稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度影响.方法:体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,检测细胞内钙离子浓度.结果:①稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞有抑制增殖的作用,与空白对照组对比,差别有统计学意义(P＜0.05);②稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞有增加G0/G1期细胞数目,减少G2/M期、S期细胞数目的作用.③稳心草黄酮类化合物能降低细胞内钙离子浓度,细胞内钙离子浓度降低的程度与药物剂量相关.结论:稳心草黄酮类化合物可能是通过增加肺动脉平滑肌细胞G0/G1期细胞数目,减少G2/M期、S期细胞数目,抑制其增殖.此外,稳心草黄酮类化合物可能会降低胞质内游离钙离子浓度,促进肺动脉平滑肌舒张.     

稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及血管紧张素Ⅱ的影响

目的:通过观察稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平变化的影响,探讨其防治肺动脉高压的物质基础和作用机制,为中药开发提供基础研究资料.方法:稳心草品种由药学专家进行植物基源鉴定,稳心草黄酮类化合物委托甘肃中医学院科研中心提取并鉴定.用原代培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖,采用放射免疫法检测细胞外AngⅡ含量的变化.结果:稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞有抑制增殖的作用,与空白对照组对比,差别有统计学意义(P＜0.05);稳心草黄酮类化合物各剂量组AngⅡ含量低于空白对照组,差别有统计学意义(P＜0.05),且AngⅡ含量降低的程度与药物剂量呈一定的正相关.结论:稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞有抑制增殖的作用,机制可能是其通过对AngⅡ的抑制,此可能是稳心草黄酮类化合物具有一定的降低肺动脉高压作用的原因之一.     

稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及培养液中ET-1水平的影响

目的：观察稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的抑制作用。方法：采用（四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法）MTT法测定稳心草黄酮类化合物对大鼠PASMC增殖的抑制率、放射免疫法检测培养液中ET-1含量的变化。结果：稳心草黄酮类化合物对体外培养的PASMC有抑制增殖及降低培养液中ET-1水平的作用（P〈0.05）。结论：稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠PASMC有抑制增殖的作用。     

稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及其PDGF影响的研究

目的:探讨稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响.方法:采用四氮唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖、双抗体夹心ABC-Elisa法测定细胞外血小板源生长因子(PDGF)含量的变化.结果:稳心草黄酮类化合物具有抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖及下调细胞外PDGF水平的作用,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论:...     

丹参酮ⅡA抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及其机制研究

目的：观察丹参酮ⅡA（tanshinone ⅡA，TA）对10％胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）增殖的抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞A7r5细胞株，以终浓度为10％的胎牛血清（FBS）作为刺激因素，用细胞计数法、噻唑蓝（MTY）比色法和5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）掺入法测定TA对细胞增殖的影响，用流式细胞术（FCM）分析细胞周期分布特征，用Western blot实验测定细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）磷酸化活性，用RT—PCR测定c—fos的表达水平。结果：细胞计数、MTY比色法和BrdU掺入实验表明丹参酮Ⅱ。能抑制10％FBS所诱导的VSMC增殖，作用强度呈剂量依赖性；细胞周期分析显示，TA处理组G0／G1期细胞百分比高于10％FBS组，而S期比例低于10％FBS组，表明TA可阻止10％FBS所诱导的细胞周期由G0／G1期向S期推进；Western blot结果显示与10％FBS组相比，TA处理组ERK1／2磷酸化活性降低；RT—PCR结果显示TA处理组c—fos表达水平降低。结论：丹参酮可抑制10％FBS诱导的体外培养大鼠动脉平滑肌细胞增殖，此作用可能与其阻止细胞周期由G0／G1期向S期推进，抑制MAPK信号转导通路激活，进而下调c-fos表达有关。     

消斑通脉合剂对血管平滑肌细胞增殖和P21waf1/cip1蛋白表达的影响

目的：探讨中药复方消斑通脉合荆药物血清对血小板源性生长因子（PDGF—BB）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖与细胞周期分布的影响及相关作用机制。方法：体外培养VSMCs,PDGF—BB刺激VsMCs,采用MTr法检测药物血清对VSMCs增殖的影响;流式细胞仪分析各组细胞周期分布情况;应用Western印迹法检测药物血清对VSMcs中P21waf1/cip1蛋白的表达变化。结果：MTT法显示药物血清呈剂量依赖性抑制VSMCs增值,高剂量与低剂量比较有显著差异（P〈0．05）;流式细胞仪分析结果显示与模型组比较,低剂量与高剂量组明显提高G0／G1期百分率（P〈0．01）、减少s期百分率（P〈0．01）,低剂量与高剂量组比较有显著差异（P〈0．05）;Western印迹法显示与模型组比较,高剂量与低剂量可明显提高VSMCs中P21waf1/cip1蛋白表达（P〈0．01）,低剂量与高剂量比较有统计学差异（P〈0．01）。结论：中药复方消斑通脉合剂药物血清通过促进VSMCs中P21waf1/cip1。蛋白表达,阻滞VsMcs细胞周期进程,起到抑制VsMcs增殖作用。     

补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的:观察补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:健康Wistar清洁级大鼠,分离大鼠胸主动脉,贴块法培养VSMC,抗α-actin的免疫组织化学染色鉴定细胞。无血清培养液培养静止后,以20%胎牛血清(FBS)刺激VSMC增殖。实验分为空白对照组、补肾化痰降浊方组,分别加入不同浓度的补肾化痰降浊方,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对VSMC增殖的影响,并用流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化。结果:经20%FBS刺激后,VSMC细胞增殖明显升高,加入不同浓度的补肾化痰降浊方作用24小时后,细胞增殖明显下降,并呈一定程度的剂量依赖关系。随着补肾化痰降浊方浓度加大,VSMC细胞周期分布发生变化,G0/G1期细胞比例增加,而合成增殖的S期细胞比例减少,出现G0/G1期细胞周期阻滞。结论:补肾化痰降浊方对血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,可能是其防治动脉粥样硬化(AS)及AS性疾病的部分作用机制。     

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞增殖的抑制作用

目的：观察姜黄素对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）细胞增殖、细胞周期和周期蛋白D1的影响.方法：体外原代培养佐剂性关节炎大鼠FLS.取第3代FLS分别加入浓度为10,20,40,80 μmol/L的姜黄素溶液,共同培养24 h、72 h.MTT法检测药物对FLS增殖的影响,流式细胞术分别分析细胞周期和周期蛋白D1.结果：共培养24 h后40、80 μmol/L浓度组的MTT光密度值与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,80 μmol/L浓度组G1期细胞所占比例和周期蛋白D1荧光指数与空白对照组差异也有统计学意义（P〈0.05）;共培养72 h 后10,20,40,80 μmol/L各浓度姜黄素组的光密度值、G1期细胞所占比例及周期蛋白D1与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论：姜黄素能抑制佐剂性关节炎大鼠纤维样滑膜细胞的增殖,使细胞停滞在G1期,该作用可能与降低周期蛋白D1的表达有关.     

固本化痰通脉方含药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖及细胞周期素D1的影响

目的：观察固本化痰通脉方对大鼠血管平滑肌细胞生长增殖、细胞周期及细胞周期素D1表达的影响，以探讨其作用机制。方法：血小板源生长因子BB（PDGF-BB）刺激体外培养的大鼠血管平滑肌细胞使其快速增殖生长，加入不同浓度的固本化痰通脉方含药血清作用一定时间后，通过MTT法测定其对血管平滑肌细胞生长的抑制率，流式细胞技术测定细胞周期及细胞周期素D1的表达。结果：固本化痰通脉方能明显抑制PDGF-BB刺激的血管平滑肌细胞增殖，还以浓度依赖方式减少S期细胞、阻滞细胞于G0／G1期，并下调细胞周期素D1的表达。结论：固本化痰通脉方能抑制血管平滑肌细胞的增殖生长，阻滞细胞周期的进行，因而可能具有抗动脉粥样硬化的作用，其作用机理可能与调控血管平滑肌细胞细胞周期素D1的活性有关。     

三七总皂苷对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：观察三七总皂苷（total Panax Notoginseng Saponins,tPNS）对体外培养的SD大鼠肾小球系膜细胞（Mesangial cells,MCs）增殖以及细胞周期的影响,以探讨tPNS在防治肾小球炎症和硬化中的作用及可能机理。方法：分离培养SD大鼠MCs,分为5组（n=8）：空白对照组、血清刺激组、3个不同浓度（100,200,400μg/mL）的tPNS干预组。分别采用MTT法、细胞毒检测及流式细胞术观察大鼠MCs增殖及细胞周期的变化。结果：tPNS呈量效依赖抑制MCs增殖;降低S＋G2/M期细胞比例,且对MCs均无明显细胞毒性。结果：三七总皂苷通过减少DNA合成期（S期）细胞数量,抑制大鼠MCs增殖,而非依赖于诱导细胞凋亡和细胞毒性。     

升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。方法：建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养方法，将细胞分为空白组、模型组、升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组，并采用细胞计数法和免疫化学方法分别对平滑肌细胞的生长特性和纯度进行测定。用MTT法观察升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组拮抗肿瘤坏死因子（TNF—α）诱导平滑肌细胞增殖的作用，用流式细胞技术测定升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对平滑肌细胞周期的影响。结果：升麻苷（50，100，200mg·L^-1）和5-O-甲基维斯阿米醇苷（50，100，200mg·L^-1）均能明显抑制TNF—α引起的平滑肌细胞增殖，与TNF—α组相比有极显著差异（P〈0．01）。升麻苷（50，100，200mg·L^-1）和5-O-甲基维斯阿米醇苷（50，100，200nag·L^-1）均使G1／G0期细胞比例增加，S期、G2／M期细胞比例减少，与TNF—α组相比差异极显著（P〈0．01）。结论：升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α引起的平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用。     

绿茶多酚抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的：观察绿茶多酚对低密度脂蛋白（LDL）刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞，LDL刺激时，应用不同剂量的绿茶多酚作用24h后，采用MTS／PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态，应用流式细胞术测定细胞周期，结果：与对照组相比，LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖，绿茶多酚对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用（P＜0．05），并呈现剂量依赖性，流式细胞术检测表明，绿茶多酚可以使LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞大部分处于G0／G1期，与LDL组相比有明显差异（P＜0．05），结论：绿茶多酚可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

十枣汤对肺纤维化大鼠血清TNF-α和TGF-β1浓度的影响

目的：通过检测博莱霉素所致肺纤维化大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和转化生长因子-β1（TGF-β1）浓度,探讨十枣汤对肺纤维化大鼠的治疗作用及疗效机制。方法108只雄性健康Wistar大鼠随机分为6组：空白对照、模型对照、强的松、十枣汤低剂量、十枣汤中剂量、十枣汤高剂量组,每组18只。空白对照组以气管内注入生理盐水的方法设立对照,余各组气管内注入博莱霉素建立肺纤维化模型,造模第2天始进行药物干预,第14天、28天各处死9只大鼠,采集血清,取右肺,光镜下观察肺组织病理变化,ELISA法检测血清中TNF-α和TGF-β1浓度。结果给药后第14、28天,与空白对照组相比,模型对照组出现典型肺纤维化改变,血清TNF-α和TGF-β1的浓度明显升高（P＜0.01）;与模型对照组相比,各药物治疗组肺纤维化程度明显改善,血清TNF-α和TGF-β1的浓度显著降低（P＜0.01）;十枣汤高剂量组血清TNF-α和TGF-β1的浓度较其余各组显著降低（P＜0.01）。给药第14d时,强的松组与十枣汤低、中剂量组大鼠血清TNF-α浓度无显著差异（P＞0.05）,与十枣汤中剂量组血清中TGF-β1浓度无显著差异（P＞0.05）;28天时,强的松组大鼠血清TNF-α含量较十枣汤低剂量组低,有显著差异（P＜0.05）,与十枣汤中剂量组无显著差异（P＞0.05）;强的松组与十枣汤低剂量组大鼠血清中TGF-β1浓度无显著性差异（P＞0.05）,十枣汤中剂量组比强的松组大鼠血清中TGF-β1低,有显著差异（P＜0.05）。结论十枣汤可减轻博来霉素所致肺纤维化大鼠血清中TNF-α、TGF-β1的含量,延缓肺纤维化进展,减轻肺纤维化程度。     

糖足方对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的：用血清药理学与现代分子生物学相结合的方法，探讨糖足方对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法：选择纯种新西兰家兔，灌服不同剂量的糖足方中药制剂，制备含有不同药物浓度的兔血清；用组织块种植法体外培养糖尿病大鼠模型的髂动脉平滑肌细胞并用不同浓度含药血清进行干预；用同位素液闪测定氚标记胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（3H-TDR）掺入量，检测含药血清对平滑肌细胞增殖的影响；流式细胞仪测定细胞周期。结果：糖足方含药血清诸组呈浓度依赖性地表现为3H,TDR掺入量显著减少，3个含药血清组3H-TDR掺入量均明显低于正常血清对照组（P〈0.01）；流式细胞仪测定各含药血清组处于S和G2／M期细胞百分比显著低于正常血清对照组（P〈0.01）。结论：糖足方舍药血清抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖，且抑制效应呈浓度依赖性，其部分机制可能是通过阻滞VSMC G0/G1期向S的转化有关。     

咳喘平冲剂对幼龄哮喘大鼠气道重塑TGF-β_1和IL-1_2的影响

目的：探讨咳喘平冲剂对幼龄哮喘大鼠气道重塑TGF-β1和IL-12的影响。方法：将SD大鼠40只随机分为模型组、空白对照组、咳喘平冲剂组,通过对大鼠采用卵蛋白致敏,并反复雾化吸入卵蛋白建立哮喘气道重塑模型。肺组织石蜡切片行免疫组化染色,计算机图像处理软件测定TGF-β1表达（以染色吸光度值表示）。ELISA法检测血清IL-12的含量。结果：模型组大鼠TGF-β1、IL-12含量与空白对照组比较差异具有极显著性（P〈0.01）;咳喘平冲剂组大鼠TGF-β1、IL-12含量与模型组大鼠比较差异具有显著性（P〈0.05）。结论：咳喘平冲剂能够降低哮喘大鼠肺组织TGF-β1含量,升高血清IL-12含量,从而减轻气道炎症,干预气道重塑。     

升清降糖合剂对H_2O_2诱导凋亡的胰岛β细胞周期和Caspase-3的影响

目的：探讨升清降糖合剂（以下简称SQ）对氧化损伤的胰岛β细胞凋亡的保护作用。方法：以H2O2诱导建立胰岛细胞凋亡模型,采用半仿生提取法提取复方有效成分,以10μg/ml作用于胰岛细胞凋亡模型,采用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,分光光度法检测凋亡蛋白Caspase-3的活性。结果：H2O2可诱导胰岛β细胞凋亡,加用SQ后细胞凋亡现象明显下降。与正常组比较,模型组RINm5F细胞在G2/M期比例减少（P〈0.01）,保护组RINm5F细胞在G0/G1的比例减少（P〈0.05）,在G2/M期细胞比例上升（P〈0.01）。模型组RINm5F细胞Caspase-3活化增强,模型组原代胰岛细胞Caspase-3活化增强,保护组Caspase-3活性下降,与模型组比较,有统计学差异（P〈0.01）。结论：SQ对氧化损伤诱导的胰岛β细胞凋亡具有保护作用,其机制与调节胰岛β细胞的细胞周期和调节凋亡相关蛋白Caspase-3表达有关。     

大黄素对血管平滑肌细胞周期调控蛋白CyclinD1表达的影响

目的:观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和CyclinD1表达的影响.方法:取对数增长期的平滑肌细胞,采用MTT法观察大黄素对平滑肌细胞增殖抑制的有效浓度范围,求出IC50并干预细胞;然后分别用流式细胞仪和Westernblot法进行细胞周期时相和CyclinD1表达的测定.结果:与对照组比较,LC50时药物组G0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,CyclinD1表达高峰延迟,表达量下调,细胞周期受阻于G0/G1期.结论:大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调Cyclin D1表达,阻滞了细胞周期的进程;是一种有效的抗平滑肌细胞增殖的药物.     

槲皮素对原代培养的牛肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用 MTT 比色法、流式细胞术、细胞计数、Giemsa染色对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响进行观察。结果:与对照组相比,槲皮素处理组可显著地抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖,而且主要是细胞周期的 G_0/G_1到 S 期受抑制。结论:槲皮素可显著地抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖,其机制可能是其对酪氨酸蛋白激酶的抑制作用。     

降压通络方对缺氧诱导的大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨降压通络方对缺氧诱导的大鼠肾小管上皮（NRK-52E）细胞凋亡的相关分子机制。方法制备降压通络方（1.42g/mL灌胃大鼠）含药血清和缬沙坦（0.83mg/mL灌胃大鼠）含药血清，采用缺氧诱导大鼠NRK-52E细胞凋亡模型，分为4组：正常组、模型组、降压通络方组和缬沙坦组。采用CCK-8试剂盒检测细胞活力值，AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率，ELISA法检测细胞上清液转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白表达，免疫荧光法检测TGF-βRⅠ、Smad2/3蛋白定位，WesternBlot法检测TGF-βRⅠ、Smad2/3蛋白表达。结果TGF-βRⅠ、Smad2/3在NRK-52E细胞上广泛表达。与正常组比较，模型组细胞活力值降低（P<0.01），凋亡率升高（P<0.01），TGF-β1、TGF-βRⅠ、Smad2/3表达升高（P<0.01）。与模型组比较，降压通络方组和缬沙坦组细胞活力值升高（P<0.01），凋亡率降低（P<0.05，P<0.01），TGF-β1、TGF-βRⅠ、Smad2/3表达降低（P<0.01，P<0.05）。与缬沙坦组比较，降压通络方组TGF-β1表达升高（P<0.05），细胞活力值、凋亡率、TGF-βRⅠ和Smad2/3表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论降压通络方能抑制缺氧诱导的NRK-52E细胞凋亡，其作用机制可能是通过抑制TGF-β1/TGF-βRⅠ/Samd2/3信号通路而实现。     

止消通脉宁干预TGF-β_1诱导HK-2细胞增殖的研究

目的：通过观察止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）增殖的影响,探讨治疗糖尿病肾病有效中药复方止消通脉宁在防治肾间质纤维化方面的作用。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1∶1）培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组（TGF-β110ng/mL）、空白血清对照组（TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清）、干预1组（TGF-β110 ng/mL＋10%低剂量止消通脉宁含药血清）、干预2组（TGF-β110 ng/mL＋10%中剂量止消通脉宁含药血清）、干预3组（TGF-β110 ng/mL＋10%高剂量止消通脉宁含药血清）。倒置显微镜下观察各组细胞形态,MTT法检测细胞增殖。结果：TGF-β110 ng/mL能显著诱导人肾小管上皮细胞增殖,与空白对照组相比有显著性差异（P〈0.05）,且其作用随处理时间的延长而增强,但和止消通脉宁含药血清共同作用后,其促细胞增殖作用受到一定抑制（P〈0.05）。结论：止消通脉宁能抑制HK-2细胞增殖,在一定程度上具有防治肾间质纤维化的作用。