JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响

目的分析JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响。 方法将Hela细胞分为si-NC组、si-JMJD2B组和si-HPIP组。实时荧光定量PCR检测宫颈癌细胞中JMJD2B、HPIP mRNA表达水平。Western blotting检测宫颈癌细胞和人正常宫颈上皮细胞JMJD2B、HPIP蛋白表达水平。CCK-8检测Hela细胞增殖能力。Transwell检测Hela细胞迁移和侵袭能力。 结果JMJD2B、HPIP蛋白在宫颈癌细胞中表达高于人正常宫颈上皮细胞(P＜0.05)。与si-NC组比较,si-JMJD2B组和si-HPIP组JMJD2B、HPIP mRNA和蛋白表达、细胞增殖、迁移细胞数量、侵袭细胞数量均明显减少(P＜0.05)。 结论JMJD2B和HPIP表达可能调节宫颈癌Hela细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为。     

LINC00342调控miR-384对肺鳞癌细胞增殖侵袭迁移的影响研究

目的:探讨LINC00342通过miR-384对肺鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法:将肺鳞癌SK-MES-1细胞分为：ctrl组(正常培养的SK-MES-1细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00342组(转染si-LINC00342)、si-LINC00342+inhibitor-NC组(si-LINC00342和inhibitor-NC共转染)、si-LINC00342+miR-384 inhibitor组(si-LINC00342和miR-384 inhibitor共转染);RT-qPCR检测细胞中LINC00342、miR-384表达；CCK-8法及Transwell小室法分别检测细胞增殖和侵袭；划痕实验及流式细胞仪分别检测细胞迁移和凋亡；Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达；双荧光素酶报告基因实验验证LINC00342和miR-384的关系。结果:与ctrl组、si-NC组比较，si-LINC00342组SK-MES-1细胞的OD450值、...     

HP1α（CBX5）对前列腺癌细胞迁移、侵袭和增殖影响的研究

目的:探讨HP1α在前列腺癌细胞LNCaP和PC3中的表达情况,并研究HP1α的表达对LNCaP和PC3的影响。方法:采用qPCR及Western 印迹检测HP1α的表达情况,通过Transwell检测细胞的迁移和 侵袭能力,CCK-8和集落形成检测细胞的增殖能力。结果:HP1α在前列腺癌细胞C4-2和LNCaP中表达水平最高,PC3和DU145次之,良性前列腺增生的最低（P <0.05）;Transwell显示,与si-NC组相比, si-HP1α组前列腺癌细胞LNCaP和PC3的迁移和侵袭能力均降低（P <0.05）;CCK-8和集落形成实验显示敲低HP1α后,前列腺癌细胞LNCaP和PC3的增殖能力下降（P <0.05）;Western 印迹发现EMT分子标 志物E-cadherin的表达增加,而N-cadherin、Vimentin等的表达均降低（均P <0.05）。结论:HP1α在前列腺癌细胞LNCaP、C4-2、PC3和DU145中高表达,而降低其表达可以抑制前列腺癌细胞LNCaP和PC3 的迁移、侵袭、增殖以及上皮-间充质转化（EMT）能力。     

内皮素-1对前列腺癌PC3细胞系的侵袭、迁移能力影响

目的探讨内皮素1对前列腺癌PC3细胞系的侵袭、迁移能力的影响,并初步研究其机制。方法体外培养PC3细胞并以内皮素1干预,通过划痕实验、Boydenchamber细胞侵袭和迁移实验测定PC3细胞侵袭、迁移能力;RTPCR和明胶酶谱法分别测定PC3细胞基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9的mRNA表达和蛋白合成、激活的水平。结果与对照组比较,内皮素1组PC3细胞的侵袭、迁移能力显著提高,合成和激活MMP2、MMP9水平显著提高(P<0.05)。结论内皮素1能提高前列腺癌细胞的侵袭、迁移能力,促进MMP2、MMP9合成和激活是其机制之一。     

miR-206通过调控PDCD10抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的：探讨miR-206通过调控程序性细胞死亡因子10（programmed cell death 10,PDCD10）对前列腺细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：选取国药汉江医院手术切除的前列腺癌标本61例,另选40例良性前列腺增生组织作为对照,采用原位杂交检测miR-206和PDCD10表达水平,分别分析miR-206和PDCD10的表达与前列腺癌患者临床病理参数间的关系;双荧光素酶实验检测miR-206和PDCD10在前列腺癌细胞中的相互作用;选取前列腺癌PC3细胞,分别转染miR-206 mimics+PDCD10 pcDNA过表达载体、miR-206 mimics、PDCD10 pcDNA过表达载体、mimics NC组和mimics NC+PDCD10 pcDNA组。采用实时荧光定量PCR法检测PDCD10 mRNA的表达量,Western blot检测PDCD10蛋白的表达量;通过MTT、Transwell迁移和侵袭检测前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：原位杂交实验染色显示,miR-206在前列腺癌组织中的阳性表达率（24.59%,15/61）明显低于良性前列腺增生组织的阳性表达率（87.5%,35/40）（ χ2=38.248,P=0.000）。PDCD10在前列腺癌组织中的阳性表达率（73.77%,45/61）明显高于良性前列腺增生组织的阳性表达率（27.5%,11/40）（ χ2=20.397,P=0.000）。miR-206与PDCD10均与TNM临床分期、Gleason评分等有关（P<0.05）,与患者年龄、术前PSA水平等均无关（P >0.05）。线性回归与相关性分析发现,miR-206表达与PDCD10表达呈明显的负相关性（r=-0.9594,P<0.001）。miR-206 mimic与PDCD10野生型报告载体共转后,细胞中荧光素酶的活性降低（P<0.01）。miR-206 mimics组PDCD10 mRNA和蛋白表达水平最低。过表达miR-206可显著抑制PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。过表达PDCD10可显著提高PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且过表达PDCD10可逆转miR-206对PC3细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论：miR-206可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制与靶向负调控PDCD10的表达有关。     

UCH37与MARCH8表达对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的分析泛素羧基末端水解酶37(UCH37)、膜相关RINpCH 8(MARCH8)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法将Hela细胞分为si-NC组、si-UCH37组和si-MARCH8组,利用siRNA技术在Hela细胞中沉默UCH37、MARCH8基因。CCK-8法检测细胞增殖能力。Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。qRT-PCR检测细胞UCH37、MARCH8 mRNA表达水平。Western blotting检测细胞UCH37、MARCH8蛋白水平。 结果宫颈癌Hela细胞UCH37、MARCH8 mRNA和蛋白水平明显高于人正常宫颈上皮HUCEC细胞(P＜0.05)。与si-NC组比较,si-UCH37组UCH37和si-MARCH8组MARCH8的mRNA和蛋白水平均降低；si-UCH37组和si-MARCH8组细胞增殖活性、迁移细胞数量、侵袭细胞数量均减少(P＜0.05)。 结论UCH37和MARCH8在宫颈癌细胞中高表达,干扰其表达后可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

CFL1的表达对前列腺癌进展影响的研究

目的:探讨CFL1在前列腺癌中的表达情况,并明确其对前列腺癌进展的影响。方法:采用免疫组化、qPCR及Western blot检测CFL1的表达情况,采用Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力,CCK-8实验检测细胞的增殖能力。结果:在恶性程度高的前列腺癌中,CFL1的蛋白及mRNA表达水平最高,恶性程度低的次之,良性前列腺增生最低（P＜0.05）;Transwell实验表明si-CFL1组较si-NC组,其迁移和侵袭能力均降低（均P＜0.05）;CCK-8实验显示敲低CFL1后,前列腺癌细胞的增殖能力降低（P＜0.05）。结论:CFL1在前列腺癌中高表达,而减低其表达水平可以抑制前列腺癌的进展。     

干扰整合素转接激酶表达对口腔鳞癌细胞迁移侵袭影响研究

目的 研究干扰整合素转接激酶(ILK)表达对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 以口腔鳞癌SCC-25细胞为研究对象,细胞转染小干扰RNA阴性对照(siRNA control)和ILK小干扰RNA(ILK siRNA)分别记为si-NC组和ILK siRNA组,同时以没有转染的SCC-25细胞作为对照组。RT-PCR和Western blot法检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;Western blot法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。结果 si-NC组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目以及细胞中的MMP-9、MMP-2蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ILK siRNA组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目和细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显低于对照组和si-NC组(P<0.05)。结论 干扰ILK能够下调口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

BEZ235对体外前列腺癌细胞的抑制作用

目的：探讨PI3K/mTOR双重靶向抑制剂BEZ235对人前列腺癌细胞株的增殖、迁移能力的影响。方法： 采用MTT实验分析BEZ235对正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前列腺癌细胞PC3及DU145增殖能力的影响;划痕试验检 测BEZ235对RWPE-1,PC3及DU145细胞迁移的影响;Western印迹及免疫荧光染色方法检测BEZ235对上皮-间质转化 (epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物蛋白表达的影响。结果：BEZ235对PC3和DU145细胞的增殖具有明 显的抑制作用(P<0.01),而对RWPE-1作用不明显;BEZ235明显上调PC3和DU145细胞标志物E-cadherin的表达,下调间 质标志物Vimentin的表达(P<0.01)。结论：BEZ235可体外抑制PC3和DU145细胞增殖和迁移,其部分机制可能是通过 抑制EMT途径而实现。     

组织因子途径抑制物-2抑制人前列腺癌细胞的上皮间质转化

目的 探讨组织因子途径抑制物-2 ( TFPI-2 )对人前列腺癌细胞上皮间质转化的影响. 方法 将人前列腺癌细胞株PC3M进行培养,并分为3组,分别转染TFPI-2基因真核表达载体、空载体及不转染,细胞划痕实验和细胞侵袭小室实验检测3组细胞的迁移能力和侵袭能力,用转化生长因子-β1(TGF-β1)处理细胞,倒置相差显微镜下观察3组细胞形态,Western blot法和逆转录聚合酶链式反应( RT-PCR)法分别检测转染组、转染空载体组及未转染组上皮间质转化标志物-E钙黏素( E-cadherin )、波形蛋白( vimentin )和 snail在蛋白和mRNA水平上的表达量. 结果 细胞划痕实验和细胞侵袭小室实验结果显示,转染TFPI-2 基因真核表达载体的PC3M细胞迁移率较低(P<0. 05),侵袭细胞数较少(P<0. 05);显微镜下观察显示转染组细胞大多呈上皮型, 转染空载体组及未转染组细胞大多呈间叶型;Western blot法和RT-PCR法检测结果显示,无论在蛋白水平还是mRNA水平,转染组较转染空载体组及未转染组E-cadherin表达产物较多,vimentin和snail蛋白表达产物较少,差异有统计学意义(P<0. 05),转染空载体组及未转染组差异无统计学意义. 结论 TFPI-2可以抑制人前列腺癌细胞的上皮间质转化,这是其抑制前列腺癌细胞侵袭与转移的可能机制之一,为基因及生物靶向治疗前列腺癌提供新的思路和方向.     

lncRNA TUG1调控miRNA-145促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨lncRNA TUG1调控miRNA-145促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。方法选择人结肠癌细胞HCT116,并将细胞分为6组,培养48 h后进行后续实验;采用qRT-PCR法检测各组细胞TUG1与miRNA-145的表达水平;采用MTT检测各组细胞的增殖情况;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力;采用双荧光素酶报告基因实验验证TUG1与miRNA-145的靶向关系。结果与人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460相比,结肠癌细胞株HCT116中TUG1相对表达水平明显升高,miRNA-145相对表达水平明显降低（P < 0.01）;miRNA-145与TUG1 3'-UTR存在结合位点。与TUG1 siRNA阴性对照组相比,TUG1 siRNA组HCT116细胞中TUG1表达水平明显降低（P < 0.01）,HCT116细胞增殖活性降低（P < 0.05）,细胞划痕相对宽度明显增加,细胞侵袭数目明显减少（P < 0.05）;与miRNA NC组相比,miRNA-145 mimic组HCT116细胞中miRNA-145表达水平明显升高,HCT116细胞增殖活性降低（P < 0.05）,细胞划痕相对宽度明显增加,细胞侵袭数目明显减少（P < 0.01）;与TUG1 siRNA阴性对照组相比,TUG1 siRNA组HCT116细胞中miRNA-145表达水平升高（P < 0.05）;与si-TUG1+miRNA NC组相比,TUG1 siRNA+miRNA-145 inhibitor组HCT116细胞中miRNA-145表达水平降低（P < 0.05）,HCT116细胞增殖活性增强,细胞划痕相对宽度减小,细胞侵袭数目增加（P < 0.05）。结论结肠癌HCT116细胞中TUG1表达上调,miRNA-145表达下调,干扰TUG1表达可通过靶向上调miRNA-145的表达,抑制结肠癌HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭。     

Bloom解旋酶基因RNA干扰载体对前列腺癌PC3细胞的抑制作用

目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制前列腺癌PC3细胞系中Bloom解旋酶基因的表达,探讨Bloom解旋酶基因表达下调后对PC3细胞的抑制作用.方法 使用实验室前期成功构建的两条针对于Bloom解旋酶基因的RNAi载体shRNA-1和shRNA-2转染前列腺癌PC3细胞,以未转染RNAi载体为对照组,分别在转染24、48、72h后通过MTT法检测细胞增殖情况,转染48 h后通过Transwell小室法检验细胞侵袭、迁移能力,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡情况.结果 转染RNAi载体后,与未转染对照组相比,各实验时间点的转染组细胞增殖率降低(P＜0.05),Transwell细胞侵袭和迁移实验中穿过室膜的细胞数与对照组比均减少(侵袭:119±24、118±30 vs 227±38;迁移:122±13、121±47 vs 277±32,P＜0.05),划痕愈合率与划痕迁移距离均降低,48 h时差异有统计学意义(P＜0.05),而且细胞凋亡明显增加.结论 以RNAi载体干扰Bloom解旋酶基因的表达可抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进其凋亡,为前列腺癌的靶向基因治疗提供了依据.     

Wnt-1诱导分泌蛋白2对胃癌细胞上皮间质转化的影响*

的 探讨Wnt-1诱导分泌蛋白2（WISP2）在胃癌组织中的表达及其对胃癌患者癌细胞上皮间质转化的影响。方法 选取2016年3月—2018年5月四川绵阳四〇四医院收治的胃癌患者癌组织和癌旁组织标本,每组85例。采用免疫组织化学法检测WISP2在胃癌组织和癌旁组织中的表达情况;构建WISP2-shRNA和NC-shRNA稳定细胞系,采用细胞划痕实验检测WISP2下调对胃癌细胞迁移的影响;采用Transwell实验检测WISP2下调对胃癌细胞侵袭的影响;采用Western blotting检测WISP2下调对胃癌细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、神经-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表达的影响。结果 WISP2在胃癌组织（61.2%）中的阳性表达率高于癌旁组织（11.8%）（P?<0.05）;与NC-shRNA组（84.74±9.61）% 比较,WISP2-shRNA组（57.18±6.05）%细胞划痕愈合程度下降（P?<0.05）;WISP2-shRNA组细胞侵袭个数（195.36±23.45）较NC-shRNA组（404.91±38.16）减少（P?<0.05）;与NC-shRNA组比较,WISP2-shRNA组细胞E-Cadherin的表达水平升高（P?<0.05）,N-Cadherin和Vimentin的表达水平下降（P?<0.05）。结论 WISP2在胃癌组织中高表达,下调WISP2的表达可抑制胃癌细胞的上皮间质转化和侵袭转移。     

长链非编码RNA TPT1-AS1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用研究

目的 研究肿瘤蛋白翻译调节因子1反义-RNA1(TPT1-AS1)在肝细胞和肝癌细胞中表达的差异,及其对肝细胞癌增殖、迁移、侵袭、上皮细胞间质化(EMT)的影响.方法 2018年9月—2020年6月于西安交通大学实验室进行细胞实验,使用qRT-PCR分别检测92例经手术切除的肝癌组织与对应癌旁肝组织,肝癌细胞HepG2...     

孕激素通过HOXA9对人卵巢癌细胞增殖和迁移的机制研究

  目的  探讨HOXA9在孕激素抑制卵巢癌发展过程中的作用机制。   方法  （1）按照孕激素醋酸甲羟孕酮（MPA）药物浓度梯度（0.1、1、10、50、100 μmol/L）培养人卵巢癌细胞HO-8910,作用24 h、 48 h 、72 h后,光学显微镜观察细胞形态; CCK-8检测细胞存活率,确定IC₅₀; Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡率。（2）将细胞分为H0-8910细胞4组:（1）NC组;（2）孕激素组;（3）孕激素+si-HOXA9组;（4）孕激素+ov-HOXA9组。H0-8910细胞分别转染HOXA9敲降或过表达质粒后使用MPA处理或不转染质粒单独使用使用MPA处理72 h,qPCR 和Western blot 分别用于检测HOXA9 mRNA和蛋白表达水平以及上皮间质转化（EMT）相关蛋白 （Vimentin,N-cadherin,E-cadherin）的表达变化;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell 实验用于检测细胞侵袭能力。   结果  （1）孕激素刺激后,HO-8910细胞株生长状态变差,排列稀疏,细胞增殖,迁移以及侵袭能力受到抑制（P < 0.0001）,且细胞凋亡率上升（P < 0.0001）;（2）通过cck8结果计算得MPA处理H0-8910细胞72 h的IC50值为2.680 μmol/L;（3）相较于人卵巢上皮细胞CP-H055,HOXA9在人卵巢癌细胞株HO-8910,SKOV3,A2780和OVCAR3中mRNA均高表达（P < 0.01）,HOXA9蛋白在HO-8910中同样高表达（P < 0.001）;（4）孕激素可抑制HOXA9的表达（P < 0.0001）,敲降HOXA9 后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制更为明显（P < 0.0001）,而过表达HOXA9后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制稍有减弱（P < 0.0001）;（5）孕激素使E-cadherin蛋白表达上升（P < 0.01）,而Vimentin,N-cadherin蛋白表达下降（P < 0.001）;敲降HOXA9 后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响更为明显（P < 0.05）,而过表达HOXA9后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响减弱（P < 0.05）。  结论  孕激素通过抑制HOXA9基因的表达,抑制细胞增殖,迁移,侵袭以及EMT进程等恶性生物学表型,从而抑制卵巢癌发展进程。     

长链非编码RNA LINC00173在紫杉醇耐药乳腺癌细胞中的作用

目的探讨长链非编码RNA LINC00173对紫杉醇耐药乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法利用qRT-PCR方法检测LINC00173在乳腺癌细胞株（MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3）和正常乳腺癌上皮细胞系（MCF-10A）的表达水平;构建LINC00173过表达载体和干扰片段,各自转染到乳腺癌细胞株中,利用qRT-PCR方法检测转染后LINC00173的表达水平;采用CCK8实验检测乳腺癌细胞的增殖能力;Transwell侵袭和划痕实验,检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blotting方法检测CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达。结果与MCF-10A细胞相比,LINC00173在乳腺癌细胞株中低表达;MCF-7细胞转染干扰片段及MCF-7/PR耐药细胞株转染过表达LINC00173载体后,与阴性对照（si-NC）组相比,si-LINC00173的表达降低;而与LV-NC组相比,过表达LV-LINC00173后的表达增加,且差异有统计学意义（P < 0.01）;干扰LINC00173的表达后,MCF-7细胞的增殖及迁移能力增强（P < 0.01）;过表达LINC00173后,MCF-7/PR细胞的增殖、侵袭及迁移能力减弱（P < 0.01）;干扰LINC00173后,MCF-7细胞CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达水平明显增加（P < 0.01）;过表达LINC00173后,MCF-7/PR的CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白表达水平明显下降（P < 0.01）。结论LINC00173在乳腺癌细胞中表达降低并可能通过调控β-catenin表达参与紫杉醇耐药过程且与其发生、发展及侵袭有关,是涉及到乳腺癌发展的一种新的分子,可为临床诊断、治疗乳腺癌提供新的理论依据。     

前列腺癌中miR-140-5p靶向YES1抑制细胞增殖和迁移的作用研究

  目的  研究miR-140-5p与YES1的靶向调控关系,阐明miR-140-5p通过YES1调控前列腺癌发生发展的作用,并研究miR-140-5p在前列腺癌细胞中的潜在作用机制。   方法  采用实时定量PCR检测前列腺癌组织和细胞系中miR-140-5p的表达,采用CCK-8、细胞克隆实验、迁移和划痕实验测定miR-140-5p上调对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响,用荧光素酶报告实验和蛋白印迹实验鉴定miR-140-5p的靶基因。   结果  癌组织中的miR-140-5p表达量相对癌旁组织明显下调,差异有统计学意义(P＜0.05)。与RWPE-1细胞相比,前列腺癌细胞系中miR-140-5p的表达水平较低,差异具有统计学意义(P＜0.05)。CCK-8实验转染后miR-140-5p的细胞增殖率显著下降,细胞克隆实验实验组相比对照组细胞克隆数目偏少,差异均有统计学意义(P＜0.05)。划痕实验转染miR-140-5p细胞系的愈合能力明显减弱(P < 0.05);Transwell小室实验转染miR-140-5p的细胞系的迁移能力下降(P < 0.05);说明过表达miR-140-5p可抑制细胞的增殖和迁移。生物信息学分析和荧光素酶报告分析确定YES1为miR-140-5p的潜在靶基因。YES1在前列腺癌细胞中过表达,与miR-140-5p表达呈负相关,差异具有统计学意义(P＜0.05)。   结论  以上实验表明miR-140-5p通过直接靶向YES1在前列腺癌发生发展中起抑制作用,提示miR-140-5p可能是一个新的靶点,用于前列腺癌的诊断和治疗。