革兰阴性杆菌AmpC酶的检测及分析

目的　分析产AmpCβ 内酰胺酶 (简称AmpC酶 )的革兰阴性杆菌检测方法 ,并探讨影响初筛与确诊符合率的因素。方法　采用头孢西丁初筛试验筛选出符合AmpC酶表型筛选条件的菌株 ,再用三维试验确认产AmpC酶菌株并对其进行分析。 结果　 180 1株革兰阴性杆菌中 ,筛选出 32 7株产AmpC酶菌株 ,三维试验阳性菌株 16 1株 ,总检出率 9.0 % (16 1/ 180 1) ,其中阴沟肠杆菌检出最多 (71株 ) ,且头孢西丁和头孢吡肟抑菌圈直径中位数 (P50 )分别为 6 .7和 2 0 .4mm。结论　产AmpC酶菌株已成为医院感染的重要病原菌 ,且以阴沟肠杆菌为主 ;确认产AmpC酶菌株中 ,头孢西丁抑菌圈直径越小 ,头孢吡肟越敏感 ,初筛与确诊符合率越高。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制研究

目的了解我院分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)耐药机制及同源性分型情况。方法收集临床分离耐亚胺培南PA,用K-B法检测28株耐亚胺培南PA对12种抗菌药的敏感性,用肠杆菌科细菌基因间重复序列(ERIC)进行同源性分析,并用PCR法检测外膜孔蛋白OprD2和金属β内酰胺酶(IMP、VIM)基因。结果28株耐亚胺培南PA对其他12种抗菌药的耐药率在14.8%~42.3%。经ERIC-PCR分析后共有11个基因型。其中A型为11株:A1型9株,A2型2株;B型为5株:B1型2株,B2型2株,B3型1株;C型3株;D型2株;E~K型各1株。PCR检测到OprD2基因仅4株,其缺失率为85.7%,28株PA中检测到1株VIM基因,经测序证实为VIM-2型。结论本院耐亚胺培南PA的主要耐药机制为外膜孔蛋白缺失。在外科和高干病房中出现多种基因型的耐亚胺培南PA传播。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产色筛选平板法和聚合酶链反应(PCR)检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

体内诱导耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌膜蛋白质组学研究

目的 研究膜蛋白在耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌中的作用.方法 从同一住院病人体内分别收集碳青霉烯类敏感和耐药的鲍曼不动杆菌各1株.经多序列位点测序分型(MIST)和细菌基因组外回文结构重复序列分型(REP-PCR)分析后,等电聚焦电泳检测其已知碳青霉烯类水解酶的表达,在此进行膜蛋白二维电泳和质谱鉴定分析,并最后应用PABN(Phe-Arg-β-naphthylamide)外排泵抑制剂检测其外排泵相关膜蛋白表达.结果 MIST和REP-PCR结果表明耐药株来源与敏感菌株属于同一型别;等电聚焦电泳在P17.6和P19.0处两株菌中检测到β-内酰胺酶,没有检测到任何已知的碳青霉烯类水解酶;耐约株和敏感株的差异膜蛋白组学鉴定出相对分子质量(M_r)为34×10~3外排泵膜蛋白和0prD与CarO膜孔蛋白,且后续的外排泵抑制剂试验表明,在PAβN存在的情况下,耐药株的亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)由大于32 μg/ml下降到8 μg,/ml.结论 本研究发现外排泵膜蛋白的过度表达伴随OprD和CarO膜孔蛋白的下调是临床分离耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌主要耐药机制.     

上海市浦东部分地区尿路感染常见病原菌的耐药性分析

目的分析2004—2010年上海市浦东部分地区尿路感染患者最常见的病原菌大肠埃希菌和粪肠球菌的耐药性,为临床合理用药提供依据。方法收集2004年10月—2010年9月上海市浦东部分社区医院住院患者、上海交通大学医学院附属仁济医院东部住院及门诊患者临床分离的尿路感染病原菌,用纸片扩散(K-B)法检测并分析其耐药性,采用WHONET 5.3软件和SPSS 13.0统计学软件进行分析。结果从尿路感染患者中段尿标本中分离出4 415株细菌,大肠埃希菌1 968株(45.6%),粪肠球菌736株(16.7%)。耐药率比较:浦东地区社区医院住院患者>仁济医院住院患者>仁济医院门诊患者。大肠埃希菌对氨苄西林和环丙沙星耐药率逐年下降,对头孢噻肟和头孢他啶耐药率及超广谱β内酰胺酶(ESBLs)检出率逐年下降,对庆大霉素、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和头孢吡肟耐药率先升后降;粪肠球菌对左氧氟沙星耐药率逐年上升,对呋喃妥因耐药率先升后降。结论尿路感染最常见病原菌是大肠埃希菌和粪肠球菌;临床经验用药不同可导致耐药性差异;合理有效使用抗生素能改善耐药性产生。     

体内诱导耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌膜蛋白质组学研究

Objective To investigate the role of outer membrane protein in clinical isolated car-bapenem resistance Acinetobacter baumannii. Methods Carbapenem resistance and sensitive strains were collected from the same patient. After MIST and REP-PCR analysis, carbapenemases were detected by isoe-lectric focusing. Different expressed membrane proteins were identified by two-dimension electrophoresis and mass spectrometry analysis. We also used efflux pump inhibitor PAβN(Phe-Arg-β-naphthylamide) to con-firm the phenotype. Results Carbapenem resistance and sensitive strains were attributed to the same pat-tern. At positions of P17.6 and P19.0, two β-lactamases were expressed in two investigated strains, no cabapenemases were detected. Six differential expressed membrane proteins were identified, a 34 × 103 membrane protein that was confirmed by efflux pump inhibitor PAβN experiment (imiponem MIC decreased from far above 32 μg/ml to 8μ/ml) and OprD and CarO. Conclusion Up-regulation of exported protein accompanied with down-regulation of OprD and CarO other than carbaponemases are responsible for carbap-enem resistance in A. baumannii.     

Agilent2100分析仪在鲍曼不动杆菌同源性分析中的应用

目的Agilent2100分析仪在基因组外非编码重复序列片段的聚合酶链反应（REP-PCR）同源性分析中的应用并评估该系统。方法应用REP设计引物并进行PCR扩增,用Agilent2100分析仪DL7500 Labchip芯片进行产物分析。结果51株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中,耐药菌株分为4大型别（A、B、C、D）,其中A型共48株,分别为A1型33株,A2型13株,A3型和A4型各1株;B、C、D型各1株;18株碳青霉烯类敏感菌株中,有2株与A1型别一致,其他菌株型别都不一致。结论基于REP-PCR的Agilent2100同源性分析具有快速、易于操作、高重复性和高分辨率、结果定量处理和多种形式输出等优点,可作为临床同源性分析鉴定和分型的一线工具。     

奇异变形杆菌产超广谱β内酰胺酶基因检测

目的 了解我院2007年1月-2008年6月临床分离119株奇异变形杆菌产ESBLs检出率,并分析研究其耐药性和耐药基因分型. 方法用药敏纸片法(K-B法)对119株奇异变形杆菌进行抗菌药敏试验,并作ESBLs初筛和确证试验.对其中产ESBLs菌用PCR方法检测TEM、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-9组和SHV 5种基因并对其进行测序.结果 119株奇异变形杆菌ESBLs确证试验阳性率为20.2%,产ESBLs菌株对头孢呋辛、头孢唑林、头孢克洛和哌拉西林等耐药率均为100%,对头孢噻肟、庆大霉素和环丙沙星耐药率分别为95.5%、95.2%和86.4%.24株表型确证试验产ESBLs菌中,TEM基因检出率为70.8%,CTX-M-1组基因检出率为54.2%,CTX-M-2组基因检出率为33.3%,未检测到CTX-M-9组和SHV基因.经DNA测序,17株产TEM型ESBLs奇异变形杆菌均属于TEM-1型基因,13株CTX-M-1组和8株CTX-M-2组奇异变形杆菌分别为CTX-M-3型和CTX-M-2型基因,未检测到TEM型ESBLs菌株.结论 奇异变形杆菌中产ESBLs菌株检出率较高,产ESBLs菌对头孢菌素类、喹诺酮类、磺胺类和氨基糖苷类等抗菌药物呈多重耐药性.     

Agilent2100分析仪在鲍曼不动杆菌同源性分析中的应用

目的Agilent 2100分析仪在基因组外非编码重复序列片段的聚合酶链反应(REP-PCR)同源性分析中的应用并评估该系统。方法应用REP设计引物并进行PCR扩增,用Agilent2100分析仪DL7500 Labch ip芯片进行产物分析。结果51株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中,耐药菌株分为4大型别(A、B、C、D),其中A型共48株,分别为A1型33株,A2型13株,A3型和A4型各1株;B、C、D型各1株;18株碳青霉烯类敏感菌株中,有2株与A1型别一致,其他菌株型别都不一致。结论基于REP-PCR的Agilent2100同源性分析具有快速、易于操作、高重复性和高分辨率、结果定量处理和多种形式输出等优点,可作为临床同源性分析鉴定和分型的一线工具。     

金黄色葡萄球菌耐药性监测分析

目的分析临床分离金黄色葡萄球菌的科室分布情况及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率,比较MRSA和甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA）的抗生素耐药情况。方法收集2010年7—2010年9月临床分离的80株金黄色葡萄球菌菌株,分别通过头孢西丁纸片法及聚合酶链反应（PCR）扩增macA基因筛选MRSA,用琼脂稀释法检测MRSA和MSSA对11种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）,比较两者耐药性的差异。结果 80株金黄色葡萄球菌经头孢西丁纸片法检测,筛选出46株MRSA,检出率为57.50%;经PCR检测mecA基因,筛选出45株MRSA,检出率为56.25%。MRSA检出率前3位科室是神经外科（17/45,37.78%）、普外科（7/45,15.56%）和留院观察室（5/45,11.11%）。80株金黄色葡萄球菌对替考拉宁、万古霉素和利奈唑胺的敏感率均为100%,MRSA与MSSA对其余8种抗生素的耐药性差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 MRSA检出率及耐药率均较高,应引起临床各科室和微生物实验室的高度重视,以避免由其引发的大规模院内感染和流行。