小发卡状RNA介导的人呼吸道黏膜下腺细胞对水通道蛋白5的抑制及其对MUC5AC表达的影响

水通道蛋白5（AQP-5）不仅表达在肺泡Ⅰ型上皮细胞，还广泛分布于外分泌腺腺泡的细胞膜上。近来研究表明AQP-5基因敲除小鼠呼吸道黏膜下腺的分泌下降一半、蛋白浓度升高，说明其在呼吸道黏膜下腺液体分泌中有重要作用。     

流式细胞磁珠微阵列法检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义

 目的   探讨流式细胞磁珠微阵列法(cytometric beads array,CBA)检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义。
方法   纳入慢性持续期哮喘40例,急性发作期哮喘22例,健康人 18例。抽取外周血2 mL,采用CAB法检测外周血清中细胞因子水平,并分析各细胞因子特征及与临床数据的相关性。全自动血细胞及生化仪检测血常规,C反应蛋白和降钙素原。结果   定制含7种细胞因子微球(分别为IL-5,IL-6,IL-10,IL-13,IL-17,TNF-α,IFN-γ)的CBA试剂盒。与健康人相比,7种细胞因子在慢性持续期哮喘无明显改变。急性发作期哮喘细胞因子升高分为5种亚群,分别为IL-6升高型(22.8%)、IL-6/TNF-α双高型(13.6%)、IL-5升高型(31.8%)、IL-17升高型(占13.6%)及细胞因子正常型(占18.2%)。其中,IL-6、TNF-α明显升高,较健康人分别升高了6.28~12倍和17.3倍。IL-6升高型、IL-6/TNF-α升高型与白细胞及C反应蛋白呈正相关(R2=0.63,R2=0.67;P<0.05)。结论   CBA法可快速检测哮喘血清标本的多种细胞因子水平,细胞因子在慢性持续期无明显升高,但IL-6、TNF-α、WBC和CRP的综合指标有助于判断由细菌感染诱发的急性加重,并快速指导抗生素的使用。       

尼达尼布治疗特发性肺纤维化的长期疗效及安全性: 单中心参与INPULSIS及INPULSIS ON的系列病例分析

 目的 探讨尼达尼布治疗特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的长期临床疗效及安全性。方法 本中心于2012年7月起参加全球尼达尼布治疗IPF的为期52周的随机双盲Ⅲ期临床试验(INPULSIS,INPULSIS ON),共入组10例IPF患者。1年研究结束后,继续追踪随访至今,共约9年。经揭盲分析后发现,试验组(尼达尼布组)6例,对照组(安慰剂组)4例。记录治疗前后两组患者用力肺活量(FVC绝对值及FVC%pre)、一氧化碳弥散量(DLCO%pre)、SGRQ评分的变化及急性发作次数,持续记录患者的生存状况,并观察不良反应发生情况。结果 治疗前两组FVC和DLCO无显著差异,治疗后试验组FVC下降趋势相对较缓,FVC%pre年下降率为2%,对照组为4.9%。DLCO的年下降率及SGRQ评分变化两组无明显差异。随访期间8例患者病死,其中试验组4例(4/6),对照组4例(4/4)。Kaplan-Meier生存曲线发现试验组有生存优势,但由于病例数少,未达到统计学差异。试验组不良反应发生率为50%(3/6),多为腹泻、腹部不适。程度多为轻至中度。2例生存至今的受试者,1例服用尼达尼布至今,1例服用尼达尼布1.5年后因腹泻退出研究。这2例肺功能追踪发现,长期服用尼达尼布者FVC%pre更稳定,急性加重次数较少。而中途停药者8年时复查FVC%pre已下降24.8%,急性加重3次。结论 尼达尼布可能延缓IPF患者FVC的下降趋势及延长生存时间,减少急性加重,长期服用具有较好的耐受性。     

3D-胸部CT估算肺纤维化程度在特发性肺纤维化预后分析中的应用

 目的 探讨3D-CT（three-dimensional CT）估算的肺纤维化体积（fibrotic lung volume,FLV）占肺总体积（total lung volume,TLV）的百分比（简称CT_FLV/TLV%）是否可预测特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）患者的预后。方法 纳入复旦大学附属中山医院2012年3月1日—7月31明确诊断为IPF的患者。记录患者一般情况、肺功能参数、圣乔治评分、GAP评分、氧饱和度和CT_FLV/TLV%等,分析各指标对患者生存期的影响。患者随访至2020年7月31日。结果 共纳入10例IPF患者,最长随访时间96个月,最短5个月,平均37.3个月。CT_FLV/TLV%与患者预后密切相关,CT_FLV/TLV%≤15的患者较CT _FLV/TLV%>15的患者具有明显的生存优势,两组差异有统计学意义（t=-2.93,P<0.05）。基线一氧化碳弥散量占预计值百分比（percentage of carbon monoxide diffusing capacity in the predicted value,DLCO% pred）与患者预后呈正相关（r=0.690,P=0.026）。基线GAP评分与生存有负相关趋势,但差异无统计学意义。用力肺活量（forced vital capacity,FVC）和用力肺活量占预计值百分比（percentage of FVC in the predicted value,FVC% pred）与患者预后无明显相关性。结论 采用3D-CT估算CT_FLV/TLV%可初步预测IPF患者预后;CT _FLV/TLV%或可预测IPF患者的生存期。     

金黄色葡菌萄球耐药性监测

目的：监测成都市4家三级甲等医院临床分离的金黄色葡萄球菌（金葡菌）耐药性。方法：用琼脂稀释法测定11种抗菌药物对282株金葡菌的最低抑菌浓度（MIC）修正，并对菌株来源及科室分布进行分析。结果：282株金葡菌共筛出耐甲氧西林金葡菌（MRSA）94株，检出率为33.3％；甲氧西林 敏感金葡菌（MSSA）共188株。MSSA对青霉素和克拉霉素的耐药率分别为71.3％和54.8％，而对其抗菌药物敏感。MRSA对万古霉素、阿米卡星和利福平敏感性高（最强为万古霉素），而对其余多种抗菌药物耐药。MRSA来源最多为痰，其次为各种分泌物；科室分布依次为烧伤科、重症监护病房（ICU）、感染科等。结论：青霉素、大环内酯类药物不宜用于金葡菌感染。MRSA具有多重耐药性。MRSA感染首选糖肽类抗生素治疗。金葡菌是一种重要的病原菌，应长期进行耐药性监测，病室需做好消毒隔离。     

水通道蛋白5对PMA诱导的原代小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响

 目的 探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导的原代培养小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响及可能机制。方法 原代培养两种小鼠(AQP5基因敲除鼠和野生鼠)气道上皮细胞,Transwell建立气液平面,2周后扫描电镜及角蛋白免疫组化鉴定气道上皮细胞。蛋白激酶(protein kinase C,PKC)特异性激动剂PMA刺激原代小鼠气道上皮细胞及PKC通路特异性阻断剂Calphostinc阻断该通路,ELISA检测两组小鼠MUC5AC蛋白水平的变化,用Western blot检测小鼠气道上皮细胞PMA刺激后PKC、p-PKC、p-p38、p38、ERK、p-ERK的表达差异。结果 气液平面培养后,扫描电镜显示培养的细胞上皮有微绒毛和纤毛覆盖,细胞角蛋白14免疫组化染色为阳性。PMA 20ng/mL 刺激24h后,两组小鼠气道上皮细胞分泌的MUC5AC明显升高,AQP5基因敲除鼠增加更显著(P<0.05),两者差异有统计学意义。PKC特异性阻断剂Calphostinc能阻断PMA引起的两组小鼠MUC5AC分泌。原代小鼠气道上皮细胞经PMA刺激后,Western blot检测显示PKC、p38磷酸化激活,ERK通路无变化。结论 AQP5通过PKC-p38信号通路影响黏蛋白MUC5AC的合成和分泌。     

水通道蛋白5基因敲除纯合子小鼠的获取

水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是表达于动植物细胞膜表面的一类蛋白质,主要调控渗透压介导的水分子运动,也部分调控其他小分子如甘油、尿素等物质的跨膜运动.目前发现人类有12种AQPs的表达,主要表达于泌尿系统、消化系统、呼吸系统等部位液体流动量较大的细胞膜上.呼吸系统中主要表达AQP1、3、4、5四种分子,其中AQP1、AQP5在急性肺损伤的发病中具有重要作用[1-2],但二者的确切作用机制尚不很清楚,对其确切机制的探讨是目前研究的热点.     

哮喘小鼠肺组织中水通道蛋白5和黏蛋白5AC的表达变化及其相关性研究

目的探讨支气管哮喘(以下简称哮喘)小鼠肺组织水通道蛋白5(AQP5)和黏蛋白MUC5AC基因和蛋白的表达变化及其两者的相关性。方法制作小鼠哮喘模型,测定支气管肺泡灌洗液细胞分类及肺组织湿干重比值,应用Real-time PCR法测定哮喘组(OVA组)和对照组肺组织中AQP5和MUC5AC mRNA的表达,应用免疫组化法测定AQP5在肺组织中的分布,免疫印记法、ELISA法测定AQP5和MUC5AC蛋白在肺组织中的表达。结果小鼠哮喘组肺组织中AQP5表达较对照组明显减低(P<0.01),而MUC5AC表达显著升高(P<0.01),两者呈负相关(r=0.901,P<0.01)。结论哮喘时肺组织中AQP5表达的减低可能与气道MUC5AC表达的升高有关,从而促进了气道黏液过度分泌。     

哮喘小鼠肺组织中水通道蛋白5和黏蛋5AC的表达变化及其相关性研究

目的 探讨支气管哮喘(以下简称哮喘)小鼠肺组织水通道蛋白5(AQP5)和黏蛋白MUC5AC基因和蛋白的表达变化及其两者的相关性.方法 制作小鼠哮喘模型,测定支气管肺泡灌洗液细胞分类及肺组织湿干重比值,应用Real-time PCR法测定哮喘组(OVA组)和对照组肺组织中AQP5和MUC5AC mRNA的表达,应用免疫组化法测定AQP5在肺组织中的分布,免疫印记法、ELISA法测定AQP5和MUC5AC蛋白在肺组织中的表达.结果 小鼠哮喘组肺组织中AQP5表达较对照组明显减低(P＜0.01),而MUC5AC表达显著升高(P＜0.01),两者呈负相关(r=0.901,P＜0.01).结论 哮喘时肺组织中AQP5表达的减低可能与气道MUC5AC表达的升高有关,从而促进了气道黏液过度分泌.     

金葡球菌对糖肽类抗生素敏感性降低的研究进展

糖肽类抗生素是治疗耐甲氧西林金葡球菌（MRSA）的首选药物。近年已有金葡球菌对此类药物敏感性下降的报道。MRSA对糖肽类抗生素敏感性下降或耐药将成为抗感染治疗的棘手问题。本文将近年对糖肽类抗生素中敏金葡球菌（GISA）的抗菌药物敏感性下降低机制、检测方法、治疗及预防对策等方面的研究进展做一综述。