荔枝核总黄酮预防大鼠肝纤维化的初步研究

目的观察荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi chinensis Sonn,TFL)预防大鼠肝纤维化作用及活化肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡的变化,从细胞凋亡角度研究二者之间的关系。方法以二甲基亚硝胺腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型,同时以秋水仙碱为阳性对照,TFL[100、200 mg/(kg.d)]灌胃给药,6周后处死大鼠,放射免疫法(RIA)检测大鼠血清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)蛋白水平,取肝脏同一部位行HE、Masson染色观察大鼠肝纤维化程度,采用α-SMA及TUNEL免疫组化双重染色标记活化HSC凋亡。结果 TFL高剂量组和秋水仙碱组血清肝纤维化指标(HA、LN、PCⅢ)均明显低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,TFL高剂量组可明显增加活化的HSC凋亡指数,改善大鼠肝纤维化程度(P<0.05)。结论荔枝核总黄酮可抑制肝纤维化大鼠HA、LN、PCⅢ表达,诱导HSC凋亡并改善二甲基亚硝胺所致肝纤维化程度,且具有一定量效关系。     

秋水仙碱预防肝纤维化作用的观察

目的观察秋水仙碱预防肝纤维化的作用。方法大鼠腹腔注射CC l48周制作肝纤维化模型,同时给予秋水仙碱,8周后检测血清学指标ALT、AST、HA、PC-Ⅲ、TGFβ-、TNF-α;取肝脏组织行HE及M asson染色观察肝脏病理改变并行SSS计分评估肝纤维化程度。结果秋水仙碱可以明显降低肝纤维化异常升高的血清指标ALT、AST、HA、PC-Ⅲ、TGFβ-、TNF-α等(P<0.05),减轻肝纤维化程度(P<0.05)。结论秋水仙碱具有预防CC l4所致肝纤维化的作用。     

黄芩甙对肝星状细胞凋亡的影响

目的 研究黄芩甙对大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响,探讨黄芩甙抗肝纤维化的机制.方法 采用胶原酶循环灌流法分离肝星状细胞.以不同浓度黄芩甙作用后,通过相差显微镜观察细胞形态变化,用MTT法、溴乙锭/吖啶橙荧光染色法、流式细胞术检测黄芩甙对活化的HSC凋亡的影响.结果 黄芩甙显著促进活化的HSC凋亡,此作用随黄芩甙浓度增加而增强,呈药物浓度依赖关系.结论 黄芩甙可以促进HSC凋亡,减少活化HSC的总量,发挥其抗肝纤维化作用.     

天然牛磺酸对大鼠肝纤维化组织学及血清学的影响

[目的]观察天然牛磺酸对大鼠肝纤维化的影响。[方法]采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,Wistar大鼠随机分正常对照组、模型组、合成牛磺酸组、天然牛磺酸组,应用免疫组化及放射免疫等方法研究天然牛磺酸对大鼠肝组织纤维化的影响。[结果]天然牛磺酸较模型组相比能显著改善大鼠肝组织纤维化程度(P<0.05),促进活化HSC凋亡,提高SOD含量,降低MDA及TGF-β1的含量以及降低血清中ALT,HA,PCⅢ和LN的水平(均P<0.01);天然牛磺酸组促进HSC凋亡优于合成牛磺酸组(P<0.01)。[结论]天然牛磺酸具有一定的抑制肝纤维化作用。     

肝豆灵对铜负荷肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的观察肝豆灵对铜负荷肝纤维化大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影响,探讨肝豆灵防治Wilson病肝纤维化的作用机制。方法将75只大鼠分成空白组、模型组、肝豆灵组、青霉胺组及肝豆灵+青霉胺组,采用喂食硫酸铜饮食复制铜负荷大鼠模型,采用TUNEL法检测HSC的凋亡。结果模型组可见大量HSC增生;与模型组比较,各治疗组HSC数量显著降低(P0.01),HSC凋亡指数显著升高(P0.01);肝豆灵+青霉胺组AI显著高于肝豆灵组和青霉胺组(P0.01)。讨论肝豆灵可促进铜负荷大鼠HSC的凋亡,其与青霉胺联合用药的作用更显著。     

扶正化瘀方对肝纤维化大鼠肝脏明胶酶、TIMP-2和星状细胞凋亡的影响

为研究扶正化瘀方(主药：丹参、桃仁、人工虫草菌丝等)治疗肝纤维化的机理,60只Wistar雄性大鼠。除8只作为正常对照组(A,腹腔注射生理盐水)外,52只大鼠腹腔注射0.5％对二甲基亚硝胺(共4周,每周3次,每次2ml／kg),造成肝纤维化模型,并随机分为3组。模型对照组(B,18只)、扶正化瘀方组(C,17只)、秋水仙碱组(D,17只)。分别给予自来水以及相应中西药物灌胃,共4周。之后,处死大鼠取材检测各项指标。结果：C组大鼠Hyp和肝组织胶原分期下降。纤维化程度减轻;活化HSC减少。凋亡增加;肝组织MMP-2、MMP-9、TIMP-2表达下降。结论：促进活化HSC的凋亡、减少活化HSC的数量,并由此降低MMP-2、MMP-9、TIMP-2的表达、减轻肝纤维化程度,可能是扶正化瘀方的作用机理之一。     

抗纤Ⅰ号对肝星状细胞增殖及相关基因表达的影响

目的:研究抗纤I号对肝星状细胞(HSC)的影响及抗肝纤维化的机制. 方法:用RT-PCR方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)和血小板衍生生长因子(PDGF) mRNA在HSC的表达,用Western Blot检测TGF-β1和PDGF蛋白的表达. 同时,应用MTT法观察HSC的生长曲线. 结果:抗纤I号复方药物血清作用于HSC后,与对照组和秋水仙碱组相比HSC增殖明显被抑制(P<0.05),同时TGF-β1和PDGF蛋白及mRNA的表达明显下降(P<0.05). 结论:抗纤I号复方药物血清能够抑制HSC增殖,下调TGF-β1和PDGF蛋白及mRNA的表达,这可能是该药抗肝纤维化的分子机制之一.     

川芎嗪抑制H_2O_2诱导肝星状细胞活化的研究

目的建立体外氧化应激诱导肝星状细胞(HSC)活化模型,探讨活血化瘀中药活性成分川芎嗪对该HSC活化模型的作用及潜在机制。方法原代大鼠HSC体外给予不同剂量过氧化氢(H2O2)处理并检测HSC活化标志物,筛选出H2O2诱导HSC活化的有效浓度;以MTS法和流式细胞术检测川芎嗪对H2O2刺激下HSC增殖与凋亡的影响;以Real-time PCR和Western blot检测H2O2刺激下HSC中肝纤维化标志物的基因与蛋白表达。结果体外H2O2在5μmol/L剂量下能够显著促进HSC增殖和活化标志物的表达。川芎嗪能够剂量依赖性地抑制H2O2诱导的HSC增殖,诱导其发生凋亡,并降低肝纤维化标志物的基因与蛋白表达;此外,川芎嗪还可抑制基质金属蛋白酶的组织抑制剂-1(TIMP-1)的蛋白表达,从而调控ECM的降解平衡。结论川芎嗪能抑制H2O2诱导的氧化应激状态下的HSC活化,可作为抗肝纤维化潜在药物进一步研究其作用机理。     

以肝星状细胞为靶标的中医药抗肝纤维化实验研究概况

综述了近几年中医药以肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)为靶标防治肝纤维化机制研究的概况。中医药干预HSC的途径主要通过阻断HSC活化,抑制HSC增殖,干扰HSC自分泌及旁分泌活性因子功能,调节胶原代谢,抑制HSC收缩及调控其细胞内信号传导。目前中医药制剂抗肝纤维化的作用仍较弱。随着HSC在肝纤维化中的作用及其机制的阐明．有望能开发出作用更强、疗效确切的抗肝纤维化中药制剂。     

蛋白芯片技术研究吲哚-3-原醇抗肝纤维化的分子机制

目的:利用高通量蛋白芯片技术,观察吲哚-3-原醇(I3C)对活化肝星状细胞(HSCs)内多种蛋白表达的影响,初步探讨I3C抗肝纤维化作用的分子机制。方法:培养永生化肝星状细胞株HSC-T6,该细胞具有活化的HSC表型,用100μmol/L的I3C处理细胞24h。高通量蛋白芯片技术观察HSC中与细胞周期、DNA损伤修复、细胞凋亡、骨架蛋白和细胞外基质等相关的主要蛋白的表达变化,分析变化达2倍以上的蛋白分子。结果:I3C可抑制炎症过程,减少HSC活化;阻滞细胞周期的进展,抑制HSC增殖;抑制NF-"B相关信号通路,促进HSC凋亡;调节细胞骨架和细胞外基质的合成与分解,减少肝脏胶原沉积。结论:I3C可通过多途径发挥其抗肝纤维化作用。     

复方991抗肝纤汤治疗肝纤维化的机制探讨

目的:探讨复方991抗肝纤汤对大鼠肝纤维化的治疗作用及其机理。方法:以四氯化碳诱导大鼠肝损伤及肝纤维化,同时予复方991抗肝纤汤灌胃治疗,5周后对肝组织病理学及波形蛋白(Vimentin)免疫组化进行观察,并测定肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)及血清丙氨酸转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA)水平。结果:与模型组比较,抗肝纤汤组大鼠ALT、HA、MDA水平均明显降低(P<0.01),而ALB活性升高(P<0.01);与秋水仙碱组比较,抗肝纤汤组HA、MDA水平明显较低(P<0.05)。病理证实,抗肝纤汤组能减轻肝损伤及肝纤维化程度,减少Vimentin阳性细胞的表达。结论:复方991抗肝纤汤有良好的抗肝纤维化作用,其机制之一与抗肝细胞过氧化损伤有关。     

福尔肝6号对肝星状细胞增殖的影响

目的：探讨福尔肝6号对肝星状细胞增殖影响的抗肝纤维化作用机理。方法：采用血清药理学实验方法作用于活化的大鼠肝星状细胞（HSC）,以^3H-TdR掺入法观察肝星状细胞增殖。结果：福尔肝6号和秋水仙碱药物血清能抑制肝星状细胞增殖,福尔肝6号药物血清组优于秋水仙碱药物血清组。结论：福尔肝6号药物血清能抑制HSC的增殖,从而减少胶原等ECM合成。     

清肝抑纤饮及其拆方对CCl_4致肝纤维化大鼠HSC的影响

目的:研究清肝抑纤饮及其拆方对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)活化及凋亡的影响,探讨清肝抑纤饮抗肝纤维化的机制。方法:110只大鼠随机分为9组,空白对照组给予普通饲料喂养,自由饮水,其余各组均于四肢及背部皮下注射40%CCl4-花生油溶液,每周注射两次,同时给予中药煎剂灌胃,共8周。8周后处死大鼠,免疫组织化学法观察α-平滑肌收缩蛋白(α-SMA)表达,TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)法检测HSC凋亡。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠肝窦周围α-SMA阳性表达细胞明显增多,且表达增强;清肝抑纤饮组、清热解毒+凉血活血组的肝窦周、中央静脉及汇管区周围见棕黄色颗粒,着色较淡,体积较小,两组灰度值均大于模型组,分别与模型组比较有显著性差异(P<0.01,P<0.05);各治疗组HSC凋亡率均高于模型组,以清肝抑纤饮全方组凋亡率最高,但与模型组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:清肝抑纤饮在肝纤维化的早期阶段用药对HSC的影响主要以抑制其活化为主,有促进活化的HSC凋亡的趋势,清热解毒与凉血活血药物的配伍在抑制HSC活化过程中起主要作用。     

青蒿琥酯对肝纤维化相关分子机制的影响研究进展

肝纤维化是各种慢性肝炎发展为肝硬化必经的病理阶段,同时也是向肝癌发展的中间环节。肝星状细胞(HSC)是肝纤维化发生、发展的关键细胞,抑制HSC的活化与增殖是预防和治疗肝纤维化的主要策略之一。青蒿琥酯是青蒿素的衍生物,其具有抗肝纤维化、肝硬化和肝癌的作用,能够使活化的HSC发生凋亡,促凋亡机制是通过抑制细胞外基质的产生以及激活或抑制一些信号通路从而发生一定的级联效应。目前青蒿琥酯可作用于HSC中的信号通路有:转化生长因子β_1/Smad、核因子κB、Wnt/β-catenin及肿瘤坏死因子α介导的信号通路等。     

肝星状细胞激活的分子机制与抗肝纤维化治疗

肝星状细胞(HSC)激活是肝纤维化发生的中心环节,其激活过程可分为始动阶段(旁分泌刺激和转录调控因素启动级联瀑布式的细胞反应)和持续阶段(旁分泌或自分泌刺激和细胞外基质重建共同维持HSC活化的表型反应)。肝脏中多种细胞和细胞因子参与调节了HSC的激活过程。活化型HSC的表型变化主要包括细胞增殖、收缩和纤维形成等。抗肝纤维化治疗策略主要包括调控HSC活化增殖或促其凋亡、抑制胶原合成或促其降解、细胞因子治疗和间充质干细胞治疗等。     

MicroRNA-484通过靶向肝星状细胞中Fis1调控肝纤维化进程

目的 探讨微RNA-484 (miR-484)对肝纤维化发生和发展过程中关键细胞肝星状细胞(HSC)的作用和影响.方法 以前期芯片筛选结果为基础,通过细胞转染人为干预miR-484在HSC-T6细胞株中的表达.利用qPCR、蛋白质印迹法检测肝纤维化及凋亡相关指标的表达变化;以Annexin V-FITC/PI双染细胞后,用流式细胞仪检测miR-484对细胞凋亡的影响.结果 与对照组相比,人为下调miR-484在HSC-T6细胞株中的表达后,其靶基因Fis1及促凋亡因子caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达均升高(P＜0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达下降(P＜0.05);流式细胞仪检测到HSC-T6细胞凋亡率升高[(32.81±3.21)％ vs (57.54±6.76)％,P＜0.05];同时肝纤维化相关指标α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白水平均下调(P＜0.05).结论 miR-484通过靶向Fis1抑制HSC凋亡、促进其活化,从而促进肝纤维化的发生和发展.     

脂联素与肝纤维化

肝纤维化是各种肝细胞毒性物质对肝脏慢性或重复性的损伤所引起的肝脏病理改变,目前研究认为,肝星状细胞(HSC)激活是肝纤维化的核心。研究发现,脂联素可能通过抑制转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等的作用及减少α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达等机制维持HSC静息状态、抑制HSC的活化及其增殖与迁移,并促进活化HSC凋亡,从而抑制肝纤维化发生发展,推测脂联素及其激动剂可能成为治疗肝纤维化的新药物。     

柔肝抑纤饮对实验性肝纤维化大鼠肝组织超微结构的影响

目的:观察柔肝抑纤饮抗肝纤维化的疗效,分析并探讨其抗肝纤维化的机制。方法:建立Wistar大鼠CCl4损伤性肝纤维化模型,HE染色半定量、Masson三色胶原染色半定量,电镜进行肝组织病理学观察。同时检测血清肝功能指标(ALT、TP、ALB、GLB、A/G)。结果:经柔肝抑纤饮治疗后,实验性肝纤维化大鼠肝功能指标明显改善。治疗组降低GLB水平好于预防组(P<0.05),可明显降低血清中异常升高的ALT水平,提高A/G比值;电镜观察发现,治疗组肝细胞变性程度明显减轻,综合积分与模型组比较差异具有显著性意义;胶原半定量积分优于模型组;治疗组肝细胞变性程度、形态、功能均优于模型组,肝窦基底膜部分保持完整性、连续性,毛细血管化程度轻于模型组。结论:柔肝抑纤饮具有保护肝细胞、拮抗肝星状细胞的活化增殖、增加胶原降解、增加纤维化逆转因素、维持肝窦的完整性及通透性等作用,从而发挥抗肝纤维化作用。     

荔枝核总黄酮抗大鼠肝纤维化的作用及其对核转录因子-κB p65表达的影响

目的观察核转录因子-κB(NF-κB)p65在实验性大鼠肝纤维化肝组织中的表达,探讨荔枝核总黄酮(TFL)抗肝纤维化的作用机制。方法以二甲基亚硝胺腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型;造模同时,模型组以生理盐水、TFL组以TFL[200 mg/(kg·d)]、秋水仙碱组以秋水仙碱灌胃给药;6周后处死大鼠,抽取下腔静脉血检测AST、ALT,取肝脏同一部位行HE染色观察大鼠肝纤维化程度,采用免疫组化检测各组肝组织NF-κB p65的表达。结果 TFL组和秋水仙碱组血清AST、ALT均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,TFL组NF-κB p65的表达明显抑制,大鼠肝纤维化程度改善(P<0.05)。结论 TFL可减轻肝损伤及其纤维化程度,抑制NF-κB p65的表达,这可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。     

褪黑素保护大鼠肝纤维化的机制初步研究

目的研究褪黑素保护大鼠肝纤维化的机制。方法用四氯化碳(CCl4)制造大鼠肝纤维化模型,同时予10mg/(kg.d)褪黑素腹腔注射;在造模的第3月末处死大鼠,用α-SMA单抗标记活化的肝脏星状细胞(HSC),并计算其数量,同时进行肝脏纤维化评分。结果褪黑素可以显著降低CCl4诱导大鼠肝脏纤维化评分,减少活化的HSC数量。结论褪黑素是通过抑制HSC的活化达到保护CCl4诱导的大鼠肝纤维化作用。