腺相关病毒末端反向重复顺序折叠结构在真核细胞染色体基因组上的整合作用

腺相关病毒（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）是一类线状单股ＤＮＡ（ＳＳ－ＤＮＡ）的微小病毒。依据Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的ＳＳ－ＤＮＡ病毒复制模型原理，将其末端反向重复顺序（ＩＴＲｓ）分离，变为折叠十字架结构，再以其发夹中的３＇－ＯＨ为引物合成另一股姊妹染色体ＤＮＡ，然后共价连接到亲代分子上，与辅助病毒Ａｄ２和ＰＡＡＶ／Ａｄ共转染真核生物细胞。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分子杂交结果表明：插入这一折叠结构中由ＳＶ４０早期启动子控制的报告基因－新霉素抗性基因拷贝已整合到细胞基因组染色体上，这种以无细菌ＤＮＡ分子为支架的折叠结构不仅证明了Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的理论，而且可望为外源基因导入真核细胞提供新的又一系统。     

登革2型病毒NS3基因的扩增及序列测定

采用热酚法从登革２型病毒４３株（Ｄ２－４３）感染的Ｃ６／３６细胞中提取了病毒ＲＮＡ,以病毒ＲＮＡ为模板,进行Ｄ２－４３株ＮＳ３基因ｃＤＮＡ片段的反转录－ＰＣＲ扩增,片段长度为１１７６ｂｐ。将扩增的ｃＤＮＡ片段克隆到Ｔ载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ｋｓⅡ中。通过双脱氧法测定了ｃＤＮＡ片段序列,与国际标准株ＮＧＣ株序列一致。     

人脑胶质细胞来源神经营养因子基因的克隆及测序

为研究人脑胶质细胞来源的神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ, ＧＤＮＦ） 在神经系统疾病中的作用,根据ＧＤＮＦ 的ｃＤＮＡ 序列设计并合成引物,以流产胎儿脑组织为来源,分别提取ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 作模板,经ＲＴ ＰＣＲ 和ＰＣＲ 技术扩增人ＧＤＮＦ 基因片段,采用ＤＮＡ 重组技术将其克隆于ｐＧＥＭ Ｔ Ｅａｓｙ 载体中并测序。结果：ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 体外扩增得到的片段均是４１０ ｂｐ ,两者无差异。ＰＧＥＭ ＧＤＮＦ 经酶切鉴定正确,测序结果与Ｇｅｎｅｂａｎｋ 比较基本相同。由于ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 扩增得到的片段大小相同,证实该基因片段内无内含子插入,该片段可用于真核及原核表达。     

基因疗法及其在艾滋病治疗研究中的应用

基因疗法及其在艾滋病治疗研究中的应用周辰生物化学教研室许多ＲＮＡ、ＤＮＡ病毒的感染最终可导致肿瘤。对其致病机理的研究发现，肿瘤病毒的基因组可以长期稳定地整合到靶细胞内的染色体ＤＮＡ中，从而使靶细胞转化成肿瘤细胞。基于对肿瘤病毒致病机理的以上认识，Ｆｒ...     

克隆乙型肝炎病毒DNA在肝与肾细胞中复制与表达的研究

对比研究在外细胞培养系统中乙型肝炎病毒在肝,紧名的复制与表达。方法髟克隆ＨＢＶＤＮＡ分别转染ＨｅｐＧ２与２９３细胞系;ｐ１７７ｔｎ与ｐ３．８Ⅱ还转染了原代人胚肾细胞。培养后收集转染细胞培养上清液,用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ与ＨＢｅＡｇ;提取转染细胞的ＤＮＡ与ＲＮＡ,进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ与Ｎｏｒｈｅｒｎ印迹杂交检测细胞内ＨＢＶＤＮＡ与ＨＢＶＲＮＡ。结果转染ＨｅｐＧ２细胞,ＨＢｓＡｇ与ＨＢｅＡｇ均有     

应用RNA探针检测流感病毒特异性RNA

插入流感病毒Ａ／Ａｉｃｈｉ（Ｈ３Ｎ２）ＮＰ ｃＤＮＡ的ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＾＋质粒，分别经Ｘｃｍ Ｉ和ＢｓｐＭＩ线性化之后，以此为模板用Ｔ７和Ｔ３ＲＮＡ多聚酶合成了同位素标记的正链和负链ＲＮＡ探针。流感病毒在狗肾传代细胞（ＭＤＣＫ）生长良好，而在其变异株ＭＤＣＫ－Ｌ细胞生长受阻。为了分析比较两种细胞中流感病毒基因复制情况，作者应用上述ＲＮＡ探针，检测了接种流感病毒的两种细胞中病毒ＲＮＡ（ｖ     

DNA病毒

ＤＮＡ病毒（ＤＮＡｖｉｒｕｓｅｓ）：由于病毒与其它生物不同，它只含有一种类型的核酸，所以凡是以ＤＮＡ作为病毒的基因组者均称为ＤＮＡ病毒。ＤＮＡ病毒所含有的ＤＮＡ在不同的ＤＮＡ病毒中；其核苷酸排列序列（化学组成）及物理性状（结构、形态、分子量等）也不相...     

慢性肝病HBVDNA,HDVRNA原位杂交及HBsAg,HBcAg研究

以特异性和敏感性较高的地高辛配基探针原位分子及免疫组化技术，对云南６８例病毒性肝炎ＣＰＨ，ＣＡＨ，肝细胞癌及癌周组织进行ＨＢＶＤＮＡ，ＨＤＶＲＮＡ，ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ研究，结果表明：ＨＢｓＡｇ作为靶抗原诱发机体免疫反应，参与炎症过程；除浆膜型ＨＢｃＡｇ，弥漫型，膜型ＨＢｓＡｇ外，ＨＢＶＤＮＡ在肝组织中表达也与肝炎活动性有关；     

肾综合征出血热病毒R22株感染人血管内皮细胞的核酸原位杂交研究

用地高辛配基（Ｄｉｇ－）标记我国肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒Ｒ２２株片段ｃＤＮＡＲ３克隆探针对ＨＦＲＳ病毒Ｒ２２株感染的人血管内皮细胞（ＨＥＣｓ）作核酸原位杂交，杂交结果显示在受染的血管内皮细胞胞浆内有明显的杂交信号，而正常细胞和ＨＦＲＳ病毒感染经ＲＮＡ酶处理组不出杂交信号，结果表明ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ主要定位于血管内皮细胞的细胞浆中，提示病毒ＲＮＡ在胞浆中复制。     

反义寡核苷酸设计策略与学习记忆研究

反义核酸是指与体内某ＲＮＡ或ＤＮＡ序列具有互补顺序,并能通过碱基配对与互补链杂交,从而影响其转录或翻译过程的ＲＮＡ或ＤＮＡ片段。反义ＲＮＡ和ＤＮＡ的特异性源自反义序列和靶序列之间的碱基配对。反义核酸的长度可长可短,长的反义核酸一般都借助表达载体导入细胞,通过在细胞中进行转录而实现功能。反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＯＤＮ）是短序列的单链ＤＮＡ,在体外通过化学合成,与细胞内特异的靶序列互补。ＯＤＮ比通过表达载体导入的方式应用广泛,而且由于它可以作为反义…     

Northern杂交法分析转染的胞苷酶

目的：研究人胞苷转移酶（ＣＴ）ｃＤＮＡ在鼠巨噬细胞中的表达。方法：按照Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ等人的方法人转染的巨噬细胞中提取总ＲＮＡ，电泳分离ＲＮＡ，转移ＲＮＡ至尼龙膜并固定，制备３２ｐ标记的胞苷转移酶ＤＮＡ探针，杂交及放射性自显影。结果：对照组无表达，同类转染的细胞均有不同程度的表达。结论：制备探针前应用电泳法确定ＣＴｃＤＮＡ片段的浓度比紫外光吸收法更准确适用。Ｑｕｉｃｋｓｐｉｎ柱（Ｓｅｐｈａｄｅ     

人胃癌组织WAF1基因的缺失与不表达

目的 探讨ＷＡＦ１与胃癌的关系，为胃癌基因治疗提供有价值的依据。方法 ３２例胃癌和３０例正常胃粘膜标本提取细胞ＤＮＡ，总ＲＮＡ，ＭＴＳ１ｃＤＮＡ探针采用随机引物法进行＾３２Ｐ－ｄＡＴＰ掺入标记，ＷＡＦ１与所提ＤＮＡ，ＲＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析，检测标本于中无ＷＡＦ１的缺失和ｍＲＮＡ的不表达。ｐ５３抗体与提取的蛋白质进行Ｗｅｓｔｒｎ印迹分析，检测标本中有无ｐ５３的表达，结果     

异硫氰酸胍法提取大鼠睾丸总RNA及质量鉴定

本实验应用改良的异硫氰酸胍法从睾丸中提取总ＲＮＡ。经紫外分光光度计检测，ＯＤ２６０ｎｍ／ＯＤ２８０ｎｍ≥１．８，表明蛋白质污染少，ＲＮＡ纯度较高。经变性琼脂糖凝胶电泳可见清晰的１８ｓ和２８ｓ两条带，经ＲＮａｓｅＡ消化的样品中条带消失，表明所提取物质确为ＲＮＡ，并无降解。以雄激素受体ｃＤＮＡ为探针，应用分子杂交法检定杂交信号居１８ｓ稍后，表明总ＲＮＡ中这种特定的ｍＲＮＡ未发生降解。同时证明ＲＮＡ提取     

原癌基因K-ras mRNA的体外核酶定点切割

目的：确定人工设计的梅核Ｒｘ１９９对原癌基因Ｋ－ｒａｓ ｍＲＮＡ的体外切割活性，为Ｋ－ｒａｓ特异性核酶的体内应用提供依据。方法：利用ＤＮＡ重组技术构建Ｋ－ｒａｓ外显子１及核酶Ｒｚ１９９的体外转录质粒，以Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行转录获得核酶Ｒｚ１９９对其靶ＲＮＡ分子进行切割。结果：Ｋ－ｒａｓ体外转录体为２５４ｎｔ的ＲＮＡ分子，能被核酶Ｒｚ１９９切割成大小分别为９０，１６４ｎｔ的２个片段。结论：梅核Ｒａ１     

庚型肝炎病毒的临床检测

庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ)是 1995年美国Ｇｅｎｅｌａｂｓ的Ｋｉｍ等和Ａｂｂｏｔｔ公司的Ｓｉｍｏｎｓ等发现的人类致肝炎病毒。ＨＧＶ为单股正链ＲＮＡ病毒 ,与丙型肝炎病毒(ＨＣＶ)同属黄病毒属ＲＮＡ病毒 ,且具有相似的传播途径 ,但对其流行病学和临床特点等问题还了解甚少。本文应用套式聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术检测ＨＧＶ ,同时检测乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ) ＤＮＡ、ＨＣＶ ＲＮＡ、抗甲型肝炎病毒 (ＨＡＶ) ＩｇＭ ,抗戊型肝炎病毒 (ＨＥＶ) ,丙氨酸氨基转移酶 (ＡＬＴ) ,天门冬酸氨基转移酶 (ＡＳＴ) ,血清胆红素 (ＳＢ) ,对 731例患…     

RNase H在反义寡聚脱氧核苷酸抑制小鼠白血病病毒表达过程中的作用

用与Ｍｏｌｏｎｅｙ小鼠白血病病毒（Ｍｏ－ＭｕＬＶ）５＇端引物序列、ｅｎｖ－ＬＴＲ间序列及ｐｏｌ基因互补的三种反义脱氧寡核苷酸（１４ｍｅｒ，１８ｍｅｒ，３５ｍｅｒ）进行抗小鼠白血病病毒（ＳＲＳＶ）作用研究。发现它们在兔网织红细胞体外翻译系统中能抑制ＳＲＳＶｍＲＮＡ的转译，其中，３５ｍｅｒ作用最强，浓度为８μｍｏｌ／Ｌ时抑制率约４０％１４ｍｅｒ作用较弱，抑制率仅２３％；ＲＮａｓｅＨ能有效降解不对称ＰＣＲ反应合成的单链反义ＤＮＡ（１１９ｍｅｒ）与ＳＲＳＶＲＮＡ杂交体中的ＲＮＡ，加入ＲＮａｓｅＨ后，３５ｍｅｒ和１８ｍｅｒ对ＳＲＳＶｍＲＮＡ转译的抑制率分别由４２％提高到５９％和２７％提高到３３％，但１４ｍｅｒ抑制率无改变。提示反义寡核苷酸能有效地抑制ＳＲＳＶｍＲＮＡ的表达，这种作用呈序列特异性和剂量依赖性。它们可能是通过ＲＮａｓｅＨ对反义ＤＮＡ·ＳＲＳＶｍＲＮＡ杂交体中的ＲＮＡ降解所致。     

异硫氰酸胍法提取大鼠睾丸总RNA及质量鉴定

本实验应用改良的异硫氰酸胍法从睾丸中提取总ＲＮＡ。经紫外分光光度计检测，ＯＤ２６０ｎｍ／ＯＤ２８０ｎｍ≥１．８，表明蛋白质污染少，ＲＮＡ纯度较高。经变性琼脂糖凝胶电泳可见清晰的１８ｓ和２８ｓ两条带，经ＲＮａｓｅＡ消化的样品中条带消失，表明所提取物质确为ＲＮＡ，并无降解。以雄激素受体ｃＤＮＡ为探针，应用分子杂交法检定杂交信号居１８ｓ稍后，表明总ＲＮＡ中这种特定的ｍＲＮＡ未发生降解。同时证明ＲＮＡ提取过程中，如第一步－２０℃沉淀时间过长，可引起ＲＮＡ降解。     

反义核酸技术及其在心血管研究中的应用

反义核酸技术及其在心血管研究中的应用北京医科大学生物化学教研室邱京欣，周爱儒北京医科大学生物化学教研室反义（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ）核酸是揩按照碱基互补配对原则，能够与互补链（靶基因或其表达的ｍＲＮＡ）特异结合，从而影响靶基因转录或翻译的ＲＮＡ或ＤＮＡ片...     

逆转录病毒的研究和应用

逆转录病毒是一类重要的ＲＮＡ动物病毒 ,病毒ＲＮＡ在自身编码的逆转录酶的催化作用下 ,逆转录成病毒双链ＤＮＡ中间体 ,整合入宿主细胞ＤＮＡ ,形成前病毒 (Ｐｒｏｖｉｒｕｓ)形式 ,进行复制增殖。某些逆转录病毒可转导发生了微小遗传改变的细胞癌基因 (ｃｅｌｌｕｌａｒｏｎｃｏｇｅｎｅ,ｃ ｏｎｃ)或原癌基因 (ｐｒｏｔｏ ｏｎｃｏｇｅｎｅ) ,并将之置于病毒的调节成分控制之下。逆转录病毒感染敏感宿主细胞可建立慢性感染。病毒基因的连续表达通常对细胞无毒性效应 ,大多数逆转录病毒都是非杀细胞的。逆转录病毒科的肿瘤病毒亚科很多成…     

乙肝病毒在转染细胞（z7－4）中复制的探讨

用ＨＢＶ　ＤＮＡ二聚体转染高度分化的人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２），筛选出具有分泌病毒抗原、核酸以及释放４２ｎｍ　Ｄａｎｅ颗粒能力的ｚ７－４细胞株。本实验结果支持３．５ＫｂｍＲＮＡ是前病毒基因，以它作模板可逆转录成１．６Ｋｂ（－）ｓｓＤＮＡ，再合成（＋）ｓｓＤＮＡ，最后装配成４．０Ｋｂ和３．２ＫｂｄｓＤＮＡ。在ＤＮＡ印迹法中位于４．０Ｋｂ（Ｄ１）和３．２Ｋｂ（Ｄ２）处是病毒的松驰环状双股ＤＮＡ（ＲＣＤＮＡ），而１．６Ｋｂ和１．２Ｋｂ处的２条ＤＮＡ带（Ｓ１和Ｓ２）均为单股ＤＮＡ，这些不同位置的ＤＮＡ带与病毒复制过程中ＤＮＡ的构型和片断大小不同有关。本实验未能发现２．０ＫｂｃｃｃＤＮＡ，但提示了负股ＤＮＡ５’端连接有蛋白质引物。