稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度影响.方法:体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,检测细胞内钙离子浓度.结果:①稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞有抑制增殖的作用,与空白对照组对比,差别有统计学意义(P＜0.05);②稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞有增加G0/G1期细胞数目,减少G2/M期、S期细胞数目的作用.③稳心草黄酮类化合物能降低细胞内钙离子浓度,细胞内钙离子浓度降低的程度与药物剂量相关.结论:稳心草黄酮类化合物可能是通过增加肺动脉平滑肌细胞G0/G1期细胞数目,减少G2/M期、S期细胞数目,抑制其增殖.此外,稳心草黄酮类化合物可能会降低胞质内游离钙离子浓度,促进肺动脉平滑肌舒张.     

稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及培养液中ET-1水平的影响

目的：观察稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的抑制作用。方法：采用（四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法）MTT法测定稳心草黄酮类化合物对大鼠PASMC增殖的抑制率、放射免疫法检测培养液中ET-1含量的变化。结果：稳心草黄酮类化合物对体外培养的PASMC有抑制增殖及降低培养液中ET-1水平的作用（P〈0.05）。结论：稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠PASMC有抑制增殖的作用。     

稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及其TGF-β表达影响的实验研究

目的：研究稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMs）增殖和TGF-β表达水平的影响,探讨其防治肺动脉高压的疗效及作用机制。方法：组织帖块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,MTT法确定高、中、低剂量分组及作用时间。MTT法进行细胞计数,流式细胞仪进行细胞周期测定,ELISA法进行细胞培养夜TGF-β含量测定。结果：贴块培养的细胞经电镜鉴定为动脉平滑肌细胞;台盼蓝染色倒置显微镜观察表明细胞生长状态良好。黄酮类化合物高、中剂量组细胞计数明显减少、细胞周期G0/G1期细胞增多,S期、G2/M期细胞减少;细胞TGF-β含量明显降低,与空白对照组比较有统计学意义（P〈0.05）;低剂量组与空白对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：稳心草黄酮类化合物可抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,延缓细胞周期进程,调节细胞分泌TGF-β水平。     

稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及其PDGF影响的研究

目的:探讨稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响.方法:采用四氮唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖、双抗体夹心ABC-Elisa法测定细胞外血小板源生长因子(PDGF)含量的变化.结果:稳心草黄酮类化合物具有抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖及下调细胞外PDGF水平的作用,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论:...     

芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察芍药苷对血管紧张素Ⅱ刺激下离体大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响和基质金属蛋白酶-2活性的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、芍药苷干预血管平滑肌细胞,采用MMT法检测细胞增殖,硝酸还原酶及化学比色法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,应用酶谱法测基质金属蛋白酶-2活性的变化.结果 AngⅡ能明显促进平滑肌增殖、提高基质金属蛋白酶-2活性,芍药苷在125～1000 μg/mL能显著提高NO、NOS、iNOS水平,抑制平滑肌增殖,并呈剂量及时间依赖性;能显著抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌基质金属蛋自酶-2活性的升高.结论 芍药苷可能通过升高NO和NOS水平抑制AngⅡ诱导的平滑肌胞增殖.     

二冬二母二草汤对慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压平滑肌细胞增殖的影响及作用机制研究

目的:研究二冬二母二草汤对慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Diseases,COPD)相关肺动脉高压大鼠模型的肺动脉平滑肌细胞(Pulmonary Arterial Smooth Muscle Cells,PASMCs)增殖的影响及作用机制。方法:体外培养PASMCs,分为对照组、模型组、二冬二母二草汤组(低、中、高浓度组)、Rho激酶抑制剂组。采用CCK-8方法测定PASMCs增殖水平,通过Western blot测定PASMCs中ROCK1、ROCK2表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组的PASMCs增殖及ROCK1、ROCK2表达均明显升高(P<0.01);与模型组相比,低、中、高剂量组及Rho激酶抑制剂组的PASMCs增殖及ROCK1、ROCK2表达均明显降低(P<0.01或P<0.05),其中以高剂量组及Rho激酶抑制剂组降低显著。结论:二冬二母二草汤可明显抑制COPD相关肺动脉高压大鼠的PASMCs增殖,作用机制与调节Rho激酶信号通路有关。     

保肺定喘汤对小牛肺动脉平滑肌细胞增殖的干预作用

目的:探讨保肺定喘汤防治肺动脉高压的作用机理.方法:观察保肺定喘汤药物血清对体外培养小牛肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响.结果:缺氧能促进小牛PASMC的增殖(P＜0.05),保肺定喘汤药物血清对常氧和缺氧条件下小牛PASMC增殖均有抑制作用(P＜0.05或P＜0.01).结论:保肺定喘汤药物血清能抑制小牛PASMC增殖,可能是保肺定喘汤防治肺动脉高压的作用机理.     

柿叶黄酮抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察柿叶黄酮对低密度脂蛋白(LDL)刺激时离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,LDL刺激时,应用不同剂量的柿叶黄酮作用24 h后,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态.结果:与对照组相比,LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖,柿叶黄酮对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用(P＜0.05),并呈现剂量依赖性.结论:柿叶黄酮可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖.     

从CaN信号通路探讨川芎嗪对AngⅡ诱导的大鼠VSMCs增殖的抑制作用及机制

目的从钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及机制。方法以AngⅡ诱导体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞建立细胞增殖模型,实验分为空白组、AngⅡ组、AngⅡ 川芎嗪(低、中、高)剂量组。采用定磷法分别测定各组细胞CaM和CaN活性,MTT法检测细胞增殖活度的变化,免疫组化定量技术观察细胞内c-myc、PCNA的表达水平。结果AngⅡ组VSMCs细胞增殖活度(吸光度值)、胞内CaM、CaN活性以及c-myc、PCNA表达量(光密度值)显著高于空白组(P<0.01);同时加入不同剂量(低、中、高剂量)川芎嗪温育,各组CaM、CaN活性以及c-myc、PCNA表达水平均显著低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论川芎嗪可通过降低细胞内CaM、CaN活性,下调胞内c-myc、PCNA表达水平,从而显著抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖。     

雷公藤内酯醇对AngⅡ介导的大鼠GMC增殖的影响

目的:观察不同剂量雷公藤内酯醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的肾小球系膜细胞增殖的影响,探讨其可能机制。方法:分离培养大鼠GMC,用10-6mol/LAngⅡ刺激GMC,将培养的大鼠GMC随机分为5组:正常培养对照组、AngⅡ刺激组、AngⅡ和3种不同浓度(15、10、5μg/L)的雷公藤内酯醇共孵育组。分别采用MIT法及流式细胞术检测大鼠GMC增殖及细胞周期的变化。结果:雷公藤内酯醇能抑制AngⅡ介导的大鼠GMC增殖,降低S G2/M期细胞比例,其中以高浓度雷公藤内酯醇作用最强(P<0.01)。结论:雷公藤内酯醇可能通过减少DNA合成期(S期)细胞数量,抑制大鼠GMC增殖。     

槲皮素对原代培养的牛肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用 MTT 比色法、流式细胞术、细胞计数、Giemsa染色对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响进行观察。结果:与对照组相比,槲皮素处理组可显著地抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖,而且主要是细胞周期的 G_0/G_1到 S 期受抑制。结论:槲皮素可显著地抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖,其机制可能是其对酪氨酸蛋白激酶的抑制作用。     

姜黄醇提取物中不同组分对血管平滑肌细胞增殖的影响研究

目的:比较姜黄醇提取物中不同组分对常规培养血管平滑肌细胞(Vascular Smooth Muscle Cells VSMC)增殖的影响和对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)条件培养的平滑肌细胞增殖作用的影响.方法:姜黄醇提取物经制备型薄层色谱分离,纯化,含量测定后配制成不同浓度的药物溶液,分别与常规培养的VSMC和浓度为2μmol/L的AngⅡ条件培养VSMC中共孵育48h,MTT法测定细胞的增殖情况.结果:姜黄素、一脱甲氧基姜黄素和二脱甲氧基姜黄素在剂量为(1.35×10-5mol/L)时,对常规条件培养和浓度为2×10-6mol/L的AngⅡ条件培养的VSMC均有明显的抑制增殖作用,P＜0.001～0.05;在剂量为(5.4×10-7mol/L)时三者均无明显差异,存在剂量依赖性.抑制作用姜黄素＞一脱甲氧基姜黄素＞二脱甲氧基姜黄素;对AngⅡ条件培养的抑制率＞常规条件培养.色谱的原点物质给予高剂量姜黄素组相同剂量,无抑制作用.     

川芎嗪对大鼠颈总动脉损伤后内皮素、血管紧张素Ⅱ与血小板源生长因子表达的影响

目的观察川芎嗪对血管再狭窄大鼠血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素（ET）与血小板源生长因子（PDGF—B）的影响。方法制备大鼠血管再狭窄模型，观察颈总动脉形态学变化，放射免疫法测定血浆AngⅡ与ET含量，免疫组化法观察颈总动脉PDGF—B表达。结果颈总动脉损伤后14d，平滑肌细胞大量增殖，AngⅡ、ET含量显著升高（均P〈0．01），平滑肌PDGF—B表达显著增强（P〈0．01）。川芎嗪抑制平滑肌细胞增殖，显著降低AngⅡ、ET含量及PDGF—B的表达。结论川芎嗪通过降低AngⅡ、ET含量及抑制PDGF—B表达实现抗血管再狭窄作用。     

绿茶多酚抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的 :观察绿茶多酚对低密度脂蛋白 (LDL)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,LDL刺激时 ,应用不同剂量的绿茶多酚作用 2 4h后 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果 :与对照组相比 ,LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖 ,绿茶多酚对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P <0 .0 5 ) ,并呈现剂量依赖性。流式细胞术检测表明 ,绿茶多酚可以使LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞大部分处于G0 /G1期 ,与LDL组相比有明显差异 (P <0 .0 5 )。结论 :绿茶多酚可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

去甲乌药碱对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响研究

目的:探讨去甲乌药碱对大鼠主动脉平滑肌细胞迁移和增殖的影响。方法:体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,使用不同浓度去甲乌药碱(0、10、30、100μmol/L)培养24h后,通过划痕试验观察去甲乌药碱对平滑肌细胞趋化迁移能力的影响,通过CCK-8试验检测去甲乌药碱对平滑肌细胞增殖能力的影响。结果:划痕试验结果示,去甲乌药碱10μmol/L有抑制大鼠主动脉平滑肌细胞迁移的趋势,但无统计学意义(P0.05);30μmol/L及以上浓度均具有抑制细胞迁移的作用(P0.01),且具有剂量依赖性(P0.05,P0.01)。CCK-8试验结果示,去甲乌药碱各剂量均有明显的抑制大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的作用(P0.05,P0.01),且具有剂量依赖性(P0.05)。结论:去甲乌药碱能抑制大鼠主动脉平滑肌细胞的迁移与增殖,且呈剂量依赖性。推测去甲乌药碱可能具有预防血管再狭窄的作用。     

槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞IL-6的影响

目的:观察槲皮素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞产生IL-6的影响。方法:以不同浓度AngⅡ刺激培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,并以不同剂量的槲皮素干预24 h,用ELISA法检测不同时间点上清液中IL-6含量,用半定量RT-PCR法检测槲皮素对IL-6 mRNA表达的影响。结果:AngⅡ刺激血管平滑肌细胞产生IL-6具有剂量和时间依赖性。槲皮素对不同浓度AngⅡ刺激血管平滑肌细胞产生IL-6有明显剂量依赖性抑制作用,1000μmol/L时作用最为明显;不同浓度槲皮素均可下调AngⅡ(10-7M)所诱导的血管平滑肌细胞IL-6mRNA的表达,浓度为1000μM时作用最明显。结论:槲皮素可在蛋白和转录水平下调AngⅡ诱导血管平滑肌细胞IL-6的产生,提示槲皮素的抗动脉粥样硬化作用可能与其抗炎作用有关。     

青心酮对猪动脉平滑肌细胞增生的抑制作用

在培养的肺动脉平滑肌细胞内加入青心酮注射液，用结晶紫色法，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入以及用ＳＰ免疫细胞化学检测ＰＣＮＡ表达，观察对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响，结果表明青心酮对１０％小牛血清引起的ＰＡＳＭＣ增生的作用与异搏定相似，呈剂量依赖性抑制细胞增殖。提示青心酮可用于慢性肺动脉高压血管改建的防治。     

甲基莲心碱对人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及Cyclin D1,P21Waf1/Cip1表达的影响

目的:观察甲基莲心碱对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMCs)增殖,Cyclin D1及P21Waf1/Cip1表达的影响,旨在探讨甲基莲心碱作用的分子机制。方法:采用MTT法和流式细胞仪观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及甲基莲心碱对HUVSMCs增殖的影响。用免疫印迹法检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1rnRNA的表达。结果:AngⅡ对HUVSMCs有明显促增殖作用,其促增殖效应在24 h达到峰值,且在0.001-0.1μmol/L浓度范围内有剂量依赖关系。甲基莲心碱呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的HUVSMCs增殖,同时可抑制AngⅡ诱导的Cyclin D1蛋白及mRNA的表达,促进P21Waf1/Cip1蛋白及mRNA表达。结论:甲基莲心碱可通过下调Cyclin D1及上调P21Waf1/Cip1的表达阻滞细胞周期的进程,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,是一种有效的抑制血管平滑肌细胞增殖的药物。     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

川芎平喘合剂对慢性阻塞性肺疾病肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及对Rho激酶的影响

目的:观察川芎平喘合剂对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及对Rho激酶的影响。方法:体外培养PASMCs,分为对照组、模型组、川芎平喘合剂组(低、中、高浓度组)、Rho激酶抑制剂组。采用CCK-8方法测定PASMCs增殖,Western blot测定PASMCs中ROCK1、ROCK2表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组PASMCs增殖明显升高,ROCK1、ROCK2表达增强;Rho激酶抑制剂组PASMCs增殖、ROCK1、ROCK2表达均显著低于模型组;与模型组相比,中、高剂量组PASMCs增殖水平显著降低,低、中、高剂量组ROCK1、ROCK2表达低于模型组,以高剂量组降低显著;低、中剂量组ROCK1、ROCK2表达均低于抑制剂组(P0.05或P0.01)。结论:川芎平喘合剂可明显抑制COPD相关肺动脉高压大鼠PASMCs增殖,与降低Rho相关蛋白表达有关。