重症急性呼吸综合征的诊断与治疗

重症急性呼吸综合征(SARS)是一种新出现的烈性传染病，其临床表现不典型，主要通过影像学和实验室检查进行诊断；目前SARS尚无特效疗法，治疗方法主要包括药物治疗如抗病毒药、抗生素、激素治疗，呼吸机的应用，血清治疗及中西医结合治疗等方法。     

人源抗戊型肝炎病毒单克隆抗体的获得与鉴定

目的　获得人源中和性抗戊型肝炎病毒 (HEV)单克隆基因工程抗体。方法　采用五轮筛选法 (逐轮降低抗原包被量 ,严格洗脱条件 ) ,以固相化的 4种含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV患者外周血源的噬菌体抗体库。获得有特异结合活性的噬菌体抗体 ,酶切鉴定抗体基因插入。切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因构建表达载体 ,在大肠杆菌中可溶性表达抗HEV抗体Fab段 ,ELISA、Westernblot检测抗体免疫学活性 ;测序分析抗体基因。结果　筛选出 4株与含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体 ,可能为中和抗体。切去gⅢ基因 ,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段 ,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中差异无显著性。可溶性抗体与含中和抗原表位的HEVORF2重组混合抗原有特异结合活性 ,与BSA、HBsAg无交叉结合反应。Westernblot显示在相对分子质量 (Mr)略大于 4 5× 10 3 处有一明显条带 ,与Mr4 8× 10 3 的Fab大小一致。DNA测序分析表明 ,Fab段VH 属于IgGVH3基因家族 ,VL 属于Vκ1基因家族。结论　利用噬菌体抗体库技术成功获得抗HEV的人源单克隆抗体。     

两种不同基因型NS3抗原在HCV感染者血清学诊断中的应用

目的 研究两种不同基因型NS3抗原在HCV感染者血清学诊断中的应用价值. 方法 分别用两种不同基因型NS3单片段抗原、两种单片段抗原的混合物(MIX)作为包被抗原,对血清标本进行ELISA测定;应用反转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测血清中HCV RNA,数据以X2检验. 结果 85份抗-HCV阳性血清以不同基因型HCV NS3单片段抗原检测,阳性检出分别为52份(Ⅰ型)和50份(Ⅵ型),X2=0.06,P>0.05;100份健康成人体检血清以此两种抗原检测均为阴性;90份抗-HCV阳性血清经MIX抗原检测,阳性检出为65份;51份抗-HCV阳性血清经RT-nPCR检测,29份阳性. 结论 HCV不同基因型NS3编码区抗原片段有不同的抗原反应性,在HCV感染者的血清学诊断中将不同基因型NS3抗原混合使用可能是更好的选择.     

基于戊型肝炎病毒中和表位的基因免疫表达载体的构建与鉴定

目的：获得戊型肝炎病毒(HEV)中和表位p166的编码基因，构建基于该中和表位的HEV基因免疫的真核表达载体。方法：应用RT-PCR方法从粪便标本中扩增获得HEV VOF2中G6461～G7035片段，通过比较核酸序列同源性鉴定其基因型，PCR方法扩增该片段中HEV中和表位p166的编码基因，经酶切后克隆于真核表达载体pTR421质粒，并以PCR、酶切和DNA测序加以鉴定。结果：成功克隆了p166的编码基因，其基因型别为Ⅳ型；经酶切鉴定和DNA测序证实p166的编码基因已成功插入pTR421质粒，且核酸序列、读码框架正确结论：成功构建含Ⅳ型HEV中和表位编码基因的重组质粒，为后续基于HEV中和表位基因免疫的研究奠定基础。     

抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

目的:制备抗-戊型肝炎病毒的单克隆抗体,并将其用于分析戊型肝炎病毒不同毒株结构蛋白的抗原表位。方法:采用来自墨西哥株(Mexicanstrain)的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Mex)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性克隆,并将获得的单克隆抗体与戊型肝炎病毒缅甸株(Burmastrain)和美国株(USAstrain)的重组蛋白(p166Bur、p166US)进行交叉反应测定。结果:最终获得4株能稳定分泌抗-p166Mex的杂交瘤细胞株,即D8G10、E5E12、D4A3、B7E6。其中D8G10,E5E12和B7E6细胞株的培养上清液,还能分别与p166Bur和p166US重组蛋白发生阳性反应。结论:利用已获得的抗-p166Mex单克隆抗体,初步确定3种不同的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Bur、p166US、p166Mex)含有一种共同的抗原表位。     

食用乙肝疫苗的研究进展

经口传递的食用乙肝疫苗与传统的注射疫苗相比具有安全、有效、易于推广等诸多优势，近年来受到广泛的重视。目前利用转基因植物生产食用乙肝疫苗的研究已取得显著的进展，并开始应用于人的临床实验。本文综述了近年来在该领域的研究成果，展望了食用乙肝疫苗的良好前景。     

一个能诱生戊型肝炎病毒中和抗体的ORF2编码蛋白短片段

目的：比较戊型肝炎病毒（HEV）第4基因型ORF2编码蛋白片段pN472-C617（aa472～617）和pN477-C613（aa477～613）的免疫原性，找到能诱生HEV中和抗体的ORF2编码蛋白的更短片段。方法：表达和纯化pN472-C617和pN477-C613，分别免疫BALB/c小鼠，以间接ELISA检测免疫血清的抗体效价，并以基于PCR的体外中和试验检测免疫血清的中和活性。结果：pN472-C617和pN477-C613可在大肠杆菌高效可溶性表达，纯化后的重组蛋白能在小鼠体内诱导出高效价的抗体。基于PCR的体外中和试验显示pN472-C617免疫血清可有效中和HEV，阻断其在敏感细胞表面的吸附和细胞内复制；而两端仅比pN472-C617各短5个氨基酸的pN477-C613的免疫血清不具有中和HEV的活性。结论：重组蛋白pN472-C617具有良好的抗原性和诱生中和抗体的能力，是目前文献报道中含有HEV中和抗原表位的最短ORF2编码蛋白片段，可作为重组亚单位候选疫苗用于HEV疫苗的开发。     

戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同

目的：制备戊型肝炎病毒(HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白(p166Bur和p166Mex)的单克隆抗体(McAbs)，用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法：将免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得分泌抗-p166Bur和抗-p166Mex McAbs的杂交瘤细胞株，然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEV ORF2编码蛋白p166的免疫反应性。结果：获得4株杂交瘤细胞株，即分泌抗-p166Bur McAbs的2G2、2B1以及分泌抗-p166Mex McAbs的D8G10和E5E12，其中2B1分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合，而其余3株分泌的McAbs既能与Ⅰ、Ⅱ基因型HEV的p166重组蛋白发生反应，也能与Ⅲ、Ⅳ基因型的p166蛋白反应。结论：HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。     

戊型肝炎病毒结构蛋白p166在家蚕细胞及蛹体中的表达

目的探讨戊型肝炎病毒结构蛋白基因片段p166(HEVp166)在家蚕／BmNPV表达载体系统中的表达水平。方法应用PCR、基因克隆及共转染等技术将p166插入到家蚕杆状病毒多角体启动子的下游，构建重组病毒；并在家蚕细胞及家蚕蛹中表达p166。用间接免疫荧光试验检测感染36h后家蚕培养细胞中p166蛋白的表达情况。收集感染后144h的蛹样品进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecylsulphate-Polyacrylamide gel eleetrophoreses，SDS-PAGE)及Western blotting分析。结果获得含有HEVp166基因片段的重组杆状病毒表达载体Bm-HEV166。Bm-HEV166能在家蚕细胞中表达p166蛋白，感染后的培养细胞中出现绿色球状体；感染Bm-HEV166的家蚕蛹血淋巴能高效表达p166蛋白，蛹血淋巴能与抗p166单克隆抗体发生特异性反应，在Mr为19000大小的位置出现一条明显的杂交条带。结论HEVp166基因片段在家蚕蛹中能获得高效表达，为进一步研制HEV口服疫苗奠定基础。