miR-1187靶向调控Arhgef9在七氟醚致海马神经元凋亡中的作用

目的探讨miR-1187靶向调控Rho鸟苷交换因子-9（Arhgef9）在七氟醚致小鼠海马神经元凋亡中的调控作用。方法通过基因芯片技术测定小鼠海马miRNA。利用miRWalk数据库对差异miRNA的靶基因进行预测。为验证预测结果与实际情况是否相符,同步进行mRNA水平的表达谱芯片实验,筛选出与差异miRNA确有互作关系的mRNA。为说明miRNA与mRNA的互作关系,进一步利用David数据库对靶基因进行注释,最终形成miRNA与mRNA共表达网络。采用RT-PCR法检测海马神经元miR-1187mRNA相对表达量,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测miR-1187转染后海马神经元存活率,荧光素酶实验检测Arhgef9是否为miR-1187的靶基因。结果海马神经元凋亡主要与9个miRNA相关,即miR-101b-3p、miR-1187、miR-188-5p、miR-219a-5p、miR-338-3p、miR-425-5p、miR-467a-3p、miR-705、miR-92a-3p。miR-1187在七氟醚诱导海马神经元损伤模型中的相对表达量明显降低（P＜0.05）,miR-1187高表达质粒（miR-1187mimics）转染后,海马神经元存活率明显升高（P＜0.05）。miR-1187与Arhgef9存在靶向关系,miR-1187通过与Arhgef9基因mRNA的3忆非翻译区互补配对来发挥作用。结论miR-1187是海马神经元抗细胞凋亡的抑制因子;高表达miR-1187通过靶向调节Arhgef9mRNA表达来抑制海马神经元凋亡的发生。     

miR-130a-3p在胶质母细胞瘤中的表达与靶基因分析

目的 探索miR-130a-3p在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)细胞中的表达水平,预测并分析miR-130a-3p的靶基因.方法 采用实时聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测GBM细胞和正常人胶质细胞中miR-130a-3p的相对表达水平.选择miRanda、DIANA、TargetScan和PicTar工具预测miR-130a-3p的靶基因,对靶基因进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和通路富集分析,基于STRING数据库进一步建立蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)并利用Cytoscape软件进行可视化分析.结果 相对于正常人胶质细胞,miR-130a-3p在GBM细胞中的表达水平显著下调.四种预测工具取交集后共筛选出302个靶基因.GO富集分析表明miR-130a-3p靶基因主要参与转录调控、蛋白泛素化、Wnt信号、miRNA介导基因沉默、DNA损伤反应、细胞迁移等生物学过程和分子功能.通路富集分析发现miR-130a-3p靶基因主要富集于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路、磷脂酰肌醇信号通路、内吞、自噬调节、胶质瘤、FoxO信号通路等.结论 miR 130a 3p在GBM细胞中低表达,其靶基因涉及多个肿瘤发生相关的信号通路,为进一步阐明其在GBM发生过程中的调控机制以及开发靶向治疗提供参考.     

肝细胞癌组织中调控CDK2基因的靶miRNA的表达

目的通过筛选肝细胞癌及癌旁组织中microRNA差异表达谱探讨肝细胞癌组织中调控CDK2基因的靶miRNA。方法通过芯片分析临床收集的3例肝细胞癌与癌旁组织样本的miRNA差异表达谱,与miRNA生物信息数据库反向预测的miRNA进行比对,通过实时荧光定量PCR初步确定调控肝癌细胞CDK2基因表达的靶miRNA。利用FUNRICH软件对差异表达的miRNA进行GO富集分析和转录因子分析。结果通过比对芯片结果和反向预测结果筛选出9个miRNA与芯片结果一致,经qRT-PCR验证确定miR-18a-5p、miR-222-3p、miR-200a-3p、miR-375与临床样本的miRNA差异表达谱上/下调一致,其中miR-18a-5p、miR-222-3p表达上调,miR-200a-3p、miR-375表达下调。GO富集分析显示转录因子活性、细胞黏附分子活性、细胞核与胞质、转移酶活性富集程度高;筛选到5个与miRNA结合能力强的转录因子EGR1、SP1、POU2F1、SP4、FOXA1。结论初步确定miR-200a-3p、miR-375为肝细胞癌组织中调控CDK2基因的靶miRNA,与CDK...     

miR-340在膀胱尿路上皮癌中的表达及其靶基因预测的生物信息学分析

目的探讨miR-340在膀胱尿路上皮癌中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析,为miR-340在膀胱尿路上皮癌发生中的作用机制研究提供理论基础。方法采用miRNA芯片技术检测膀胱尿路上皮癌及正常膀胱黏膜组织中miRNA表达谱,用实时定量PCR法进行验证,挑选具有显著表达差异的miR-340为进一步研究对象,利用生物信息学方法,对miR-340的靶基因进行预测,并对其靶基因进行基因本体（GO）功能富集分析及KEGG信号转导通路富集分析。结果miRNA表达谱芯片、实时定量PCR法均提示miR-340在膀胱尿路上皮癌中较癌旁正常膀胱组织中表达明显降低。miR-340预测靶基因集合功能富集于细胞黏附（celladhesion）、生物黏附（biologicaladhesion）和细胞间黏附（cell-celladhesion）等,KEGG通路分析涉及癌通路（pathwaysincancer）和细胞周期通路（pathwaysincellcycle）等。结论miR-340在膀胱尿路上皮癌中呈低表达,miR-340预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中。     

肾透明细胞癌相关特异miRNAs的筛选及分子网络调控机制分析

目的 miRNAs(microRNAs)是肿瘤重要的调节因子,对细胞增殖、细胞周期的控制、逃避细胞凋亡、组织侵袭及转移、血管形成、无限复制潜力均起到重要的调节作用。文中对肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)与癌旁正常肾组织的差异miRNAs表达谱进行分子网络调控机制分析,找到关键miRNA并验证其靶基因。方法通过TargetScan预测得到差异miRNA调控的所有靶基因,并在筛选后利用GO显著性功能分析和KEGG Pathway显著性分析,构建差异miRNA与靶基因的调控网络。筛选关键miRNA及其靶基因,对miR-199a-5p调控的靶基因进行验证。结果 miR-22、miR-199a-5p、miR-429是调控网络的关键miRNA。转化生长因子β受体1(transforming growth factor-βreceptor 1,TGFBR1)、jun B原癌基因(jun B proto-cologene,JunB)是miR-199a-5p的靶基因。结论 miR-199a-5p通过抑制TGFBR1、JunB的表达在ccRCC进展过程中起到重要的调控作用。     

当归挥发油对自发性高血压大鼠心肌组织中微小RNA差异表达谱的影响

目的：探讨当归挥发油对自发性高血压大鼠（SHRs）心肌组织中微小RNA（miRNA）表达谱的影响,阐明当归挥发油发挥作用的可能机制。方法：将SHRs分为模型组、卡托普利组和当归组,取同周龄的正常Wistar大鼠作为对照组,采用无创套尾法测定大鼠尾动脉收缩压,给药4周后,采用Affymetrix miRNA 4.0 芯片测定心肌组织中miRNA表达谱,采用京东基因与基因组百科全书（KEGG）富集法分析差异表达的miRNA靶基因。结果：给药前模型组大鼠收缩压明显高于对照组（P < 0.05）,连续服药1~4周后,卡托普利组和当归组大鼠收缩压明显低于模型组（P < 0.05）。与模型组比较,当归组大鼠差异表达的miRNA29个,其中表达上调的miRNA13个（Ratio>2.0,P < 0.05）,表达下调的miRNA16个（Ratio<0.5,P < 0.05）。KEGG富集分析,miR-19a、 let-7i和miR-181c与胰岛素信号通路有关联（P < 0.05）,let-7i 、miR-181a和miR-455与血管内皮生长因子（VEGF）信号通路调控有关联（P < 0.05）,miR-122、miR-181a、miR-200b、miR-181c、let-7i和miR-19a与细胞凋亡有关联（P < 0.05）。结论：当归挥发油可降低SHRs血压 ,对SHRs心肌组织中miRNA表达谱产生影响,可能通过调节胰岛素信号通路及VEGF信号通路相关miRNA发挥血压调节作用。     

胃癌中P53诱导相关微小RNA靶基因预测及生物信息学分析

目的：利用生物信息学预测胃癌中 P53诱导相关微小 RNA（miRNA）的靶基因及功能。方法通过胃癌的限定,用在线数据库mir2disease、Gene Expression Atlas缩小目的基因范围。利用在线预测软件miRNA 靶基因数据库 miRGen（v3．0）预测目标miRNA的靶基因。通过在线软件DAVID和Pathway Miner对预测的靶基因数据集进行功能富集和信号转导通路分析。结果胃癌中P53诱导相关miRNA包括miR-21、miR-25、miR-103等,预测miR-21靶基因共1090个,其中在胃癌中下调共115个;Pathway Miner分析显示miR-21的靶基因涉及黏附连接、胰岛素信号转导通路、细胞凋亡、钙信号转导通路、JAK-STAT信号转导途径等。结论 miR-21靶基因涉及多个肿瘤发生、发展相关信号通路。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓微小RNA-340-3p的表达情况及生物信息学分析

目的 探讨微小RNA(miR)-340-3p在骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中的表达情况,并应用生物信息学技术分析其靶基因及功能.方法 利用基因表达谱芯片结合分层聚类在9例MDS患者和6例健康正常人骨髓中筛选出差异表达的miR-340-3p,并利用miRBase和Miranda软件预测其靶基因,并对预测的靶基因进行功能富集和信号通路分析.结果 与健康正常人比较,miR-340-3p在MDS患者骨髓中表达下调(P<0.05).获得共同76个潜在靶基因,包括BANP、KIF2C、DIDO1、GRM1等.基因本体(GO)分析显示靶基因主要富集于细胞生物学、分子功能、细胞组分,信号通路分析显示其主要富集于FoxO信号通路、NOD样受体信号通路、造血细胞系、Gap连接等信号转导通路等.结论 miR-340-3p在MDS患者骨髓中表达下调,其可能通过靶向负向调控下游的靶基因而参与MDS的发生发展.     

唐氏综合征胎儿羊水外泌体miRNA差异表达谱分析

目的 探讨胎儿羊水外泌体中miRNA在唐氏综合征（DS）胎儿生长发育中的作用。方法 收集DS胎儿羊水和正常胎儿羊水,分别提取羊水外泌体 miRNA。设置对照组：正常胎儿羊水外泌体 miRNA;DS 组：DS 胎儿羊水外泌体 miRNA。运用miRNA测序技术筛选出两组中差异表达的miRNA,并对差异表达的miRNA进行靶基因预测及功能分析（GO）和信号通路分析。从差异表达的miRNA中挑选3个与DS表型最相关的miRNA进行qPCR验证。通过双荧光素酶报告基因技术验证let-7d-5p对BACH1的靶向调控作用。结果 和对照组相比,DS组中存在15个差异表达的miRNA,其中表达上调的miRNA有7个,表达下调的miRNA有8个。靶基因预测结果发现差异表达的miRNA可以靶向调控17种与DS相关的基因。GO分析发现靶基因主要功能与蛋白结合、蛋白转运、ATP结合、转移酶活性、突触等有关。Pathway通路分析发现富集显著的功能通路与神经系统发育有着密切的联系。qPCR验证结果发现与对照组相比,DS组中miR-140-3p、let-7d-5p水平显著降低（P<0.05）,与测序结果一致;而DS组中miR-4512水平较对照组显著增加（P<0.05）,与测序结果相反。双荧光素酶报告基因检测结果证实let-7d-5p可靶向调控BACH1的表达。结论 羊水外泌体let-7d-5p可能通过调控BACH1的表达促进DS胎儿大脑氧化应激事件。     

食管鳞癌中miRNA-mRNA调控网络的构建和信号通路分析

目的：构建食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中miRNA-mRNA的调控网络,对候选基因进行基因本体（gene ontology,GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析,为ESCC发生发展的分子机制研究提供一定的理论指导。方法：从GEO数据库中筛选ESCC组织中的差异表达miRNA（differentially expressed miRNA,DE miRNA）和差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）,并用在线数据库预测调控DE miRNA的靶基因。对DE miRNA的靶基因及DEGs取交集得到候选基因,使用DAVID在线数据库对其进行GO富集分析和KEGG分析,并运用GEPIA网站进行生存分析。结果：筛选出4个DE miRNA（miR-34c-5p、miR-944、miR-133b、miR-139-5p）,分析DE miRNA在ESCC组织和正常食管组织中的表达情况。候选基因GO富集分析表明其主要参与细胞增殖、凋亡、迁移等过程,KEGG分析表明其主要富集在PI3K/AKT、Rap1、P53信号通路,生存分析发现候选基因中的COL1A1、SOX4与食管癌较差的无病生存期（disease-free survival,DFS）有关。结论：miR-34c-5p、miR-944、miR-133b和miR-139-5p在ESCC中存在差异表达,可能在食管鳞癌的发生发展中发挥作用,且候选基因COL1A1、SOX4与食管癌较差的无病生存期相关。     

肺鳞癌中miR-144靶基因预测及其生物信息学分析

目的:分析miR-144靶基因在肺鳞癌中参与的信号通路生物过程。方法:分析The Cancer Genome Atlas网站中肺鳞癌患者的miR-144的表达量及生存曲线;预测miR-144靶基因并通过表达数据筛选影响肺鳞癌进展基因;BinGo软件对候选靶基因进行GO注释分析,利用DAVID网站预测其信号通路。结果: miR-144表达量高有利于延长肺鳞癌患者生存时间。综合4个靶基因数据库发现miR-144有72个预测结果,其中45个在肺鳞癌患者癌与癌旁组织间表达存在差异。其中部分候选靶基因参与胞核及星形微管的组成,参与上皮细胞增生、RNA合成。通路分析显示部分候选靶基因参与Ras、Wnt、Hippo等信号通路。结论:45个miR-144候选靶基因通过多条信号通路及生物过程调节细胞生命活动,影响肿瘤患者生存预期。     

miR-182-5p在阿尔兹海默病的表达及生物信息学分析

目的探究miR-182-5p在阿尔兹海默病（AD）病人血清中的表达水平,并采用生物信息学方法对其进行靶基因预测及功能分析。方法从GEO数据库获取AD相关miRNAs芯片数据集GSE104514,利用GEO2R在线工具分析差异表达的miRNAs,选择差异最大的miR-182-5p进行深入研究。收集AD病人28例（AD组）及健康者15名（对照组）,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清中miR-182-5p的表达水平。通过miRBase数据库分析miR-182-5p在不同物种间的保守性;运用miRcode、miRDB、miRWalk和Target Scan数据库预测miR-182-5p靶基因,并取交集靶基因;应用DAVID和KOBAS数据库对miR-182-5p靶基因进行GO功能及KEGG信号通路富集分析。结果AD小鼠脑组织的miR-182-5p表达明显高于野生型小鼠（P < 0.05）,AD病人血清中的miR-182-5p表达量（2.022±1.225）明显高于对照组（0.486±0.442）（P < 0.01）;保守性分析显示miR-182-5p成熟体序列在不同物种间高度保守;在线数据库预测获得miR-182-5p潜在的交集靶基因共23个。GO富集结果显示,miR-182-5p靶基因主要参与于锌离子的结合、生物过程的负调控、杂环类化合物的结合、主要代谢过程的调节、GTPase的活性、膜的内在成分的组成、大脑的发育、部分细胞形态的发生、转移酶的活性、信号的调节、泛素结合酶的结合、耳蜗的发育、组蛋白H4-K16的乙酰化作用、咽系统的发育、神经元演化方向的规范、大脑皮层细胞的迁移、大脑皮层细胞的放射状定向迁移等多个生物学过程。KEGG分析结果显示,miR-182-5p靶基因主要参与肾集合管的酸分泌、醚脂类代谢、志贺菌病、细胞的黏附、细菌侵袭上皮细胞等5条信号通路。结论miR-182-5p在AD病人血清中高表达,其可能通过多条信号通路参与AD的发展过程。     

血浆miR-1181在2型糖尿病患者表达水平变化和意义

  目的  miRNA可作为预测糖尿病发生和发展的生物标志物，探索miR-1181在2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus，T2DM)患者的表达情况。  方法  运用Agilent miRNA芯片对T2DM患者（n = 5）和正常对照组（n = 5）血浆样本进行差异筛选，荧光定量PCR技术（quantitative Real Time PCR，qRT-PCR）验证出差异表达的miRNA；通过生物信息学方法预测其靶基因并绘制miRNA-靶基因-代谢通路关系网络图，扩大样本检测血浆中差异表达的miRNA:miR-1181和靶基因MAP2K2、MAPK12表达水平。  结果  miRNA芯片筛选和qRT-PCR验证出与T2DM相关的差异表达miRNA:miR-1181，生物信息学分析得出miR-1181靶基因有CCND1、PI3KR2、MAP2K2和MAPK12；T2DM患者血浆中 miR-1181的表达水平明显下降（P < 0.001），而靶基因MAPK12 mRNA的表达水平明显升高（P < 0.01）。  结论  2型糖尿病患者血浆miR-1181水平降低，可能与其抑制靶基因MAPK12对MAPK通路影响有关。     

MiR-148a-3p通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞转移

目的:MicroRNA (miRNA/miR)参与结肠癌各种生物学过程。目前,miR-148a-3p在结肠癌中的作用还不完全清楚。本研究旨在探讨miR-148a-3p对结肠癌细胞转移及侵袭能力的影响及机制。方法:实时定量PCR （qRT-PCR）检测结肠癌细胞系中miR-148a-3p及SRPK2 mRNA的表达,Western blot检测SRPK2 蛋白的表达。使用miR-148a-3p mimic, miR-148a-3p inhibitor调节HCT-116及SW480细胞中miR-148a-3p的水平。通过划痕及transwell实验检测miR-148a-3p对结肠癌细胞迁移及侵袭能力的影响。生物信息学分析预测miR-148a-3p的靶点,荧光素酶报告实验验证。Western blot及qRT-PCR检测miR-148a-3p对结肠癌细胞上皮-间质转化及SRPK2表达的影响。结果:与正常结直肠粘膜细胞FHC相比,结肠癌细胞系中miR-148a-3p水平降低（P<0.05）。结肠癌细胞中miR-148a-3p过表达可以明显抑制结肠癌细胞转移及侵袭能力（P<0.05）。相反的,敲低miR-148a-3p结肠癌细胞转移及侵袭能力增强（P<0.05）。荧光素酶报告系统结果提示SRPK2是miR-148a-3p的直接作用靶点。过表达miR-148a-3p可以抑制SRPK2在结肠癌中的表达（P<0.05）,但是敲低miR-148a-3p时SRPK2表达明显增高（P<0.05）。结论:MiR-148a-3p可能通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞的转移及侵袭能力。MiR-148a-3p可能成为诊断和治疗结肠癌的靶点之一。     

宫颈鳞状细胞癌组织中miRNA差异性表达及其靶基因作为诊断标志物的意义

目的: 采用生物信息学方法研究宫颈鳞状细胞癌(CESC)组织中差异性表达的miRNA并预测其靶基因,以期找到影响CESC发生发展及可用于肿瘤标志物的miRNA。 方法: 癌症基因组图谱 (TCGA)数据库中下载3例CESC组织及3例配对正常组织,用统计学方法对差异性表达的基因及miRNA进行筛选,通过靶基因预测网站对差异性表达的miRNA进行靶基因预测,运用KEGG数据库分析靶基因参与的肿瘤相关信号通路。 结果: 与同源正常组织比较,CESC组织有18个miRNA和1180个基因有差异性表达(P<0.05),其中有15个miRNA和411个基因上调,3个miRNA和770个基因下调,采用靶基因预测网站有7个miRNA与预测到的靶基因呈负向调控关系,6个上调miRNA的靶基因下调,1个下调miRNA的靶基因上调,靶基因集中在Wnt、MAPK、P53和cAMP等肿瘤相关信号通路。 结论: 差异性表达的miRNA包括hsa-miR-27a、hsa-miR-148b、hsa-miR-185、hsa-miR-200a、hsa-miR-200b、hsa-miR-221和hsa-mir-133b,差异性表达的miRNA及其靶基因在CESC的发生发展过程中起重要作用,有可能成为诊断CESC的肿瘤标志物。     

MiR-199a-3p在胰腺癌中的表达水平及生物信息学分析

目的:探讨miR-199a-3p在胰腺癌中的表达水平及作为胰腺癌的诊断指标的意义,并进行生物信息学分析。方法:从GEO数据库收集胰腺癌和正常胰腺组织中miR-199a-3p的数据。汇总数据绘制受试者工作特征曲线,进行Meta分析,采用生物信息学方法预测miR-199a-3p的靶基因,并对靶基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。结果:收集到6个GEO数据,4个数据的ROC曲线表现出显著的诊断意义,Meta分析结果显示miR-199a-3p在胰腺癌中表达水平高于正常胰腺组织,差异有统计学意义（P<0.001）。预测到221个miR-199a-3p潜在的靶基因,其功能主要富集在基因表达的调控,细胞代谢的调控,蛋白质域特异性结合等生物学过程（P<0.001）,KEGG分析结果显示主要集中在PI3K-Akt通路、黏着斑、肌动蛋白细胞骨架调控、癌症通路、Hippo通路、鞘脂通路、ErbB通路、MAPK通路等通路（P<0.05）。结论:相比正常胰腺组织,miR-199a-3p在胰腺癌为高表达,可作为胰腺癌的一个潜在诊断指标,并可能在胰腺癌的发生发展中起到重要作用,为胰腺癌的研究和治疗提供了新的方向。     

MicroRNA meta-signature of oral cancer: evidence from a meta-analysis

Aim: It was the aim of the study to identify commonly deregulated miRNAs in oral cancer patients by performing a meta-analysis of previously published miRNA expression profiles in cancer and matched normal non-cancerous tissue in such patients.

Material and methods: Meta-analysis included seven independent studies analyzed by a vote-counting method followed by bioinformatic enrichment analysis.

Results: Amongst seven independent studies included in the meta-analysis, 20 miRNAs were found to be deregulated in oral cancer when compared with non-cancerous tissue. Eleven miRNAs were consistently up-regulated in three or more studies (miR-21-5p, miR-31-5p, miR-135b-5p, miR-31-3p, miR-93-5p, miR-34b-5p, miR-424-5p, miR-18a-5p, miR-455-3p, miR-450a-5p, miR-21-3p), and nine were down-regulated (miR-139-5p, miR-30a-3p, miR-376c-3p, miR-885-5p, miR-375, miR-486-5p, miR-411-5p, miR-133a-3p, miR-30a-5p). The meta-signature of identified miRNAs was functionally characterized by KEGG enrichment analysis. Twenty-four KEGG pathways were significantly enriched, and TGF-beta signaling was the most enriched signaling pathway. The highest number of meta-signature miRNAs was involved in the sphingolipid signaling pathway. Natural killer cell-mediated cytotoxicity was the pathway with most genes regulated by identified miRNAs. The rest of the enriched pathways in our miRNA list describe different malignancies and signaling.

Conclusions: The identified miRNA meta-signature might be considered as a potential battery of biomarkers when distinguishing oral cancer tissue from normal, non-cancerous tissue. Further mechanistic studies are warranted in order to confirm and fully elucidate the role of deregulated miRNAs in oral cancer.     

卒中后抑郁患者血浆中miR-30a-5p的差异性表达及其作用机制的生物信息学预测

目的 探讨卒中后抑郁（PSD）患者miR-30a-5p的表达差异性及其在PSD中的诊断价值,基于生物信息学方法,分析其可能作用机制。方法 检索PubMed数据库,利用VENNY2.1在线软件获取到目标microRNA。贯续性纳入2018年10月~2019年3月就诊于皖南医学院弋矶山医院神经内科卒中病房并首次诊断为急性脑梗死的患者,收集患者入院时人口统计学资料、卒中危险因素、既往卒中病史、美国国立卫生研究院脑卒中量表（NHISS）评分等临床基线资料及影像学资料,并与入院当天留取研究对象外周静脉血5 mL。随访3个月根据Hamilton 抑郁量表（HAMD-17）行抑郁程度的评价,对于评分值≥7 者按照《美国精神病学会叶精神疾病诊断与统计手册》第4 版（DSM-IV）诊断标准诊断抑郁,分为PSD组（n=11）和non-PSD组（n=25）。使用qRT-PCR法检测卒中后抑郁患者（PSD）和非卒中后抑郁患者（NPSD）外周血miR-30a-5p表达水平,利用ENCORI数据库和CTD（Comparative Toxicogenomics Database）数据库共同预测和筛选miR-30a-5p调控的抑郁相关可能作用的靶基因,通过生物信息学方法对靶基因的可能作用机制进行进一步分析。结果 通过交叉筛选得到同时与卒中和抑郁相关的 miR-30a-5p,临床样本 qRT-PCR 验证 miR-30a-5p 在 PSD 和 non-PSD 组有差异性表达（2.462±0.326 vs 1±0.126,P<0.0001）。ROC曲线分析提示miR-30a-5p预测PSD的AUC=0.869（95%CI,0.745-0.993,P=0.0005）,cut-off值为1.597,对应的敏感性和特异性分别为0.727、0.840。靶蛋白主要作用的生物学过程包括信号转导、细胞间通讯、核酸碱基、核苷、核苷酸和核酸代谢的调节;KEGG通路富集分析发现,靶蛋白主要作用于神经营养素信号通路、轴突导向信号通路、胰岛素信号传导系统;经过CytoHUBBA分析得出可能与卒中后抑郁相关的前20种HUB基因。结论 外周血miR-30a-5p在卒中后抑郁患者和非卒中后抑郁患者中存在差异性表达,可以作为诊断PSD的临床标志物,其可能是通过神经营养素信号通路、轴突导向信号通路、胰岛素信号传导系统来影响PSD的发生。     

二氧化硅刺激的巨噬细胞源性外泌体miRNA表达谱差异

目的：分析游离二氧化硅(silicon dioxide,SiO2)粉尘刺激的RAW264.7巨噬细胞源性外泌体miRNA的表达差 异。方法：以SiO2(200 mg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞48 h(exo_48 h组)后收集上清液,超速离心法提取上清中的外泌 体;使用透射电镜扫描、纳米微粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术、蛋白质印迹法鉴定外泌体;提 取外泌体miRNA行高通量测序,比较exo_control组(以不含SiO2粉尘的培养基孵育RAW264.7巨噬细胞48 h)与exo_48 h 组外泌体miRNA表达差异;采用miRanda,TargetScan和starBase 3个软件进行差异miRNA的靶基因预测,对靶基因进行 GO(gene ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析,进一步分析基因的生物学功能。结果：在透 射电镜下,外泌体为不均匀分布的、圆形或椭圆形的、脂质膜包被的、直径30~100 nm的囊泡;粒径检测显示其体积 峰度集中在40~100 nm;蛋白质印迹法显示外泌体标志蛋白质TSG101表达阳性。高通量测序筛选出148个差异表达的 外泌体miRNA。与exo_control组相比,exo_48 h组miR-219c-3p,let-7d-3p,let-7a-1-3p,miR-328-3p,miR-365-3p,miR- 7219-3p等显著上调,miR-378d和miR-5106等显著下调。靶基因预测结果、GO和KEGG分析结果显示靶基因主要富集 在mTOR信号通路、Wnt信号通路、TGF-β信号通路等。结论：SiO2诱导的巨噬细胞产生的外泌体包含丰富的miRNA, 且其表达存在显著差异,这些差异的miRNA可能参与了肺成纤维细胞的活化、上皮间质转化等过程。