荧光探针JC-1检测骨髓增生异常综合征细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化

目的探讨荧光探针JC-1在检测细胞凋亡早期线粒体膜电位（△ψm）中的应用。方法2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡，利用新型荧光探针JC-1标记MUTZ-1细胞，在FACS Calibur流式细胞仪（FCM）上检测细胞内JC-1荧光强度的变化；在荧光显微镜下观察和计数细胞内JC-1荧光颜色的改变。结果对照组MUTZ-1细胞线粒体△ψm维持较高，JC-1在线粒体内形成聚合物，发出橘红色荧光；用药组MUTZ-1细胞线粒体△ψm下降，JC-1聚合物分解成单体，发出绿色荧光。MUTZ-1细胞线粒体△ψm的下降随着时间延长而逐渐增强，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；随着药物浓度的增加，细胞线粒体△ψm下降增强，在4μmol／L时线粒体△ψm下降达到最大值，以后线粒体△ψm下降趋势减缓。结论荧光探针JC-1结合FCM和荧光显微镜可以准确、直观地检测凋亡早期线粒体△ψm的变化，为2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡机制的研究提供了重要手段。     

毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡及其机制的实验研究

本研究旨在探讨毒胡萝卜素对K562细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化，annexin V—FITC／PI双染法FCM检测凋亡率的变化，Ca^2＋荧光指示剂Fura-2／AM法荧光分光光度计测定细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）的改变，Rh123单染法FCM检测线粒体△ψm的变化，Western blot检测caspase-3，-7，-9，-12、细胞色素C和GRP78蛋白的改变。结果显示：4μmol／L毒胡萝卜素作用K562细胞48小时后，荧光显微镜观察到细胞呈典型的凋亡形态变化，早期凋亡细胞核染色质呈固缩状、圆珠状或斑块状；晚期凋亡细胞核染色质呈固缩状或斑块状。1、2、4、8μmol／L毒胡萝卜素作用K562细胞24和48小时后细胞凋亡率分别为7．51％、11．65％、23，22％、30．56％和12．85％、20.27％、31．5l％、44．16％，在一定范围内呈剂量和时间依赖性，与对照组比较，均有统计学意义（P〈0．05）。毒胡萝卜素诱导K562细胞[Ca^2＋]i升高以及线粒体△ψm下降，并均呈一定的浓度依赖性，与对照组比较，均有统计学意义（P〈0．05）。Western blot检测显示，毒胡萝卜素诱导K562细胞caspase-3，-7，-9，-12剪切活化、细胞色素C释放、GRP78表达上调。结论：毒胡萝卜素可诱导K562细胞发生内质网应激反应性凋亡，内质网是细胞内诱导凋亡的一个重要新场所；caspase-3，-7，-9，-12剪切和活化、线粒体△ψm破坏和细胞色素C释放是毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡的重要机制之一，线粒体参与内质网应激反应性凋亡途径并发挥重要作用。     

金雀异黄素对氯化钴诱导的白血病K562细胞缺氧诱导因子-1α表达抑制作用的研究

为探讨金雀异黄素（genistein,gen）对氯化钴（CoCl2）诱导的人白血病细胞K562缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达的影响,本研究采用低氧模拟剂CoCl2模拟低氧环境。实验分为量-效关系组和时-效关系组,前者CoCl2取0、50、100及150μmol/L4个浓度点,培养72小时进行检测;后者则在CoCl2取100μmol/L浓度的基础上,选取0、24、48和72小时4个时间点进行检测。gen干预实验分为：①正常对照组;②CoCl2150μmol/L组;③CoCl2150μmol/L加gen50μmol/L组;④CoCl2150μmol/L加gen100μmol/L;组⑤CoCl2150μmol/L加gen200μmol/L组,培养72小时检测。采用RT-PCR及Western blot的方法分别检测HIF-1α mRNA及蛋白表达水平。结果发现：CoCl2诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达增加,并呈明显的浓度和时间依赖性关系（p〈0.01）;而对HIF-1α mRNA的表达无显著影响（p〉0.05）;gen呈明显浓度依赖性地抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α蛋白表达（p〈0.01）,对K562细胞HIF-1α mRNA表达无显著影响（p〉0.05）。结论：CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达,无论常氧还是在CoCl2诱导下,HIF-1α mRNA呈组成型表达;gen可抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α的表达,这种抑制作用与mRNA水平无关,主要在蛋白水平。     

氯化钴诱导心肌细胞化学性缺氧HIF-1α表达的研究

目的：观察不同浓度的氯化钴（CoCl2）对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法：用100、300、600、900、1200μmol／L的CoCI2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型,分别于12、18、24、36、48h用Hoechst33342细胞核染色法检测心肌细胞凋亡：CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;确定最佳诱导浓度600μmol／L后,分别于0、3、6、9、12、18、24、36、48h采用蛋白印迹法检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白的表达;确定最佳诱导时间后,用蛋白印迹法检测100、300、600、900、1200μmol／LCoCl2处理H9C2心肌细胞12h后HIF-1α蛋白的表达情况。结果：在600～1200μmo1／L浓度范围内,CoCl2呈剂量依赖性地抑制H9C2心肌细胞的存活。600μmol／LCoCl2诱导12h后H9C2心肌细胞产生明显凋亡．诱导12～48h范围内．12h时H9C2心肌细胞表达的HIF-1α蛋白最高：100～1200μmoI／LCoCl2诱导H9C2心肌细胞12h．其中600μmol／LCoCl2诱导时H9C2心肌细胞表达的HIF-α蛋白最高。结论：CoCl2诱导H9C2心肌细胞化学性缺氧的最佳浓度为600μmol／L．此时最佳时间为12h。     

藏红花素对缺氧环境下Wistar大鼠视网膜Muller细胞活性和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察不同浓度藏红花素对缺氧条件下RMC活性和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法改良Reichenbach等方法原代培养Muller细胞,并采用GFAP和Vimentin染色鉴定RMC。RMC培养基中加人终浓度10μmoL／L、50μmoL／L和100μmoL／L藏红花素,于1—7d计数细胞,于24h和48h台盼蓝染色测定细胞活性,对照组RMC培养基中未加入藏红花素。培养液中加入终浓度为200μmol/L的CoCl2建立化学缺氧模型。实验分4组：缺氧组（H组）、藏红花素处理组（C组）、缺氧＋藏红花素处理组（HC组）和正常对照组（NC组）,其中C和HC组培养液中加入10μmol／L藏红花素。处理24h,台盼蓝染色检测细胞活性,采用Westernblot法半定量检测GFAP的表达。结果含10μmoL／L和50μmol／L藏红花素的培养液中,细胞生长无抑制;100μmol/L藏红花素的培养液中细胞增生受到抑制,培养24h和48hRMC活性分别为（68±7）％、（59±9）％,与对照组相比,明显降低（t24h=3．723,P〈0．05;t48h=4．103,P〈0．05）。在缺氧条件下,正常细胞和10μmoL／L藏红花素的培养液中细胞活性受到明显抑制,藏红花素可减轻缺氧环境对细胞活性的抑制作用。在缺氧条件下,GFAP表达明显升高（t=2．945,P〈0．05）;藏红花素可部分抑制GFAP高表达（t=3．362,P〈0．05）。结论缺氧能诱导体外培养视网膜Muller细胞死亡,适合浓度藏红花素可抑制缺氧诱导的视网膜Muller细胞死亡。     

高磷对血管平滑肌钙化的影响及骨保护素干预作用

目的研究高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响和骨保护素（OPG）mRNA表达的影响,及骨保护素对高磷诱导RVSMC钙化的作用及其相关机制。方法用不同的试剂培养RVSMC,分别为正常磷组（Pi1.4mmol/L）、高磷组（Pi2.0mmol/L、Pi2.6mmol/L）、凋亡抑制组（Pi2.6mmol/L＋ZVAD.FMK0.1μmol/L,Pi2.6mmol/L＋ZVAD.FMK1.0μmol/L,Pi2.6mmol/L＋ZVAD.FMK2.0μmol/L）、骨保护素组（Pi2.6mmol/L＋OPG1μg/ml,Pi2.6mmol/L＋OPG10μg/ml,Pi2.6mmol/L＋OPG100μg/ml）。全自动生化仪比色法测定钙含量,BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量。同时行VonKossa染色观察细胞钙化情况。用半定量PCR（RT-PCR）法检测RVSMCOPGmRNA的表达。流式细胞仪测定各组的细胞凋亡量。结果①培养3天,6天,9天时,高磷组（Pi2.0mmol/L,Pi2.6mmol/L）与Pi1.4mmol/L相比,RVSMC钙沉积较多（P＆lt;0.05）;②培养第6天时,Pi2．6mmol／L＋ZVAD．FNK0．1μmol／L组的钙沉积与Pi2．6mmol／L组相比无统计学差异,而Pi2．6mmol／L＋ZVAD．FMK1．0μmol／L,Pi2．6mmol／L＋ZVAD．FMK2．0μmol／L组与Pi2．6μmol／L组相比,RVSMC钙沉积较少（P〈0．05）。Pi2．6mmol／L＋OPG10μg／ml、Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml组与Pi2．6mmol／L组相比,细胞钙沉积较少（P〈0．05）。Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml与Pi2．6mmol／L相比,细胞钙沉积明显降低（P〈0．01）;③Von Kossa染色显录Pi1．4mmol／L组钙化不明显．Pi2．6mmol／L组细胞有大量黑色颗粒沉积而Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml组较少。培养第6天时,Pi2．6mmol／L组与Pi2．0mmol／L组;Pi2．0mmol／L,Pil．4mmol／L相比,OPG mRNA表达较多（P〈0．05）。培养第6天时,Pi2．6mmol／L与Pi1．4mmol／L相比,细胞凋亡量较多（P〈0．05）;Pi2．6mmol／L＋OPG100μg／ml与Pi2．6mmol／L相比细胞凋亡量较少（P〈0．05）。结论高磷可能通过诱导RVSMC凋亡而导致钙化,骨保护素对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用,此作用与其降低RVSMC凋亡有关。     

槲皮素对过氧化氢所致体外心肌细胞损伤的保护作用

目的：观察槲皮素对过氧化氢所致心肌细胞损伤的保护作用及其机制。 方法：①实验于2004-12／2005-05在锦州医学院药理学教研室完成。选用出生1-3d的SD大鼠15只，雌雄不拘。②采用纯化培养的心肌细胞建立过氧化氢损伤模型，实验分为6组（每6孔细胞一组）：正常对照组（正常细胞培养，加入等数量的培养基，不加入任何药物），10以二甲基亚砜组（加入10g/L二甲基亚砜），过氧化氢损伤组（加入过氧化氢200μmol／L），过氧化氢＋低浓度槲皮素组（加入过氧化氢200μmol／L和槲皮素25μmol／L），过氧化氢＋槲皮素中浓度组（加入过氧化氢200μmol／L和槲皮素50μmol/L），过氧化氢＋槲皮素高浓度组（加入过氧化氢200μmol／L和槲皮素100μmol／L）。过氧化氢（200μmol／L）损伤时间为12h。③采用乳酸脱氢酶试剂盒测其释放量；采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活力；硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛含量；硝酸还原法测定一氧化氮含量；四唑盐比色法测定线粒体脱氢酶活性。④计量资料差异比较采用t检验，组间数据处理根据处理方差齐性分析结果，采用非配对t检验。 结果：①心肌细胞乳酸脱氢酶活性及丙二醛含量：过氧化氢损伤组明显高于正常对照组（P〈0．01），过氧化氢＋高、中、低浓度槲皮紊组明显低于过氧化氢损伤组（P〈0．01）。②心肌细胞超氧化物歧化酶活性：过氧化氢损伤组明显低于正常对照组（P〈0．01），过氧化氧＋高、中浓度槲皮素组明显高于过氧化氢损伤组（P〈0．01）。③线粒体脱氢酶活性：过氧化氢损伤组明显低于正常对照组（P〈0．01），过氧化氢＋各浓度槲皮素组明显高于过氧化氢损伤组（P〈0．01）。④心肌细胞内一氧化氮含量：过氧化氢损伤组高于正常对照组（P〈0．05），过氧化氢＋高、中、低浓度槲皮素组低于过氧化氢损伤组（P〈0．05）。 结论：槲皮素具有对抗缺氧复氧损伤、明显保护心肌细胞的作用，可能与其抗氧化、抗脂质过氧化反应有关。     

线粒体途径在慢性髓系白血病信号转导中的作用

本研究旨在探讨线粒体途径在慢性髓系白血病（CML）信号转导中的作用。用脂质体转染法将bcr3／abl2反义寡核苷酸（ASO）导入CML细胞系K562细胞中;用MTr法检测bcr3／abl2 ASO对K562细胞活力的影响;流式细胞术（FCM）分析测定细胞凋亡率;荧光染料罗丹明123染色分析细胞线粒体跨膜电位（△ψm）的变化;Western blot检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白细胞色素C（CytC）的表达。结果表明,2μmol／Lbcr3／abl2 ASO与K562细胞作用24小时后,可明显抑制K562细胞活力,其抑制率为65．7％;可诱导细胞凋亡,凋亡率为16．9％;可下调K562细胞线粒体△ψm,有38．33％的细胞出现线粒体△ψm下降;可增强CytC的表达,激光光度扫描仪测得其表达光密度值由2．33±0．3升高到4．78±0．1。结论：线粒体途径通过介导凋亡信号而在CML信号转导中发挥重要作用。     

药物防护电磁脉冲所致海马神经元损伤的可能性

背景：电磁脉冲照射可引起实验大鼠学习记忆能力下降，并可造成离体海马神经元的胞内钙超载，进而发生坏死和凋亡，物理屏蔽可减轻电磁辐射对实验动物的损伤，但缺乏在细胞模型上进行的药物防护研究。 目的：观察药物防护电磁脉冲致离体海马神经元损伤的可能性。 设计：随机对照动物实验。 单位：承德医学院基础部。材料：实验于2004—01／2005-01分别在军事医学科学院和承德医学院完成。实验动物选用Wistar乳鼠若干只。 方法：断头取脑分离海马组织，进行海马神经元原代培养与鉴定，原代培养的海马神经元经MK801（N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂）和尼非地平（L型钙离子通道阻断剂）预处理后进行电磁脉冲照射。电磁脉冲照射条件为6&;#215;10^4V／m，脉冲上升时间20ns，脉宽30μs，频率2．5脉冲／min，作用2min。将培养在特殊培养皿的细胞分为正常对照组、电磁脉冲照射组、MK801 20μmol／L组和MK80 120μmol／L＋尼非地平1μmol／L组。采用MTT法对细胞活力进行测定；FACS法检测细胞凋亡率；Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca^2＋]i。 主要观察指标：各组细胞内钙超载、细胞活力、细胞调亡的情况比较。 结果：①电磁脉冲组在照射后即刻的[Ca^2＋]i荧光强度显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（107．34&;#177;26．14），（54．93&;#177;16．08），P〈0．051；MK80 120μmol／L组比电磁脉冲照射组的[Ca^2＋]i荧光强度有所下降（81．29&;#177;19．96，P〈0．05），而MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol/L组的[Ca^2＋]i荧光强度呈进一步下降趋势（69．82&;#177;25．54，P〈0．05）。但两个给药组的[Ca^2＋]i荧光强度仍高于正常对照（P〈0．05）。②MK801 20μmol／L组和MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol／L组反映细胞增殖活力的吸光度值分别为0．25&;#177;0．06和0．27&;#177;0．07，明显高于电磁脉冲照射组（0．17&;#177;0．08，P〈0．05），但仍低于正常对照组（0．33&;#177;0．08，P〈0．05）。③电磁脉冲照射组在照后即刻的细胞凋亡率显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（68．63&;#177;9．04）％，（20．14&;#177;4．34）％，P〈0．011；MK801 20μmol／L组比电磁脉冲照射组的细胞凋亡率有所下降（62．12&;#177;11．08）％。MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol／L组的细胞凋亡率呈进一步下降趋势[（53．69&;#177;13．60）％，P〈0．05）1，但两个给药组的细胞凋亡率仍高于正常对照组（P〈0．01）。 结论：MK801和尼非地平预处理可部分阻断电磁脉冲所致的海马神经元损伤；细胞内钙超载在电磁脉冲损伤机制中发挥重要作用。     

羧胺三唑对脂多糖诱导的RAW264．7细胞分泌炎症因子的影响’

目的研究羧胺三唑对脂多糖诱导的RAW264．7细胞炎症模型中炎症因子的影响。方法脂多糖（1μg／ml）刺激生长良好的RAW264．7细胞,建立细胞炎症模型,并用不同浓度羧胺三唑处理。CCK-8法检测羧胺三唑对RAW264．7细胞的毒性作用,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,分光光度法检测一氧化氮（NO）含量。结果羧胺三唑在2．5～40μmol／L的浓度范围内对RAW264．7细胞无毒性作用（P〉0．05）。脂多糖可以明显诱导RAW264．7细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和NO（P〈0．01）,10、20、40μmol／L的羧胺三唑能够显著抑制脂多糖诱导的RAW264．7细胞释放TNF-α、IL-6和NO的水平（P〈0．05和P〈0．01）,20、40μmol／L的羧胺三唑能够抑制脂多糖诱导的IL-1β的释放（P〈0．01）。结论羧胺三唑可以抑制脂多糖诱导的RAW264．7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎症因子TNF—α,、IL-1β、IL-6和NO有关。     

稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌-一氧化氮的影响

目的探讨氯化镧（LaCl3）由对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264．7）分泌一氧化氮（nitric oxide，N01的影响。方法RAW 264．7细胞随机分成四组：空白对照组（培养基中不含LaCl3和LPS），氯化镧组（含LaCk2．5，5，10，20μmol／L培养24h）、氯化镧＋LPS组（分别以含LaCl3 2．5、5、10、20μmol／L的培养基培养24h后．更换含LPS 1mg／L的培养基继续培养24h）及LPS组（含LPS 1mg／L的培养基培养24h）。采用硝酸还原酶法测定各组细胞培养液上清一氧化氮（NO）的含量。结果LPS组培养上清NO浓度为52．82±12．60μmol／L与空白对照组（2．90±2．36μmol／L）和LaCl3组[（6．50±4．67μmol／L、9．52±4．47μmol／L、11．14±7．42μmol／L、6．74±2．00μmol／L]比较有显著性差异（P〈0．05）；LaCl3＋LPS组NO的浓度分别为26．00±5．83μmol/L（2．5μmol／L LaCl3＋LPS）、29．86±7．26μmol／L（5μmol／L LaCl3＋LPS）、34．62±6．24μmol／L （10μmol／L LaCl3＋LPS），与LPS组相比显著减少（P〈0．05），20μmol／L LaCl3＋LPS）组NO的产生为45．61±6．68μmol／L与LPS组比较无显著性差异。结论一定浓度的LaCl3可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的水平。     

二氮嗪介导的延迟预处理对未成熟心肌的保护机制研究

目的研究二氮嗪（DZX）介导的延迟预处理对缺血缺氧环境中未成熟心肌的保护作用机制。方法分离培养新生鼠心肌细胞随机分为：①缺氧组；②DZX组：细胞缺氧培养前24h放入含100μmol／L的DZX的培养液15min；③DZX＋PDTC组：细胞缺氧培养前24h放入含100μmol／LDZX和500μmol／L二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）的培养液15min；④对照组。前3组细胞在缺氧模型中培养16h，对照组一直有氧培养。采用Hoechst染色、Annexin V／PI流式检测凋亡细胞，Western Blot检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达。结果①流式检测示DZX组较缺氧组细胞凋亡明显降低（P〈0．01），Hoechst染色心肌凋亡细胞也减少；②与DZX组比较，加入PDTC后，流式检测显示细胞凋亡显著增多（P〈0．01），Hoechst染色心肌细胞凋亡增多，Westem blot检测显示Bcl-2表达减少，Bax表达增加。结论线粒体钾通道开放剂二氮嗪介导的延迟预处理对心肌有明显的保护作用；位于下游的NF-κB通过调控促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用。     

沉默缺氧诱导因子-1α对卵巢癌化疗敏感性的影响

目的观察沉默缺氧诱导因子HIF-1α对卵巢癌细胞化疗敏感性的相关影响并探讨其机理。方法构建HIF-1α基因短发夹RNA真核表达质粒,并转染卵巢癌细胞SKOV3（人卵巢浆液性囊腺癌细胞株）。实验可分为空白组,非特异对照组（转染pNonspecific-siRNA,即SKOV3NS）,目的siRNA组（转染pHIF-siRNA,即SKOV3siRNA）3组,用RT-PCR及Western Blot法分别检测各组HIF-1α基因的mRNA和蛋白的表达水平。细胞经过20μmol/L顺铂作用后,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCS）检测细胞凋亡率。结果 SKOV3siRNA转染组HIF-1α基因在mRNA水平和蛋白水平表达均明显降低,SKOV3siRNA组肿瘤细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均明显增高（P〈0.05）。结论 RNA干扰技术沉默HIF-1α能够有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达,增强其对化疗药物顺铂的敏感性。     

IGF-1、HIF—1α在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的：研究胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学SABC法检测54例HCC及14例正常肝组织中IGF-1和HIF-1α的表达情况，研究其与HCC生物学行为的关系。结果：54例HCC中IGF-1、HIF-1α的表达均较正常肝组织高，差异具有显著性（x^2=9．112，13．369；P〈0．05）。HCC中IGF-1与HIF-1α的表达呈正相关（rx=0．539，P〈0．05）。HIF-1α的表达与肿瘤的侵袭转移密切相关（P〈0．05），IGF-1在AFP≥400μg／ml的HCC组织中表达明显高于AFP〈400μg／ml者，差异具有显著性（P〈0．05）。结论：HCC中IGF-1和HIF-1α表达反映HCC的生物学行为，可作为预测肝癌浸润转移的-项重要指标。     

低氧模拟剂氯化钴对人单核细胞白血病细胞株SHI-1化疗敏感性的影响

【目的】研究氯化钴（CobaltChloride,CoCl2）模拟的化学性低氧是否能增强人单核细胞白血病细胞株SHI—l细胞对依托泊苷（VP-16）的敏感性,并探讨及其分子机制。【方法】在培养基中加入低氧模拟剂CoCl2（终浓度为100umol／L）模拟化学性低氧环境（低氧组）,并用正常培养基作对照（对照组）。分别在对照组和低氧组中加入不同浓度的VFL16（0．5,1．0,2．0μg／mL）,即VP16组和低氧＋VP-16组。检测各组的细胞的增殖抑制率（四甲基偶氮唑盐法）,细胞凋亡率（流式细胞术）,FAK、AKT、ERK、HIF-1α、Bcl-2及Pax基因mRNA表达（实时定量PCR方法）。【结果】①低氧组SHF-1细胞增殖受到抑制,并随作用时间延长而逐渐增强。②低氧模拟剂CoCl2也可在一定程度上诱导SHI-1细胞凋亡,并对VP-16诱导的SHI-1细胞凋亡有促进作用（P〈0．05）。③低氧模拟剂CoCl2可以增强FAK、AKT、ERK、HIF-1α、Bcb2及Pax基因mRNA表达（P〈0．05）,且Bax／Bcl-2比值升高更为明显。CoCl2并不能使VP-16作用24h后SHF1细胞内FAK、AKT和Beg2基因mRNA表达发生明显变化,但可以使ERK、HIF-1α和PaxmRNA表达量增加（P〈0．05）,且Pax／Bcl-2比值升高。【结论】CoCl2模拟化学性低氧对SHI-1细胞生物学活性有一定的抑制作用并能增强其对VP-16的化疗敏感性,其分子机制可能涉及ERK介导的信号通路对HIF_1a表达的调控作用,以及HIF-1α介导的信号传导通路对Pax和Bcl-2基因表达的不均衡调控。     

罗格列酮对肾小管上皮细胞人尿酸盐转运子基因表达的影响

目的：观察不同浓度罗格列酮对肾小管上皮细胞（HK-2细胞）人尿酸盐转运子（hUAT）mRNA表达的影响。方法：根据培养液中所含罗格列酮浓度的不同，将HK-2细胞分为4组，（1）仅使用DMEM组（对照组）；（2）DMEM＋5μmol／L罗格列酮组（R1组）；（3）DMEM＋10μmol／L罗格列酮组（R2组）；（4）DMEM＋15μmol／L罗格列酮组（R3组），每组均培养6瓶细胞。上述细胞在不同培养液中分别培养48h。采用实时荧光定量PCR检测HK-2细胞中hUATmRNA的相对表达量（2^△△O法）。结果：所有标本均能检测到huAT mRNA的表达，且R1、R2、R3组hUAT mRNA表达水平均明显低于对照组．其中R1组（浓度5μmol／L）hUAT mRNA表达水平为对照组的19．6％，R2组（浓度10μmol／L）hUAT mRNA表达水平为对照组的18．8％，R3组（浓度15μmol／L）hUAT mRNA表达水平仅为对照组的9．5％。结论：罗格列酮可能有下调hUAT mRNA表达的作用。[著者文摘]     

甲磺酸氟马替尼对U266细胞株中C-MYC、HIF-1α及VEGF的作用

本研究旨在探讨新-代酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸氟马替尼对多发性骨髓瘤细胞株U266中C-MYC、HIF-1α及VEGF的作用。采用实时荧光定量PCR检测甲磺酸氟马替尼（1、5、10μmol／L）作用于U266细胞株8、16、24h后c-MYc及HIF-1α的表达情况;采用Westernblot进一步从蛋白水平检测甲磺酸氟马替尼（1、5、10μmol／L）作用于多发性骨髓瘤细胞株U26616h后c-MYc、HIF-1α及VEGF的表达情况。结果表明,C-MYC基因及HIF-1α基因随着氟马替尼作用浓度增大,其表达逐渐降低,差异均具有统计学意义（P〈0．05）;在相同浓度的氟马替尼作用下,随着药物作用时间的延长其表达逐渐降低,差异均具有统计学意义（P〈0．05）;C-MYC蛋白、HIF-1α蛋白及VEGF在甲磺酸氟马替尼作用16h后,随着药物作用浓度的增大,三者表达均逐渐降低,甲磺酸氟马替尼作用前后的差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：甲磺酸氟马替尼可以降低U266细胞株中C-MYC、HW-1α及VEGF的表达．呈时间-剂号依粕性．甲稽酸氟马替尼有可能作为-种治疗MM的新药．     

异硫氰酸苯乙酯对K562／A02细胞阿霉素耐药影响的研究

本实验研究探讨异硫氰酸苯乙酯（phenylhexyl isothiocyanate,PHI）对K562／A02细胞的阿霉素（ADM）耐药性与敏感性的影响,并研究其可能的相关机制。运用MTT法分别检测阿霉素（ADM）以及PHI＋ADM对K562／A02细胞的生长抑制率,计算其耐药倍数;用流式细胞仪检测PHI作用前后细胞的凋亡、细胞内ADM浓度的变化和MRPI蛋白变化;分光光度仪测定细胞内还原性谷胱目肽（GSH）的含量;RT—PCR半定量检测PHI作用前后MRP1 mRNA的水平。结果显示,随着PHI浓度的增加,细胞生存率降低;两药联合应用时K562／A02细胞凋亡率均增加;当PHI≥20μmol／L时其耐药倍数有显著差异（P〈0．05）,两种细胞内ADM浓度增加亦有显著差异（P〈0．05）。单独运用1μg/ml ADM时K562／A02细胞内的GsH含量下降5％,单独运用PHI时K562／A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的增加先是轻度升高尔后下降,GSH含量下降点约在10μmoL／L;当PHI≥20μmol/L与1μg／ml ADM联合应用时,K562／A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的升高而进行性下降;而不同浓度的PHI的作用前后,两种细胞的MRP1的表达无论是蛋白水平还是基因水平都无显著差异（P〉0．05）。结论：PHI对K562／A02细胞的细胞毒作用与细胞内GSH耗竭无直接关系,PHI不但可以增强K562／A02细胞对ADM的敏感性,而且通过耗竭细胞内GSH部分地逆转K562／A02细胞对ADM的耐药。联合使用PHI可减少ADM的用量,从而降低其毒副作用。     

稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌-一氧化氮的影响

目的探讨氯化镧（LaCl3）由对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264．7）分泌一氧化氮（nitric oxide，N01的影响。方法RAW 264．7细胞随机分成四组：空白对照组（培养基中不含LaCl3和LPS），氯化镧组（含LaCk2．5，5，10，20μmol／L培养24h）、氯化镧＋LPS组（分别以含LaCl3 2．5、5、10、20μmol／L的培养基培养24h后．更换含LPS 1mg／L的培养基继续培养24h）及LPS组（含LPS 1mg／L的培养基培养24h）。采用硝酸还原酶法测定各组细胞培养液上清一氧化氮（NO）的含量。结果LPS组培养上清NO浓度为52．82±12．60μmol／L与空白对照组（2．90±2．36μmol／L）和LaCl3组[（6．50±4．67μmol／L、9．52±4．47μmol／L、11．14±7．42μmol／L、6．74±2．00μmol／L]比较有显著性差异（P〈0．05）；LaCl3＋LPS组NO的浓度分别为26．00±5．83μmol/L（2．5μmol／L LaCl3＋LPS）、29．86±7．26μmol／L（5μmol／L LaCl3＋LPS）、34．62±6．24μmol／L （10μmol／L LaCl3＋LPS），与LPS组相比显著减少（P〈0．05），20μmol／L LaCl3＋LPS）组NO的产生为45．61±6．68μmol／L与LPS组比较无显著性差异。结论一定浓度的LaCl3可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的水平。     

西罗莫司对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的影响及其机制

目的研究西罗莫司(SRL)对体外培养的人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞的增殖及其可能的机制。方法用氯化钴(CoCl2)诱导细胞模拟缺氧微环境,并根据CoCl2浓度不同分为0、25、50、100、150μmol/L组;选择CoCl2浓度为100μmol/L来模拟肿瘤内缺氧微环境,同时分别联合不同浓度(0、10、100、500、1 000 nmol/L)SRL作用细胞48 h。应用CCK-8法测定SRL对各组细胞抑制效应和RT-PCR测定各组mTOR、HIF-1αmRNA的相对表达量。结果随着CoCl2作用浓度的增加,Ishikawa细胞中HIF-1αmRNA表达增强(P<0.05),其中100、150μmol/L两组比较差异无统计学意义(P>0.05);缺氧条件下不同浓度的SRL可抑制Ishikawa细胞,且抑制率随药物浓度的增加而上升(P<0.05);缺氧条件下SRL可使Ishikawa细胞中mTOR、HIF-1αmRNA的表达降低并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论缺氧微环境可以促进Ishikawa细胞中的HIF-1αmRNA的表达,HIF-1α可能通过在细胞缺氧调控中起作用而参与了肿瘤的发生发展。在缺氧条件下,SRL可通过抑制mTOR而下调人子宫内膜癌Ishikawa细胞内HIF-1α基因表达。这可能是SRL抗肿瘤的机制之一,并有望成为子宫内膜癌分子治疗的有力途径。