人滋养层细胞内丙型肝炎病毒样颗粒的免疫电镜形态学研究

目的：应用免疫电镜技术观察体外培养的人胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒（HCV）情况。方法：采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞，以HCV RNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染实验，胶体金免疫电镜检测滋养层细胞内的HCV病毒颗粒，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）定性检测滋养层细胞内HCV RNA。结果：体外培养的人胎盘滋养层细胞内可观察到胶体金颗粒吸附的病毒样颗粒，形态及直径符合HCV特点。RT—PCR定性检测结果阳性，进一步证文所观察到的病毒样颗粒为HCV。结论：HCV可感染体外培养的人胎盘滋养层细胞。     

人胎盘滋养层细胞的分离培养及HCV体外感染试验

目的：体外分离培养较高纯度的胎盘滋养层细胞，观察其生物学特性，探讨丙型肝炎病毒（HCV）经胎盘母婴传播的具体途径。方法：采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织，以35％，45％两个Percoll密度梯度进行分离纯化。并用免疫组化及透射电镜等技术对其生物学特性进行观察。HCV阳性血清感染体外分离培养的胎盘滋养层细胞，通过逆转录聚合酶链反应及扩增敏感试验对培养上清进行定性、定量检测，以观察HCV的感染及复制情况。结果：胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性，血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性，经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者（滋养层细胞）占90％以上，电镜下滋养层细胞可观察到成熟型、中间型、未成熟型三种形态。HCV感染细胞培养16d内培养上清中可间断检测出HCV RNA.结论：改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞，HCV感染胎盘滋养层细胞可能是HCV宫内母婴传播的途径之一。     

人胎盘滋养层细胞的分离培养及IgG FcγRⅢ在滋养层细胞的表达

目的：体外分离培养人胎盘滋养层细胞，观察其生物学特性，研究IgGFcγRⅢ（CD16）在人胎盘组织中的定位及体外培养的滋养层细胞是否存在CD16，从而为HCV母婴传播机制的研究提供细胞学实验基础。方法：采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织，以35%、45%两个Percoll密度梯度进行分离纯化，用ABC免疫组化染色法对足月分娩后的胎盘组织石蜡包埋切片及体外分离培养的胎盘滋养层细胞进行染色。结果：胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性，血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性，经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者（滋养层细胞（占90%以上，胎盘组织切片的滋养层细胞及体外分离培养的滋养层细胞抗CD16染色阳性，阳性信号定位于胞质，未见胞核着色，结论：改进后的分离方法可能得到较高纯度的滋养层细胞，胎盘组织的滋养层细胞和体外分离培养的滋养层细胞均有CD16表达。     

丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响

目的:探讨丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响. 方法:应用ELISA方法检测细胞培养上清MMP-2和MMP-9水平,分析感染组和对照组数据间的差异,并用明胶酶谱进一步验证ELISA结果,随后应用RT-PCR法分析感染对细胞proMMP-2和proMMP-9 mRNA表达的影响. 结果:感染组细胞分泌MMP-2和MMP-9能力明显下降(MMP-2:t=4.186,P＜0.05; MMP-9:t=2.325,P＜0.05);RT-PCR结果显示感染组细胞proMMP-2和proMMP-9 mRNA表达弱于对照组,但差异不明显(proMMP-2:t=1.196,P＞0.05;proMMP-9:t=1.417,P＞0.05). 结论:丙型肝炎病毒持续感染时体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌能力下降,为非特异性.     

人工流产物中绒毛膜促性腺激素的提取工艺

人工流产物中绒毛膜促性腺激素的提取工艺马骏，谢景文（药理学教研室，兰州军区总医院药剂科）关键词绒毛膜促性腺激素，提取，人工流产中图法分类号Ｒ５５６．５人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）是妇女在妊娠时由胎盘组织的绒毛合体滋养层细胞合成和分泌的一种糖蛋白激素．...     

胎盘滋养层细胞的功能

胎盘滋养层细胞对妊娠与胚胎发育具有非常重要的作用,侵袭功能和内分泌功能是滋养层细胞的两大主要功能。侵袭性迁移行为是胎盘形成、胚胎发育、妊娠顺利完成的基本要素,滋养层细胞在侵袭血管方面上与癌细胞非常相似。同时滋养层细胞也发挥着极其复杂的内分泌功能,能分泌甾体类激素、神经肽类激素、生长因子、细胞因子等多种生物活性物质,构成了复杂的脐血造血微环境。滋养层细胞所分泌的激素、神经肽等活性物质对母婴之间能量代谢转运、维持早孕、营养黄体等方面起到重要的作用。同时,滋养层细胞是胎盘屏障的重要组成部分和母血进入胎儿的第一道屏障,所分泌的各种细胞因子发挥了极其重要的免疫功能。在本文中作者旨在微环境的层面上阐述胎盘滋养层细胞的功能。     

曲古抑菌素A上调肿瘤细胞柯萨奇-腺病毒受体表达而抑制其侵袭力的体外研究

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACI）曲古抑菌素A（TSA）抑制肿瘤细胞侵袭力是否通过上调肿瘤细胞表面柯萨奇-腺病毒受体（CAR）的表达而实现的。方法：在TSA作用124细胞和MCF-7细胞后，分别检测CAR mRNA和蛋白水平的表达；同时采用体外黏附实验和Boyden小室体外侵袭实验，以评价细胞黏附和侵袭力的改变。结果：TSA作用72h后，肿瘤细胞CARmRNA和蛋白表达水平明显上调，细胞间同型黏附增强，侵袭力下降。且这一过程可被CAR特异性抗体部分逆转。结论：TSA可以通过上调CAR而使肿瘤细胞同型黏附增加，侵袭力下降。     

雌激素受体α和β mRNA变异型在胎盘组织的表达及定位

目的 探讨人足月胎盘组织雌激素受体α、β（ERα、ERβ）的mRNA变异型种类及其在胎盘的组织细胞学定位。方法 采用逆转录聚合酶链反应技术和免疫组织化学技术检测正常足月妊娠胎盘组织中ERα、ERβ表达及细胞学定位。结果 人足月胎盘组织中有ERα、ERβmRNA的表达，胎盘组织中ERβmRNA的表达为ERβ5变异型ERα表达定位于滋养层细胞滋养细胞核，ERβ表达定位于滋养层合体滋养细胞胞浆。结果 ERβ5是胎盘组织ERβ的变异型种类，定位于胎盘合体滋养细胞，与胎盘合成和分泌雌激素有关。     

胰岛素样生长因子系统在人早孕绒毛滋养层细胞中的表达

目的 探讨胰岛素样生长因子系统（IGFs)在体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中的基因表达及其作用。方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术半定量检测体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中IGFsmRNA的表达，结果 体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中可以检测出IGF-ⅡmRNA,IGF-ⅠRmRNA，IGFBP-3mRNA的表达。结论 IGFs可能在早期细胞滋养层的侵入，增殖分化，胎盘形成和胚胎生长发育过程中以自分泌和/或旁分泌方式发挥重要的调节作用。     

人早孕绒毛滋养层细胞的分离纯化及马鞭草对其分泌绒毛膜 …

从正常妊娠６～８周早期胎盘Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度离心分离滋养层细胞进行体外培养，观察马鞭草对培养的滋层细胞形态及绒毛膜促性细胞激素（ＨＣＧ）分泌功能的影响，探讨了马鞭等抗早孕的细胞学作用机理，结果表明２５，５０ｍｇ／ｍｌ马鞭草乙醇提取液对滋养层细胞ＨＣＧ分泌有明显的抑制作用，给药后２４ｈ即见部分细胞变圆，４８ｈ大多固缩死亡，一定浓度的马鞭草可直接杀伤滋养层细胞，抑制ＨＣＧ的分泌而中止早孕。     

新基因ANGPTL4的克隆及其在血管新生中的功能研究

目的　克隆新基因ANGPTL4 ,并探讨其功能。方法　采用以细胞生长为基础的功能筛选方法筛选人胎盘cDNA文库 ,结合RACE PCR方法克隆到一个人全长新基因ANGPTL4 ,用RH PCR方法对其进行染色体定位 ;用原核表达系统对重组ANGPTL4进行蛋白表达 ;用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)试验、原代猪主动脉内皮细胞 (PAEC)体外迁移试验、PAEC体外浸润试验、PAEC体外管状试验及小鼠体内栓子形成试验探讨了新基因ANGPTL4对体内外血管新生过程的影响。结果　获取的人全长基因ANGPTL4定位于染色体 19p13 3,其原核表达产物对PAEC的体外增殖没有明显作用 (P =0 0 5 04 ) ,但ANGPTL4的 2 μg/ml剂量组对PAEC的体外迁移和浸润均有明显的促进作用 (P <0 0 5 ) ,对其管状结构形成也有程度不同的促进作用 ;对小鼠体内血管新生有较明显的促进作用。结论　新基因ANGPTL4对血管新生有促进作用     

Estrogen inhibits corticotropin-releasing hormone production in primary human placental cells

Objective: To study the inhibition effects of estrogen on the production of corticotropin-releasing hormonein human placental cells. Methods: Primary cultured placental cells were treated by ICI182, 780, a complete ER an-tagonist, and Tamoxifen, an ERα-mixed agonist/antagonist and ERβ antagonist for 24 h. The supernatant was havestedfor the radioimmunoassay of CRH. Results: 17β-estradiol inhibited the secretion of corticotropin-releasing hormone inhuman placental (P<0.05).ICI182, 780 stimulated the secretion of corticotropin-releasing hormone in human pla-cental(P<0.05). Conclusion: Estrogen represses the synthesis and secretion of corticotropin-releasing hormone inhuman placental, which is possibly mediated by ERα.     

丙型肝炎病毒对白细胞介素32表达影响的研究

目的 探讨丙型肝炎病毒（HCV）在体内外对白细胞介素32（IL-32）表达的影响。方法 荧光定量PCR和免疫印迹法检测Huh7.5.1细胞中IL-32 mRNA和蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IL-32的血清含量。结果 HCV感染的Huh7.5.1细胞IL-32 mRNA和蛋白的表达水平较对照细胞高,HCV患者IL-32血清含量明显高于健康对照（P〈0.05）。结论 HCV能够在体内外促进IL-32的合成和分泌。     

SGI-1776 钝化Pim-1 对卵巢癌细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制

目的：检测SGI-1776 对卵巢癌HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其可能机制。方法：体外培 养卵巢癌HO-8910 细胞;M法和克隆形成法检测SGI-1776 对HO-8910 细胞的增殖抑制作用;PI 染色流式细胞术(ow cytometry,FCM) 检测SGI-1776 对HO-8910 细胞周期分布的影响;Transwell 法检测SGI-1776 对HO-8910 细胞迁移 及侵袭的抑制作用;ELISA,Western 印迹,siRNA/cDNA 转染检测SGI-1776 对HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭抑制 作用的可能分子机制。结果：SGI-1776 在体外对HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭呈现出浓度依赖性的抑制作用,阻 滞细胞周期于G1 期。随Pim-1 激酶活性降低,Pim-1 蛋白表达下调,同时Pim-1 下游蛋白CDK6,pCDK6,CDK4, pCDK4,CDK2 和pCDK2 表达下调,而P21 和P27 蛋白表达上调。用siRNA 干扰沉默Pim-1 基因,则SGI-1776 对 HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用明显加强;用Pim-1-cDNA 转染HO-8910 细胞,则能部分抵消SGI-1776 对细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论：SGI-1776 通过钝化Pim-1 而发挥其抑制卵巢癌HO-8910 细胞增殖、迁 移和侵袭的作用,提示Pim-1 是卵巢癌治疗的新的分子靶。     

Effect of leptin on cytotrophoblast proliferation and invasion

The effects of leptin on cytotrophoblast proliferation and invasion activity were investigated. Immunohistochemistry was used to determine the placental expression of leptin in first-trimester pregnancy. By using RT-PCR and quantitative real-time PCR, the expression of leptin in cytotrophoblast and the effect of leptin on cytotrophoblast secretion were detected. The potential of cell proliferation, invasiveness and migration was assessed by MTT, Transwell invasion assay and migration assay respectively when the cytotrophoblast was cultured with different concentrations of leptin. The results showed that： （1） Leptin was distributed diffusely around cell membrane, in cytoplasma, and on nuclear mem- brane of cytotrophoblast; （2） Leptin mRNA was expressed in cytotrophoblast. Ten ng/mL leptin could promote the secretion of cytotrophoblast significantly （P〈0.01）; （3） After culture with different concentrations of leptin for 24 h or longer, the proliferation of cytotrophoblast was inhibited, while in 24 h leptin could promote cytotrophoblast invasion and migration. Leptin at a concentration of 500 ng/mL could promote cytotrophoblast invasiveness and migration significantly as compared with controls （P〈0.05）. It was suggested that leptin could inhibit cytotrophoblast proliferation, and promote cytotro- phoblast invasion and migration activity.     

荧光素酶基因标记乳腺癌细胞系鉴定

目的 利用三阴性人乳腺癌MDA-MB-231细胞,对稳定表达荧光素酶的细胞系MDA-MB-231-Luc进行功能评价及鉴定.方法 构建荧光素酶的HIV慢病毒载体,体外感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,经嘌呤霉素筛选后得到稳定表达的细胞系,采用MTT法,利用Transwell侵袭模型,应用伤口愈合细胞划痕实验评价细胞增殖、侵袭和转移能力.结果 利用慢病毒转染的MDA-MB-231细胞能稳定表达荧光素酶,与亲本细胞相比,细胞的增殖、侵袭、迁移能力无显著影响(P>0.05).结论 慢病毒感染乳腺癌细胞能稳定表达荧光素酶,对MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭、转移能力无明显影响,为后续的小动物活体成像实验提供细胞模型.     

促红细胞生成素在人乳腺癌细胞株中的表达及作用

目的: 通过检测重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rh-EPO）对乳腺癌细胞株增殖、凋亡及转移等生物学行为的影响,探讨EPO/EPO-R在乳腺癌发生发展中的作用。方法： 运用RT-PCR、免疫细胞化学Envision法及蛋白质印迹法检测乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中EPO、 EPO-R mRNA含量及蛋白表达;采用MTT比色试验、原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记DNA链断端分析法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dutp-Biotin nick end-labeling assay,TUNEL)、Transwell小室法观察不同浓度rh-EPO 对这两种细胞增殖、凋亡和转移能力的影响。结果：MCF-7和MDA-MB-231细胞中均表达EPO及EPO-R;MTT比色试验和Transwell小室法显示,rh-EPO能增强两种细胞株的增殖活性和迁移侵袭能力,而且具有时间剂量依赖性;TUNEL法显示rh-EPO并没有抑制两株细胞凋亡的作用。rh-EPO对于MCF-7的作用效果强于MDA-MB-231细胞。结论：在不影响癌细胞凋亡的情况下,rh-EPO能够促进MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖活性,提高癌细胞的迁移和侵袭能力。     

miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨MicroRNA-126(miR-126)在人结肠癌细胞中的表达以及对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法应用荧光PCR定量检测60例结肠癌患者的结肠癌组织以及癌旁组织中miR-126的表达,共60对,再测定5株结肠癌细胞(SW480、HT29、HCT116、LOVO、SW620)中的表达情况;CCK-8法、划痕实验和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并进一步通过体外实验研究miR-126对结肠癌细胞生物学行为的影响。结果与癌旁组织细胞比较,miR-126在结肠癌细胞中表达下降(95.0%vs.55.0%,P<0.05),发生转移者与未发生转移者比较,差异有统计学意义(25.0%vs.75.0%,P<0.05)。miR-126可以抑制SW480细胞的生长及其侵袭转移,有基质胶Tran—swell实验中,转染组及空白对照组细胞迁移数分别为(10.0±4.3)个和(258.0±30.6)个;无基质胶的Transwell实验中,分别为(84.0±13.2)个和(335.0±27.3)个,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-126高表达可以增强癌细胞对奥沙利铂的敏感性。结论miR-126可明显抑制结肠癌细胞的发生发展,影响多种结肠癌细胞株生物学行为。     

人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响

目的 :观察人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响。方法 :流式细胞术和免疫荧光检测宫颈癌Hela细胞表面Trop-2蛋白的表达;划痕实验和Transwell检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞凋亡的诱导作用;CCK-8(cell counting kit-8)检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:Hela细胞表面有Trop-2蛋白表达,人源抗Trop-2 Fab能够抑制Hela细胞的增殖,有效降低Hela细胞的迁移和侵袭能力,同时能够诱导Hela细胞凋亡。结论:人源抗Trop-2 Fab能明显降低宫颈癌细胞的恶性生物学行为,Trop-2可作为宫颈癌治疗的潜在靶点。