梁金菇多糖对人脐血单个核细胞增殖活性的增强效应及作用机制的实验研究

[目的]研究梁金菇多糖(LJPS)对人脐血单个核细胞(CBMC)增殖活性和白介素-2受体(IL-2R)生成的影响,为栽培的梁金菇药用价值的开发提供实验依据。[方法]采用四甲基氮唑盐(MTT)比色法检测LJPS体外对CBMC增殖活性的影响,采用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶标法检测LJPS对CBMC表面IL-2R生成的影响。[结果]1)LJPS能够在体外单独或与人重组白介素-2(rIL-2)协同刺激CBMC的增殖(分别为P<0.05和P<0.005),LJPS的最佳浓度为1mg/L。并且LJPS在rIL-2诱导的脐血-淋巴因子激活的杀伤细胞(CB-LAK)早期加入始能明显增强CB-LAK细胞的增殖活性(P<0.01)。2)LJPS单独或与rIL-2协同均能促进CBMC细胞表面IL-2R的表达(分别为P<0.002,P<0.001)。[结论]LJPS对静止的CBMC有活化效应,而且能使rIL-2诱导的CB-LAK有更强的增殖活性,其作用机制与LJPS能够促进CBMC表达IL-2R有关。     

梁金菇多糖促脐血单个核细胞增值活化的分子机制研究

目的:研究梁金菇多糖(liangjin mushroom polysaccha-ride,LJPS)对人脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cells,CBMC)增殖活化的机制,为我国开发LJPS的药用价值提供理论依据。方法:采用流式细胞仪检测法方法观察了LJPS对CBMC作用后对CD33+细胞(髓系干细胞)的增殖作用,并采用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从mRNA水平对其增值活化的机理进行了探讨。结果:LJPS本身不能促进粒-单系祖细胞(CFU-GM)的生成,最佳浓度的LJPS刺激的CBMC上清液对CD33+细胞具有增殖作用,增殖高峰为第7天,其CD33+细胞数为培养前的6.9倍。LJPS可诱导CBMC表达粒-单细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA,从第6小时即开始表达,表达高峰为第24小时,其mRNA的量为对照组的23.9倍。结论:LJPS具有促造血的功能,其本身虽无GM-CSF活性,但其可通过刺激CBMC增殖活化,诱导细胞表达GM-CSFmRNA,间接促进CFU-GM的形成和髓系干细胞(CD33+细胞)的增殖从而调节造血功能。     

梁金菇多糖影响造血功能的实验研究

目的:研究梁金菇多糖(LJPS)对造血功能的影响。方法:采用粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)琼脂半固体培养法观察 LJPS 刺激的脐血单个核细胞(CBMC)上清液对脐血 CFU-GM 形成的作用,并采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,从 mRNA 水平对其机理进行探讨。结果:LJPS 刺激的脐血单个核细胞上清液可促进脐血中 CFU-GM 的生成,最佳浓度为1μg/ml,与空白组比较差异有显著性(P< 0.01)。LJPS 对 CFU-GM 的生成没有直接作用,但可诱导 CBMC 表达 GM-CSF mRNA。结论:LJPS 具有促造血的功能。     

梁金菇多糖对脐血单个核细胞增殖活化的研究

姬松茸Agaricus blazei系菌类植物的地上菌丝体,属于担子菌纲,原产于巴西,又名梁金菇。日本的姬松茸多糖具有抗肿瘤、抗突变、促进免疫、促进造血,保护肝脏[1]等功能。为了进一步探讨移植国内后的梁金菇多糖对造血功能的影响,本实验采用从脐带采集的脐血,其中含有丰富的干细胞和祖细胞,研究了梁金菇多糖对脐血单个核细胞的增殖活化作用。1材料1·1药物制备梁金菇(LJPS)由福州华胜食品有限公司提供,经中国科学院植物研究所梁峥研....     

梁金菇多糖对白血病原代细胞促凋亡作用的分子机制研究

目的：研究梁金菇多糖诱导白血病原代细胞凋亡的分子机制。方法：运用RT—PCR检测Bcl-2mRNA的表达、TRAP—ELISA测定端粒酶活性，流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果：梁金菇多糖能够下调白血病原代细胞Bcl-2mRNA表达、抑制端粒酶活性，且细胞周期明显改变，S期细胞数显著降低。结论：梁金菇多糖是具有较强抗肿瘤活性的物质，其诱导白血病原代细胞细胞凋亡机制可能与下调Bcl-2mRNA表达和抑制端粒酶活性、阻止细胞周期的进程有关。     

梁金菇多糖诱导K562细胞凋亡的研究

目的 :探讨梁金菇多糖对K562细胞凋亡的影响及其机制。方法 :应用集落形成实验观察梁金菇多糖对K562细胞增殖的影响 ,细胞形态学、DNA凝胶电泳等检测细胞凋亡 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT-PCR)检测凋亡相关基因FasmRNA的表达。结果 ;梁金菇多糖能明显抑制K562细胞的增殖 ,促进细胞凋亡 ,细胞凋亡率的增加呈剂量依赖性。Fas基因的表达与K562细胞凋亡呈正相关。结论 :梁金菇多糖具有抑制K562细胞增殖、诱导其凋亡的作用 ,Fas基因表达的上调可能是梁金菇多糖诱导细胞凋亡的机制之一。     

大黄素对大鼠腹腔巨噬细胞产生的TNF_α、IL-1、IL-6及细胞[Ca~(2 )]_i的影响

目的　研究中药大黄有效成分大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌 TNFα、IL- 1、IL- 6和 [Ca2 ]i 的影响。方法　利用脂多糖 (lipopolysacchride,L PS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞作为过度炎症反应的体外模型 ,用生物学方法和荧光分光光度法测定巨噬细胞合成分泌的 TNFα、IL- 1、IL- 6和 [Ca2 ]i。结果　大黄素对 TNFα 的分泌和[Ca2 ]i 有双向调节作用。结论　大黄素可能具有免疫双向调节功能。     

中药清热利湿饮对HaCaT细胞表达IL-6mRNA、IL-8mRNA、IL-10mRNA及分泌IL-8、IL-10的影响

目的:揭示中药清热利湿饮对人永生化角质形成细胞HaCaT细胞表达IL-6mRNA、IL-8mRNA、IL-10mRNA和分泌IL-8、IL-10的作用机制。方法:以HaCaT细胞为研究对象,分别采用RT-PCR技术及ELISA方法观察中药清热利湿饮提取液对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞表达IL-6mRNA、IL-8mRNA、IL-10mRNA和分泌IL-8、IL-10的影响。结果:清热利湿饮对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞IL-6mRNA和IL-8mRNA的表达有下调作用,在药物浓度为10g/L和12.5g/L时,HaCaT细胞IL-10mRNA的表达量增强较为明显,与TNF-α诱导活化组相比,有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。清热利湿饮对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞IL-8的分泌有不同程度的抑制作用,但对IL-10的影响不明显。结论:清热利湿饮可下调IL-6mRNA、IL-8mRNA的表达,上调IL-10mRNA的表达,且此作用随药物浓度的升高而增强;同时可降低细胞IL-8的分泌,但对IL-10的分泌无明显的作用。     

生肌象皮膏对2型糖尿病大鼠溃疡肉芽组织的Th1/Th2淋巴细胞平衡的影响

[目的]探讨生肌象皮膏对糖尿病大鼠溃疡组织Th1/Th2淋巴细胞平衡的影响。[方法]将Wistar大鼠随机分为4组,1组为正常对照组,其余3组采用链脲佐菌素(STZ)尾静脉注射制备糖尿病模型,4组动物均于背部进行打孔处理,造成正常对照大鼠溃疡模型与糖尿病溃疡模型。糖尿病溃疡大鼠按照血糖和体质量分层随机分为糖尿病对照组、凡士林组与生肌象皮膏组。观察创面组织白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10和干扰素-γ(IFN-γ)含量的变化。[结果]与正常对照组比较,糖尿病对照组大鼠溃疡肉芽组织中IL-2及IFN-γ的表达于实验各个时间点均升高IL-2及IFN-γ的表达于实验各个时间点均升高(P0.05),而IL-4及IL-10的含量于实验各个时间点均降低(P0.05);与糖尿病对照组比较,生肌象皮膏组大鼠溃疡肉芽组织中IL-2及IFN-γ的表达于实验3、7、14、21、30 d均明显降低,而IL-4及IL-10的表达于实验3、7、14和21天增加(均于实验7 d达到高峰),P0.05。[结论]生肌象皮膏促进糖尿病大鼠溃疡创面的愈合与其调节溃疡肉芽组织的Th1/Th2淋巴细胞的平衡有密切联系。     

五味子多糖对H_（22）荷瘤小鼠血清IL-2、IL-10和VEGF表达的干预作用研究

目的：研究H22荷瘤小鼠血清免疫相关细胞因子IL-2、IL-10和VEGF的表达及五味子多糖的干预作用。方法：采用H22荷瘤小鼠,五味子多糖给药1周后采血,分离血清,ELISA法检测各组小鼠血清IL-2、IL-10和VEGF的表达水平。结果：H22荷瘤小鼠血清IL-2表达水平显著低于正常小鼠,VEGF的表达水平显著高于正常小鼠,五味子多糖可以上调H22荷瘤小鼠血清IL-2表达水平,但对VEGF的表达水平无明显调节作用。H22荷瘤小鼠和五味子多糖给药组小鼠血清IL-10的表达水平与正常小鼠间无显著差异。结论：似可认为五味子多糖抑制小鼠H22肝癌移植瘤的作用靶点之一是IL-2,五味子多糖通过上调血清中IL-2的表达达到抑制小鼠H22肝癌移植瘤生长的作用。     

赤芍总苷对荷瘤鼠细胞因子分泌的调节及对bcl-2、p16表达的影响

[目的]通过观察赤芍总苷(TGC)对荷瘤小鼠免疫功能的调节及对肿瘤细胞凋亡的调控,研究TGC抗肿瘤的作用机制.[方法]采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定小鼠外周血白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-10(IL-10)水平;用免疫组化SABC法检测瘤荷小鼠瘤组织bcl-2和p16的表达.[结果]TGC提高瘤荷小鼠外周血IL-2的分泌,TGC组与荷瘤对照组比较,差异有显著性(P＜0.01);与荷瘤对照组比较,TGC组IL-10分泌显著低于荷瘤对照组(P＜0.01),TGC降低IL-10分泌水平;TGC组与荷瘤对照组比较,bcl-2蛋白阳性细胞数表达均低于荷瘤对照组(P＜0.05),下调bel-2的表达水平,上调p16蛋白表达水平(P＜0.01).[结论]TGC通过调节荷瘤机体异常的免疫状态及诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.     

防风醇提物对肥大细胞PAR-2及相关细胞因子的影响

目的:观察防风醇提物对肥大细胞过氧化物酶体增殖因子活化受体-2(PAR-2)及相关细胞因子的影响,探索防风抗过敏的新机制。方法:用胰蛋白酶刺激P815细胞的方法建立肥大细胞脱颗粒模型,设空白组,模型组,防风高、低剂量组(0.02,0.01 g·m L~(-1)),药物作用6 h后,采用ELISA检测细胞上清液中组胺,白细胞介素-4(IL-4),IL~(-1)3水平,Western blot,RTPCR检测PAR-2蛋白及其mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组组胺,IL-4,IL~(-1)3含量及PAR-2蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,防风醇提物在体外抑制肥大细胞组胺,IL-4,IL~(-1)3含量及PAR-2蛋白及mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:防风醇提物可能通过抑制PAR-2表达,阻断肥大细胞脱颗粒,且选择性减少相关细胞因子分泌,继而抑制肥大细胞"瀑布效应",达到抗过敏作用。     

心身1号片对大鼠应激性溃疡胃黏膜Bcl-2和Bax表达的影响

[目的]观察心身1号片对大鼠应激性溃疡胃黏膜Bcl-2和Bax表达的影响.[方法]Wistar大鼠水浸-束缚应激12h,用免疫组化方法检测心身1号片对胃黏膜组织Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.[结果]Bcl-2和Bax在正常大鼠胃黏膜组织中有散在的表达;心身1号片各剂量组Bcl-2阳性细胞数目较造模组增多,两者具有明显的差异(P＜0.01);造模组Bax阳性细胞数目较心身1号片各剂量组增多,两者也具有明显的差异(P＜0.01);在造模组和心身1号片各剂量组中,Bax阳性细胞数目均比Bcl-2增加(P＜0.01).[结论]中药心身1号片能够促进应激性溃疡大鼠胃黏膜组织Bcl-2的表达,降低Bax的表达,这可能是心身1号治疗本病的作用机制之一.     

基于JAK1/STAT6通路探讨安肠愈疡汤对HT-29细胞炎症模型的影响及机制研究

[目的]观察安肠愈疡汤对脂多糖(LPS)诱导的HT-29细胞炎症模型蛋白酪氨酸激酶1(JAK1)/信号转导和转录活化因子6(STAT6)通路的影响,并探讨其作用机制。[方法]实验分为6组,空白组、模型组、安肠愈疡汤低、中、高浓度组(0.1、1、10 mg/mL)、美沙拉秦组(1 mg/L),空白组不做任何处理,模型组给予LPS诱导,其余各组在LPS诱导后分别给予相应药物干预。干预24 h后分别应用酶联免疫吸附(ELISA)法、免疫荧光技术检测各组白细胞介素(IL)-13、肠三叶因子3(TFF3)的表达,分别应用实时荧光定量聚合酶链反应(Q-RT-PCR)技术、蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组IL-13、JAK1、STAT6、TFF3 mRNA及蛋白的表达。[结果]与空白组比较,模型组IL-8水平上调(P0.01),IL-13水平下调(P0.01),提示炎症模型构建成功,模型组JAK1、STAT6、TFF3的水平也不同程度降低(P0.05或P0.01)。与模型组比较,各用药组IL-13、TFF3分泌水平增加、荧光强度增强(P0.05或P0.01),IL-13、JAK1、STAT6、TFF3 m RNA及蛋白表达不同程度上调(P0.05或P0.01)。安肠愈疡汤高浓度组IL-13、TFF3分泌水平、荧光强度以及IL-13、JAK1、STAT6、TFF3 mRNA及蛋白表达不同程度高于中、低浓度组(P0.05或P0.01),而与美沙拉秦组比较无统计学差异(P0.05)。[结论]安肠愈疡汤可能通过上调IL-13的分泌,以激活JAK1/STAT6通路,促进黏膜修复因子TFF3的分泌,减轻LPS诱导的HT-29细胞的炎症反应,发挥保护作用。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠缺血脑组织及血清IL-6的影响

[目的]观察针刺对局灶性脑缺血大鼠脑组织及血清白介素-6(IL-6)含量的影响。[方法]以热凝法阻断一侧大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型,采用放免法测定大鼠脑组织及血清IL-6含量。[结果]脑缺血后3、6、12、24 h缺血组脑组织IL-6含量与正常组比较均显著增高(P0.01),针刺后3、6、12 h脑组织中IL-6含量较同时段缺血组显著降低(P0.01),并明显低于正常对照组(P0.01)。脑缺血后血清中IL-6含量3 h急剧升高,3、6、12 h段缺血组血清IL-6含量与同时段假手术及正常组比较显著升高(P0.01),治疗后3、6、12 h针刺组血清IL-6含量较同时段缺血组显著降低(P0.01),24及48 h针刺组血清IL-6含量明显升高,与正常组及假手术组比较均有显著差异(P0.01)。[结论]通过对IL-6的调节,发挥其抗炎、神经保护作用,促进受损神经元修复,可能针刺治疗缺血性脑卒中的作用机制之一。     

芪玄益心胶囊对冠脉结扎大鼠心肌肝细胞生长因子及血管内皮生长因子mRNA表达的影响

[目的]评价芪玄益心胶囊对冠脉结扎大鼠心肌梗死的治疗作用,并探讨其机制.[方法]建立大鼠冠脉结扎心肌梗死模型,将模型大鼠随机分为麝香保心丸组、芪玄益心胶囊高、中、低剂量组、模型组,并设空白对照组.观察各组模型心肌梗死率和心肌组织肝细胞生长因子(HGF)mRNA、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,并与空白组对照.[结果]模型组及各治疗组与空白组比较心肌梗死率、HGFmRNA、VEGFmRNA表达均显著增高(P＜05).芪玄益心胶囊各剂量组与模型组比较心肌梗死率明显降低,VEGFmRNA、HGFmRNA表达明显增高(P＜0.05),以高剂量组变化最显著,高剂量组在降低心肌梗死率,增高VEGFmRNA、HGFmRNA表达方面均优于麝香保心丸组(P＜0.05).[结论]芪玄益心胶囊能够降低心肌梗死率,并推测芪玄益心胶囊抗心肌梗死的作用与增加VEGFmRNA、HGFmRNA表达相关.     

莱菔承气汤对重症急性胰腺炎大鼠肾脏细胞凋亡的影响

[目的]探讨中药莱菔承气汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响。[方法]健康Wistar大鼠72只,随机分为空白对照组(24只)、SAP模型组(24只)和莱菔承气汤治疗组(24只)。3组大鼠均于术后6 h,12 h,24 h心脏采血,检测血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)。Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测肾脏细胞凋亡指数,RT-PCR检测肾脏组织Bax、Bcl-2 mRNA的表达。[结果]与对照组相比较,随着时间变化,SAP模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显升高(P0.01),肾脏细胞凋亡指数趋于升高,Bax mRNA表达明显升高(P0.01),Bcl-2 mRNA表达明显下降(P0.01)。与SAP模型组相比较,莱菔承气汤治疗组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降(P0.01),肾脏细胞凋亡指数下降,Bax mRNA表达明显下降(P0.01),Bcl-2 mRNA表达明显升高(P0.01)。[结论]中药莱菔承气汤可能通过调节凋亡相关基因,减少肾脏细胞凋亡以减轻肾脏病理损伤,从而改善SAP时并发的急性肾功能障碍。     

毓宫胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2-IFN-NKC免疫调节网影响的研究

【目的】观察毓官胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2（自介素-2）-IFN（干扰素）-NKC（自然杀伤细胞）免疫调节网的影响，探讨其治疗子宫发育不良的机制。【方法】通过对幼龄SD雌鼠40只随机分为4组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、右归丸组（C组）、毓宫胶囊组（D组），肌注地塞米松复合双侧卵巢切除建立肾阳虚型子宫发育不良模型，对模型动物用毓宫胶囊治疗，右归丸做对照，治疗18d后处死，取胸腺、脾脏、子宫称质量，并测定脾组织IL2、IFN、NKC活性。【结果】肾阳虚子宫发育不良大鼠胸腺、脾脏、子宫质量以及IL2、IFN、NKC活性均较正常组明显下降（P〈0．01），毓宫胶囊能提高胸腺、脾脏、子宫质量及IL2、IFN、NKC活性（P〈0．01）。【结论】肾阳虚型子宫发育不良大鼠的非特异性免疫力下降；毓宫胶囊在促进肾阳虚型子宫发育不良大鼠子宫发育的同时，提高IL2、IFN、NKC活性，正向调节其免疫功能。即毓宫胶囊有调节神经内分泌免疫网的作用。     

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB表达的影响

目的:观察参苓白术散对脾虚湿困型溃疡型结肠炎大鼠结肠组织白细胞介素(IL)-13,IL-23及环氧合酶-2(COX-2),c AMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响,探究其对溃疡性结肠炎作用机制。方法:将48只SPF级Wistar大鼠随机分为6组,分别是空白组、模型组、参苓白术散高、中、低剂量组和美沙拉秦组,每组8只,雌雄各半。除空白组,其余各组采用病证结合法复制脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠模型,即饮食、环境干预等措施联合2,4-二硝基苯磺酸灌肠。造模成功后,参苓白术散高、中、低剂量组分别按照24,12,6 g·kg-1·d-1,美沙拉秦组0.2 g·kg-1·d-1进行灌胃。连续灌胃21 d后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠结肠组织IL-13,IL-23含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测结肠组织IL-13,IL-23,COX-2,CREB mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织COX-2,CREB蛋白表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达水平明显降低(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA升高(P0.05),COX-2,CREB mRNA及蛋白相对表达量升高(P0.05)。与模型组比较,参苓白术散(高、中、低剂量)组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达均升高,尤以参苓白术散高剂量组最显著(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA降低(P0.05),COX-2,CREB mRNA表达及蛋白相对表达量降低(P0.05)。结论:参苓白术散可能调节脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB的表达,减少结肠的炎症反应。