miR-100基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定

目的 探讨miR-100基因敲除小鼠模型的构建及基因鉴定.方法 将引进的miR-100flox/flox小鼠与EIIa-Cre小鼠进行交配繁育出F1代小鼠,将F1代小鼠中基因型为miR-100flox/-的雌雄小鼠继续进行交配,获得F2代小鼠,待小鼠1周龄时剪尾部组织提取DNA,PCR法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定.结果 结果显示有所需要的miR-100基因敲除纯合子小鼠,将获得的敲除纯合子小鼠再交配,就可获得更多的基因敲除纯合子小鼠.F1代杂合子小鼠交配获得的F2代小鼠中出现3种基因型:miR-100flox/flox、miR-100flox/-、miR-100-/-,使用 PCR 法成功鉴定出了子代小鼠的基因型.同时剪取miR-100敲除纯合子小鼠、miR-100flox/flox小鼠及miR-100敲除杂合子小鼠的耳朵提取RNA,然后进行qRT-PCR验证miR-100的表达情况.qRT-PCR结果显示,miR-100基因全身敲除纯合子小鼠的耳朵中miR-100的表达几乎为零.结论 该实验成功配繁出miR-100基因全身敲除的小鼠模型,为后续实验提供基础.     

类固醇受体辅活化子-1基因敲除小鼠的繁殖与筛选

目的 繁殖和鉴定SRC-1基因敲除小鼠.方法 将所引进的雄性野生型小鼠和雌性SRC-1基因敲除小鼠进行交配繁殖,繁殖成功后其子代均为杂合子,杂合子和杂合子再交配就可以得到野生型、杂合型及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雌性和雄性纯合子,其子代就均为纯合子.结果 SRC-1小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦成功获得了较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及筛选方法,可以获得较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.     

SRC-3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的繁殖和鉴定SRC-3基因敲除小鼠.方法将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雄性纯合子,就将其与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠.结果SRC-3杂合子小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠.结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得SRC-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径.     

水通道蛋白1基因敲除小鼠的饲养繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖和基因型鉴定水通道蛋白1（aquaporin-1，AQP-1）基因敲除小鼠。方法 将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖，繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型，提取每只小鼠尾部基因组DNA，用PCR法进行鉴定，一旦获得雄性纯合子，将其与雌性杂合子交配，依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果AQP-1基因敲除杂合子小鼠的饲养和繁殖及鉴定均获得成功，并得到较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从亲代杂合子小鼠中获得AQP-1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

Lck-Cre×Perp^flox/flox条件敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的 制备Cre-LoxP重组酶系统调控下的T淋巴细胞Perp基因条件性敲除的纯合子小鼠并进行鉴定,为进一步在整体动物水平研究Perp基因在T细胞发育以及在自身免疫疾病发病中的作用提供研究平台.方法 将引进的Perp条件敲除小鼠和T淋巴细胞特异性表达Cre重组酶的Lck-Cre小鼠分别进行繁殖和鉴定,然后将两种小鼠进行杂交并对其子代小鼠的基因型进行鉴定,其子代基因型为Lck-Cre×Perpflox/flox的小鼠即为本实验所构建的T细胞Perp基因特异性敲除的纯合子小鼠.结果 Lck-Cre×Perp^flox/flox的纯合子小鼠被繁殖成功并准确鉴定.Lck-Cre×Perp^flox/flox小鼠脾脏CD3-细胞的Perp基因的RNA及蛋白表达水平与Lck-Cre×Perp^＋/＋小鼠相比显著降低.结论 本研究利用Cre-LoxP技术成功构建了T细胞特异性敲除Perp基因的纯合子小鼠,为进一步研究Perp基因在T淋巴细胞发育以及自身免疫性疾病发病中的作用提供了优良的工具.     

水通道蛋白3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的: 繁殖和鉴定水通道蛋白3(AQP-3)基因敲除小鼠。方法: 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性纯合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果: AQP-3杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论: 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得AQP-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

DDR2血管内皮细胞条件性基因敲除小鼠的复制、鉴定及表型分析*

目的 应用Cre/LoxP系统复制盘状结构域受体2（DDR2）在血管内皮细胞可诱导性条件性基因敲除小鼠模型DDR2i?EC（DDR2flox/flox,Cdh5-Cre/ERT2）,并分析其在肝脏中的表型。方法 复制DDR2打靶载体,通过电转入小鼠胚胎干细胞（ES细胞）打靶,通过聚合酶链反应（PCR）+脱氧核糖核酸（DNA）印迹法鉴定筛选阳性ES细胞,将阳性的ES细胞注射到C57BL/6N小鼠囊胚,移植入受体小鼠子宫以获得嵌合体小鼠。将得到的嵌合体小鼠与C57BL/6N小鼠回交得到F0杂合子,F0代杂合小鼠自交筛选获得F1代DDR2flox/flox小鼠,该小鼠与Cdh5-Cre/ERT2小鼠杂交,通过子代自交获得DDR2在血管内皮细胞可诱导性条件性基因敲除（DDR2flox/flox, Cdh5-Cre/ERT2）小鼠。他莫昔芬诱导血管内皮细胞上DDR2基因敲除,对小鼠进行表型分析。结果 获得DDR2血管内皮细胞可诱导性条件性基因敲除小鼠DDR2i?EC（DDR2flox/flox,Cdh5-Cre/ERT2）,DDR2i?EC小鼠出生时符合孟德尔遗传定律,发育良好,他莫昔芬诱导敲除小鼠血管内皮细胞DDR2基因表达后,小鼠出现自发性肝纤维化及黄体血管新生障碍等表型。结论 成功复制DDR2血管内皮细胞可诱导性条件性基因敲除小鼠模型。血管内皮细胞DDR2缺失能导致自发性肝纤维化。     

利钠肽受体-A基因敲除小鼠的繁育与鉴定

目的:繁殖和鉴定NPR-A基因敲除小鼠.方法:将所引进的雄性野生型和雌性NPR-A基因敲除杂合子小鼠进行交配繁殖,可以得到野生子、杂合子及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行基因型鉴定.结果:NPR-A基因敲除小鼠的饲养和繁殖均获得成功,成功获得了较多的NPR-A基因敲除纯合子小鼠.结论:雌、雄性NPR-A基因敲除杂合子小鼠交配是繁育NPR-A基因敲除纯合子子鼠的较好方法;用PCR方法能够精确鉴定NPR-A基因敲除纯合子子鼠.     

血液系统条件性DNMT 3B 基因敲除小鼠的构建及鉴定

目的 构建可在血液系统中条件性敲除DNMT 3B 基因小鼠并进行鉴定,为研究DNMT 3B 基因的生物学功能及其在血液肿瘤疾病的作用机制提供动物模型。方法 将引进的DNMT3Bflox/flox 小鼠与Mx1-Cre+ 小鼠进行杂交繁殖,得到基因型DNMT3Bflox/+Mx1-Cre+ 及DNMT3Bflox/+Mx1-Cre- 两种子代,再用这两种子代杂交产生子代小鼠,通过PCR 法鉴定子代小鼠的基因型;获得基因型为DNMT3Bflox/flox Mx1-Cre+ 的小鼠,通过腹腔注射pI-pC 共5 次诱导DNMT3B 敲除,然后用半定量PCR 方法鉴定DNMT 3B 基因敲除情况。结果 基因型鉴定确认在13 只子鼠中有2 只为DNMT3Bflox/flox Mx1-Cre+,经pI-pC 腹腔注射后,DNMT 3B 基因通过Cre/loxP 系统被成功敲除。结论 该方法成功构建可以在血液系统条件性敲除DNMT 3B 基因的小鼠,并进行敲除后鉴定。     

Nrf2基因敲除小鼠的饲养繁殖及基因型鉴定

目的 繁殖和鉴定Nrf2基因敲除小鼠.方法 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功的子代有3种基因型小鼠,即野生型、杂合子以及纯合子小鼠,从繁殖成功的小鼠尾巴中提取基因组DNA,用PCR法鉴定小鼠的基因型.结果 Nrf2杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得Nrf2基因敲除纯合子小鼠的有效途径.