原位分子杂交检测大鼠肾综合征出血热病毒隐性感染和病毒RNA的体内分布

目的和方法：用异羟基洋地黄毒苷配基－１１－ｄＵＴＰ随机引物延伸法分别标记肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）汉坦株病毒Ｍ与ＳＲＮＡ全片段ｃＤＮＡ作为探针，用核酸原位分子杂交法检测某动物所一批大鼠ＨＦＲＳ病毒的隐性感染及病毒ＲＮＡ的组织细胞定位和分布．结果：９８只大鼠中８８只病毒ＲＮＡ阳性，阳性率８９．７９％，阳性率最高的脏器是肝脏７９／８５，其次为心脏２２／８３，再次为肾脏１４／７９，其余脏器阳性率较低．阳性部位主要在各脏器的实质细胞胞浆内，呈细颗粒状，未见于核内．结论：结果说明本批大鼠ＨＦＲＳ病毒隐性感染率极高；大鼠ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ的阳性检出率明显高于同批大鼠病毒抗原和血清抗体的阳性检出率，说明原位分子杂交检测病毒ＲＮＡ对确定动物病毒隐性感染具有重要的流行病学意义．病毒ＲＮＡ主要存在于肝脏，提示肝脏可能是病毒的主要潜伏部位，病毒可能主要由粪便排除．     

原位分子杂交检测大鼠肾综合征出血热病毒隐性感染和病毒…

用异羟基洋地黄毒苷配基－１１－ｄＵＴＰ随机引物延伸法分别标记肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）汉坦株病毒Ｍ与ＳＲＮＡ全片段ｃＤＮＡ作为探针，用核酸原位分子杂交法检测某动物所一批大鼠ＨＦＲＳ病毒的隐性感染及病毒ＲＮＡ的组织细胞定位和分布。结果：９８只大鼠中８８只病毒ＲＮＡ阳性，阳性率８９．７９％，阳性率最高的脏器是肝脏７９／８５，其次为心脏２２／８３，再次为肾脏１４／７９，其余脏器阳性率较低，阳性部位主要在     

肾综合征出血热病毒在体外培养的血管内皮细胞中增殖的研究

目的 研究肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒在血管内皮细胞（ＨＥＣ）内的增殖。方法 采用微量免疫酶斑法检测ＦＲＳ病毒（Ａ９、ＰＵＶ株）感染后ＨＥＣ的病毒繁殖动态，亲与病毒在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞繁殖动态相互对比。结果 ＨＦＲＳ病毒感染ＨＥＣ后第一天即可检验到病毒释放，Ａ９株第３在达增殖高峰，ＰＵＶ株第７天达增殖高峰。结论 ＨＦＲＳ病毒可在原妈靶细胞ＨＥＣ内增殖但不同的病毒株繁殖速度不同，这种差异可能与其致     

肾综合征出血热病毒结构蛋白抗原及其相应抗体的检测

１０株ＨＦＲＳＶ乳小白鼠脑内接种传代后，滴定其毒力（ＰＦｕ／０．１ｍｌ）、核、膜结构蛋白抗原（ＲＰＨＡ、ＨＡ）、并以活毒一次免疫，１个月后以ＩＦＡ、ＨＩ、ＲＰＨＩ、ＰＲＮＴ检测血清中相应抗体。并以交叉ＨＩ、交叉ＲＰＨＩ证实各毒株间抗原性的关系。结果提示：选择ＨＦＲＳ疫苗株时，高的ＨＡ／ＲＰＨＡ比值是必要的；且ＵＲ、Ｒ＿（２２）、Ｌ＿（９９）株病毒抗体与其它１０株病毒有广泛的交叉反应、被推荐为疫苗首选毒株，需进一步与ＨＦＲＳ各型病毒作广泛的交叉试验。     

肾综合症出血热肾组织中病毒感染及病毒抗原的来源和意义

目的：明确肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）肾组织中病毒感染及抗原的来源和意义。方法：应用免疫组化和原位分子杂交技术，分别对西安、沈阳、上海、江西和广州地区收集的３０例ＨＦＲＳ尸检肾组织进行了研究；结果：２８例进行病毒抗原检测，有２６例阳性（２６／２８／３０）；２８例进行病毒ＲＮＡ检测，２６例阳性（２６／２８／３０）。西安及沈阳病例，病毒抗原和ＲＮＡ阳性部位主要是肾小管上皮细胞。上海及江西病例，病毒抗原定位于肾间质血管内皮，血管壁和肾小管上皮；而病毒ＲＮＡ主要定位于肾间质血管和血管内皮，少数病例伴肾小管上皮细胞阳性；１例上海病例肾小管上皮细胞胞核病毒ＲＮＡ阳性。广州病例，病毒抗原主要定位于肾血管平滑肌细胞；在３例西安病例和６例上海病例肾脏远曲小管和集合管上皮细胞中检测到ＮＰ和ＨＡ抗原阳性的胞浆内病毒包涵体（ＣＩＢ）。在病变严重的肾小管和间质血管部位可同时检测到ＩｇＧ，ＩｇＭ和Ｃ３阳性；少数病例肾小球也有不连续阳性，但较前两者弱。结论：ＨＦＲＳ病毒可感染肾脏中肾小管上皮和血管内皮，并在肾小管上皮细胞产生包涵体，不同地区病例肾脏中病毒感染的部位不同，可能与不同地区病例所感染的病毒毒株或血清型不同有关。病毒感染所诱发的Ⅱ     

磁式RT—PCR检测肾综合征出血热病毒方法的建立及应用

针对汉坦病毒中国代表株（Ａ９、Ｒ２２）Ｍ基因片段设计分型引物（Ⅰ、Ⅱ型），采用改进的异太氰酸胍酚一步法（胍酚法）提取汉坦病毒ＲＮＡ，套式ＲＴ－ＰＣＲ检测稀释病毒上清模拟病人血清和２０例急性期血清样本。结果：能检测到模拟血清中少至几个ＰＦＵ病毒ＲＮＡ，敏感性５－１０ｆｇ。检测过程可在５ｈ内完成。２０例急性患者血清检测阳性率为１００％，并能进行临床分型。扩增产物经打点杂交产其特异性。而正常及非ＨＦＲＳ     

肝脏中肾综合征出血热病毒感染与c—myc基因的表达以及免…

观察比较人和动物肝脏感染肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒后病变的异同。方法以原位分子杂交和免疫组化检测ＨＦＲＳ尸检及自然感染大鼠肝脏中病毒ＲＮＡ，病毒抗原及免疫球蛋白（Ｉｇ）的定位和分布及尸检肝脏中ｃ－ｍｙｃ基因。结果：尸检肝脏中病毒ＲＮＡ，病毒抗原和Ｉｇ的阳性率分别为８４．２１％，８８．２３％和５３．５０％，大鼠肝脏阳性率分别为９２．９０％，９３．１０％和５４．５０％，尸检肝脏ｃ－ｍｙｃ基因阳性率     

肾综合征出血热病毒感染人肾小球系膜细胞的电镜观察

进一步探讨肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒对肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）的作用及其在ＨＦＲＳ肾脏损害发病机理中的作用。用透射电镜观察ＨＦＲＳ病毒ＳＲ－１１株感染的人ＭｓＣ。发现感染细胞多有不同程度的病理改变，胞浆内可见病毒样颗粒及病毒包涵体。ＨＦＲＳ病毒对人ＭｓＣ的直接损害作用可能与ＨＦＲＳ的肾脏损害有关。     

出血热病毒R22株感染对培养的脐静脉内皮细胞细胞周期及DNA …

方法：采用流式细胞术和＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法。目的：分析肾综合征出血热病毒Ｒ２２株感染对人血管内皮细胞（ＨＥＣｓ）的细胞周期和细胞ＤＮＡ合成率的影响。结果：病毒感染可明显延缓ＨＥＣｓ细胞周期进程，降低细胞ＤＮＡ合成率，细胞增殖受到明显的抑制。结论：ＨＦＲＳ病毒对ＨＥＣｓ有直接致病作用。     

肾综合征出血热病毒对体外培养的人胚肾小球系膜细胞的影响

观察肾综合征出血热病毒Ａ９株（ＨＦＲＳＶ－Ａ９）对体外培养的人胚肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）的影响以及病毒唑、磷甲酸钠对病毒感染的抑制作用。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、间接免疫荧光法（ＩＦＡ）、免疫酶组化法和电镜等技术检测ＭｓＣ中病毒、抗原与培养上清液中的病毒滴度。结果：ＨＦＲＳＶ－Ａ９感染ＭｓＣ７天后细胞中便有病毒抗原表达；电镜下胞浆中见到病毒颗粒和包涵体：病毒唑与磷甲酸钠能降低病毒抗原表达     

In situ hybridization detection of persistent infection and viral RNA distribution in laboratory rats with hemorrhagic fever

ＩｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｖｉｒａｌＲＮＡｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎｌａｂｏｒａｔｏｒｙｒａｔｓｗｉｔｈｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｆｅｖｅｒｗｉｔｈｒｅｎａｌｓｙｎｄｒｏｍｅ...     

Hemorrhagic fever with renal syndrome virus infection in livers studied by in situ hybridization and immunohistochemistry

ＨｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｆｅｖｅｒｗｉｔｈｒｅｎａｌｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎｌｉｖｅｒｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＹａｎｇＳｈｏｕｊｉｎｇ（杨守京）；Ｌ...     

R_(22)株M片段cDNA探针在流行性出血热患者病原诊断研究中的应用

用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步提取法从流行性出血热患者和感染家兔微量血清中提取肾综合征出血热(HFRS)病毒 RNA,然后与(α-~(32)P)dCTP 标记的 R_(22)株 HFRS 病毒 M 片段探针杂交,在6例患者血清和2例感染兔血清共8例样品中,有7例出现明显的杂交信号,而正常对照血清和培养细胞为阴性。R_(22)株 M 片段 cDNA 探针可进一步试用于临床肾综合征出血热病毒的检测。     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

间接荧光抗体技术(IFAT)已广泛用于肾综合征出血热(HFRS)病毒抗原的检测,其不足之处是需用荧光显微镜,有一定主观性及不能检测可溶性抗原。本文建立了以同样的抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)作为包被和第二抗体,以酶标葡萄球菌A蛋白(SpA)作指示抗体的双McAb ELISA间接夹心法,初步用于感染细胞培养上清及组织标本中HFRS病毒抗原的检测,获得较满意结果。     

Detections of HFRS Virus Antigen and Antibody by a McAb ELISA Indirect Sandwich Method

An ELISA indirect sandwich method using monoclonal antibodies(McAb)against hem-orrhagic fever with renal syndrome(HFRS)virus has been developed fordetections of HFRS virus antigen and specific antibody.Dynamic changes of HFRS virusantigens in the cells infected and their culture supernatants were observed by indirectfluorescence-antibody technique(IFAT)and ELISA separately.It was shown that HFRSvirus antigens in the cells and in the supernatants peaked separately 8 days and 14 daysafter infection.A hundred and seventy-nine brain and lung specimens of suckling miceinfected were examined by ELISA and IFAT.The positive rates were 72.1% and 68.2%,respectively.Furthermore,the IgM antibodies of 121 sera from HFRS patients wereexamined by ELISA and IFAT.The positive rates were 90.1% and 83.5% respectively.The IgG antibodies of 178 sera from HFRS patients were also examined by the twomethods,and both of the positive rates were 89.3%.The antibody titer measured byELISA was higher than the titer by IFAT.The above results suggest that the ELISA is aspecific and sensitive method and can be used for early diagnosis,epidemiologicalsurveillance and etiological study of HFRS.