人多能干细胞的冷冻与保存

背景：人多能干细胞的出现与发展是近年来生物医学研究领域的重大突破。但其在基础/临床研究中的广泛应用还有诸多限制,建立安全有效标准化的冷冻保存方案是人多能干细胞广泛应用面临的重大挑战。 目的：回顾人多能干细胞冷冻领域的研究进展,探索造成冷冻损伤的原因和机制及改进方式,致力于促进新的更有效的冷冻方案形成。 方法：以“人多能干细胞、人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞、玻璃化、程序化冷冻、慢冻法、冷冻保存”为中文检索词,以“human pluripotent stem cells,human embryonic stem cell,human introduced pluripotent stem cell,vitrification,programmed cryopreservation,slow-freezing,cryopreservation”为英文检索词,应用计算机检索中国知网全文数据库、万方全文数据库、维普(VIP)期刊全文数据库、PubMed数据库有关人多能干细胞冷冻保存技术的文献,排除与研究目的无关及重复文献,保留58篇文献进一步总结分析。 结果与结论：了解人多能干细胞冷冻过程中造成冷冻损伤的原因和机制,是寻找高效的冻存方案的关键。需要更清晰的了解冷冻过程中损伤的原理,改进和创新低温生物技术来避免各种冷冻损伤的发生并致力于探讨可重复的,高效的,符合GMP要求的,能大规模冻人多能干细胞的方案。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

高剂量黄体生成素在卵泡期不同时段对体外受精-胚胎移植的影响

目的探讨在控制超排卵（controlled ovarian hyperstimulation，COH）用药中，高剂量黄体生成素（luteinising hormone，LH）在卵泡的不同时期对体外受精-胚胎移植（in—vitro fertilization and embryo transfer，IVF—ET）的影响。方法采用回顾性研究。常规方案实施IVF—ET的病人359例，按COH中卵泡刺激素（follicle—stimulating hormone，FSH）和LH的不同用量，以及用药时间分为3组：A组（n=252），FSH≥225u／d，且LH≤225u／d（对照组）。B组（n=43）为卵泡晚期高LH接触组，FSH〉225u／d，且取卵前3日内LH〉225u／d（高LH近期组）。C组（n=64）卵泡早、中期高LH接触组，FSH〉225u／d，且取卵前4日或以前LH〉225u／d，取卵前3日内LH〈225u／d（高LH远期组）。对各组受精率、胚胎植入率、临床受孕率、继续妊娠率进行比较分析。结果 A组的胚胎植入率、临床受孕率、继续妊娠率均高于B组（10：4％与7．0％，26．7％与18．4％，20．2％与9．5％，P〈0．05）；而与C组比较则差异无显著性（10．4％与9．5％，26．7％与23．6％，20．2％与18．6％，P〉0．05），但受精率差异显著（60．2％与50．4％，P〈0．05）。C组的胚胎植入率、临床受孕率与B组差异无显著性（9．5％与7．0％，23．6与18．4％，P〉0．05），但C组的继续妊娠率明显高于B组（18．6与9．5，P〈0．05）。结论降调节下COH应用LH〉225u／d时，可使IVF—ET的受精率下降。在卵泡晚期（取卵前3日内）高LH的不良影响较大，其植入率、临床受孕率、继续妊娠率均明显下降。     

运用单细胞聚合酶链式反应进行植入前诊断的性别鉴定

目的：建立一种高效、快速、可靠的植入前诊断的性别鉴定方法。方法：取成人外血血单个淋巴细胞和人胚胎单卵裂球，采用多重荧光PCR和多重巢式PCR同时扩增性别识别位点Amelogenin和5号染色体上的基因IL－3。结果：男性单个淋巴细胞荧光PCR扩增效率为72％，巢式PCR扩增效率为64.7%；女性单个淋巴细胞荧光PCR扩增效率为76％，巢式PCR扩增效率为65％，两者与供体外周血gDNA扩增结果的一致性均达100％。单卵裂球荧光PCR扩增效率为86.9%，巢式PCR扩增效率为85.7%，来源于同一胚胎的不同单卵裂球扩增结果的一致性达100%。巢式PCR与荧光PCR的扩增效率比较无显著性差异（P＞0.05）。结论：巢式PCR和荧光PCR各有优劣。但荧光PCR操作简便、耗时短、灵敏度高，为今后的发展方向。     

运用单细胞聚合酶链式反应进行植入前诊断的性别鉴定

目的 :建立一种高效、快速、可靠的植入前诊断的性别鉴定方法。方法 :取成人外周血单个淋巴细胞和人胚胎单卵裂球 ,采用多重荧光PCR和多重巢式PCR同时扩增性别识别位点Amelogenin和 5号染色体上的基因IL 3。结果 :男性单个淋巴细胞荧光PCR扩增效率为 72 % ,巢式PCR扩增效率为 6 4 .7% ;女性单个淋巴细胞荧光PCR扩增效率为 76 % ,巢式PCR扩增效率为 6 5 % ,两者与供体外周血gDNA扩增结果的一致性均达 10 0 %。单卵裂球荧光PCR扩增效率为 86 .9% ,巢式PCR扩增效率为 85 .7% ,来源于同一胚胎的不同单卵裂球扩增结果的一致性达 10 0 %。巢式PCR与荧光PCR的扩增效率比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :巢式PCR和荧光PCR各有优劣 ,但荧光PCR操作简便 ,耗时短、灵敏度高 ,为今后的发展方向     

肌营养不良的分子遗传学进展

肌营养不良症（Muscular dystrophy disease，DMD）是一类较为常见的进行性肌肉变性疾病，在神经系统遗传病中占的比率较高，表现为肌肉进行性加重的萎缩和无力，一般都在青壮年以前发病，随着病情的发展，很多患者丧失劳动力及行走能力，靠轮椅维持生活，严重影响患者的生活质量，严重者危及生命，是一类危害较大的遗传病。这类疾病根据其临床表现、肌肉萎缩的分布、发病年龄、遗传方式又分为假性肥大性、     

海南地区一例NSHL患者的Cx26基因突变分析

目的分析非综合征型耳聋（Nonsyndromic hearing loss,NSHL）患者缝隙连接蛋白beta2（gap junction proteinbeta2,GJB2）基因的突变情况。方法采集患者外周静脉血,PCR法扩增患者GJB2的编码序列全长,纯化回收扩增产物,直接双向测序,分析患者GJB2基因的突变情况。结果基因分析发现,患者GJB2基因编码区存在三个位点的改变,分别是c.79G〉A（p.V27I）纯合改变,c.341A〉G（p.E114G）杂合改变和c.478G〉A（p.G160S）杂合改变。结论携带多位点的复合改变79G〉A＋478G〉A/79G〉A＋34lA〉G与非综合征型耳聋发病可能存在一定相关性。     

育龄期女性体重指数对胚胎发育及助孕结局的影响

目的：探讨育龄期女性体重指数对胚胎发育及助孕结局的影响，旨在为不同体重指数的患者提供更好的助孕治疗，为临床诊疗提供参考。方法：回顾性收集2015年1月～2021年10月在海南医学院第一附属医院生殖医学中心首次接受鲜胚移植且通过长方案促排的患者资料，共3 783例。按照体重指数（body mass index,BMI）将患者分为：低体重组（BMI<18.5 kg/m2）、正常体重组（18.5≤BMI<24 kg/m2）、超重组（24≤BMI<28 kg/m2）和肥胖组（BMI≥28 kg/m2）。比较四组的基本情况、助孕过程、胚胎发育以及助孕结局。结果：分析患者基本情况发现，四组女性年龄无显著差异（P>0.05），但肥胖女性的不孕时间显著延长（P=0.007）。超重及肥胖组的基础内分泌水平低于正常组（P<0.05）。肥胖组基础卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone, FSH）、基础黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、基础雌二醇（estradiol,E2）、基础孕酮（progesterone,P）、抗缪勒管...     

不同黄体酮给药方式对辅助生殖治疗妊娠结局的影响

目的评价黄体酮阴道缓释凝胶以及注射用黄体酮针剂对辅助生殖治疗效果以及对母婴安全性的影响。方法回顾性分析2012年3月至2016年7月海南医学院第一附属医院妇产科采用辅助生殖技术诊治的200例不孕症患者为研究对象,根据不同黄体酮给药方式将其平均分为观察组和对照组,每组100例患者。观察组和对照组患者黄体支持分别选择黄体酮阴道缓释凝胶与黄体酮针剂肌肉注射。记录两组患者基本妊娠结局、新生儿基本情况、围产期并发症以及分娩后1年子宫内膜容受性改变。结果两组患者基本妊娠结局比较,其差异无统计学意义(P0.05)。两组新生儿体重、性别、缺陷发生率以及出生后Apgar评分比较,其差异无统计学意义(P0.05)。两组患者母体围产期并发症比较,其差异无统计学意义(P0.05)。两组患者入院后人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)日和种植窗日子宫动脉血流脉搏指数(pulse index,PI)、抵抗指数(resistance index,RI)以及内膜下血管化-血流指数(vascularization-blood flow index,VFI)比较,其差异均无统计学意义(均P0.05);随访1年后,两组患者子宫动脉血流PI、RI与入院时相比均无显著改变,其差异无统计学意义(P0.05);内膜下VFI均比入院时显著降低,而且观察组患者内膜下VFI显著高于对照组患者,其差异均具有统计学意义(均P0.05)。结论黄体酮阴道缓释凝胶以及注射用黄体酮针剂都是辅助生殖中安全有效的黄体支持方案,但黄体酮阴道缓释凝胶能够有效保护子宫内膜容受性,减少超促排卵对子宫内膜功能的损伤,值得在临床推广应用。     

女性年龄对夫精宫腔内人工授精结局的影响

目的 分析不同年龄组促排卵周期夫精宫腔内人工授精(IUI)的临床结局及其影响因素.方法 回顾性分析2008年1月至2015年12月期间在海南医学院第一附属医院生殖中心进行促排卵周期IUI治疗的4228个周期的临床资料,分析临床妊娠率、抱婴率、流产率与女性年龄的关系.结果 IUI临床妊娠率为14.5％(614/4228),抱婴率为10.1％(429/4228),流产率为15.5％(95/614);按照女性年龄分为21～25岁组、26～30岁组、31～35岁组、36～38岁组、39～40岁组、>40岁组,各组临床妊娠率依次分别为16.5％(40/242)、16.8％(262/1559)、14.2％(224/1578)、13.1％(59/451)、8.9％(18/203)、5.6％(11/195);其抱婴率依次分别为10.3％(25/242)、12.2％(190/1559)、10.2％(161/1578)、8.4％(38/451)、4.9％(10/203)、2.6％(5/195);其流产率依次分别为7.5％(3/40)、14.1％(37/262)、13.4％(30/224)、25.4％(15/59)、27.8％(5/18)、45.5％(5/11);各年龄组临床妊娠率、抱婴率、流产率比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);HCG日子宫内膜厚度平均(9.4±2.0)mm,各组的子宫内膜厚度比较差异无统计学意义(P>0.05);各组平均处理后前向运动精子数依次分别是(11.7±12.3)百万、(10.4±10.8)百万、(9.9±9.4)百万、(10.2±10.6)百万、(8.9±10.0)百万,各组比较差异均无统计学意义(P>0.05);各组的不孕年限依次分别为(3.5±1.5)年、(4.3±2.1)年、(5.2±2.7)年、(6.3±3.8)年、(6.3±4.6)年、(6.2±5.2)年;IUI次数依次分别为(1.4±0.6)次、(1.5±0.8)次、(1.6±0.8)次、(1.6±0.8)次、(1.6±0.9)次、(1.7±1.2)次;直径≥14 mm卵泡个数依次分别为(2.8±2.1)个、(2.7±2.1)个、(2.5±1.9)个、(2.5±1.8)个、(2.4±1.6)个、(2.3±1.4)个;不孕年限、IUI次数、直径≥14 mm的卵泡个数总体分布不全相同,差异均有显著统计学意义(P<0.01).结论 年龄是影响AIH结局的重要因素,对于年龄较大的患者特别是>40岁者应慎重选择IUI,适当减少IUI次数.     

自体外周血干细胞移植联合利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤及相关因子的表达北大核心

背景:目前国内已有较多采用利妥昔单抗联合自体外周血干细胞移植治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的临床报道,但其作用机制还不是很明确。目的:对比分析利妥昔单抗联合自体外周血干细胞移植与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的效果与相关因子水平的变化。方法:选择96例弥漫大B细胞淋巴瘤患者为研究对象,其中男62例,女34例,年龄20-75岁。48例采用利妥昔单抗联合化疗方案(对照组),另48例采用利妥昔单抗联合化疗、自体外周血造血干细胞移植方案(试验组),对比两组临床疗效、不良反应发生情况,随访记录患者生存期,治疗前、化疗6个疗程后及移植后6个月,检测两组血清血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及白细胞介素17水平。结果与结论:①试验组患者均采集到了足够的外周血造血干细胞,回输CD34+细胞数为(3.6±0.6)×106/kg,回输后中性粒细胞植入时间为(11.1±1.2)d,血小板植入时间为(12.3±2.4)d;②试验组治疗有效率明显高于对照组(81%,56%,P<0.05);③从确诊开始至随访结束,试验组生存率为79%、无进展生存率为50%,对照组生存率为56%、无进展生存率为31%,两组间生存率与无病生存率比较差异显著(P<0.05);④两组不良反应发生情况比较差异无显著性意义(P>0.05);⑤治疗前与化疗6个疗程后,两组间3种细胞因子水平比较差异无显著性意义;与治疗前比较,两组化疗6个疗程后的白细胞介素17水平升高(P<0.05),血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平降低(P<0.05);与化疗6个疗程后比较,试验组移植后6个月的白细胞介素17水平升高(P<0.05)、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平降低(P<0.05),对照组3种细胞因子水平无显著变化(P<0.05);⑥结果表明,利妥昔单抗联合自体外周血干细胞移植可提高弥漫大B细胞淋巴瘤患者的生存期,其作用途径可能与调控白细胞介素17、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平有关。