miR-16-5p靶向NLRP1抑制缺氧复氧诱导的BRL-3A细胞焦亡

目的探讨mi R-16-5p对缺氧复氧诱导的大鼠正常肝细胞系BRL-3A焦亡的作用以及作用机制。方法通过细胞缺氧复氧的方法构建肝缺血再灌注损伤(HIRI)的体外模型,通过流式细胞术检测细胞焦亡率;通过荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测mi R-16-5p的表达水平;运用mi R-16-5p mimic在细胞中过表达mi R-16-5p并研究mi R-16-5p对细胞焦亡的影响;通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的蛋白表达水平;通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验预测并鉴定mi R-16-5p与NLRP1的靶向关系;通过过表达和干扰NLRP1,研究NLRP1及mi R-16-5p/NLRP1轴对细胞焦亡的影响。结果与空白对照组相比,模型组焦亡率极显著上升(P0.01),mi R-16-5p表达量显著降低(P0.05)。过表达mi R-16-5p极显著抑制细胞焦亡(P0.01)并抑制焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的表达(P0.01或P0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示NLRP1是mi R-16-5p的靶基因,过表达mi R-16-5p显著降低了NLRP1的m RNA和蛋白水平(P0.01或P0.05)。此外,过表达NLRP1逆转了mi R-16-5p对细胞焦亡的抑制作用(P0.01)和对caspase1、IL-1β、IL-18表达的抑制作用(P0.01或P0.05)。结论 MiR-16-5p通过靶向NLRP1来抑制caspase1、IL-1β、IL-18的表达,从而改善缺氧复氧引起的BRL-3A细胞焦亡。     

IcarisideⅡ诱导卵巢癌SKOV3细胞焦亡机制研究

目的 探索淫羊藿次苷Ⅱ（IcarisideⅡ）通过调控ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路对卵巢癌SKOV3细胞增殖、细胞周期及细胞焦亡的影响。方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞并添加IcarisideⅡ,浓度分别为25、50、75、100、150、200μmol/L。采用CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期和细胞内活性氧簇（ROS）的水平;蛋白质印迹法检测焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达。结果 与对照组比较,IcarisideⅡ可抑制SKOV3细胞的增殖活力,其作用呈浓度和时间依赖性,差异均具有统计学意义（P<0.000 1）;IcarisideⅡ作用SKOV3细胞24 h后,细胞停滞在G0/G1期,并显著提高了细胞内的ROS水平,差异有统计学意义（P<0.000 1）;IcarisideⅡ干预组焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达水平明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 IcarisideⅡ通过促进细胞内ROS的积累诱导焦亡,机制可能与激活ROS/NLRP3/Caspase...     

动力相关蛋白-1在缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞焦亡机制中的作用

目的 观察人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时线粒体动力相关蛋白1 (dynamin-related protein 1,Drp1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3,Nlrp3)以及炎性因子的表达改变和细胞焦亡情况,探讨Drp1在H/R诱导肾小管上皮细胞焦亡中的作用.方法 HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12液培养于37 ℃、5％ CO2和95％O2的恒温培养箱.将细胞分为正常对照组、H/R组、H/R+ Drp1抑制剂(H/R+Mdivi-1)组、H/R+siNlrp3腺病毒(H/R+siNlrp3)组、H/R+空腺病毒(H/R+ Scra)组.检测细胞培养液上清乳酸脱氢酶LDH活性,Western blot检测Drp1、Nlrp3、凋亡相关蛋白-l(caspase-1)、IL-1β表达,2',7 '-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,流式分析仪检测细胞焦亡情况.结果 与正常对照组比较,H/R组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显升高,Drp1、Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达增高,细胞焦亡明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与H/R组比较,H/R+Mdivi-1组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显降低,Nlrp3、caspase-1、IL-1 β表达降低,细胞焦亡明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在H/R条件下,Drp1通过激活Nlrp3炎性体诱导人肾小管上皮细胞焦亡.     

敲除hsa_circRNA_102958调节胰腺癌PANC-1细胞增殖、氧化应激和线粒体功能

目的 探讨敲除hsa_circRNA_102958对胰腺癌PANC-1细胞增殖、氧化应激和线粒体功能的影响.方法 胰腺癌PANC-1细胞转染shRNA-NC和3种不同的circ_102958shRNA 序列,RT-PCR 检测 circRNA_102958表达,选取干扰效果最好的circ_102958 shRNAl进行后续实验,CCK8检测细胞增殖倍数;Hoechst染色观察细胞形态变化;总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒和DCFH-DA试剂盒分别测定SOD、MDA、活性氧(ROS)含量;流式检测JC-1红/绿荧光比值;Western blot检测 Bax/Bcl-2、cleaved cas9/cas9、cleaved cas3/cas3、c-Myc蛋白表达.结果 与Control组相比,干扰circRNA_102958表达抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖能力(P＜0.05),细胞形态趋于紊乱,凋亡细胞增多,MDA和ROS含量上调(P＜0.05),SOD活性降低(P＜0.05),JC-1红/绿荧光比值下调(P＜0.05),Bax/Bcl-2、cleaved cas9/cas9和 cleaved cas3/cas3蛋白表达增高(P＜0.05).结论 干扰circRNA_102958表达抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖能力和线粒体功能,促进细胞凋亡和氧化应激水平.     

抑制线粒体活性氧自由基可减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡和铁死亡

目的 探讨抑制线粒体氧化应激和炎症小体减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡和铁死亡的作用,分析线粒体活性氧自由基（ROS）和炎症小体之间可能的上下游关系。方法 将H9C2心肌细胞按照随机数字表法随机分为5组。正常对照组（CON）：含25 mmol/L浓度葡萄糖的DMEM完全培养基;高糖损伤组（HG）：含35 mmol/L浓度的高糖完全培养基;高糖+线粒体抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）组（HG+MitoQ）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为0.5 μmol/mL的MitoQ;高糖+ NLRP3抑制剂MCC950组（HG+MCC950）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950;高糖组+MCC950+线粒体电子传递抑制剂Rotenone（ROT）组（HG+MCC950+ROT）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950和0.5 μmol/mL的ROT。各组心肌细胞干预24 h后,CCK-8法测定细胞活性;CellRox和MitoSox荧光探针分别测定心肌细胞内和线粒体氧化应激水平变化;免疫荧光法检测细胞内NLRP3炎症小体水平;Western blot检测心肌细胞中NLRP3、GSDMD和Cleaved-GSDMD（GSDMD-NT）等焦亡相关重要因子的蛋白表达和铁死亡相关因子GPX4蛋白表达。结果 与CON组相比,HG组细胞活性明显下降（P<0.01）,心肌细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及焦亡相关因子NLRP3,GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达（P<0.01）均明显升高,铁死亡相关因子GPX4蛋白表达下降（P<0.01）。与HG组相比,HG+MitoQ和HG+MCC950组细胞活性明显升高（P<0.01）,细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及 NLRP3、GSDMD 和 GSDMD-NT 的蛋白表达明显降低（P<0.05）,GPX4 蛋白表达增高（P<0.01）。与HG组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性和NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达无明显差异（P>0.05）;但与HG+MCC950组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性明显降低（P<0.01）,ROS荧光强度、NLRP3炎症小体免疫荧光以及NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达均明显升高,GPX4蛋白表达降低（P<0.05）。结论 MitoQ直接抑制线粒体ROS的产生减轻了高糖诱导的心肌细胞NLRP3炎症小体的生成,减少焦亡和铁死亡的发生;抑制NLRP3炎症小体减少线粒体ROS的产生;线粒体ROS和NLRP3之间可能存在着相互影响。     

RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达的实验研究

目的研究用RNAi表达载体对胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin表达的抑制作用。方法用免疫荧光技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达,并把survivin基因克隆到T载体进行测序,构建针对survivin基因的干扰载体,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC一1,RT-PCR初步分析干扰载体对survivin表达地抑制情况。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中高表达,其基因序列与genebank中公布的一致,干扰载体si-svv-2可以有效的抑制survivin的表达,抑制率达71％。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。     

内皮祖细胞外泌体抑制紫杉醇诱导的血管内皮细胞焦亡

目的：探索内皮祖细胞外泌体（EPCs-Exo）对紫杉醇诱导的内皮细胞焦亡的影响及其可能机制。方法：培养原代骨髓间充质干细胞（BMSCs）和内皮祖细胞（EPCs）并鉴定。提取BMSCs和EPCs培养液中的外泌体,使用透射电镜观察外泌体形态并检测CD63和CD9的表达鉴定外泌体。分别用BMSCs-Exo和EPCs-Exo干预经紫杉醇诱导的内皮细胞焦亡模型,光镜下观察细胞形态;Western blot检测外泌体标志蛋白CD63、CD9和细胞焦亡相关蛋白NLRP-3、IL-18、GSDMD-N的表达情况;电镜下观察细胞超微结构的变化。基因芯片检测两组外泌体中差异的非编码RNA,RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1表达情况。结果：大鼠骨髓细胞中分离培养分化出BMSCs和EPCs,免疫荧光法证实BMSCs中CD90 和CD44阳性,EPCs中CD34 和VEGFR2阳性。相比于对照组,紫杉醇组细胞膜被破坏,细胞内线粒体间距离增加,细胞内纤维排列紊乱,细胞中NLRP-3、IL-18、GSDMD-N等细胞焦亡蛋白表达增加（P ＜0.05）;相比于紫杉醇组,紫杉醇+EPCs-Exo组内皮细胞中细胞膜较完整,细胞系损伤较轻,NLRP-3、IL-18、GSDMD-N表达减少（P ＜0.05）;紫杉醇组与紫杉醇+BMSCs-Exo组内皮细胞形态和焦亡蛋白的表达差异无统计学意义。芯片及RT-PCR结果显示相比于BMSCs-Exo,lncRNA FGD5-AS1在EPCs-Exo中表达增加（P ＜0.05）。结论：EPCs外泌体抑制紫杉醇诱导的血管内皮细胞焦亡。     

RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达并诱导细胞凋亡的实验研究

目的构建RNAi表达载体，并分析其对胰腺癌细胞PANC-1 survivin表达的抑制作用。方法用免疫荧光技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达，并把survivin基因克隆到T载体进行测序，构建针对survivin基因的干扰载体，用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1，RT-PCR、western-blot分析干扰载体对survivin表达的抑制情况，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中高表达，其基因序列与GenBank中公布的一致，干扰载体pTZU6＋1-svv2可以有效的抑制survivin的表达，抑制率约为74％，并诱导了肿瘤细胞的凋亡。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达并诱导胰腺癌细胞凋亡。     

去甲斑蝥素对人胰腺癌PANC-1 细胞凋亡作用的研究

目的 探讨去甲斑蝥素对人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的作用及其机制。方法 将PANC-1 细胞株随机分为处理组 和对照组,处理组加入不同浓度的去甲斑蝥素培养24h后,CCK-8 法检测细胞增殖情况;流式细胞术分析细胞的凋亡情况;免疫印迹法检测细胞内质网应激和凋亡相关蛋白的表达;荧光定量PCR 技术检测细胞内质网应激和凋亡相关蛋白mRNA表达。结果 不同浓度去甲斑蝥素处理PANC-1细胞24h后,与对照组相比,能降低细胞的存活率并诱导其凋亡。与对照组相比,处理组中内质网应激和凋亡相关蛋白的表达水平均上调（均P＜0.05）,同时其mRNA 的表达水平亦均上调（均P＜0.05）。结论 去甲斑蝥素能明显抑制人胰腺癌PANC-1 细胞的生长并诱导其凋亡,并且具有浓度依赖性,这一作用可能是通过内质网应激介导的凋亡途径实现的。     

RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达的实验研究

目的用RNA i方法抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。方法用免疫细胞化学技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达,构建针对survivin基因的siRNA表达载体并进行酶切和测序鉴定,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1,RT-PCR初步分析siRNA表达载体对survivin表达的抑制作用。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中有较高表达,siRNA表达载体可以有效的抑制survivin的表达,抑制率达60%。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。     

同型半胱氨酸通过促进细胞焦亡和上调琥珀酸脱氢酶亚基A诱导神经炎症反应

目的探索同型半胱氨酸(Hcy)是否通过促进细胞焦亡和上调琥珀酸脱氢酶亚基A(SDHA)蛋白表达诱导神经炎症反应。 方法使用不同浓度Hcy(1.25、2.50、5.00 mmol/L)处理小鼠海马神经元细胞系HT22细胞。CCK-8检测细胞活力;免疫荧光法观察细胞形态和焦亡相关蛋白消皮素(GSDMD)与细胞膜的共定位情况;Western blotting检测细胞核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)和Caspase-1的活性片段(cleaved-Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、GSDMD和GSDMD的N端结构域(GSDMD-N)等焦亡相关蛋白及SDHA蛋白表达水平。酶联免疫吸附测定法检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平。 结果Hcy可显著降低HT22细胞活力,损伤HT22细胞突触,增加GSDMD与细胞膜的共定位和细胞膜破裂程度,上调HT22细胞NLRP3、pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1、ASC、GSDMD和GSDMD-N等焦亡相关蛋白及SDHA蛋白表达水平,并增加IL-1β和IL-18水平。 结论Hcy可诱导神经炎症反应,其机制与其促进细胞焦亡和上调SDHA蛋白表达密切相关。     

白藜芦醇对高糖诱导足细胞损伤的改善作用及机制探讨

[目的]观察白藜芦醇（RSV）对高糖诱导足细胞凋亡的影响及作用机制。[方法]采用体外高糖诱导作为足细胞损伤模型,细胞分为3组：对照组为5 mmol/L低糖培养液（LG）;模型组为30 mmol/L高糖培养液（HG）;RSV干预组：HG+5 μmol/L RSV;HG+10 μmol/L RSV,培养48 h后采用流式细胞术检测足细胞的凋亡情况;DHE探针观察细胞内活性氧自由基（ROS）生成;激光共聚焦检测线粒体膜电位及线粒体内ROS合成;Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase）3、caspase 9的表达情况。[结果]与HG组相比,RSV可呈剂量依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡;荧光探针结果显示,RSV干预后细胞内及线粒体ROS生成明显低于HG组;JC-1染色显示,与HG组相比,RSV干预可显著提高线粒体膜电位;Western blot结果显示,随RSV干预浓度的提高,caspase 3、caspase 9表达水平明显下调,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论]RSV呈浓度依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧化应激,改善线粒体功能障碍相关。     

钠-氢交换蛋白调节细胞内环境酸化并激活肝癌细胞焦亡的作用及相关机制

目的探讨钠-氢交换蛋白1（NHE1）调节细胞内环境酸化并激活肝癌细胞焦亡的作用及相关机制。方法采用Westernblot和RT-qPCR法检测4株肝癌细胞中NHE1蛋白及mRNA表达水平,选出表达最高的MHCC97细胞株进行实验。小干扰RNA（siRNA）技术沉默MHCC97细胞中NHE1,将常规培养的MHCC97细胞作分为对照组、NHE1无关对照的序列转染的细胞作为siRNA-NC组、NHE1转染的细胞株作为siRNA-NHE1组,检测3组细胞活性,细胞凋亡情况,细胞中半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、炎性小体（NLRP3）、消皮素D（GSDMD）表达水平,培养基中IL-1β、IL-18水平以及细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出水平,观察NHE1沉默对细胞焦亡的影响。另取NHE1沉默后细胞设立NHE1沉默组和Caspase-1抑制组（用Caspase-1抑制剂AC-YVAD-CMK干预）,观察阻断Caspase-1对细胞焦亡的影响。结果NHE1沉默后的MHCC97细胞活性下降（P＜0.05）,凋亡增多;细胞Caspase-1、NLRP3表达水平,培养基IL-1β、IL-18水平及LDH漏出水平升高,GSDMD表达水平降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。阻断Caspase-1后细胞活性增强（P＜0.05）,凋亡减少;细胞Caspase-1、NLRP3表达水平,培养基IL-1β、IL-18水平及LDH漏出水平降低,GSDMD表达水平升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论NHE1沉默会造成细胞内酸化,同时激活细胞焦亡,这是NHE1在肝癌中的作用机制之一;阻断Caspase-1可以抑制细胞焦亡。     

白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制

研究白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制。采用MTT检测细胞增殖情况,活性氧试剂盒分析细胞内ROS水平;流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期的变化。Western blot检测凋亡相关蛋白以及相关通路蛋白表达。结果表明,经不同药物浓度处理,白藜芦醇可以诱导DU145细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于G₀/G₁期,提高细胞内ROS水平,降低细胞内线粒体膜电位水平,并呈剂量依赖性。白藜芦醇通过上调Bax蛋白的表达和抑制Bcl-2蛋白表达,促使Bax/Bcl-2比值升高,激活Caspase级联反应从而诱导细胞发生凋亡。进一步研究发现白藜芦醇可以升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位水平,从而通过线粒体途径诱导DU145细胞发生凋亡。因此,白藜芦醇可能通过ROS-线粒体途径诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡。     

石斛碱对氧糖剥夺/再灌注诱导Ht22细胞损伤的神经保护作用及其机制研究

目的：探讨石斛碱（dendrobium alkaloids,DNLA）对氧糖剥夺/再灌注（oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）作用的Ht22海马神经元细胞系的神经保护作用及其机制。方法：体外培养Ht22细胞系,同时将细胞随机分为9组：无任何处理的正常对照组（Control组）、OGD/R组、OGD/R+DNLA治疗组（0.03 mg/mL）、OGD/R+DNLA治疗组（0.3 mg/mL）、OGD/R+DNLA治疗组（3 mg/mL）、OGD/R+焦亡相关蛋白Caspase-1的抑制剂VX765组（10 ng/mL）、OGD过程中培养基加入聚乙二醇PEG3000（1%）后再灌注组（OGD/R+PEG3000→Media）、OGD/R后培养基中加入PEG3000（1%）组（OGD/R+Media→PEG3000）、PEG3000（1%）组。对Ht22细胞OGD 2 h后复糖复氧24 h建立OGD/R模型;DNLA自OGD前12 h开始即加入并持续到复氧复糖结束;VX765则自氧糖剥夺开始即加入并持续到复糖复氧结束。MTT法检测细胞死亡率及乳酸脱氢酶法测定细胞损伤率,选取DNLA最佳剂量组（3 mg/mL）进行后续检测,流式细胞技术Annexin V FIFT/PI双染测细胞焦亡率,Western blot检测焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD和GSDMD-C的表达以及白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6、IL-18的表达,免疫荧光染色法检测Ht22 细胞Caspase-1的表达情况,扫描电镜观察Ht22细胞的焦亡情况。结果：在OGD/R诱导Ht22细胞损伤后通过扫描电镜观察到细胞焦亡现象,与Control组相比,OGD/R组细胞活性下降（P=0.008）,细胞损伤率升高（P=0.009）,细胞焦亡率升高（P=0.005）,焦亡相关蛋白Caspase-1（P=0.000）、GSDMD（P=0.001）及GSDMD-C（P=0.004）蛋白的表达量明显升高,炎症因子IL-1β（P=0.006）、IL-6（P=0.004）、IL-18（P=0.000）的表达量亦增加,PEG3000组细胞存活率和损伤率均无明显变化（P=0.005,P=0.007）;与OGD/R组相比,3个不同剂量的DNLA组细胞活性均有升高,细胞损伤率明显降低,细胞焦亡率递减,以DNLA组（3 mg/mL）最为明显（P=0.005,P=0.009,P=0.003）,焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD的蛋白表达量降低（P=0.005,P=0.008）,GSDMD-C蛋白表达量升高（P=0.002）,炎症因子IL-1β（P=0.005）、IL-6（P=0.000）、IL-18（P=0.007）的蛋白表达量降低,VX765抑制剂组的细胞存活率也有所上升（P=0.007）,细胞损伤率降低（P=0.002）,焦亡率也明显降低（P=0.008）,焦亡相关蛋白Caspase-1（P=0.006）、GSDMD（P=0.007）蛋白的表达量有所降低,GSDMD-C蛋白的表达量升高（P=0.004）,炎症因子IL-1β（P=0.006）、IL-6（P=0.004）、IL-18（P=0.001）的蛋白表达量亦降低,有趣的是OGD/R+PEG3000（1%）→Media组较OGD/R+Media→PEG3000（1%）组细胞存活率增加（P=0.007,P=0.006）,损伤率下降（P=0.006,P=0.003）。结论：OGD/R作用后的Ht22细胞存在细胞焦亡现象,DNLA对OGD/R诱导的Ht22细胞损伤具有神经保护作用,其机制可能与抑制焦亡相关蛋白Caspase-1的表达有关。     

LncRNA MEG3对过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞焦亡的机制研究

目的 探讨LncRNA MEG3对过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞焦亡的影响。方法 利用CCK-8检测不同浓度下H2O2培养人晶状体上皮细胞活力确定最适浓度。流式细胞术检测在最适浓度下细胞焦亡率、Western-Blot检测caspase-1的表达,qRT-PCR检测LncRNA MEG3的相对表达量。转染HLE-B3细胞沉默LncRNA MEG3,将HLE-B3细胞随机分为空白对照组、siNC组、siMEG3组,CCK-8和流式细胞术分别检测各组细胞活力和焦亡率,Western-Blot检测焦亡相关蛋白caspase-1、N-GSDMD、NLRP3的表达水平,ELISA检测IL-1β的浓度。结果 CCK-8结果显示HLE-B3细胞活力随H2O2浓度上升而下降,最适浓度下人晶状体上皮细胞焦亡率上升、LncRNA MEG3、caspase-1表达上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。敲低MEG3表达后,与对照组相比细胞焦亡率上升,caspase-1、NLRP3、N-GSDMD蛋白表达下调,IL-1β分泌量减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LncRNA MEG3通过Caspase-1介导的焦亡经典途径参与H2O2诱导人晶状体上皮细胞焦亡过程,敲低MEG3可以抑制人晶状体上皮细胞焦亡。     

丙泊酚作用NLRP3/ASC/caspase-1通路对肺癌A549细胞焦亡的影响

目的 探讨丙泊酚作用核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/凋亡相关斑点样蛋白（ASC）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)通路对A549细胞焦亡的影响。方法 超低吸附培养法建立肺癌A549细胞三维培养模型,建立模型后采用不同浓度丙泊酚作用肺癌A549细胞,CCK-8法检测丙泊酚对A549细胞增殖的影响;酶联免疫吸附法检测肺癌A549细胞上清炎性细胞因子白细胞介素（IL）-18、IL-1β、IL-6表达水平变化;蛋白免疫印迹法检测各组焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、caspase-1、焦孔素蛋白N端（GSDMD-N）、IL-1β表达水平。结果 三维培养下,A549细胞间有聚拢黏附趋势,培养12 h即可清晰观察到细胞球。与空白对照组相比,随着丙泊酚浓度增加,肺癌A549细胞存活率依次降低（P <0.05）;肺癌A549细胞上清炎性细胞因子IL-18、IL-1β、IL-6、焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD-N、IL-1β表达水平依次增加（P <0.05）。结论 超低吸附培养法成功建立肺癌A549细胞三维培养模型,丙泊酚通过激...     

HSP90抑制剂17-DMAG调控胰腺癌细胞PANC-1增殖及凋亡的初步研究

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂17-DMAG对胰腺癌细胞PANC-1增殖与凋亡的影响。方法体外培养腺癌细胞PANC-1,17-DMAG处理PANC-1细胞后,CCK8法测定细胞生长曲线,观察细胞增殖的抑制情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率的变化,Jc-l染色检测线粒体膜电位变化,RT-PCR法测定17-DMAG处理PANC-1细胞前后Bcl-2、Bax表达变化。结果 17-DMAG处理组24 h时D(490)值较对照组差异无统计学意义(P>0.05),48、72 h后较对照组D(490)值分别减少(18.3±2.4)%、(21.5±3.2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。17-DMAG处理组48 h时较对照组能显著地抑制PANC-1细胞增殖(P<0.05),细胞凋亡率[(22.4±2.4)%]较对照组[(4.2±1.7)%]显著增加(P<0.05);线粒体电位显著降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,17-DMAG处理组抑制Bcl-2的表达,促进Bax的表达。结论 17-DMAG可抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖并诱导其凋亡,该效应可能是通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2家族成员的表达实现。     

miRNA-1在大鼠心搏骤停心肺复苏后心肌焦亡及损伤中的作用

目的：探讨微小RNA-1（miR-1）在大鼠心搏骤停/心肺复苏（CA/CPR）后心肌细胞焦亡与损伤中的作用。方法：心搏骤停/心肺复苏模型的建立和分组：SD大鼠按照随机数字表法分为心搏骤停复苏（CA）组和假手术对照（Sham）组。前者再分为5组：CA组,CA+antago miR-1组,CA+antago miR NC组,CA+ago miR-1组,CA+ago miR NC组,每组n=6。所有6组大鼠在自主循环恢复（ROSC）后6 h取心尖部心肌组织、血样待测。用Real-time PCR法检测各组心肌细胞中miR-1的mRNA水平,Western blot法检测各组心肌细胞中焦亡相关的蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18的表达情况,用TUNEL染色技术检测心肌细胞焦亡率,ELISA技术检测血清中CK-MB、cTnI浓度。结果：各组大鼠体质量、基础平均动脉压（MAP）差异无统计学意义（P＞0.05）。与Sham组比较,CA组大鼠miR-1表达水平、心肌焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达、焦亡率、血清CK-MB与cTnI浓度升高（P＜0.05）。与CA组比,CA+antago miR-1组大鼠miR-1表达水平、心肌焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达、焦亡率、血清CK-MB与cTnI浓度降低（P＜0.05）,CA+ago miR-1组大鼠miR-1表达水平、心肌焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达、焦亡率、血清CK-MB与cTnI浓度升高（P＜0.05）,CA+antago miR NC组与CA+ago miR NC组大鼠miR-1表达水平、心肌焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达、焦亡率、血清CK-MB与cTnI浓度差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：CA/CPR大鼠ROSC后存在明显心肌焦亡和心肌损伤,静脉使用ago miR-1和antago miR-1可以调节CA/CPR后大鼠心肌miR-1的表达,miR-1促进大鼠CA/CPR后心肌焦亡和心肌损伤,miR-1调节大鼠CA/CPR后心肌损伤机制可能和其促进心肌细胞焦亡相关。