贵州省死亡病例1型猪链球菌的分离及分子生物学特征分析

目的 对来自贵州省1例疑似人感染猪链球菌患者的血液标本进行细菌分离鉴定,了解该菌株的分子生物学特征,为病例的快速确诊提供病原学依据。方法 采用血培养法对疑似感染猪链球菌患者的血液进行细菌分离培养,对分离菌株采用细菌16S rRNA 基因通用引物进行PCR扩增和DNA序列测定,将测序结果通过GenBank数据库的BLAST程序进行在线比对,再用猪链球菌种特异的16S rRNA 基因进行猪链球菌种的鉴定,进一步分别采用PCR检测常见强致病性血清型1、2、7和9型特异的cps 1j、cps 2j、cps 7h和cps9h基因以鉴定其血清型,并对菌株毒力基因gapdh、mrp、sly和ef进行检测。结果 血培养分离出1株链球菌可疑菌株,序列比对结果显示该分离菌株16S rRNA基因与猪链球菌的同源性最高,进一步的猪链球菌特异性PCR检测显示分离菌株16S rRNA基因为阳性,血清型特异PCR检测结果显示cps 1j基因为阳性,而cps 2j、cps 7h和cps 9h基因为阴性,毒力基因检测结果显示分离菌株gapdh,sly和ef毒力基因为阳性,而mrp为阴性。结论 本次从疑似感染猪链球菌死亡病例分离的菌株为猪链球菌1型,其毒力特征为gapdh、sly和ef基因阳性,mrp基因阴性,该病例为1型猪链球菌感染所致,且菌株毒力较强。     

2014—2022年湖南省病人来源猪链球菌2型鉴定及毒力基因分析

目的 了解2014—2022年湖南省人感染猪链球菌病病人分离株型别分布与毒力基因携带情况,为人感染猪链球菌病的防控提供依据。方法 收集2014—2022年湖南省人感染猪链球菌病临床分离株,通过传统生化反应和聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)检测猪链球菌种特异性基因16S rRNA,同时用PCR对2型血清型鉴定基因(兼荚膜多糖毒力基因)cps2J和7种毒力基因进行扩增,用毛细管电泳检测扩增产物,分析病人来源猪链球菌的型别与毒力基因携带情况。结果 2014—2022年湖南省38株人感染猪链球菌病临床分离株中,1株为羊链球菌,32株为猪链球菌2型,5株生化鉴定为2型的菌株经分子分型鉴定为猪链球菌其他型别。32株猪链球菌2型菌株中,46.88%的菌株携带全部8种毒力基因,40.63%的菌株携带除mrp外的7种毒力基因。携带cps2J、fbps、ef、gdh、orf2、gapdh 6种毒力基因与携带cps2J、sly、gdh、orf2、gapdh 5种毒力基因的菌株均占3.13%,6.25%的菌株携带cps2J、gdh、orf2、gapdh 4种毒力基因...     

宁波市首例人感染猪链球菌2型的实验室鉴定

目的:对首例人感染猪链球菌2型菌株进行鉴定,了解病原学及毒力。方法:将疑似猪链球菌感染患者血液、脑脊液进行增菌培养,对所分离的病原菌进行染色形态观察、APIStrep20生化鉴定;合成引物检测菌株的16SrRNA、cps2J、mrp、ef、sly、gapdh基因片段;制作cps2J、mrp、ef、sly长片段产物,进行基因序列测定。结果:从患者血液和脑脊液中分离的病原菌,经API20Strep生化鉴定编码为4641453,确认为猪链球菌2型,16SrRNA扩增结果进一步证实该菌为猪链球菌2型,基因测序结果与Genebank中注册05ZYH33的猪链球菌2型序列同源性在99%以上。结论:根据流行病学调查、临床表现和实验室鉴定结果,本起人感染猪链球菌的病原为猪链球菌2型,带有多种毒力基因其分子生物学特征典型。     

PCR快速检测猪链球菌2型方法的建立

目的建立一种快速、特异且敏感的猪链球菌菌型的检测方法。方法从疑似猪链球菌感染患者血液（抗凝血）中提取DNA为模板，并合成引物检测猪链球菌特异性16 Sr RNA基因片段、2型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段ef。结果PCR扩增结果证实是猪链球菌2型。结论PCR反应体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。     

人感染猪链球菌病的病原分离与PCR方法的快速检测

目的研究人感染猪链球菌的生物学特征，并建立一种快速、特异且敏感的检测方法。方法将疑似猪链球菌感染患者的血液进行增菌培养，对所分离的病原菌进行染色形态观察、API 32 Strep生化鉴定；同时从该疑似患者血液（抗凝血）中提取DNA为模板，并合成引物检测猪链球菌特异性16SrRNA基因片段、2型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段ef。结果PCR扩增结果证实是猪链球菌2型，而从血液中分离的病原菌，经API 32 Strep生化鉴定，也证实为猪链球菌2型。结论人感染猪链球菌的病原学及PCR检测符合猪链球菌2型，同时该PCR反应体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。     

广西人感染猪链球菌病的病原学及分子生物学鉴定分析

目的:用细菌分离培养和分子生物学方法鉴定猪链球菌,为确定疫情、及时治疗及控制提供依据.方法:疑似患者血液、脑脊液,死亡患者的肝、脾、肾等尸检组织进行分离培养、API 20 Strep生化鉴定、药敏试验及PCR检测.结果:从11份血液、4份脑脊液标本中分离出5株猪链球菌,API 20 Strep生化鉴定为猪链球菌Ⅱ型;经PCR检测5株菌均具有猪链球菌种特异性基因16St‘RNA(spe)基因、猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因(cps2J)和猪链球菌溶菌酶释放相关蛋白编码基因(mrp),1例死亡患者尸检组织标本和2例患者(1例为死亡病例)的脑脊液标本,具有猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因(cps2J),脾脏组织和1份脑脊液标本具有猪链球菌溶菌酶释放相关蛋白编码基因(mrp),全部确定为猪链球菌2型,并携带强毒力基因.药敏试验表明,猪链球菌2型对万古霉素、氯霉素、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松、克林霉素敏感.结论:广西6起疫情均为人感染猪链球菌2型所致.     

江苏省首例人感染ST1型猪链球菌的快速检测及分子特征分析

目的对2014年江苏省一起疑似人感染猪链球菌病的病原菌进行实验室快速检测并分析其分子特征。方法采用实时荧光PCR方法对病人标本中提取的DNA进行猪链球菌血清2型特异基因检测,运用PCR方法进行猪链球菌毒力基因鉴定及多位点序列分析。结果病人标本中检测到猪链球菌种特异基因(16srRNA)和血清2型荚膜多糖编码基因(cps-2J),5种毒力基因(mrp,sly,ef,gapdh,fbps)全部阳性,多位点序列分析结果为ST1型。结论该病例的病原菌为携带5种毒力基因的ST1型猪链球菌血清2型菌株,该型别在江苏省尚属首次报道。     

安徽省一例人感染猪链球菌病例的病原学特征分析

目的通过对安徽省一例人感染猪链球菌患者血液标本分离的菌株进行鉴定分型,了解菌株的分子特征。方法采用Vitek2 compact全自动细菌鉴定仪对分离菌株进行生化鉴定,玻片凝集法进行血清型鉴定,PCR法检测菌株5种毒力基因和多位点序列分型(MLST),PubMLST数据库获得ST型别。结果分离菌株经生化和血清型鉴定,确定为猪链球菌2型,毒力基因cps2J、sly、ef、gadph的PCR检测结果均为阳性,mrp检测结果为阴性,MLST为ST7型。结论分离病原菌为cps2J+/sly+/ef+/gadph+/mrp-ST7型猪链球菌2型,该型别人源猪链球菌在安徽省属首次报道,具有较强毒力,疫源地应加强防控,防止病例的再次出现。     

致病性猪链球菌主要毒力因子基因多重PCR检测

目的建立多重PCR体系．实现猪链球菌毒力相关因子基因cps、mrp、epf，（epf^＊）和sly的同步检测。方法根据上述毒力因子基因核苷酸序列，设计和合成4对特异性引物，通过体系和条件优化，建立多重PCR检测方法，并对72株种属背景明确的实验菌株（其中猪链球菌48株、阴性对照株24株）及49株猪临床分离的链球菌样本进行检测分析。结果48株猪链球菌中，cps2检出率为33．3％（16／48）、mrp检出率为29．2％（14／48）、epf检出率为25％（12／48）、epf^＊检出率为6．3％（3／48）、sly检出率为54．2％（26／48），上述检测结果与菌株的毒力因子背景情况完全相符；24株阴性对照和49株猪临床分离样本毒力因子检测结果均为阴性。结论多重PCR可用于猪链球菌毒力相关因子CPS2、MRP、EF、Sly的基因检测，特异性和敏感性好，为该病快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术手段。     

人感染猪链球菌Ⅱ型菌株的毒力基因及分子分型特征分析

目的掌握浙江瑞安地区人感染猪链球菌Ⅱ型菌株毒力因子及分子分型情况,为诊断、治疗和制定防控措施提供科学依据。方法对2012年瑞安地区分离的病原菌进行形态学观察、生化鉴定及多位点序列分型(MLST)分析,并选取胞外因子(ef)、荚膜多糖(cps2J)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、溶血素(sly)、谷氨酸脱氢酶(gdh)等5个猪链球菌Ⅱ型主要毒力基因进行PCR检测。结果在血、脑脊液样本中分别分离出3株猪链球菌,均属于Ⅱ型,MLST分型结果显示:1株属于ST1型、2株属于ST7型。3株病原菌分为2种毒力基因型,其中ef+/cps2J-/mrp-/sly+/gdh+1株,ef+/cps2J-/mrp+/sly+/gdh+2株。结论在瑞安地区首次分离到人感染猪链球菌Ⅱ型,其中ST1克隆株属于全球常见高致病株,ST7克隆株与四川流行株相一致,可能来源于四川。毒力基因型分析表明,这3株病原菌均为高致病型。     

四川省人感染猪链球菌病的病原分离与鉴定

目的分离和鉴定猪链球菌,为诊断和治疗提供科学依据。方法用无选择性的血琼脂平板对患者血液、脑脊液、尸检组织和病死猪内脏进行分离培养,并对分离到的细菌进行染色形态观察;用PCR技术检测猪链球菌种基因、荚膜多糖编码基因、溶菌酶释放相关蛋白基因和溶血素基因;用VITEK2compact微生物生化鉴定仪定型。结果从4例患者血液、2例患者脑脊液、2例患者尸检组织和7例病死猪中分离到27株链球菌,经鉴定27株菌均为猪链球菌2型,猪链球菌种基因和猪链球菌三种毒力基因阳性。结论此次疫情为猪链球菌2型引起。     

快速诊断性DNA测序法鉴定致病性猪链球菌

目的尝试将诊断性DNA测序方法优化后用于猪链球菌的快速鉴定。方法5个来源于临床感染病例的可疑猪链球菌分离株,用诊断性PCR产物直接测序法分析其基因组上的16SrRNA,cps2J和mrp3个特征性靶基因的DNA序列;并对整个技术流程进行优化改进,缩短获得结果的时间。结果获得了5个可疑猪链球菌菌株的3个靶基因片段的DNA碱基序列;这5个菌株被扩增检测的基因区域,有相同的16SrRNA、cps2J和mrp基因片段,长度分别为336、437、520bp;将这3个靶基因片段序列上载到NCBI-BLAST服务器,与GenBank核酸序列数据库的已知序列进行比对分析,结果显示,该5个可疑菌株的被分析的3个靶基因片段与猪链球菌2型的同源性最高。优化后的方法在得到经过适当培养的纯菌后,在不超过7～8h内,就可以获得靶基因片段的DNA测序结果。结论该5个来源于临床感染病例的可疑菌株为血清2型猪链球菌;经优化改进的诊断性DNA测序方法可用于猪链球菌的快速鉴定。     

中山市12株人源2型猪链球菌生物学特性研究及PFGE分型分析

目的 研究2016—2019年中山市人感染2型猪链球菌临床分离株的生物学特性及脉冲场凝胶电泳技术(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)的分型,以期为临床防治猪链球病提供科学依据.方法 收集2016-2019年人感染2型猪链球菌12株,采用全自动细菌鉴定仪对其进行鉴定,应用核酸蛋白...     

广西地区无症状猪中猪链球菌2型分子流行病学研究

目的了解广西地区无症状猪中猪链球菌2型的带菌情况以及主要毒力因子的分布和抗药性。方法从广西地区10个县区屠宰场采集无症状猪的扁桃体标本进行细菌分离、多重PCR鉴定和药物敏感性分析。结果从采集到的1179份扁桃体标本中分离出1105株链球菌,其中猪链球菌667株,猪链球菌2型33株;对33株2型菌进行主要毒力因子检测,强毒型sly mrp epf 22株,占66．7％,sly mrp epf-1株,sly-mrp epf-7株,sly-mrp epf 2株,sly-mrp- epf-1株;33株2型菌对青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素、壮观霉素、恩诺沙星、环丙沙星、先锋霉素Ⅵ、磺胺嘧啶钠、呋喃妥因、新霉素、丁胺卡那和四环素都存在不同程度的耐药性,其中先锋霉素Ⅵ、青霉素、恩诺沙星相对敏感,分别有93．9％(31／33)、87．9％(29／33)和81．8％(27／33)的菌株在中度敏感以上,而耐药性强的是丁胺卡那和四环素,耐药菌株分别有84．8％(28／33)和81．8％(27／33)。结论广西地区无症状猪中猪链球菌2型带菌率较低,疫点与非疫点的带菌率没有明显差异;分离的菌株多以强毒型sly mrp epf 存在,对先锋霉素Ⅵ最敏感。     

浙江省散发猪链球菌病临床分离株存在89K候选致病岛

目的 对浙江省临床分离猪链球菌血清2型(SS2)菌株进行89K候选致病岛检测.方法 用多种特异性引物进行PCR扩增检测,同时对89K的3个扩增片段进行测序,并结合有关资料进行生物信息学和流行病学分析.结果 8株SS2菌株,均检出89K(1&2)、89K(3&4)、89K(5&6)候选致病岛特异片段和种特异性16S rDNA、cps2J、mrp毒力基因,和1998年江苏省暴发疫情的菌株结果一致.ZJ0501号SS2分离株89K候选致病岛的3个PCR扩增片段序列和1998年江苏省暴发疫情的菌株有99%以上的相似性,其中编码DNA重组蛋白的序列片段和病乳链球菌及无乳链球菌有较高的同源性.结论 近年来在浙江省临床分离Ss2菌株中,存在89K候选致病岛片段.     

快速PCR检测猪链球菌2型方法的研究及应用

目的建立可同时检测猪链球菌2型5种特异基因的快速PCR方法。方法根据已有的5对猪链球菌2型特异基因引物,运用高效聚合酶及优化反应程序,建立针对猪链球菌2型的16sRNA基因、荚膜多糖基因(cps-2J)、溶菌酶释放蛋白相关基因(mrp)、细胞外因子基因(ef)和溶血素基因(sly)的快速PCR方法。结果此法可在一台PCR仪上30min同时扩增猪链球菌2型的5种特异基因,敏感性和特异性与普通PCR无差别。对35株猪链球菌2型菌株的检出率为100%。结论所建立的检测方法具有便捷、快速的优点,可应用于人畜间猪链球菌2型突发疫情的实验室快速诊断。