细胞松弛素B和解冻方法对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响

【目的】探讨细胞松弛素B和解冻程序对玻璃微细管法（GMP）玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响。【方法】以小鼠MII期卵母细胞为模型，研究冷冻前细胞松弛素B预处理、不同解冻程序对小鼠卵母细胞冷冻效果的影响；随后对经GMP玻璃化冷冻的卵母细胞直接进行培养以检测冷冻是否诱发孤雌发育。【结果】与对照组相比．细胞松弛素B预处理的卵母细胞存活率、受精率、卵裂率及囊胚率没有显著差异（89．3％vs91．3％．44．0％vs40．4％，30．0％vs27．7％，4．0％vs6．4％；P〉0．05）；采用连续浓度梯度递减解冻法的受精率明显高于间断浓度梯度递减解冻法（57．4％vs40．4％；P〈0．05），且前者的卵裂率和囊胚发育率也相对较高f40，2％vs27，7％，14．5％vs6．4％；P〉0．05）。冷冻复苏后卵母细胞的孤雌发育率稍高于未经冷冻的卵母细胞（17．1％vs3．2％；P〉0．05）。【结论】细胞松弛素B预处理对MII期小鼠卵母细胞的GMP玻璃化冷冻保存效果没有影响：采用连续浓度梯度递减解冻法能明显提高复苏后卵母细胞的体外发育能力。     

细胞松弛素B预处理对小鼠卵母细胞玻璃化冻融后发育潜能的影响

目的:观察细胞松弛素B (Cytochalasin B,CB)预处理对小鼠卵母细胞玻璃化冻融后发育潜能的影响.方法:用浓度为0(对照)、5、10、20、40 μg/ml的CB分别预处理小鼠成熟卵母细胞后玻璃化冷冻,解冻后进行体外受精,观察卵母细胞的复苏率、受精率、6～8 cell胚胎形成率.结果:CB 20、40μg/...     

一种安全有效的卵母细胞封闭式玻璃化冷冻载体

目的 探讨封闭式玻璃化冷冻载体冻存小鼠卵母细胞的可行性.方法 以小鼠MII期卵母细胞为模型,以开放式玻璃微细管法(GMP)为对照组,比较两种玻璃化冷冻载体对小鼠卵母细胞冷冻后的存活率、受精率、卵裂率及囊胚率的影响.结果卵母细胞经冻融后,封闭式冷冻载体组和GMP组的存活率、受精率、卵裂率和囊胚率均没有明显差异(92.80%vs 93.11%,49.80%vs 51.67%,36.73%vs 35.83%,12.65%vs 14.17%%;P>0.05).结论 封闭式冷冻载体能安全、有效的冷冻保存小鼠卵母细胞.     

左卡尼汀对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞体外受精结局的影响

目的：研究左卡尼汀对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响。方法：将卵母细胞分为新鲜组（存活卵数243个）,玻璃化冷冻组（解冻卵数282个）,左卡尼汀高、中、低剂量（2．0、1．0、0．5 g／L）组（解冻卵数分别为285、280和279个）。观察各组卵母细胞中GSH含量、ROS水平以及卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率。结果：5组卵母细胞GSH含量、ROS 水平及卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均有统计学意义（ F ＝881．290、182．760及χ2＝113．361、21．560、16．660、9．667,P均＜0．05）。与新鲜卵母细胞比较,玻璃化冷冻卵母细胞中GSH含量降低,ROS水平升高,卵母细胞存活率、受精率、卵裂率均降低（ P＜0．05）。左卡尼汀呈剂量依赖性地增加玻璃化冷冻卵母细胞中GSH含量,降低ROS水平（P＜0．05）;高剂量左卡尼汀可明显改善玻璃化冷冻卵母细胞的存活率（ P＜0．05）。结论：左卡尼汀可通过抗氧化作用改善玻璃化冷冻卵母细胞的结局。     

小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的研究

目的　对小鼠卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液进行研究。方法　用两种玻璃化冷冻液EFS4 0 (高钠 )、DEFS4 0 (低钠 )对ICR、C57BL 6J小鼠卵母细胞进行冷冻 ,0 5mol L蔗糖液解冻 ,体外授精前对部分解冻后的C57BL 6J小鼠卵母细胞进行透明带切割。结果　DEFS4 0冷冻液冷冻效果明显高于EFS4 0冷冻液 ,ICR小鼠卵母细胞解冻后成活率达 75 2 %、体外授精率 (2 4 6 % )与对照组相比差异无显著性 ,C57BL 6J小鼠卵母细胞解冻后成活率为 87 1%、卵母细胞切割后体外受精率 (36 0 % )与对照组相比差异也无显著性。结论　冷冻液中钠离子浓度影响小鼠卵母细胞冷冻效果 ,用DEFS4 0 (低钠 )冷冻液进行玻璃化冷冻可以取得理想的冷冻效果。     

冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究

目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片（A）组、冷冻小钩（B）组、电镜铜环（C）组、自制冷冻叶片（D）组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.01）;D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。     

影响冻融胚胎复苏率和移植成功率因素分析

目的探讨影响冻融胚胎复苏率和移植成功率的相关因素。方法回顾性分析573个冷冻胚胎移植（FET）周期的临床资料,按冷冻前胚胎质量、胚胎发育时间、解冻后胚胎复苏程度和冷冻方法分别进行分组,分析不同分类各组间的胚胎复苏情况和（或）临床妊娠率差异。结果冷冻当天胚胎中有优质胚胎者的临床妊娠率显著高于无优质胚胎者（31．8％vs20．0％）（P〈0．05）。受精第2天冷冻者与受精第3天冷冻者的胚胎复苏率和临床妊娠率差异无统计学意义（79．1％vs82．9％和25．5％vs31．2％）（P〉0．05）。解冻后完全移植100％卵裂球完整者和混合移植者的临床妊娠率显著高于完全移植部分卵裂球损伤者（36．7％vs24．1％和29．2％vs24．1％）（P〈0．05）。冷冻方法改进后的胚胎复苏率和全胚复苏率显著高于冷冻方法改进前（82．0％vs66．3％和50．0％vs27．5％）（P〈0．05）。结论胚胎质量与胚胎复苏率和临床妊娠率密切相关,冷冻胚胎解冻后全胚复苏率与临床妊娠率正相关,冷冻过程中的操作细节是胚胎实验室保证冻融胚胎复苏、移植成功的重要因素。     

猪卵母细胞OPS玻璃化冷冻保存的研究

猪卵母细胞由于脂肪含量高,对低温敏感,相较其他动物卵母细胞的冷冻保存更加困难,因此在种质的保护保存、胚胎工程研究产生极大的阻碍。本试验研究了猪卵母细胞的OPS玻璃化冷冻保存方法,研究乙二醇、甘油和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作为冷冻保护剂,对比不同的浓度梯度和两种冷冻保护剂联合使用对冷冻效果的影响。研究未经体外成熟培养和不同时间体外成熟培养的猪卵母细胞的冷冻保存效果。对比改良优化的OPS玻璃化冷冻方法和传统的程序化冷冻方法的保存效果。实验表明,体外成熟12h(GV期)的猪卵母细胞用乙二醇添加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)进行玻璃化冷冻,解冻后体外成熟率、细胞的形态正常率与未经体外成熟的的卵母细胞相比差异显著,与成熟48h(MII期)卵母细胞相比差异不显著。但卵裂率和桑椹胚囊胚率体外成熟12h(GV期)的猪卵母细胞用乙二醇添加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作为冷的保护剂组要好于其他组。     

玻璃化冷冻人卵母细胞体外受精－胚胎移植9例临床分析

目的：探讨人卵母细胞玻璃化冷冻在体外受精－胚胎移植（ IVF-ET）中的应用效果。方法行IVF-ET 治疗、因取卵日男方因素无法进行受精的患者9例,对其成熟卵子进行玻璃化冷冻保存,解冻后进行卵胞浆内显微授精（ICSI）,记录卵子复苏、受精、卵裂及移植后妊娠情况。结果9例患者共解冻复苏58枚卵子,复苏率68．2％（58／85）;复苏后进行ICSI的成熟卵子中,受精40枚,形成胚胎34枚,受精率69．0％,卵裂率85．0％。7个移植周期共移植胚胎15枚,临床妊娠3例,临床妊娠率42．9％。结论人卵母细胞玻璃化冷冻可以获得一定的临床妊娠率,在IVF-ET中可作为临床治疗的选择之一。     

OPS两步法玻璃化冷冻小鼠8-细胞胚胎生存发育率的研究

目的为实验动物、家畜和人类胚胎的冷冻保存探索简易、高效的玻璃化冷冻程序。方法以小鼠8-细胞胚胎为材料,在25℃室温和37℃恒温台条件下,利用玻璃化冷冻溶液EDFS30, 对小鼠8-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存,解冻后培养60 h后的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标,同时对解冻后培养1-3 h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。OPS(Open-pulled straw)两步法冷冻保存,即胚胎首先移入预处理液(10％EG 10％DMSO)中平衡30 s,再移入玻璃化溶液中吸入OPS平衡15、25、35、45和60 s连同胚胎直接投入液氮中冷冻保存。结果小鼠胚胎8-细胞冷冻后囊胚发育率最佳组高达95．6％,与对照组(96．8％)差异无统计学意义(P> 0．05)。利用最佳冷冻组获得的165枚胚胎移植于11只假孕63-67 h的受体母鼠,结果有4只妊娠,产仔23只,妊娠产仔率为38．3％(23/60),与对照组37．9％(22/58)差异无统计学意义(P>0．05)。结论 EDFS33为玻璃化冷冻液,OPS两步法能有效地冷冻保存小鼠8-细胞胚胎。     

改良Hemi straw与Cryoleaf法对人卵和胚胎玻璃化保存效果的比较

目的比较改良的Hemi straw与Cryoleaf法对人卵子和胚胎的玻璃化保存效果。方法 将接受体外受精-胚胎移植周期中剩余的98枚未受精卵和76枚废弃胚胎，分别采用Cryoleaf(A组)与改良的Hemi straw（B组）为载体进行玻璃化冷冻，复苏后观察并计算两种玻璃化载体的卵子存活率，24?h继续存活率与卵裂率；胚胎存活率，24?h继续存活率及囊胚形成率。结果Cryoleaf与改良的Hemi straw法保存人未受精卵分别为43、55枚，复苏存活分别为29（67.4%）、31（56.4%）枚，24?h继续存活分别为23（53.5%）、25（45.5%）枚，卵裂分别为3（7.0%）、1（1.8%）枚，两种载体差异不明显（P＞0.05）。Cryoleaf与改良的Hemi straw法保存废弃胚胎分别为39、37枚，复苏存活分别为29（74.4%）、33（89.2%）枚，24?h继续存活分别为28（71.8%）、33（89.2%）枚，形成囊胚分别为5（12.8%）、1（2.7%）枚，两种载体差异不明显（P＞0.05）。结     

不同激光辅助孵化对玻璃化冷冻和慢速程序冷冻卵裂期胚胎移植妊娠率的影响

目的:研究分析两种激光辅助孵化方法对玻璃化冷冻和慢速程序冷冻卵裂期胚胎移植妊娠率的影响。方法:对2013年11月到2014年7月期间在我院接受冷冻胚胎移植的160例患者进行临床研究,随机分为两组,对照组为进行激光透明带打孔辅助孵化,研究组进行激光透明带薄化辅助孵化,比较组间患者的临床妊娠结局。结果:胚胎经程序冷冻后,研究组胚胎种植率(19.1%)显著高于对照组(12.3%),差异有统计学意义(P<0.05),而解冻后卵裂球存活率(82.21%vs.77.43%)与临床妊娠率(37.5%vs.32.5%)无显著差异(P>0.05);胚胎经玻璃化冷冻后,研究组和对照组解冻后卵裂球存活率(87.48%vs.87.41%)、胚胎的临床妊娠率(37.5%vs.35.0%)、种植率(17.5%vs.15.1%)相比较均无统计学差异(P>0.05);研究组中来源于两种冷冻方法的卵裂期胚胎解冻后卵裂球存活率(87.48%vs.82.21%)、临床妊娠率(37.5%vs.37.5%)和种植率(17.5%vs.19.1%)无统计学差异(P>0.05)。结论:激光透明带削薄优于激光透明带打孔用于辅助孵化,不影响患者的妊娠率,可减少对胚胎的损害。     

不同冷冻方法对小鼠卵母细胞冻存的影响

目的：：探讨不同冷冻方法对小鼠卵母细胞存活率及其发育潜能的影响。方法：采用玻璃化冷冻技术,选取开放式载体与封闭式载体分别冻存带卵丘细胞(COC)或剥除卵丘细胞(OD)的小鼠卵丘复合体,复苏后分别作体外受精,胚胎培养。结果：开放式载体冻存组存活卵数76.79%略高于封闭式载体冻存组72.98%,无统计学意义(P >0.05);两组内 COC 组的卵子存活率显著高于 DO 组,但有统计学差异(P <0.05),COC 组的受精率、囊胚率略高于 DO 组,无统计学差异(P >0.05)。结论：(1)封闭式载体有效避免了潜在的污染问题,但不同载体对卵子存活率无显著影响。(2)卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中可以起到保护作用,并对胚胎后期的发育有一定的改善。     

颗粒细胞在玻璃化冷冻中对卵母细胞的影响

目的 采用开放式拉细麦管(open pulled straws，OPS)法玻璃化冷冻技术，探讨卵丘颗粒细胞对未成熟卵母细胞冻融后存活率及其发育能力的影响。方法 小鼠生殖泡期卵丘-卵母细胞复合物(COC)或完全去颗粒细胞后的裸卵(DO)用OPS法玻璃化冻存，复苏后行体外成熟培养(IVM)；COC直接行IVM作为对照组。结果 COC及裸卵冻融后存活率(分别为69．49％、77．90％)、成熟率(分别为56．10％、56．74％)无显著性差异，但成熟率均显著低于对照组(82．28％)。结论 在未成熟卵的玻璃化冷冻中颗粒细胞对卵母细胞冻存无保护作用。     

利用废弃胚胎行人原核移植方法的初步建立

 【目的】 探索利用废弃胚胎进行人原核移植的方案?【方法】 收集废弃多原核受精卵117个?用显微操作-电融合的方法构建原核移植重构胚胎?分别比较钙离子浓度0.05 mmol/L(n=39)和0.1 mmol/L(n=58)的两种电融合液以及电压分别为1 800 V/cm(n=58)和2 000 V/cm(n=20)的两种电场条件对重构合子融合率和发育的影响?【结果】 操作成功率70.1%,融合成功率59.8%,得到43个卵裂胚胎,其中23个(53.5%)6细胞以上胚胎?共14个重构胚发育至8细胞或以上,得到3个囊胚?将电压由2 000 V/cm下降到1 800 V/cm,重构胚胎融合率?卵裂率和囊胚率的差异没有统计学意义(P > 0.05),但6-细胞率明显上升(22.2% vs. 60.9%, P < 0.05)?和钙离子浓度为0.05 mmol/L的融合液比较,0.1 mmol/L的融合液融合率明显上升(39.3% vs. 69.0%,P < 0.05),卵裂率?6-细胞率和囊胚率皆无统计学差异(P > 0.05)?【结论】 通过显微操作-电融合的方法,用废弃胚胎重构人核-质异质的胚胎模型,是可行的?经济的?     

高浓度玻璃化冷冻剂对卵子冷冻复苏及发育潜能的影响

目的:探讨卵子暴露于高浓度玻璃化冷冻剂中的时间对卵子冷冻复苏及其后续发育潜能的影响.方法:收集79例未受精的成熟卵子290枚进行玻璃化冷冻及解冻,根据卵子在高浓度玻璃化冷冻剂中暴露的时间将其分为A组(147枚卵子,暴露时间10 ～20 s)及B组(143枚卵子,暴露时间40 ～50 s),比较两组卵子复苏率、受精率、卵...     

平皿-微滴法玻璃化冷冻保存小鼠胚胎

目的 :使用平皿 微滴法玻璃化冷冻小鼠 8～ 12细胞胚胎 ,检验该方法对胚胎的冻存效果。方法 :胚胎在EG2 0 中平衡 3min ,EFS4 0 中平衡 1min ,将含有胚胎的小于 0 .5 μl的EFS4 0 微滴吹于 35mm平皿上并立即直接浸入液氮保存。结果 :解冻后胚胎回收率达到 98.1% ,透明带无破损 ,冷冻后存活率为 95 .2 %。冻融胚胎体外发育和体内发育能力与对照组胚胎比较差异无显著性 (84 .3%对 90 .1% ,12 .1%对 13.5 % ,P >0 .0 5 )。结论 :小鼠 8～ 12细胞胚胎可以用平皿 微滴法有效地进行玻璃化冻存。     

EDS-40玻璃化冻存小鼠卵母细胞的研究

目的设计研究玻璃化液EDS一40对冻贮小鼠卵母细胞的效果。方法①按随机分组原则，分为实验组和对照组，实验组（a）采用自行设计的EDS一40玻璃化液进行玻璃化冷冻（其配方为：40％乙二醇＋18％葡聚糖），对照组（b）采用国际上已证实效果较好的EFS-40J~璃化溶液进行玻璃化冷冻，对照组（c）采用以PROH为基础的程序冷冻液进行程序冷冻。首先对EDS一40和EFS-40玻璃化溶液，行玻璃化测试；再随机选用小鼠卵母细胞，在室温25℃下分别加入EDS-40和EFS．40玻璃化溶液，玻璃化后装管并迅速投入液氮中。对照组（c）置于程序冷冻仪中进行程序化冷冻。各组均冻存2mo-3mo后，在25℃的水浴中复温后，用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养，观察卵母细胞的成活率。将成活的卵母细胞行体外受精，观察其受精率。结果①两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果；②EDS一40、EFS一40及对照组冷冻复温后的存活率依次为：79．34％、67．94％、56．34％；⑤EDS一40、EFS-40及对照组冻卵的受精率分别：79．17％、66．29％、51．25％。结论①EDS一40可以用来玻璃化冷冻小鼠卵母细胞；②EDS一40较EFS一40玻璃化溶液冻存小鼠卵母细胞效果更好；③玻璃化技术比传统冷冻法效果更好。     

RapidWarm Blast玻璃化解冻液对囊胚复苏的效果观察

目的 观察在囊胚复苏周期中,RapidWarm Blast玻璃化解冻液对囊胚的复苏效果。方法 回顾性分析2018年12月至2019年12月在安徽医科大学第一附属医院首次行囊胚复苏移植的655例患者临床资料,根据囊胚解冻液不同分A组357例及B组298例。A组采用传统Vitrification Media解冻液进行囊胚复苏,B组采用新型RapidWarm Blast解冻液复苏。比较两组囊胚复苏后整体存活率,解冻2 h后囊胚重扩张率、孵化率,囊胚种植率及临床妊娠率;同时比较两种解冻液对囊胚不同发育阶段(第5天囊胚、第6天囊胚)的重扩张率、孵化率及临床妊娠率的影响。结果 两组囊胚复苏后的存活率、重扩张率、孵化率、临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);B组囊胚种植率(55.45%)高于A组(48.76%),差异有统计学意义(P<0.05)。两组中发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率均高于发育第6天的囊胚,差异均有统计学意义(P<0.05);两组间发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率比较,差异无统计学意义(P>0.05),B组发育第6天的囊胚复苏2 h后扩张率及孵化率均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 新型RapidWarm Blast解冻液用于囊胚玻璃化复苏,可获得与传统的Vitrification Media相似的临床结局,但新型解冻液对发育第6天囊胚的复苏效果更好,胚胎种植率更高。     

Study on the developing potentiality of mouse morula produced in vitro or in vivo after vitrification

Great horovement haS been made in the cryopreservation Of inalnlnalian elnbmp since wnttingham['] reported his Pioneering wold about successful cryOPreservationof mouse embryo. It results in the availability of cryOPreserVation of embryos of all stages[']. HOwever, cryopreserved embryos can not avoid the damages by ice crystal,which is a major cause of cen death in the freezing andthawing ProceduresL',']. SO it is necesseq to seareh for anew and more efficient method for embryO cryOPrese…