紫外线灭活Ⅱ型单纯疱疹病毒体内感染能力的研究

为探讨灭活的单纯疱疹病毒的生物学特性,本实验研究了紫外线灭活 HSV-2的体内感染能力。将灭活 HSV-2接种于小鼠阴道后,取感染急性期阴道拭子和潜伏期腰骶神经节以组织培养法分离病毒。结果显示:急性期灭活病毒组分离阳性率为71％;未灭活组为80％;潜伏期灭活病毒组病毒分离阳性率为65％,未灭活组为75％。灭活组与未灭活组病毒分离阳性率在急性期和潜伏期均无显著性差异。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型与白血病病毒协同诱发小鼠淋巴细胞白血病的初步观察

将紫外线灭活的疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2),小剂量的小鼠白血病病毒(MuLV)、HSV-2加MuLV分别接种三个实验组的成年小鼠,对照组小鼠不接种任何病毒。结果在四个组中仅HSV-2加MuLV组和MuLV组的动物发生了淋巴细胞白血病,其发病率分别为12.96％(7/54)和1.92％(1/52),二者之间差异有显著性(P<0.05);而且前者的白血病发病时间较后者要早。提示HSV-2与MuLV在诱发小鼠淋巴细胞白血病过程中具有协同作用,其中的HSV-2只是一种“促癌因素”。     

荔枝核提取物体外抗病毒活性及其机制研究

目的:研究荔枝核提取物(LSE)的体外抗病毒活性,并初步研究其抗病毒的作用机制.方法:采用细胞病变效应(CPE)减少法和MTY法检测LSE对柯萨奇B3病毒(Cox B3)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)的体外抗病毒活性,并通过观察直接杀病毒作用、对宿主细胞的保护作用、抑制病毒吸附作用以及在病毒感染后不同时间加入实验,对LSE抑制HSV-1的作用机制进行探讨.结果:LSE有一定的细胞毒性,它不能抑制Cox B3在宿主细胞内的增殖,但对RSV、HSV-1和HSV-2表现出明显的浓度依赖性抗病毒活性,其IC<,50>值分别为32.3,27.9和20.4μg/mL.该提取物预培养Vero细胞后不能保护细胞免受HSV-1感染,但它对HSV-1有直接的灭活作用.LSE可影响HSV-1对Vero细胞的吸附,当浓度为31.3μg/mL时对病毒吸附的抑制率为51%.ISE对HSV-1在细胞内的增殖表现出很强的抑制活性.结论:LSE具有较强的体外抗RSV和HSV活性,它对HSV的抑制作用可能通过多种方式和途径实现.     

纳米雄黄对单纯疱疹病毒Ⅱ型的体外抗病毒活性

目的：探讨纳米雄黄对单纯疱疹病毒II型(herpes simplex virus Type II,HSV-2)的体外抗病毒活性。方法： 以阿昔洛韦作为阳性对照,采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法观察 不同浓度(200.00,150.00,100.00,50.00,25.00,12.50,6.25,3.13,1.54,0.78,0.39和0 mg/L)纳米雄黄对正常非洲 绿源猴肾细胞(Vero细胞)作用48 h的细胞毒性;空斑法测定病毒滴度,建立病毒感染细胞模型,并采用细胞病变观 察和MTT结合的方法对不同浓度(20.00,10.00,5.00,2.50,1.25,0.63,0.31,0.15,0.08,0.04和0 mg/L)纳米雄黄在 预防、治疗及直接灭活病毒3种给药方式下的抗HSV-2活性进行评价。结果：纳米雄黄对正常Vero细胞的半数细胞毒 性浓度为37.15 mg/L,HSV-2病毒滴度为7.30 log PFUs/mL,纳米雄黄在预防、治疗和直接灭活病毒3种给药方式下对 HSV-2感染细胞的半数有效浓度分别为0.13,1.80和0.52 mg/L,对应的治疗指数分别为285.77,20.64和71.44,纳米雄 黄在预防给药下的治疗指数高于其治疗和直接灭活给药。结论：纳米雄黄在3种给药方式下均具有良好的抗HSV-2活 性,且预防给药的疗效较好。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型在Vero细胞中培养与增殖特性的研究

目的研究单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）在非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）中培养及增殖的合适条件。方法把HSV-2接种于Vero细胞中培养和传代,于不同时间收获病毒液并测毒力,进行不同培养条件的摸索。结果pH值、残留牛血清是HSV-2在Vero细胞培养的影响因素,最佳收毒时间为36-72h。在Vero细胞上培养病毒3-5代,病毒毒力较高。结论建立了单纯疱疹病毒Ⅱ型在Vero细胞上培养增殖的初步方法,为下一步建立HSV-2的潜伏与激发细胞模型打下基础。     

藏药甘青乌头生物碱抗单纯疱疹病毒Ⅱ型体内外作用

目的探讨藏药甘青乌头脂溶性生物碱（ALA）和水溶性生物碱（AWA）抗单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）的作用和机制。方法四甲基偶氮唑蓝法测定细胞毒性,细胞病变作用法和蚀斑法测定甘青乌头生物碱体外抗HSV-2活性,以半数有效浓度和治疗指数为评价指标;荧光定量聚合酶链式反应法（FQ-PCR）和蚀斑法考察ALA和AWA体外抗HSV-2作用机制。用HSV-2建立小鼠脑炎模型,对AWA体内抗HSV-2的活性进行评价。结果 ALA和AWA对Vero细胞的半数中毒浓度分别为3.57和7.87mg/mL。ALA和AWA半数有效质量浓度分别为4.99和2.81 mg/mL,治疗指数分别为0.72和2.80。ALA和AWA均能直接灭活HSV-2,能够显著抑制HSV-2的感染性。ALA对吸附到非洲绿猴肾细胞的HSV-2没有抑制作用,能微弱抑制HSV-2大分子的增殖,对HSV-2 DNA的复制没有作用。AWA能够抑制HSV-2吸附,抑制HSV-2大分子的增殖,抑制HSV-2 DNA的合成,抑制倍数达10~2。AWA对小鼠的半数中毒质量浓度为0.28mg/kg。AWA延长了小鼠的平均存活时间,对小鼠的死亡显示出10%的保护率。结论 AWA抗HSV-2的活性大于ALA,ALA主要通过直接灭活HSV-2,AWA通过抑制HSV-2复制循环的各个环节起作用。     

单纯疱疹病毒介导GALV致融性糖蛋白对人肺腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 探讨Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)载体介导的长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(GALV.fus)基因转导肺腺癌细胞的体内抗肿瘤作用及建立人肺腺癌皮下瘤裸鼠模型的最佳方案.方法 将重组HSV-Ⅰ载体质粒通过脂质体导入非洲绿猴肾细胞(Vero)中包装制备重组HSV-Ⅰ病毒,通过细胞悬液接种或组织块移植法构建人肺腺癌细胞(A549)裸鼠皮下移植瘤模型,将重组HSV-Ⅰ病毒注入裸鼠肺癌瘤体中观察其体内抗肿瘤作用.结果 成功包装重组HSV-Ⅰ病毒,病毒对肺癌细胞有明显的杀灭作用且对裸鼠皮下肺癌转移灶抑制明显.结论 细胞悬液接种和套管针组织块接种均为建立裸鼠荷瘤模型理想方法;GALV.fus基因对肺癌细胞有强效的抗肿瘤作用,明显抑制人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长,为临床肺癌治疗探索出一种新型基因治疗方法.     

红树林淡紫拟青霉胞外多糖体外抗HSV-1 的实验研究

目的 探讨红树林淡紫拟青霉胞外多糖体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）感染的活性,为开 发新型抗病毒药物提供实验基础。方法 以Vero 细胞为病毒感染靶细胞,以不同浓度淡紫拟青霉胞外多糖 作用于HSV-1 感染的各个阶段,以细胞病变程度测定病毒半数感染量,MTT 法检测淡紫拟青霉胞外多糖对 Vero 细胞的毒性作用、对HSV-1 的直接灭活作用、对病毒吸附和生物合成的影响。结果 淡紫拟青霉胞 外多糖对Vero 细胞的半数有毒浓度（CC50）为1 724.2μg/ml,该多糖浓度<900μg/ml 时,细胞存活率仍> 90%,且对细胞无增殖作用;在25 ～ 1 000μg/ml 浓度范围内,该多糖可在一定程度上抑制病毒吸附,并表 现出一定的量效关系,半数抑制浓度（IC50）为650.7μg/ml ;该多糖还具有抑制HSV-1 生物合成的作用, 其IC50 为547.7μg/ml,在25 ～ 1 000μg/ml 浓度范围内,抑制率与药物浓度呈量效关系,未发现该多糖对 HSV-1 有直接灭活作用。结论 淡紫拟青霉胞外多糖对Vero 细胞毒性较小,是一种非常安全的多糖;该多 糖具有一定的抗病毒作用,在一定浓度范围内可抑制HSV-1 吸附和生物合成,且表现出一定的量效关系。     

单纯疱疹病毒感染对HEp-2细胞乳酸脱氢酶的影响

HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ感染HEp-2细胞后,以16小时乳酸脱氢酶(LDH)活力的降低及24小时LDH活力的升高最明显,具统计学意义。用各型抗血清处理及紫外灭活后,HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ感染后不同时间HEp-2细胞的LDH活力明显下降,而且处理过的样本接种到HEp-2细胞上无细胞病变产生,说明LDH活力的变化与病毒感染有关。对LDH同工酶谱的分析表明,HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ感染均与HEp-2细胞LDH_3有关。     

荔枝核黄酮类化合物对小鼠Ⅰ型单纯疱疹病毒性脑炎的作用及机制

目的 探讨荔枝核黄酮类化合物(FLCS)对体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)的作用及其可能机制,进一步验证该药对小鼠病毒性脑炎的治疗效果,从而为HSV-1感染的治疗提供新的手段.方法 采用微量细胞培养法和MTT比色法观察FLCS对HSV-1感染细胞的保护作用,通过检测细胞病变效应(CPE)以及病毒抑制率确定该药体外抗病毒活性.进一步利用小鼠病毒性脑炎模型,设计治疗方案(FLCS 3个剂量组,疗程5 d),观察小鼠生存率、平均存活时间、组织中病毒滴度,评价FLCS对小鼠病毒性脑炎的治疗作用.结果 FLCS不仅对HSV-1有直接灭活作用,而且还可阻止HSV-1的生物合成,表现为各剂量组FLCS通过不同方式和病毒作用后,HSV-1感染细胞的PE则随药物浓度的增加而减少,病毒抑制率明显升高.FLCS对HSV-1直接灭活作用和抑制生物合成作用的细胞半数抑制有效浓度(IC50)分别为32.76μg/mL和12.72μg/mL,相应作用方式的治疗指数(TI)分别为7.3和18.8.但是FLCS不能阻止HSV-1吸附细胞,表现为各剂量组FLCS作用细胞后,HSV-1再感染细胞,均出现典型CPE.对于小鼠来说,其体征大多数都会从厌食、呆滞以及嗜睡等症状,逐渐转变为颤抖、抖毛、背弓、抽搐、打转、体重下降等神经系统感染症状,直至死亡,FLCS治疗组小鼠组织病变程度减轻.结论 FLCS虽不能阻止病毒吸附与穿入易感细胞,但能直接杀灭病毒以及抑制HSV-1的生物合成或(和)以后环节发挥其抗病毒作用.FLCS能降低HSV-1感染小鼠死亡率,延长平均生存期,加快组织中病毒的清除,缓解小鼠脑炎症状.     

HSV-2 LAT过表达vero细胞中microRNA的表达谱变化

目的分析过表达疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）潜伏相关转录子LAT后vero细胞microRNA表达谱的表达变化。方法通过化
学合成的方法获得LAT基因的全长序列。构建HSV-2LAT逆转录病毒表达载体pRetroQ- AcGFP1-C1,包装获得HSV-2LAT
基因过表达的逆转录病毒。利用microRNA芯片技术,分析感染逆转录病毒HSV-2LAT后vero细胞microRNA表达谱的变化,
得到因LAT基因过表达而产生变化的microRNA。结果通过microRNA芯片分析,逆转录病毒HSV-2LAT感染vero细胞后,
可引起hsa-miR-23a*、kshv-miR-K12-3、hsa-miR-943、hsa-miR-634、hsa-miR-12705种microRNA2倍以上上调;使hsa-miR-181a-2*、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-31、hsa-miR-24、kshv-miR-K12-12*5种microRNA2倍以上下调。结论LAT基因过表达后
可引起vero细胞microRNA表达谱的变化。
     

Vero细胞和鸡胚细胞对HSV敏感性的比较研究及其意义

HSV有HSV-1和HSV-2两型,Vero细胞和鸡胚细胞对HSV-1和HSV-2的敏感性不同,前者对HSV-1的敏感性较HSV-2高,而后者则相反;HSV-1在Vero细胞上的感染滴度比在鸡胚细胞上至少高4.0TCID_(50)/0.05ml,而HSV-2则平均低1.84TCID_(50)/0.05ml。这种敏感性和感染滴度的差异,可作为HSV分型的生物学指标,具有实用意义。     

Preliminary study on Herpes simplex virus type 1 infection of human oral epithelial cell in vitro

Objective： To explore the functions and mechanisms of herpes simplex virus type I（HSV-1） while infecting human oral epithelial cells in vitro（being similar to the infection in vivo）. Methods：An abundance of HSV-1 strains amplified in Vero cells were used to infect human oral epithelial cells. The culture supernatant was collected to infect Vero cells again. Morphology of HSV-1 was identified by inverted microscope and transmission electron microscope. Nucleic acid of the virus was detected by PCR. Results：The infected human oral epithelial cells didn＇ t display an obvious cytopathic effect（CPE） under inverted microscope（while Vero cells which were infected by the culture supernatant showed typical（CPE）. The virus particles were not observed in the cytoplasm nor in nucleus of human oral epithelial cells, however under transmission electron microscope in the cytoplasm of Vero cells, the nucleic acid of HSV-1 could be detected in infected human oral epithelial cells, by PCR. Conclusion-HSV-1 can successfully infect human oral epithelial cells. This model may provide a useful approach for studying the pathogenesis of herpes virus-associated periodontal disease.     

甘草甜素对HSV-1抑制作用的实验研究

目的:观察甘草甜素对单纯疱疹病毒Ⅰ型的抑制作用,为临床更为有效的治疗单纯疱疹病毒性脑炎探索新的药物.方法:体外培养Vero细胞,分成甘草甜素在病毒吸附vero细胞后加入病毒、吸附前甘草甜素预处理细胞以及吸附前甘草甜素预处理病毒,通过观察空斑形成单位来评价甘草甜素对单纯疱疹病毒Ⅰ型的抑制作用,以及作用发生于病毒感染的哪个阶段.结果:病毒吸附vero细胞后加入甘草甜素能明显抑制病毒所致的空斑形成,IC50为0.56mmol/L.吸附前甘草甜素预处理细胞以及吸附前甘草甜素预处理病毒,对病毒所致的空斑形成无明显影响.结论:甘草甜素能明显地抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型的复制,它的作用是发生在病毒穿入细胞后的阶段,不能阻止病毒对细胞的吸附,也不能直接灭活病毒.     

单纯疱疹病毒Ⅰ型在正常人眼睫状体潜伏的初步研究

目的研究正常人睫状体是否有单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏.方法采用健康志愿者捐献的新鲜眼球15个,1/3眼球组织进行免疫组化染色,排除HSV-1急性感染.取出剩余的睫状体,1/3睫状体组织进行离心,取上清液与Vero细胞共培养,另外2/3睫状体组织提取DNA作PCR和凝胶电泳检测HSV-1的DNA和LAT.结果15个标本免疫组化染色皆阴性,Vero细胞与睫状体组织上清液共培养结果为阴性,未观察到细胞病理学改变,PCR检测的15个标本中4、5、7号标本的HSV-1 DNA阳性,HSV-1 LAT阴性,其他12个标本PCR检测HSV-1 DNA阴性,HSV-1 LAT阴性.结论正常人睫状体存在HSV-1 DNA.     

Antiviral effects of Lactobacillus crispatus against HSV-2 in mammalian cell lines

Background

Herpes simplex virus type 2 (HSV-2) infectious disease is one of the most common viral sexually transmitted diseases. As regards, vaginal lactobacilli play an important role in protecting host against the urogenital pathogens; here we assessed the potential antiviral activity of Lactobacillus crispatus against HSV-2 infection in vitro.

邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性研究

摘要：目的研究邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白（3-Hydroxyphthalic anhydride-modified ovalbumin, HP-OVA）体外对抗单纯
疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）的活性。方法采用化学修饰的方法将3-羟基-邻苯二甲酸酐（HP）修饰卵清蛋白（OVA）,合成酸酐
修饰蛋白HP-OVA;选用HSV-2 333病毒株及非洲绿猴肾细胞（Vero 细胞）靶细胞,采用MTT比色法检测HP-OVA的体外
抗HSV-2病毒活性及其对Vero细胞的体外细胞毒性;镜检观察HP-OVA对17株阴道收集的乳酸杆菌的抑菌作用。结果
酸酐修饰卵清蛋白HP-OVA对HSV-2病毒具有明显抑制作用,其IC50为23.56±8.33 μg/ml,且其对病毒作用靶细胞毒性较
低,CC50>1 mg/ml,对17株阴道乳酸杆菌均无明显抑制作用,MIC>1 mg/ml。结论酸酐修饰蛋白HP-OVA体外有较好的
抗HSV-2病毒的活性,有望被开发为预防性传播性疾病的候选杀微生物剂。     

The anti-HSV-2 effect of alumen: In vitro and in vivo experimental studies

This study investigated the anti-HSV-2 effect of alumen through in vitro and in vivo expe-riments.Viable cell counting was employed to assess the toxicity of alumen on Vero cells.The inhibition rate of HSV-2 was defined as the cytopathic effect(CPE)of the cells infected with the virus.Alumen suppositories of different concentrations were vaginally applied to the guinea pigs which were then infected with HSV-2 via a vaginal route.The clinical symptoms were observed and the local virus titer calculated.The results showed that alumen had an in vitro anti-HSV-2 effect by means of antiviral dup-lication,direct killing of the virus,and antiviral adsorption.Alumen suppositories of different concen-trations could reduce or completely inhibit HSV-2 infection in guinea pigs.It was concluded that alumen had an in vitro anti-HSV-2 effect through multiple approaches and it could suppress in vivo vaginal HSV-2 infection of guinea pig to some extent.