大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶检测及其耐药基因分析

目的了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率,分析及研究其耐药性和耐药基因分型。方法用药敏纸片法对142株大肠埃希菌和79株肺炎克雷伯菌进行抗生素药物敏感试验,并对这2种菌株做ESBLs初筛和确证试验。对其中60株ESBLs阳性菌(大肠埃希菌29株,肺炎克雷伯菌31株)用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、CTX-M3种基因并进行测序分型。结果142株大肠埃希菌和79株肺炎克雷伯菌中确证试验阳性率分别为56.3%和41.8%。产ESBLs菌对头孢类抗生素高度耐药,对庆大霉素、环内沙星的耐药率为71.3%~88.5%,对亚胺培南高度敏感(100.0%),对头孢西丁、头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦等的敏感性在63.8%~92.0%。60株ESBLs阳性菌中,TEM、SHV、CTX-M3种基因检出率分别为58.3%、33.3%、66.7%。其中29株大肠埃希菌中,TEM基因检出率为75.8%,SHV基因检出率为0,CTX-M基因检出率为86.2%。31株肺炎克雷伯菌中,TEM基因检出率为41.9%,SHV基因检出率为64.5%,CTX-M基因检出率为48.4%。有35株(58.3%)菌株同时检测到2种以上基因型。序列分析证实TEM扩增产物均属于TEM-1基因,CTX-M扩增产物均属于CTX-M-3基因,而SHV扩增产物则分别属于SHV-1、SHV-5、SHV-11、SHV-12、SHV-28。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的检出率较高,CTX-M-3、SHV-11和SHV-12是我院产ESBLs菌株的主要基因型。     

产OXA-23型碳青霉烯水解酶鲍曼不动杆菌基因研究

目的　了解临床分离 12株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药情况、耐药株来源以及产碳青霉烯酶的类型。方法　收集本院对碳青霉烯类药中介或耐药的鲍曼不动杆菌 12株 ,用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC) ,脉冲场凝胶电泳 (PFGE)分析其同源性 ,并用聚合酶链反应 (PCR)检测分析其耐药基因。结果　 12株细菌均为多重耐药株 ,有 9株对亚胺培南耐药 ,6株对美罗培南耐药。对青霉素类、头孢菌素类、复方磺胺甲唑均耐药 ,对氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药率最低。 12株PFGE图谱分为A、B(B1、B2 ) 2型 ,以A型为主要流行株 (9株 ) ,主要集中在重症监护病房 (ICU)。PCR检出 12株菌株均携带OXA 2 3基因 ,未能检出OXA 2 4基因。结论　本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致 ,该流行株呈多重耐药 ,12株菌株均产OXA 2 3型碳青霉烯酶。     

214株鲍曼不动杆菌最低抑菌浓度及耐药性

目的　了解我院和威尔斯亲王医院鲍曼不动杆菌对16种抗生素的耐药性。方法　收集我院和香港威尔斯亲王医院临床分离的鲍曼不动杆菌共214株,用琼脂稀释法检测鲍曼不动杆菌对16种抗生素的最低抑菌浓度。结果　214株鲍曼不动杆菌对16种抗菌药物的耐药率中以头孢哌酮舒巴坦、亚胺培南和美罗培南耐药率最低,其他抗菌药物耐药率达49. 5% ~73. 4%。上海菌株对替卡西林、哌拉西林、哌拉西林他唑巴坦、替卡西林克拉维酸、氨苄西林舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和复方磺胺甲口恶唑的耐药率均高于香港菌株。其他抗生素耐药率相似。结论　本院鲍曼不动杆菌耐药性高于香港威尔斯亲王医院,需提醒临床医生慎用抗生素,避免多重耐药鲍曼不动杆菌在院内传播。     

体内诱导耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌膜蛋白质组学研究

目的 研究膜蛋白在耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌中的作用.方法 从同一住院病人体内分别收集碳青霉烯类敏感和耐药的鲍曼不动杆菌各1株.经多序列位点测序分型(MIST)和细菌基因组外回文结构重复序列分型(REP-PCR)分析后,等电聚焦电泳检测其已知碳青霉烯类水解酶的表达,在此进行膜蛋白二维电泳和质谱鉴定分析,并最后应用PABN(Phe-Arg-β-naphthylamide)外排泵抑制剂检测其外排泵相关膜蛋白表达.结果 MIST和REP-PCR结果表明耐药株来源与敏感菌株属于同一型别;等电聚焦电泳在P17.6和P19.0处两株菌中检测到β-内酰胺酶,没有检测到任何已知的碳青霉烯类水解酶;耐约株和敏感株的差异膜蛋白组学鉴定出相对分子质量(M_r)为34×10~3外排泵膜蛋白和0prD与CarO膜孔蛋白,且后续的外排泵抑制剂试验表明,在PAβN存在的情况下,耐药株的亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)由大于32 μg/ml下降到8 μg,/ml.结论 本研究发现外排泵膜蛋白的过度表达伴随OprD和CarO膜孔蛋白的下调是临床分离耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌主要耐药机制.     

鲍曼不动杆菌整合子相关耐药基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌整合子流行情况，证实整合子与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系，建立一种快速简便的整合酶聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法收集我院2005年9月至2006年2月临床分离的鲍曼不动杆菌共52株，用纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌耐药性及用整合酶PCR检测其整合子基因。结果在52株鲍曼不动杆菌中，整合酶PCR检测出Ⅰ类整合子33株（63％），未检测出Ⅱ类整合子。统计学分析结果显示，整合子阴性和阳性的鲍曼不动杆菌对各种抗生素的耐药率存在明显差异，前者仅对几种抗生素耐药而后者对多种抗生素耐药。结论我院多重耐药鲍曼不动杆菌中主要为Ⅰ类整合子，整合酶PCR是一种快速、简便、易在临床开展的检测方法，同时也是控制医院感染的有效检测手段。     

性传播性疾病实验室检测结果分析

目的探讨上海浦东新区的性传播性疾病(STD)感染特征.方法对657例患者的淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、梅毒螺旋体抗体检测法(TPPA)检测结果进行分析.结果阳性检出率为梅毒21.4%(141/657)>NG 15.7%(103/657)>CT 9.0%(59/657)>UU 1.8%(12/657),梅毒感染占首位,UU检出率偏低.结论浦东新区的STD感染情况符合我国沿海城市的特征,梅毒感染显著升高应引起重视.UU检出率偏低,可能与试剂质量有关,应加强试剂的质量监控.     

IS256与医院感染表皮葡萄球菌耐氨基糖苷类抗菌药物的关系

目的了解医院感染表皮葡萄球菌对不同类型氨基糖苷类抗菌药物的敏感特征，分析插入序列（IS）256与表皮葡萄球菌耐氨基糖苷类抗菌药物的关系。方法收集2007年2月至2007年7月外科病区中引起医院感染的表皮葡萄球菌48株，利用纸片扩散法测定细菌对4种氨基糖苷类抗菌药物（庆大霉素、奈替米星、链霉素和阿米卡星）药敏特征；构建IS256特异性引物，利用聚合酶链反应（PCR）检测48株细菌中IS256分布状况。结果48株临床分离的表皮葡萄球菌对4种氨基糖苷类抗菌药物的药敏特征分别为：对庆大霉素的耐药率为69％，敏感率为31％；对奈替米星的耐药率为8％，敏感率为79％，中介率为13％；对链霉素的耐药率为42％，敏感率为35％，中介率为23％；对阿米卡星的耐药率为15％，敏感率为75％，中介率为10％。全部临床分离株中，有25株细菌检出IS256。在庆大霉素耐药菌株中，IS256检出率高达70％，与敏感菌相比差异具有统计学意义（P〈0．01）；而对其他3种抗菌药物耐药的菌株中，IS256的检出与耐药无明显相关性（P〉0．05）。结论表皮葡萄球菌临床分离株对氨基糖苷类抗菌药物存在不同程度耐药。IS256与表皮葡萄球菌对庆大霉素耐药密切相关。     

检测常见酵母菌耐药性的纸片法和微量稀释法比较

目的用纸片法和微量稀释法检测痰液标本分离酵母菌的耐药性并比较两者符合率,试找出一种适用于临床实验室的简便方法。方法采用丹麦ROSCO公司抗真菌药敏纸片法检测痰液标本分离的86株常见酵母菌对5种抗真菌药物的敏感性,同时用法国生物梅里埃公司ATB FUNGUS 2念珠菌药敏板条测定4种抗真菌药物的最小抑菌浓度,对结果进行分析。结果两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑2种方法完全符合率分别为95.3%、95.3%和88.4%,未出现一种方法敏感而另一种方法耐药的严重错误现象;对86株痰液标本分离常见酵母菌的耐药性进行分析,两性霉素B、制霉菌素和氟胞嘧啶的敏感率高,分别为95.4%、98.8%、95.3%,伊曲康唑的耐药率最高(15.1%)。结论纸片法和微量稀释法相比有很好的一致性,且抗真菌药敏纸片种类多,便于随时根据临床所需增加单个药敏结果,易于在各临床实验室开展。酵母菌唑类抗真菌药物的耐药现象日益严重,应加强酵母菌的耐药性监测。     

多重聚合酶链反应检测革兰阴性杆菌中质粒介导ampC基因

目的运用多重聚合酶链反应（PCR）检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因,了解该基因在我院的流行情况。方法采用头孢西丁初筛试验筛选出符合头孢菌素酶（AmpC）表型筛选条件的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌共50株,通过热裂解法进行DNA抽提,采用6组ampC特异引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物,进一步DNA测序确定其基因型。结果50株试验菌中有8株为阳性,分别为肺炎克雷伯菌5株,大肠埃希菌3株,基因型为CIT型1株,DHA型4株,EBC型3株。结论我院质粒介导ampC基因型主要为DHA型、EBC型和CIT型。多重PCR是特异性高、简便检测质粒ampC基因型的分子生物学方法。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制研究

目的了解我院分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)耐药机制及同源性分型情况。方法收集临床分离耐亚胺培南PA,用K-B法检测28株耐亚胺培南PA对12种抗菌药的敏感性,用肠杆菌科细菌基因间重复序列(ERIC)进行同源性分析,并用PCR法检测外膜孔蛋白OprD2和金属β内酰胺酶(IMP、VIM)基因。结果28株耐亚胺培南PA对其他12种抗菌药的耐药率在14.8%~42.3%。经ERIC-PCR分析后共有11个基因型。其中A型为11株:A1型9株,A2型2株;B型为5株:B1型2株,B2型2株,B3型1株;C型3株;D型2株;E~K型各1株。PCR检测到OprD2基因仅4株,其缺失率为85.7%,28株PA中检测到1株VIM基因,经测序证实为VIM-2型。结论本院耐亚胺培南PA的主要耐药机制为外膜孔蛋白缺失。在外科和高干病房中出现多种基因型的耐亚胺培南PA传播。