microRNA-671-5p在肝细胞癌中的表达及其负向调控丝切蛋白2与上皮细胞-间质转化的关系

背景与目的:近年研究发现,microRNA-671-5p(miR-671-5p)参与了多种恶性肿瘤的发生发展,同时与多种病毒介导的肝损伤相关,但其与肝细胞癌(HCC)之间的关系目前仍未见报道。本研究的目的为观察miR-671-5p在HCC中的表达情况,分析其功能及其与HCC生物学行为及临床病理特征的联系,并初步探讨作用机制。方法:用qRT-PCR检测80例HCC组织及癌旁组织样本、不同HCC细胞系(Hep3B、MHCC-97H、HepG2、SMMC-7721)及人正常肝细胞(L02)中miR-671-5p的表达,且在同时分析TCGA数据库中miR-671-5p在HCC组织与癌旁组织的表达差异。分析miR-671-5p表达量与临床病理因素的关系;用miR-671-5p抑制物敲低MHCC-97H细胞系中miR-671-5p的表后,分别采用CCK-8实验及Transwell实验分别检测HCC细胞转染miR-671-5p抑制物后增殖、侵袭及迁移能力的变化。利用TargetScan及Starbase网站预测miR-671-5p的靶基因,并通过Western blot、双荧光素酶实验及TCGA数据库分析验证。用Western blot观察降低miR-671-5p表达对HCC细胞中miR-671-5p靶基因及上皮细胞-间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、vimentin)表达的影响,以及在此基础上同时敲低靶基因的表达后,以上蛋白表达的变化。结果:miR-671-5p的表达在HCC组织中明显高于其癌旁组织,在各种HCC细胞系中均明显高于正常肝细胞,且随着样本肿瘤分期与HCC细胞的侵袭力的增加而升高(均P0.05);TCGA数据库分析也显示,miR-671-5p在HCC组织中的表达量明显高于癌旁组织(P0.05)。miR-671-5p的表达水平与AFP水平、肿瘤数目、静脉侵犯、Edmondson-Steiner分级及TNM分期明显有关(均P0.05)。转染miR-671-5p抑制物后,MHCC-97H细胞的增殖、侵袭及迁移能力均明显降低(均P0.05)。生物信息学分析及双荧光素酶实验均显示丝切蛋白2(CFL2)是miR-671-5p潜在靶基因,TCGA数据库分析也显示miR-671-5p与CFL2的表达呈负相关(均P0.05)。降低MHCC-97H细胞中miR-671-5p的表达后,CFL2蛋白的表达水平升高,同时EMT相关蛋白表达明显降低(均P0.05),但同时干扰CFL2的表达后,以上变化均有明显程度的逆转(均P0.05)。结论:miR-671-5p在HCC中表达上调,且与HCC的不良临床病理特征密切相关。miR-671-5p可促进HCC细胞的增殖、侵袭、迁移,其机制可能与抑制CFL2的表达而促进EMT发生有关。     

肝细胞癌合并胆管癌栓综合治疗1例

患者女性, 38岁, 因"上腹部疼痛2周"于2020年12月2日收入我院。2020年11月患者出现间断上腹痛, 伴恶心、呕吐, 逐渐出现皮肤及巩膜黄染, 余无特殊不适。外院行增强CT检查, 结果提示肝左内叶近肝门异常强化影, 考虑为肿瘤、胆囊结石、胆管结石。诊断乙肝2周, 服用丙酚替诺福韦治疗;余无特殊。体检无明显阳性体征, 一般状况良好。肝功能检查结果提示, 总胆红素为586.7 μmol/L, 甲胎蛋白为5 884 μg/L, CA19-9为 2 205 U/ml。超声检查结果提示, 肝门部胆管弱回声团, 考虑癌, 伴肝内胆管扩张, 胆囊胆泥形成, 肝硬化, 脾大。超声造影提示, 肝左内叶异常灌注, 考虑肝内胆管癌可能性大, 伴左肝管远端癌栓形成;肝门部胆管、右肝管、左肝管近端未见造影剂进入, 考虑胆泥。上腹部MRI增强扫描提示:(1)左右肝管、肝总管、直至胆总管下段充盈缺损, 轻度强化, 胆总管下段壁明显强化, 考虑胆管癌, 并肝内、外胆管扩张;(2)肝硬化、脾大、门静脉高压;胆囊炎、胆囊结石伴胆囊周围积液。磁共振水成像检查结果考虑为高位胆管癌(图1)。CT血管成像提示:(1)肝...     

阿替利珠单克隆抗体联合贝伐珠单克隆抗体治疗初始临界可切除中晚期肝癌的临床疗效

转化治疗已成为临界可切除或不可切除肝癌治疗的核心,为更多晚期肝癌患者提供可切除机会。根据临床指南关于肝癌一线治疗方案推荐,笔者总结并分析1例初始临界可切除中晚期肝癌患者行阿替利珠单克隆抗体联合贝伐珠单克隆抗体（T+A方案）转化治疗后,成功行肝段切除术,且术后9个月随访未见肿瘤复发。该例患者术后病理学检查为肝细胞-胆管细...     

微小RNA-5586-5p在肝细胞癌中的表达及其对肝细胞癌侵袭、迁移的影响

目的检测肝细胞癌中miRNA-5586-5p的表达情况,探究其与肝细胞癌临床病理特征和肝细胞癌病人预后的相关性,进而探究其对肝细胞癌细胞侵袭和迁移的影响。方法选取2010年1月—2013年6月西安交通大学第一附属医院进行根治性肝癌切除术的肝细胞癌患者100例。采用Real-time PCR法检测肝细胞癌组织和癌旁组织中miRNA-5586-5p的表达水平;采用合理统计学方法进行miRNA-5586-5p的表达水平与肝细胞癌临床病理特征的相关性分析及对肝细胞癌患者预后的影响。采用Real-time PCR法检测肝细胞癌细胞系中miRNA-5586-5p的表达水平,继而通过Transwell小室实验研究miRNA-5586-5p对肝细胞癌细胞侵袭和迁移能力的影响。采用Real-time PCR、Western blotting以及免疫组织化学检测miRNA-5586-5p下游潜在靶点肝细胞癌水通道蛋白9(AQP9)的m RNA和蛋白表达水平,利用Western blotting证实miR-5586-5p下调AQP9并通过miRNA-5586-5p-AQP9-AKT通路发挥促癌作用。结果 miR-5586-5p在肝细胞癌组织中的表达水平较癌旁组织显著上调(P0.01)。miRNA-5586-5p的高表达与肿瘤数量、血管侵犯、Edmondson分级和TNM分期显著相关(P0.05、0.01)。与mi RNA-5586-5p高表达者比较,miR-5586-5p低表达者的生存时间更长(P0.01)。miR-5586-5p在肝细胞癌细胞系中的表达均明显高于正常肝细胞(P0.05),经Transwell小室实验证实miR-5586-5p具有增强肝细胞癌细胞的侵袭、迁移的作用。miR-5586-5p可下调AQP9的蛋白表达量;且miR-5586-5p与AQP9蛋白表达呈负相关。结论 miR-5586-5p在肝细胞癌中为高表达,并显著促进肝细胞癌的侵袭、迁移能力,miR-5586-5p与AQP9的蛋白水平呈负相关,并且能够抑制AQP9表达和通过miR-5586-5p-AQP9-AKT通路促进肝细胞癌细胞的侵袭与迁移能力。     

微小RNA-3682-3p通过下调GAS8基因促进肝癌细胞迁移、侵袭的研究

目的探讨肝细胞癌中miR-3682-3p的表达情况、临床意义和作用机制。方法待实验所需肝癌细胞、正常肝细胞(L02)培养与转染后,采用实时定量PCR(qPCR)检测miR-3682-3p在肝癌组织、癌旁组织、L02细胞和肝癌细胞系中的表达情况,利用TCGA数据库分析正常肝组织、肝癌组织中miR-3682-3p的表达差异,分析miR-3682-3p的表达与肝癌患者临床病理特征、预后的关系;通过Transwell实验评价细胞侵袭、迁移能力;通过TargetScan数据库预测获得下游靶基因,采用qPCR、Western blotting法分析miR-3682-3p对生长抑制特异性基因8(GAS8)的表达的调控作用,并利用双荧光素酶报告基因实验加以验证。结果与癌旁组织和正常肝细胞比较,miR-3682-3p在肝癌组织、细胞系中均高表达(P0.05),并与门静脉侵犯、Edmondson分级、TNM分期有关;基于TCGA数据库数据的生存分析显示,miR-3682-3p高表达与不良预后相关;在MHCC97-H细胞中敲减miR-3682-3p显著抑制细胞的侵袭、迁移(P0.05);通过生物信息学预测加以实验验证证实GAS8是miR-3682-3p的直接靶基因,并通过回复实验证实GAS8介导了miR-3682-3p对肝癌细胞侵袭及迁移能力的促进作用。结论 miR-3682-3p在肝癌中通过靶向抑制抑癌基因GAS8从而促进肝癌细胞侵袭、迁移。     

含氟涂料和含氟牙膏对釉面再矿化和抗酸作用的实验研究

目的：观察含氟涂料与含氟牙膏对釉质表面再矿化和抗酸作用。方法：取牛恒切牙制备釉质片;统一酸蚀脱矿后随机分为4组（n＝3）;分别为生理盐水（A组对照）、Duraphat含氟涂料（B组）、Fluor Protector含氟涂料（C组）、含氟牙膏规律处理（D组）;处理期间标本置于人工唾液孵育2周;再次酸蚀;各阶段均用显微硬度仪测定釉面显微硬度、扫描电镜观察釉面,图像分析电镜下釉面微孔隙面积差异;统计分析。结果：首次酸蚀后釉面明显脱矿。分组处理2周,A组釉面再矿化不明显;B组和C组釉面形成涂料保护层;D组釉面可见明显再矿化。再次酸蚀后：A组和D组显微硬度下降,B组和C组涂料保护层有明显抗酸作用。再次酸蚀后,A组和D组釉面微孔隙面积增加（P＜0．05）,但D组小于A组（P＜0．05）;B组、C组无显著变化（P＞0．05）。结论：含氟涂料在釉面形成保护层,具有抗酸蚀和促进釉面再矿化作用;含氟牙膏能促进脱矿釉面再矿化,抗酸作用较弱。     

腹腔镜直肠癌根治术44例体会

目的:探讨腹腔镜直肠癌根治术的可行性和手术方法。方法:回顾分析2008年9月至2011年5月94例直肠癌患者的临床资料,分别行腹腔镜直肠癌根治术和传统开腹直肠癌根治术,比较手术时间、出血量、并发症、清扫淋巴结数、术后排气时间、住院时间等。结果:腹腔镜组与传统开腹组患者手术时间分别为(2.5±0.3)h及(2.1±0.4)h(P>0.05);出血量分别为(120±8)ml及(220±10)ml(P<0.05);并发症分别为13%及20%(P<0.05);清扫淋巴结数分别为(16±2)枚及(17±3)枚(P>0.05);术后排气时间分别为(52.5±6.5)h及(81.2±9.0)h(P<0.05);住院时间分别为(8.3±1.6)d及(11.2±2.7)d(P<0.05)。结论:腹腔镜直肠癌根治术创伤小,术后恢复快,根治效果同开腹手术,术中Trocar位置的选择、Toldt间隙及骶前间隙的辨别、对肿瘤的包裹隔离,是进一步完善手术的必要步骤。     

肝癌细胞中miR-376c的表达及其与高迁移率族蛋白A2的关系

目的:探讨肝细胞癌(HCC)中miR-376c的表达情况、临床意义及作用机制。方法:用real-time PCR检测miR-376c在HCC组织与癌旁组织、以及不同HCC细胞系与正常肝细胞中的表达,分析miR-376c的表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系;将HCC细胞分别转染miR-376c模拟物和阴性对照组序列后,用Transwell法和划痕实验检测细胞的迁移及侵袭,Western blot检测miR-376c可能的靶点高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达;用免疫组化检测HCC组织中HMGA2的表达,并分析miR-376c与HMGA2之间的相关性。结果:与癌旁组织或正常肝细胞比较,miR-376c在HCC组织及不同HCC细胞中的表达均明显下调(均P0.05),miR-376c的低表达与门静脉侵犯(P=0.019)、TNM分期(P=0.012)及Edmondson分级(P=0.009)有关;miR-376c低表达的患者3年生存率明显低于其高表达的患者(P=0.0081)。与转染阴性对照序列的HCC细胞比较,转染miR-376c模拟物的HCC细胞的迁移及侵袭数(56.00 vs.26.00;45.33 vs.18.33)明显减少、划痕愈合率明显减低(95.33%vs.60.00%)、HMGA2的表达明显下调(均P0.05);miR-376c高表达的HCC组织中HMGA2表达量明显低于miR-376c低表达的HCC组织(P0.05),HCC组织中miR-376c与HMGA2的表达呈负相关(r=-0.541,P0.01)。结论:miR-376c可能是一种抑癌因子,其在HCC中表达降低,从而削弱了对HMGA2的抑制、促进了HCC细胞的迁移与侵袭。