下调MDR-1 mRNA的表达的同时,并通过活化STAT-3信号通路的表达促进肝癌细胞凋亡.     

ShRNA靶向沉默FGFR3基因对人肝癌细胞Huh7增殖和迁移的影响

目的:研究成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)对肝癌细胞株Huh7增殖和迁移能力的影响。方法:以靶向沉默FGFR3的shRNA慢病毒表达载体、delta8.9和VSVG三质粒共转染293T细胞来包装慢病毒颗粒。选择Huh7细胞转导慢病毒载体。通过细胞增殖实验(CCK-8法)和transwell实验,分别评估沉默FGFR3对Huh7肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。裸鼠分别皮下注射pSilencer-FGFR3-shRNA1#组和pSilencer-NC组Huh7细胞后,监测肿瘤生长。Western印迹法检测下游信号蛋白p-AKT和p-ERK。结果:与NC组比较,RNAi组的细胞增殖能力显著下降(P