鲍曼不动杆菌D类碳青霉烯酶及其基因环境研究进展

近年来非发酵菌在临床分离到的致病菌中呈增长趋势,其中重要的细菌为鲍曼不动杆菌（acinetobacter baumannii,Ab）。Ab为不动杆菌属的一种非发酵革兰阴性球杆菌,是非常重要的条件致病菌,在人体免疫力低下时引起感染。而随着广谱抗菌药物和免疫抑制剂的使用世界范围内陆续出现了泛耐药或多重耐药鲍曼不动杆菌（multi-drug resistant acinetobacter baumannii,MDRAB）的报道。碳青霉烯类抗菌药物曾被认为是临床治疗Ab感染最有效的抗菌药物之一,但近年来由于碳青霉烯类药物在医院中的大量使用,碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌（carbapenem-resistance acinetobacter baumannii,CRAB）的比例也逐年增高。一旦细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药,对其他的抗菌药物也基本都耐药。这使由CRAB引起感染的治疗陷入无药可用的境地,给临床抗感染治疗带来巨大难题。所以讨论鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制已十分必要。     

Carba NP法快速检测鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的研究

目的了解泛耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶表型及酶基因型,为临床合理使用抗生素,监控医院感染提供依据。方法收集117株鲍曼不动杆菌临床分离株进行常规微生物学检测,K-B纸片法筛选多重耐药鲍曼不动杆菌,通过Carba NP试验及改良Hodge试验进行产碳青霉烯酶表型检测,利用PCR对多重耐药不动杆菌耐药基因型进行确证。结果临床分离的117株鲍曼不动杆菌株有64株属多重耐药鲍曼不动杆菌,其中33株碳青霉烯酶阳性,检出碳青霉烯酶OXA-23耐药基因型,未检出IMP、VIM、NDM-1耐药基因。结论 Carba NP法可以快速检测产碳青霉烯酶菌株,且敏感性强,操作简单,有助于提高产碳青霉烯酶菌株检出率,利于监控医院感染。     

ICU鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的分析重症监护病房(ICU)鲍曼不动杆菌耐药情况,研究其碳青霉烯酶基因型的流行情况。方法收集2016-2017年ICU分离得到的108株鲍曼不动杆菌。采用K-B纸片扩散法进行药物敏感试验。采用PCR法检测7种碳青霉烯酶基因,包括OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、IMP-1、IMP-4和VIM-2。结果 108株鲍曼不动杆菌中碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的检出率从2016年的60.0%(24/40)上升到2017年的82.4%(56/68)。CRAB对多黏菌素B未见耐药(0.0%,0/80),对其他常见的抗菌药物耐药率均在96%左右。而非CRAB的耐药率均小于15%,与CRAB差别明显。碳青霉烯酶基因OXA-51的检出率为100.0%(108/108);OXA-23基因的检出率为63.0%(68/108),其中非CRAB未检出OXA-23基因(0/28),CRAB的OXA-23基因检出率为85.0%(68/80);其他OXA-24、OXA-58、IMP-1、IMP-4和VIM-2基因均未检出。结论 ICU的CRAB检出率上升明显且耐药现象严重;OXA-23基因在CRAB对碳青霉烯类药物耐药机制中起主要作用。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药机制及同源性分析

摘要 目的 <\b>了解鲍曼不动杆菌在院内流行情况,研究鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的分子生物学机制。方法 <\b>使用法国梅里埃VITEK 2型全自动细菌鉴定及药敏分析仪进鉴定和药敏试验。采用PCR检测鲍曼不动杆菌编码的OXA-23型碳青霉烯酶基因blaOXA-23。采用ERIC-PCR对分离到的鲍曼不动杆菌进行同源性分析。结果 <\b>分离到的17株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中共有16株产OXA-23型碳青霉烯酶,且为同源性相同。结论 <\b>鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药的重要机制为产OXA-23型碳青霉烯酶,该院存在鲍曼不动杆菌克隆流行。     

2014-2016年某医院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的临床分布和耐药性分析

摘要 目的 了解耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）的临床分布和耐药性变化。方法 收集2014年1月－2016年12月住院患者的CRAB菌株数据，描述其临床分布，并用WHONET软件进行耐药性分析。结果 1 182株非重复分离的鲍曼不动杆菌中，检出CRAB 514株，其中CRAB感染菌株367株；2014-2016年CRAB感染检出率逐年上升；CRAB标本多来源为痰液，占61.31%；CRAB感染部位主要集中在下呼吸道，占47.1%；CRAB感染菌株主要分布在神经外科、胸外科、急诊科、普外科胃肠和呼吸科，占59.67%；3年间CRAB对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦和复方新诺明的耐药率呈逐年下降趋势。结论 CRAB感染主要发生在神经外科和胸外科等科室的下呼吸道感染病例中，CRAB对抗菌药物的耐药率均较高，采取合理的抗菌药物管理措施可降低其耐药性。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌基因检测及同源性分析

目的 临床分离出的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)耐药基因检测及同源性分析。方法 收集中山市中医院2012年7月～2013年12月临床分离40株CRAB,用PCR法对碳青霉烯类基因进行扩增、序列分析; 应用ERIC-PCR研究其传播机制。结果 40株CRAB所有菌株且被检测到含有OXA-51-like基因为40株(100%),OXA-23-like基因为38株(95%),未检出NDM,VIM,IPM,OXA-24-like及OXA-58-like基因; ERIC-PCR聚类分析相似大于0.8,可认为是同一克隆群; 这40株菌在相似水平被聚为33个类群(克隆株)。结论 临床分离的CRAB主要携带碳青霉烯酶基因型为OXA-23-like,OXA-51-like和ERIC-PCR是进行鲍曼不动杆菌同源性分析的有效方法。     

86株鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因分析及同源性研究

目的分析北京康复医院住院患者分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的分布特点、耐药性及同源性。方法收集2017年12月至2018年12月北京康复医院临床感染病例中非重复分离的86株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌,采用Phoenix BD 100进行菌株鉴定和药敏试验。采用基因组重测序技术检测其携带的耐药相关基因并进行进化树分析,采用多位点序列分型分析菌株间的同源性。结果86株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌均表现为多重耐药。共检出17种耐药基因,全部菌株均携带OXA-23型碳青霉烯酶耐药基因;检出多种β内酰胺酶基因、外排泵相关基因、抗菌药物修饰酶基因等。多位点序列分型得到15种ST型,同源性分析提示部分菌株间存在较近亲缘关系。结论北京康复医院鲍曼不动杆菌耐药情况严重,OXA-23为主要耐药基因型,菌株之间存在同源相关性,应加强医院感染防控。     

某院2011～2015年鲍曼不动杆菌感染分布及耐药性变迁

目的：回顾分析某院2011～2015年分离鲍曼不动杆菌感染临床分布及耐药性变迁,为临床经验治疗鲍曼不动杆菌感染提供数据支持。方法使用Microscan Walkaway 40 plus型全自动微生物鉴定及药敏分析仪对临床分离株进行鉴定及抗菌药物最低抑菌浓度检测,采用WHONET5．6版软件对数据进行统计分析。结果2011～2015年分别分离到鲍曼不动杆菌190株、269株、350株、336株、427株,分别检出碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌159株、222株、294株、281株、356株。鲍曼不动杆菌主要来源于IC U （559株,35．6％）、神经外科（276株,17．6％）、呼吸内科（271株,17．2％）等科室,主要分离自痰液（1201株,76．4％）、伤口切口分泌物（124株,7．9％）、尿液（81株,5．2％）等标本。鲍曼不动杆菌对青霉素类、青霉素类／β内酰胺酶抑制剂复合物、头孢菌素类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类耐药率均超过了80％。碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌对检测的所有抗菌药物耐药率高于总耐药率,对青霉素类、青霉素类／β内酰胺酶抑制剂复合物、头孢菌素类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类耐药率均超过了95％。结论鲍曼不动杆菌耐药形势严峻,临床科室应根据微生物培养报告合理选择抗菌药物,同时应加强院内感染控制工作,避免碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌暴发流行。     

LAMP法检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌OXA-23基因的研究

目的建立一种简便、快速、特异、灵敏的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)OXA-23基因分子检测方法,并用于临床标本检测,以便了解产OXA-23酶CRAB的耐药分布状况。方法运用环介导等温扩增技术(LAMP),利用PrimerExplorer 4.0软件设计一套特异引物检测CRAB的OXA-23基因。通过优化LAMP检测方法的实验条件,应用SYBR Green I作为LAMP反应荧光显色物质,然后通过肉眼目测或电泳检测比较结果。同时,应用LAMP检测该院自2013年12月至2014年3月收集分离的41株多重耐药鲍曼不动杆菌。结果 CRAB的OXA-23基因菌株LAMP反应电泳产生了阶梯状条带,而其他不同菌株和阴性对照没有条带;向扩增产物中加入1μL SYBR GreenⅠ,CRAB的OXA-23基因菌株LAMP扩增产物的颜色由橙色变为绿色,而其他不同菌株和阴性对照仍为橙色;并检测出CRAB的OXA-23基因菌株纯培养物的灵敏度达到了5cfu/μL。对41株我院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌进行LAMP检测,检出OXA-23基因32株,检出率为78.04%。结论该院分离的CRAB OXA-23基因的携带率较高,对常用抗菌药物有非常高的耐药率;本研究建立的LAMP技术检测CRAB OXA-23基因是一种简便、快速、特异、灵敏的耐药鲍曼不动杆菌检测方法,适于基层单位推广使用,对临床医生合理选择抗生素具有重要意义。     

碳青霉烯类耐药的不动杆菌分子流行病学及其泛耐药的分子机制

目的调查不动杆菌属对碳青霉烯类的耐药性，研究碳青霉烯类耐药的不动杆菌（CRAB）分子流行病学及耐药机制。方法收集2003-2004年我国10家教学医院187株鲍曼不动杆菌，采用琼脂稀释法确定抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）和随机引物多态性DNA（RAPD）分型对128株CRAB进行分子流行病学研究；对多种β内酰胺酶基因进行聚合酶链反应（PCR）及序列分析；对整合子可变基因进行PCR及序列分析。12％十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析CRAB菌株的外膜孔通道蛋白（OMP）。体外筛选亚胺培南的耐药突变子。结果多中心的数据显示，碳青霉烯类耐药率从2003年的4．5％升至2004年的18，2％，多重耐药菌株从2003年的33％升至2004年的48％。北京、广州、福州、杭州、济南的7家医院均发现CRAB耐药克隆的暴发流行。2004年北京协和医院发生泛耐药株的暴发，波及18个病房的74例患者，59，4％的患者（44例）为感染，主要引起肺部感染和菌血症，其中菌血症的病死率40．2％。耐药克隆株均产多种β内酰胺酶：OXA-23型碳青霉烯酶或IMP-8型金属酶、PER-1型酶、高产AmpC酶和TEM-1酶。整合子含有携带氨基糖苷类、利福平、氯霉素的修饰酶及金属酶（blaIMP-8）。不同克隆株OMP差异很大。利血平试验未发现外排机制的高表达。体外成功选择出亚胺培南的耐药突变子，OMP20000的缺失、OMP29000和OMP21000的表达降低是突变子耐药的主要原因。头孢哌酮／舒巴坦、黏菌素、米诺环素可以联合用于CRAB的治疗。结论CRAB克隆株的传播是造成中国多家医院碳青霉烯类耐药率增加的重要原因。不动杆菌通过产生碳青霉烯酶、不同基因盒的整合子、外膜孔蛋白多个通道的缺失，共同介导多重耐药性或泛耐药性。CRAB株引起的感染预后差，必须采取有效的感染控制措施和抗菌药物的干预政策以控制耐药株的传播。     

老年人鲍曼不动杆菌的耐药分析

目的分析老年人鲍曼不动杆菌的耐药情况。方法从老年人中分离的鲍曼不动杆菌对10种抗生素的耐药情况,并用PCR方法检测碳青霉烯酶基因。结果64株鲍曼不动杆菌检测出20株携带碳青霉烯酶OXA-23基因。结论鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素耐药主要是产生碳青霉烯酶,也有其它耐药机制起作用。     

多重及泛耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌医院感染调查及产碳青霉烯酶表型研究

目的 了解铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌院内感染分布、耐药特点以及产碳青霉烯酶表型情况。方法 回顾性收集2012年7月到2013年7月该院分离非重复铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌医院感染菌株及病例。采用纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验,改良Hodge试验进行碳青霉烯酶初筛,初筛阳性菌株应用2-巯基丙酸协同法进一步检测金属酶。结果 在研究期间,共纳入非重复铜绿假单胞菌250株,鲍曼不动杆菌132株。菌株标本类型以痰液(55.5%)为主,科室分布以重症监护病房(20.9%)为主。药敏试验显示:铜绿假单胞菌对测试药物敏感性较好,均大于70%以上,对IPM和MEM耐药率较低分别为8.5%、9.5%,然而鲍曼不动杆菌对测试药物耐药率较高达35.2%~77.4%,对IPM和MEM耐药率分别为35.2%、39.1%。多重耐药及泛耐药鲍曼不动杆菌医院感染发生率要高于铜绿假单胞菌分别为44.7%和24.0%;9.1%和2.8%。40株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌,碳青霉烯酶初筛阳性11株占27.5%,金属酶表型阳性2株占18.2%;49株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌,碳青霉烯酶初筛阳性37株占75.5%,金属酶表型阳性1株占2.7%。结论 该院铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物呈现不同耐药性,应加强监测。产碳青霉烯酶是鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类药物主要机制之一。产金属酶铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌检出率较低。     

多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的研究

目的 调查我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的存在情况,为临床合理使用抗菌药物和控制院内感染的发生提供科学依据.方法 用WalkAway 96 PLUS NC31复合板鉴定菌种,用微量稀释法和K-B纸片扩散法测定菌株的药敏情况,PCR法检测OXA23、OXA24、OXA48、OXA55、OXA58、OXA60、OXA64、OXA66基因在46株院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况,对部分阳性基因进行测序.结果 46株多重耐药鲍曼不动杆菌中,41株(89.1%)OXA23组基因阳性,其余基因检测均阴性.结论 我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因之一是产OXA23组碳青霉烯酶.     

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的研究

近年来不动杆菌对碳青霉烯酶的耐药性不断增强，并且呈现多药耐药趋势。研究表明，不动杆菌对碳青霉烯的主要耐药机制是产生了质粒或染色体编码的碳青霉烯酶。为了解本地区鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶的类型，进行了研究。     

碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的了解临床分离的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药情况以及碳青霉烯酶的基因型。方法收集21株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法（K—B法）进行药敏试验,PCR方法检测碳青霉烯酶基因型。结果21株碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星和氨曲南的耐药率分别为35．7％、42．9％和78．6％,对其余抗菌药物耐药率均高达92．9％～100％。21株中检出OXA-23基因阳性17株（80．9％）,OXA-51基因阳性15株（71．4N）,OXA-58基因阳性2株（9．5％）。12株（57．1％）含OXA-23＋OXA-51基因,1株（4．8％）含OXA-23＋0XA-51＋OXA～58基因。上述菌株中均未检出OXA-24、IMP和VIM耐药基因。结论碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌多重耐药情况严重,碳青霉烯酶基因型OXA-23和OXA-51携带率高,且以OXA-23＋OXA-512种基因型同时存在为主。     

泛耐药鲍曼不动杆菌质粒介导碳青霉烯酶的研究

目的 了解泛耐药鲍曼不动杆菌(pan-drug resistant A.baumannii,PDR-AB)的耐药性和产耐药酶的情况及其耐药机制.方法收集泛耐药鲍曼不动杆菌3株,用纸片扩散法进行药敏测定;通过质粒接合试验、质粒提取实验、琼脂糖凝胶电泳、质粒消除试验等方法,研究细菌对碳青霉烯类耐药的分子机制.结果 3株泛耐药鲍曼不动杆菌对包括亚胺培南(IMP)在内的常用抗菌药物均高度耐药.所有菌株接合试验均成功,接合子质粒条带相同.且经SDS质粒消除试验发现其对碳青霉烯类的耐药性随质粒的消除而丢失.结论 碳青霉烯酶的产生是泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药的机制之一;其携带的耐药基因能通过质粒在细菌间传递.     

老年人鲍曼不动杆菌的耐药分析

目的 分析老年人鲍曼不动杆菌的耐药情况.方法 从老年人中分离的鲍曼不动杆菌对10种抗生素的耐药情况,并用PCR方法检测碳青霉烯酶基因.结果 64株鲍曼不动杆菌检测出20株携带碳青霉烯酶OXA-23基因.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素耐药主要是产生碳青霉烯酶,也有其它耐药机制起作用.     

多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因和同源性分析

目的分析多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因型和医院感染鲍曼不动杆菌同源性。方法收集四川省人民医院重症监护病房(ICU)分离的鲍曼不动杆菌复合群76株,用OXA-51基因扩增法鉴定。用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统进行药敏试验,同时用PCR技术分析其产碳青霉烯酶相关耐药基因类型,对其中确定为医院感染的19株鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌用重复序列聚合酶链反应(Rep-PCR)的DiversiLab系统进行同源性分析。结果 76株菌株均显示多重耐药,全部检出携带OXA-51、OXA-23基因,未检出OXA-24、OXA-58、VIM、IMP-1、IMP-4、SIM、NDM-1耐药基因。DiversiLab系统将19株医院感染鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌分为4个亲缘性不同的克隆组及9个亚克隆组。结论该院鲍曼不动杆菌多重耐药现象严重,OXA-23基因可能是其耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。克隆组1为该院鲍曼不动杆菌医院感染的主要流行株。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌医院感染监测分析

目的探讨耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)引发的医院感染分布及耐药性,为寻求更有效的预防和控制方式提供科学依据。方法采用回顾性调查的方法,对2010年至2011年深圳市第二人民医院医院感染病例中鲍曼不动杆菌(ABA)引发的医院感染中CRAB的分布及耐药情况进行分析。结果两年医院感染病例共分离137株CRAB菌株,其中以呼吸道标本的来源居第一位,分离率为67.9%;科室分布以重症监护病房(ICU)分离率最高,为57.7%,其次是神经外科病房,为21.9%。结果显示CRAB菌株呈现高度耐药性,对头孢吡肟、头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦、阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星、环丙沙星等耐药率均在90%以上,而对米诺环素耐药率最低,为2.2%,其次是头孢哌酮/舒巴坦,耐药率为44.5%。结论应继续加强CRAB监测,要重点关注ICU病房及呼吸系统医院感染的预防控制。     

耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌膜蛋白机制研究

目的研究耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌膜蛋白机制并了解其流行型别。方法收集仁济医院、瑞金医院和上海市第六人民医院鲍曼不动杆菌共85株,其中亚胺培南和美罗培南耐药菌49株,敏感菌36株。用细菌基因组回文结构重复序列-聚合酶链反应（REP-PCR）分析其流行型别,PCR扩增检测碳青霉烯类水解酶及金属酶,对阳性扩增菌株进行DNA测序分析,同时用超声波和超速离心法提取细菌的膜孔蛋白并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行分析。结果49株耐亚胺培南和美罗培南鲍曼不动杆菌中,REP-PCR分析结果以A型为主,与敏感菌株存在很大差异;耐药菌株中oxa-51均为阳性,45株为oxa-23阳性;36株敏感菌株中检测到1株oxa-58阳性,29株为oxa-51阳性;金属酶（VIM和IMP-1/4型）均阴性;膜蛋白分析显示,在36株耐药株中38 000附近条带缺失,而在30株敏感株中有17株在相应位置处表达该条带。结论耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌主要以A型流行,产oxa-23水解酶和38 000附近膜孔蛋白条带缺失可能是其主要耐药机制。