PFT-α对结肠上皮细胞凋亡和周期的影响及机制探讨

目的探讨p53抑制剂(p-fiftythreeinhibitor-alpha,PFT-α)对结肠上皮细胞凋亡、周期的影响及机制。研究PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞的影响。方法顺铂联合温热处理原代培养结肠上皮细胞30min,对比加入不同浓度PFT-α后,AnnexinV-FITC/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡。PI染色检测细胞周期。Westernblot检测结肠上皮细胞CyclinB1和Cdc2(Tyr15)表达。结果不同浓度PFT-α作用于热化疗处理的结肠上皮细胞后,细胞凋亡率下降且呈剂量依赖性。流式细胞仪细胞周期分析显示在运用PFT-α后,结肠上皮细胞的G2/M延长,CyclinB1和Cdc2(Tyr15)蛋白表达随PFT-α的剂量升高而逐渐增强。结论PFT-α可能通过促进CyclinB1蛋白表达,Cdc2(Tyr15)磷酸化水平升高,降低CyclinB1/Cdc2活性,细胞停滞于G2/M期,减轻热化疗对结肠上皮细胞的损伤。     

p53抑制剂对热化疗损伤结肠上皮细胞p53、Bax和MDM2表达的影响

目的 探讨p53抑制剂PFT-α（pifithrin alpha，PFT-α）对热化疗诱导原代培养结肠上皮细胞凋亡及p53靶基因Bax和MDM2表达的影响。方法 原代培养结肠上皮细胞分为正常对照组、热化疗组和PFT-α加热化疗组，运用顺铂联合温热（43℃）处理结肠上皮细胞30min，对比加入不同浓度的PFT-α后，Annexin V-FITC／PI染色，流式细胞仪检测细胞凋亡。MTT法分析PFT-α对热化疗杀伤DLD1细胞的影响。Western blot检测结肠上皮细胞的p53、Bax和MDM2蛋白表达。结果 热化疗导致结肠上皮细胞发生凋亡，Bax和MDM2蛋白表达明显高于对照组。PFT-α作用于顺铂联合温热处理结肠上皮细胞后，细胞凋亡率下降呈剂量依赖性，同时p53在结肠上皮细胞胞核／胞质表达比例下降，Bax和MDM2的表达逐渐降低。热化疗杀伤肿瘤细胞的效应并未受到低剂量PFT-α影响。结论 PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞具有保护作用，其机制可能与改变p53核转位和抑制促凋亡基因Bax和MDM2的表达相关，抑制p53可作为克服热化疗抗肿瘤治疗副效应的新策略。     

p53抑制剂对热化疗损伤结肠上皮细胞p53、Bax和MDM2表达的影响

目的探讨p53抑制剂PFT-α(pifithrinalpha,PFT-α)对热化疗诱导原代培养结肠上皮细胞凋亡及p53靶基因Bax和MDM2表达的影响。方法原代培养结肠上皮细胞分为正常对照组、热化疗组和PFT-α加热化疗组,运用顺铂联合温热(43℃)处理结肠上皮细胞30min,对比加入不同浓度的PFT-α后,AnnexinV-FITC/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡。MTT法分析PFT-α对热化疗杀伤DLD1细胞的影响。Westernblot检测结肠上皮细胞的p53、Bax和MDM2蛋白表达。结果热化疗导致结肠上皮细胞发生凋亡,Bax和MDM2蛋白表达明显高于对照组。PFT-α作用于顺铂联合温热处理结肠上皮细胞后,细胞凋亡率下降呈剂量依赖性,同时p53在结肠上皮细胞胞核/胞质表达比例下降,Bax和MDM2的表达逐渐降低。热化疗杀伤肿瘤细胞的效应并未受到低剂量PFT-α影响。结论PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞具有保护作用,其机制可能与改变p53核转位和抑制促凋亡基因Bax和MDM2的表达相关,抑制p53可作为克服热化疗抗肿瘤治疗副效应的新策略。     

Survivin反义核酸诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨Survivin反义核酸技术诱导乳腺癌细胞凋亡的作用及效果。方法本实验共分6组，分为以脂质体介导反义寡核苷酸组（ASODN／Lip）、无义寡核苷酸组（NODN／Lip）及RPMI 1640培养液的空白对照组（Lip），转染人乳腺癌MCF-7细胞系，应用Hoechst 33258／PI双重染色观察MCF-7细胞的形态学改变，透射电镜观察细胞超微结构，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化，DNA凝胶电泳观察凋亡情况，研究Survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果Hoechst 33258／PI染色及透射电镜观察可见转染后的细胞结构呈凋亡样改变；流式细胞仪检测见转染后细胞凋亡显著增加，并出现G2／M期阻滞现象；DNA凝胶电泳在600ng／ml，800ng／ml ASODN／Lip组的电泳图谱上呈现出明显的“梯状”现象。结论凋亡抑制基因Survivin表达下涧对乳腺癌细胞的生长抑制作用主要是通过诱导细胞发生凋亡以及阻止有丝分裂发生在G2／M阻滞期来实现，Survivin靶向反义核酸技术可能成为乳腺癌基因治疗的一种有效方法。     

黑色素瘤分化相关基因-7和白介素-24选择性杀伤肝癌细胞和诱导增殖阻滞的体外研究

目的探讨黑色素瘤分化相关基因-7／白介素-24基因（mda-7／IL-24）对不同种类肝癌细胞的选择性杀伤作用。方法将携带人mda-7／IL-24基因的复制缺陷型腺病毒（Ad．mda-7）感染人正常肝细胞和各种肝癌细胞,通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附（ELISA）实验观察mda-7／IL-24基因的表达,MTT法观察肝癌细胞的生长抑制,Hoeehst染色及Annexin—V和PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡情况及用流式细胞仪检测细胞周期。结果RT—PCR和ELISA提示Ad．mda-7能介导外源基因mda-7／IL-24在各种肝癌细胞株和正常肝细胞中高效表达。MTT实验结果提示mda-7／IL-24能明显抑制各种肝癌细胞的生长,Hoeehst染色和流式细胞仪检测提示mda-7／IL-24能选择性杀伤肝癌细胞,细胞周期分析提示mda-7／IL-24阻滞肝癌细胞在G2／M期,同时对正常的肝细胞没有促凋亡和增殖阻滞作用。结论mda-7／IL-24基因能选择性杀伤各种肝癌细胞,促进细胞增殖阻滞及诱导细胞凋亡。     

重组腺病毒介导MDA-7/IL-24对Hep3B选择性杀伤和抑制增殖的研究

目的观察黑色素瘤分化相关基因7（MDA-7／IL-24）基因对人肝癌细胞Hep3B和正常的肝细胞L02的作用，并且探讨其该作用机制。方法将携带人MDA-7／IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和肝癌细胞Hep3S，逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）和ELISA方法观察MDA-7／IL-24基因的表达，噻唑蓝染色法（MTT）观察MDA-7／IL-24对肝癌细胞的生长抑制，Hoechst染色和Annexin-V和PI双染后流式细胞仪检二种细胞的凋亡，利用PI染色后流式细胞仪检测细胞周期，RT-PCR方法检测bcl-2的表达变化。结果Ad．mda-7能介导外源基因MDA-7／IL-24在肝癌细胞株Hep3B和正常细胞L02中高效表达，细胞培养上清液中MDA-7／IL-24蛋白的表达（Hep3B：L02分别为790：810ng／L）。MDA-7／IL-24能明显抑制肝癌细胞的生长（抑制率分别是83％和1．2％），能促进肝癌细胞的凋亡（58％：2．2％），阻滞肝癌细胞在G2／M期（48．29％：7．95％）。而对正常的肝细胞没有促凋亡和增殖阻滞作用；能明显的抑制Hep3B的凋亡抑制基因bcl-2的表达。结论Ad．mda-7能介导MDA-7／IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达，选择性的杀伤肝癌细胞Hep3B，促进细胞增殖阻滞，其机制是通过抑制bcl-2的表达诱导肿瘤细胞凋亡。     

人类肿瘤细胞分化中细胞周期素的表达规律及作用机制

目的：探讨诱导人类肿瘤细胞分化过程中，细胞周期素（Cyclin）的变化在细胞周期调控机制中的作用。方法：应用全反式维甲酸（ATRA）处理HL－60细胞，流式细胞仪行细胞周期分析，应用十二烷基磺酰钠－聚丙烯胺凝胶电泳（SDS－PAGE）及Western Blot检测细胞周期素D1、E的蛋白表达量改变，使用流式细胞仪检测细胞周期素D1、E、A的表达量变化及细胞周期素B的时相性改变。结果：HL－60细胞ATRA诱导后，80％左右的细胞被祖滞在G0／G1期，S期细胞减少到2．81％，WesternBlot显示，诱导后，CyclinD1表达量明显降低，CyclinE表量高。流式细胞仪检测CyclinD1、CyclinE蛋白表达变化与WesternBlot结果相同，CyclinA表达量升高，CyclinB表达特征由经放导前的非时相性表达转为诱导分化后的时相性表达。结论：细胞周期素D1、E、A、B与肿瘤细胞分化的细胞周期调控有着密切的关系。     

溴隐亭联合肿瘤坏死因子-α对人肝癌耐药细胞株化疗敏感性的影响

目的 研究溴隐亭联合肿瘤坏死因子-α（TNF—α）基因处理人肝癌耐药细胞株HepG2／ADM后对其化疗敏感性的影响。方法 脂质体转染TNF-α基因至肝癌耐药细胞HepG2／ADM;实验分4组：空白对照组HepG2（A组）、耐药组HepG2／ADM（B组）、转染TNF—α基因组（C组）及联合溴隐亭和TNF—α组（D组）;流式细胞仪检测各组罗丹明123细胞内潴留率变化、四唑盐比色法（MTT）检测C、D两组细胞耐药指数及用免疫组织化学染色、Western blot和RT—PCR方法测定各组PKC-α、P-gP蛋白、MDR1 mRNA表达的变化,流式细胞仪检测Bcl-2蛋白的表达,AnnexinV-FITC,PI双标检测各组肿瘤细胞化疗后凋亡的变化。结果 MTT测定C、D两组之间耐药逆转率有显著差异（P〈0.01）,罗丹明123潴留率实验发现C、D两组均能明显增强其潴留作用且两组差异有统计学意义（P〈0．01）;P-gP蛋白和MDR1基因表达显示C、D两组之间MDR1基因和P—gp蛋白的表达无统计学意义（P〉0．05）,但C、B两组之间比较差异有统计学意义（P〈0．01）;PKC—α蛋白表达在D组明显下调（P〈0．01）;B组细胞Bcl-2蛋白表达明显增强,C、D两组细胞Bcl-2蛋白表达明显下调,与A组比较均有统计学意义（P〈0．01）,但C、D两组细胞Bcl-2蛋白表达无统计学意义（P〉0．05）。细胞凋亡率C、D两组比较有统计学意义（P〈0．01）,D、A两组比较无统计学意义（P〉0．05）。结论 溴隐亭和TNF—α通过不同的机制逆转肿瘤的多药耐药性,两者联合明显加强抗肿瘤药物对细胞的毒力。     

5氮2脱氧胞苷与三苯氧胺协同抗雌激素受体α阴性乳腺癌的体外实验研究

目的观察5氮2脱氧胞苷（5-aza—CdR）对雌激素受体α（ERα）阴性人类乳腺癌细胞株MDA—MB-231和MDA—MB-435ERα基因诱导表达作用;5-aza—CdR联合三苯氧胺（TAM）对ERα阴性乳腺癌细胞的体外抑制作用。方法应用甲基化特异性PCR（MSP）检测MDA—MB-231和MDA—MB-435细胞和20例ERα阴性乳腺癌组织ERα基因核心启动子区CpG岛甲基化情况;5-aza—CdR处理MDA—MB-231和MDA—MB-435细胞,逆转录PCR（RT—PCR）检测ERαmRNA表达;5-aza—CdR、TAM分别或联合作用于MDA—MB-231和MDA—MB-435细胞,M1T比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率。结果适当浓度的5-aza—CdR能诱导MDA—MB-231和MDA—MB一435细胞表达ERctmRNA,抑制细胞生长、阻滞细胞周期于G0／G1期,诱导细胞凋亡;TAM对MDA—MB-231和MDA—MB-435细胞生长、细胞周期无影响;而两药联合时能显著抑制细胞生长,诱导细胞凋亡,凋亡率分别为48、8％和53、1％。结论5-aza—CdR能诱导ERα阴性乳腺癌表达ERctmRNA,恢复ERα阴性乳腺癌细胞对TAM的敏感性,联合TAM能协同抑制ERα阴性乳腺癌细胞生长,诱导细胞凋亡,从而为ERα阴性乳腺癌开辟新的内分泌治疗途径提供实验依据。     

促红细胞生成素抑制过氧化氢诱导的肾小管细胞凋亡

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）是否可以抑制过氧化氢（H2O2）诱导的氧化应激和细胞凋亡及其抑制凋亡的相关机制。方法传代培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为正常对照组（NC组）、H1组（1mmol／L H2O2）、H2组（5mmol／LH2O2、E组（H2U＋EPO组）。细胞免疫荧光检测NRK-52E细胞是否表达EPO受体（erythropoietin receptor,EPOR）。荧光探针氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（CM—H2DCFDA）标记检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。流式细胞仪AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡指数。RTPCR检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤／白血病-2（B-cell lymphoma／L eukemia-2,Bcl-2）家族中Bcl-2和BaxmRNA的表达。结果NRK52E细胞表达EPOR。H2O2引起NRK-52E细胞内ROS水平升高,上调BaxmRNA表达、下凋Bcl-2mRNA表达,诱导NRK-52E细胞凋亡。EPO可以抑制H2O2诱导的ROS水平升高、Bcl2mRNA表达下调、BaxmRNA表达上调及NRK-52E细胞凋亡。结论EPO可以缓解H2O2诱导的氧化应激、上调Bcl-2mRNA表达、下调BaxmRNA表达,抑制H2O2诱导的NRK52E细胞凋亡,发挥肾小管细胞保护效应。     

多囊蛋白1氨基端肽对常染色体显性多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨多囊蛋白1氨基端肽（PC-1NTP）对常染色体显性多囊肾病（ADPKD）肾囊肿衬里上皮细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法 用噻唑蓝（MTT）法检测PC-1NTP对ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖的影响.用流式细胞仪分析细胞周期与凋亡状况.用荧光定量PCR检测细胞中细胞周期素cyclinD1、p21WAF1、bax、bcl-2和小染色体维护蛋白2（MCM-2）的mRNA表达.结果 PC-1NTP使ADPKD囊肿衬里上皮细胞G0/G1期细胞百分比显著增多,S期细胞百分比显著减少,并明显抑制其增殖和凋亡;同时细胞中p21和bcl-2 mRNA表达明显增高（P＜0.01）,cyclinD1、bax和MCM-2的mRNA表达明显减弱（P＜0.01或P＜0.05）.结论 PC-1NTP能明显抑制ADPKD囊肿衬里上皮细胞的增殖和凋亡,减慢细胞周期进程,其作用机制可能是通过调节G1/S关卡调节因子cyclinD1/p21WAF1和凋亡调节蛋白bcl-2/bax的表达实现的.PC-1NTP有希望成为治疗ADPKD的可选药物.     

Ad.mda-7高选择性杀伤不同转移潜能肝癌细胞的研究

目的利用携带人MDA-7／IL-24基因的复制缺陷型腺病毒（Ad．mda7）作为载体，感染不同转移潜能的肝癌细胞MHCC97H，MHCC97L，Hep3B和正常的肝细胞L02，观察该基因对肝癌的选择性杀伤作用和增殖抑制作用。方法将携带人MDA-7／IL-24基因的腺病毒Ad．mda-7感染正常肝细胞L02和肝癌细胞MHCC97H，MHCC97L和Hep3B，通过RT-PCR和ELISA方法观察MDA7基因的表达，通过四甲基偶氮哩蓝染色法（MTT）观察该基因对肝癌细胞的生长抑制，Hoechst染色和流式细胞仪观察MDA-7对肝癌细胞的杀伤作用，流式细胞仪检测细胞周期变化。结果RT-PCR提示复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7／IL-24在肝癌细胞株MHCC97H，MHCC97L，Hep3B和正常细胞L02中高效表达；ELISA方法检测提示细胞培养上清液中MDA-7／IL-24蛋白的表达，而且随着感染时间延长表达量升高；MTT实验结果表明MDA7能明显抑制肝癌细胞的生长，Hoechst染色和流式细胞仪提示MDA7能促进肝癌细的凋亡；细胞周期检测提示肝癌细胞大量被阻滞在G2／M期，正常细胞没有增殖阻滞作用。各项结果提示MDA7对正常的肝细胞没有促进凋亡和增殖阻滞的作用。结论Ad．mda-7选择性的杀伤肝癌细胞，促进细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡与肝癌细胞的转移潜能无关。     

双环铂对激素抵抗型前列腺癌细胞PC3的凋亡诱导作用

目的采用体外实验观察双环铂对激素抵抗型前列腺癌细胞PC3的凋亡诱导作用,并初步探讨其凋亡机制。方法 CCK-8法观察双环铂对PC3细胞增殖的抑制,Hoechst染色荧光显微镜下观察凋亡细胞,Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡率,PI单染流式细胞仪检测细胞周期变化。结果双环铂可抑制PC3细胞的增殖,48hIC50为（195±19.0）×10-6 mol/L.;PC3细胞在经双环铂处理后,漂浮细胞呈明显的凋亡细胞形态,经Hoechst染色荧光显微镜下可见凋亡小体等典型的细胞核染色质形态学改变;双环铂诱导的PC3细胞凋亡呈剂量依赖性及时间依赖性。低浓度的双环铂可引起PC3细胞G2期阻滞,随药物浓度的升高sub-G1期细胞比例明显增加。结论体外实验显示双环铂可诱导PC3细胞的凋亡,双环铂对细胞周期的影响可视为其抗肿瘤活性的机制之一。     

热CO2气腹对结肠癌细胞的增殖抑制作用及其机制

目的:探讨热CO2气腹对结肠癌细胞的增殖抑制作用及作用机制,明确其用于结直肠癌腹膜转移治疗的可行性。方法:建立热CO2气腹体外实验模型,热CO2气腹(43℃,2～4h)作用于结肠癌细胞株COLO205细胞。以WST-8法检测细胞增殖,Annexin-V/PI流式细胞术及透射电镜检测细胞死亡,流式细胞术检测细胞周期。结果:热CO2气腹(43℃,2～4h)对结肠癌细胞有显著的增殖抑制作用,热CO2显著诱导细胞凋亡及G1期细胞阻滞。结论:热CO2气腹通过诱导细胞凋亡及G1期细胞周期阻滞显著抑制结肠癌细胞的增殖,热CO2气腹具有应用于结直肠癌腹膜种植转移治疗的潜能。     

Bcl-2家族蛋白在Ad．mda-7介导HepG2细胞凋亡中的变化

目的 观察Bcl-2家族蛋白在Ad．mda-7介导HepG2细胞凋亡中的变化，初步探讨Ad．mda-7介导肝癌细胞的凋亡机制。方法将携带人MDA-7／IL-24基因的腺病毒转染HepG2和ID2，通过四甲基偶氮哩蓝染色法（MTr）及Hoechst染色观察MDA-7／IL-24对肝癌细胞HepG2和正常肝胚细胞ID2的生长抑制和杀伤作用。AnnexinV和PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Bcl-2家族蛋白的变化。结果Ad．mda-7能明显抑制肝癌细胞HepG2的生长，但对正常肝胚细胞ID2没有明显抑制增殖作用。Hoechst染色和流式细胞仪提示Ad．mda-7能明显诱导肝癌细胞HepG2细胞的凋亡，但对正常肝胚细胞ID2没有明显毒副作用。Westernblot说明抑制凋亡的蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达在HepG2明显下降，在ID2中则没有变化；而促凋亡蛋白Bax在HepG2和ID2都升高。结论Ad．mda-7转染HepG2后，促凋亡（Bax）与抑凋亡蛋白（Bcl-2和Bcl-xl）的比率发生改变，进而发生凋亡。     

中华眼镜蛇毒膜毒素诱导膀胱癌细胞凋亡的检测

目的研究中华眼镜蛇毒膜毒素（MT-12）诱导膀胱癌细胞的凋亡作用，比较检测凋亡的几种方法。方法MT-12作用于体外培养的人膀胱癌（BIU-87）细胞，HE染色、Hoechest 33342荧光染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态变化，DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段，Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术定量检测凋亡率。结果3种形态学检测方法均能观察到细胞凋亡的形态学变化。3μg／ml。MT作用2、4、8、12、24h和36h，双染法流式细胞术检测的细胞凋亡率分别是46．94％、51．2％、28．85％、20．43％、6．03％和5．19％，阴性对照组凋亡率为0．77％。DNA电泳未能检测到细胞凋亡的DNA ladder。结论MT-12能诱导体外培养的BIU-87细胞凋亡，且具有时间依赖性。透射电镜观察凋亡细胞的形态特征最可靠。Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术定量检测细胞凋亡，其特异性、敏感性、重复性和准确性高。     

人工气腹对结肠癌细胞增殖影响的实验研究

目的研究不同气腹介质对人结肠癌细胞株LS-174T在体外及裸鼠体内增殖的影响，探讨腹腔镜结直肠癌手术的安全性。方法（1）细胞计数法绘制LS-174T细胞株生长曲线。（2）免疫组织化学检测细胞株HIF-1α、VEGF的表达。（3）丫啶橙／溴乙啶（AO／EB）双荧光染色检测细胞凋亡率。（4）流式细胞仪检测细胞周期的变化：（5）体内实验测量各组裸鼠实体肿瘤的重量及体积。结果体外试验中，经模拟CO2气腹作用后人结肠癌细胞LS-174T生长速度高于对照组，CO2、He人工气腹作用后结肠癌细胞中HIF-1α和VEGF的阳性表达率高于对照组，CO2组高于He组。He组细胞凋亡率高于CO2组和对照组。体内实验：CO2气腹组裸鼠移植瘤平均瘤重和瘤体积较免气腹组、He气腹组明显增高。结论裸鼠CO2气腹可促进结肠癌细胞LS-174T的生长，而He气腹促进肿瘤生长的能力较弱。     

丝氨酸/苏氨酸激酶15基因沉默诱导胃癌细胞凋亡

目的 观察丝氨酸／苏氨酸激酶15基因（STK15）沉默后对胃癌细胞MKN45凋亡的诱导作用，阐述STK15基因对胃癌细胞生存的关键作用。方法 化学合成小片断干扰RNA（siRNA）抑制MKN45细胞STK15基因的表达；实时定量PCR及Western印迹检测STK15mRNA及蛋白质表达的变化；流式细胞仪检测MKN45周期分布及凋亡的变化；Hoechest染色观察凋亡形态变化，Western印迹检测pro-caspase3水平的变化。结果 经靶向STK15的siRNA作用48h后，STK15siRNAmRNA及蛋白质表达明显下降；较多MKN45细胞呈现岛期细胞DNA含量（P〈0．05）；细胞凋亡率较对照组明显上升（P〈0．05）；伴随pro—caspase3水平下降。结论 抑制STK15基因表达通过caspase3途径导致MKN45细胞凋亡，STK15基因对胃癌细胞增殖及存活起着关键作用。     

表皮生长因子对肿瘤坏死因子α致HaCaT细胞凋亡的抑制作用

目的了解肿瘤坏死因子α（TNF-α）导致HaCaT细胞凋亡过程中过氧化物酶体增殖物激活受体B（PPAR[3）的表达情况，探讨表皮生长因子（EGF）对HaCaT细胞的保护机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常对照组（不作任何处理）、TNF—α小剂量组（10ng／ml TNF-α处理）、TNF—α大剂量组（20ng／mlTNF-α处理）、EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF—α大剂量组，后2组先用20ng／mlEGF培养4h后，再分别予以10、20ng／ml TNF—α处理。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（easpase．3）荧光检测试剂盒测定caspase-3的活性，噻唑蓝比色法检测细胞存活率。以5、10、20、40ng／ml的EGF处理HaCaT细胞，采用反转录．PCR和蛋白质印迹法检测PPAR[3mRNA及其蛋白的表达。结果与TNF-α小剂量组[（32±6）％]、TNF-ct大剂量组[（57±6）％]比较，EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF-α大剂量组细胞凋亡率[（20±3）％、（28±4）％]明显下降（P〈0．01），caspase-3活性降低、存活率上升（P〈0．01）。20ng／mlEGF处理细胞时，PPAR[3mRNA及其蛋白表达最强。结论EGF在抑制TNF-α导致的HaCaT细胞凋亡的同时，亦增强细胞中PPARβ的表达。