冷拘束应激对大鼠心脏和肝脏HSP70表达及血清中CK、ALT含量的影响

目的通过研究冷拘束应激中大鼠心脏和肝脏组织热休克蛋白(HSP70)表达量以及血清中肌酸激酶(CK)、谷丙转氨酶(ALT)含量的变化,探讨冷拘束应激对心脏和肝脏的影响和差异。方法选取50日龄清洁级大鼠77只,随机分为7组,即0h,0.5h,1.0h,1.5h,2.0h,2.5h,3.0h。采用拘束冷应激法,应激相应时间后,用免疫组织化学方法观察大鼠心脏和肝脏组织HSP70的表达,并检测血清中CK和ALT含量。结果 (1)心脏中HSP70表达量随着应激时间的延长而增加,1.5h组较0h组有明显的增加(P0.05),而2.0h后有极明显的增加(P0.01)。(2)肝脏中HSP70表达量随应激时间的延长呈缓慢增加,仅3.0h组有较明显的增加,与0h组、0.5h组及1.0h组比较有显著差异(P0.05)。(3)应激开始阶段大鼠血清中的CK含量迅速上升,之后平缓升高;大鼠血清中的ALT含量呈现上升趋势,2.5h以前上升较平缓,2.5h以后急骤升高。结论冷拘束应激可使大鼠心脏中HSP70的表达量和血清中CK含量在较短的时间内显著上升,且随着时间的增加而递增,而肝脏中HSP70的表达量和血清中ALT含量在较短的时间内无明显变化,只有在3.0h时才显著增加,提示心脏对冷拘束应激较敏感,而肝脏对冷拘束应激有较强的耐受性。     

PMSG和FSH同期发情处理对小鼠子宫、卵巢和输卵管中雌激素α受体分布的影响

目的研究拘束冷应激对大鼠血清中促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质醇（CORT）、肌酸激酶（CK）和丙氨酸转氨酶（ALT）浓度的动态变化及可能的机制。方法50日龄清洁级大鼠56只,随机分为7组,即0、0．5、1．0、1．5、2．0、2．5和3．0h组。采用拘束冷应激法,在应激相应的时间后,检测大鼠血清中ACTH、CORT、CK、ALT浓度和胃溃疡指数的测定。结果①大鼠血清中的ACTH浓度随着应激时间的增加呈现迅速升高的趋势,0．5h达到最高值,之后又迅速下降,逐渐趋于平缓;②血清中的CORT浓度呈现逐渐升高的趋势。1．5h达到最高值,之后又迅速下降,逐渐趋于平缓;③血清中的CK和ALT活力显著升高,且随着冷应激时间的增加而递增;④大鼠胃溃疡指数在应激初期呈现迅速升高的趋势,2．5h时达到最高值。结论拘束冷应激可使大鼠血清中的ACTH和CORT的浓度上升,至最高值后迅速下降;而血清中CK和ALT的浓度则随着拘束冷应激时间的增加而递增。拘束冷应激导致大鼠发生急性胃溃疡,应激2．5h时最严重,提示拘束冷应激大鼠模型的造模时间以2．5h为最佳。     

氯胺酮对脓毒症大鼠肾脏保护作用的研究

目的探讨氯胺酮对脓毒症大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法选健康雄性Wistar大鼠54只,随机分为三组：假手术组（SHAM）组、盲肠结扎加穿孔组（CLP）组及氯胺酮组（KT）组。SHAM组开腹后不做任何处理,其余各组行盲肠结扎穿孔术（CLP）。KT组于CLP前20min腹腔给药40mg/kg。各组在3h、6h和12h分别经心脏采血,检测尿素氮和肌酐的含量,并取肾脏行HE染色观察其病理组织学变化,用免疫组化方法检测热休克蛋白70（HSP70）的表达。结果与SHAM组比较,CLP组大鼠血清BUN含量在术后6h和12h显著升高（P〈0.01）,血清Cr在术后12h显著升高（P〈0.01）;与CLP组比较,KT组大鼠血清BUN较CLP组含量在6、12h时相点明显降低（P〈0.05）。血清Cr在12h明显降低（P〈0.05）。三组肾组织中HSP70均有表达,CLP组及KT组均明显高于SHAM组（P〈0.01）,而KT组明显高于CLP组（P〈0.05）。结论氯胺酮能抑制脓毒症大鼠血清BUN和Cr的增高,减轻肾组织损害,对脓毒症大鼠肾脏具有一定的保护,此作用可能与诱导HSP70表达增强有关。     

不同应激方式与时程对大鼠海马CA3区HSP70表达及血清皮质醇含量的影响

目的：探讨不同应激方式与时程对大鼠海马CA3区热休克蛋白70（HSP70）表达及血清皮质醇含量的影响.方法：采用慢性限制活动应激（CRS）作为可预知性应激动物模型,每天随机给予不同轻度应激刺激建立慢性不可预知性应激（CMS）动物模型,观察两组动物海马CA3区HSP70的表达及血清皮质醇含量.结果：CMS大鼠海马神经细胞开始出现损伤的时间较CRS晚,损伤程度较CRS轻.CRS较CMS大鼠海马CA3区HSP70表达逐渐增强,且与对照组比较有统计学差异（P＜0.01）.应激组大鼠血清皮质醇较对照组高,动态观察显示应激早期达到高峰.结论：CRS大鼠海马的损伤及HSP70的表达均较CMS明显.不同的应激方式下大鼠HSP70细胞保护效应较损伤效应有所延迟,提示应激前诱导HSP70表达可能会起到预防细胞死亡的作用.     

HSP70在大鼠内毒素血症肺损伤中的作用

目的探讨热休克蛋白70（HSP70）在内毒素血症大鼠肺损伤中的作用及可能机制。方法大鼠尾静脉注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）复制内毒素血症模型。雌性Wistar大鼠24只，随机分为4组：对照组（C组）；内毒素血症组（E组）；Gln提前干预组（G1组）；Gln延迟干预组（G2组）。所有的动物于注射LPS之后6h放血处死，测定肺组织HSP70的表达、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）的含量，并用光镜观察大鼠肺组织的病理变化。结果E组同C组相比，肺组织HSP70表达明显增多（P〈0．01），SOD活性明显降低（P〈0．01），MDA含量增高（P〈0．05）。与E组相比，G1，G2组肺组织HSP70表达增多（P〈0．05），SOD活性增高（P〈0．05），MDA含量明显降低（P〈0．05）。G1与G2在肺组织HSP70表达。SOD活性，MDA含量等方面比较均无显著性差异（P〉0．05）。结论增加HSP70的表达对内毒素血症大鼠肺损伤可能起保护作用，作用机制可能与增加肺组织HSP70，提高机体应激时抗氧化能力有关，尚不能认为Gln提前干预与Gln延迟干预之间有差异。需要作进一步研究。     

L-精氨酸对大鼠肾缺血再灌注损伤HSP70表达的影响

目的：探讨左旋精氨酸（L-arg）对大鼠肾缺血再灌注损伤（RIRI）HSP70表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠48只,随机分为6组：假手术（Sham）6 h、24 h组;缺血再灌模型（IR）6 h2、4 h组和L-精氨酸（L-arg）6 h2、4 h组。IR组和L-arg组采用夹闭双侧肾动、静脉45 min后松夹再灌的方法制备RIRI模型,L-arg组于夹闭前和再灌前15 min分别尾静脉注射L-arg 0.2 mL（100 mg/kg）,于再灌后6 h和24 h测定血清肌酐（Scr）、一氧化氮（NO）及尿NAG酶（UNAG）含量,观察肾组织形态学改变和肾皮质HSP70表达。结果：缺血再灌注后6 h和24 h,大鼠肾功能和肾小管上皮细胞明显受损,Scr和UNAG含量均明显高于假手术组（P〈0.01）,血清NO及肾皮质细胞HSP70表达明显增加。尾静脉注射L-arg可明显改善RIRI大鼠肾功能,减轻肾损伤,并明显增加血清NO及肾皮质细胞HSP70表达（P〈0.05）。结论：L-arg可通过增加体内NO水平,提高肾小管上皮细胞HSP70表达,对大鼠RIRI起到一定的保护作用。     

热应激预处理影响鼠背轴型皮瓣HSP70、HSF1表达的实验研究

目的探讨热应激预处理（HSP）对缺血皮瓣组织的保护作用及其与皮瓣中热休克蛋白70（HSP70）和热休克因子1（HSF1）的关系。方法将96只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为缺血组与实验组（HSP＋缺血组）。缺血组：皮瓣模型制备后,阻断皮瓣蒂部第1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h共6个时间点,每时间点后观测皮瓣存活面积、HSP70、HSF1的变化,并进行统计学分析;实验组（HSP＋缺血组）：先予以加热预处理,之后与缺血组相同。结果单纯缺血组皮瓣成活率下降率较实验组（HSP＋缺血组）明显,差异有显著性（P〈0.05）,热应激预处理各组皮瓣的HSP70、HSF1合成量与皮瓣存活率呈正相关（r=0.7577,P〈0.01）。结论热应激预处理能够改善皮瓣组织的存活率,HSP70、HSF1在热应激预处理改善皮瓣存活率的保护作用中发挥着重要的作用。     

加味七方胃痛颗粒对慢性萎缩性胃炎大鼠血清胃泌素含量及HSP70表达的影响

目的探讨加味七方胃痛颗粒对慢性萎缩性胃炎（CAG）模型大鼠血清胃泌素含量及胃组织热休克蛋白70（HSP70）表达的影响。方法采用致癌化学物MNNG复制CAG动物模型,给药后对各组大鼠测定胃酸、采用ELISA法检测血清胃泌素含量、S-P法检测HSP70的表达。结果加味七方胃痛颗粒大、中、小剂量组和胃复春组与模型组比较,血清胃泌素含量显著升高（P〈0.01）;加味七方胃痛颗粒大剂量组与胃复春组相比,HSP70蛋白表达增加（P〈0.05）。结论加味七方胃痛颗粒对CAG模型大鼠具有促进胃酸分泌,提高血清胃泌素含量及增强HSP70的表达的作用。     

精氨酸对热暴露小鼠肝脏HSP70表达的免疫组化研究

用免疫组织化学方法研究了热习服小鼠42℃热暴露50min恢复期0－24h肝脏热休克蛋白70（HSP70）表达的动态变化及L－精氨酸干预的热处理小鼠42℃热暴露50min后恢复期8h肝脏HSP70的表达。结果：（1）HSP70主要定位于肝脏胞质，细胞核中较少；（2）HSP70在热应激后8－12h达高峰；（3）精氨酸对热处理小鼠肝脏HSP70的表达有增强作用。     

炎调方对脓毒症大鼠肺热休克蛋白70和核因子-κB的调控作用

目的：探讨炎调方对脓毒症大鼠肺热休克蛋白70（HSP70）和核因子-κB（NF-κB）的调控作用。方法：将清洁级健康雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和炎调方组,采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型。用RT-qPCR法、SABC免疫组化方法、凝胶迁移电泳EMSA法测定大鼠肺组织HSP70 mRNA及蛋白表达、NF-κB活性,并用HE染色观察肺组织病理学改变。结果：炎调方组肺组织HSP70基因相对表达水平高于假手术组和模型组（P〈0.05）,HSP70蛋白表达量高于正常组、假手术组和模型组（P〈0.05）;正常组、假手术组、炎调方组大鼠肺组织NF-κB/P65相对灰度值均低于模型组（P〈0.01）;病理切片显示炎调方组肺组织损伤轻于模型组。结论：炎调方能上调肺HSP70表达,降低肺NF-κB活性,改善肺组织病理形态学改变,减轻脓毒症导致的肺组织损伤。     

急性低氧环境下热休克蛋白72在大鼠肾脏中的表达及意义

目的 探讨急性低氧环境下大鼠肾脏热休克蛋白72（heat shock protein,HSP72）的表达.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为急性低氧组：12 h、24 h、48 h、72 h、1 w组,同时设立对照组（西宁地区）.将五组大鼠放入低压氧舱建立急性低氧模型,分别在不同时间段取大鼠肾脏组织用蛋白免疫印迹（Western Blotting）法检测HSP72表达水平;收集大鼠尿液,用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测尿微量白蛋白及尿肌酐浓度.结果 大鼠急性缺氧后,其肾组织中HSP72蛋白的表达随着缺氧时间的延长逐渐升高,72 h达最高水平（2.68±0.08）,到1 w时其表达水平有所下降（1.59±0.17）,各组与对照组（0.19±0.12）比较差异均有统计学意义（P＜0.01）;大鼠尿微量白蛋白与尿肌酐比值从48 h开始升高,48 h组（235.40±20.60）与对照组（169.63±17.45）比较差异有统计学意义（P＜0.05）,72 h（378.12±61.31）、1 w组（504.55±48.77）与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 急性低氧可以引起大鼠尿微量白蛋白排泄量增加,并随着缺氧时间的延长而增加,同时伴有肾脏HSP72表达的增加,但二者表达呈现不一致性.提示缺氧是引起肾脏损伤的重要原因,虽然HSP72升高是机体保护性应激反应,但在急性缺氧时,并不能充分缓解缺氧引起的脏器损伤,其保护作用可能具有一定的滞后性.     

低分子量肝素对SAP大鼠肾组织保护的实验研究

目的观察低分子量肝素(LMWH)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肾组织热休克蛋白70(HSP70)表达、肾组织的光镜下形态学的改变及血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平的变化,探讨LMWH对肾组织保护的作用机制。方法选用Wistar大鼠随机分为3组,假手术组(A组)、SAP模型组(B组)、SAP低分子量肝素治疗组(C组),术后24h和72h分别取肾组织,HE染色检测肾组织形态学变化,免疫组化检测肾组织HSP70的表达,并测定大鼠血清BUN和Cr。所有实验数据均采用均数±标准差(x±s)表示,统计学处理用F检验。结果肾组织HSP 70表达:各组肾组织HSP70表达在术后24h比72h多,统计学处理有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。A组HSP70表达较少,B组HSP70表达最多,C组HSP70表达明显下调,与B组比较有显著性差异(P<0.01)。光镜下可见:A组大鼠双侧肾脏无明显病理改变;B组肾小管上皮细胞坏死脱落,肾小管水肿;C组肾小管水肿程度较B组明显减轻,未见肾小管上皮细胞坏死,但有红细胞渗出。血清Cr和BUN含量:C组与B组比较,有显著性差异(P<0.01,P<0.015)。结论 LMWH通过下调肾组织内HSP70表达,减轻SAP大鼠肾的损伤,从而起到保护肾组织的作用。     

急性寒冷应激对大鼠血糖及血清激素水平的影响

目的：观察急性寒冷暴露对大鼠体温、血糖水平、激素水平的影响．方法：采用-15℃,3h低温暴露建立寒冷应激动物模型,分别使用肛温计和血糖仪测定直肠温度和血糖水平,荧光分光光度法和放射免疫分析法测定血清中激素水平．结果：冷暴露后,大鼠直肠温度降低2。80％,血糖水平降低1．09mmol／L,且30min后均未恢复正常水平（P〈0．01）;肾上腺皮质酮,促肾上腺皮质激素,5-羟色胺水平显著增高,而NE水平则显著降低（P〈0．01）,DA水平无显著变化．结论：寒冷暴露可以影响机体的体温调节和能量代谢,并可以引起下丘脑-垂体-肾上腺轴的激活,从而使血液中多种激素水平显著改变．     

不同缺血预处理方案对大鼠肾脏缺血再灌注损伤组织HSP70表达的研究

目的探讨单、多循环两种缺血预处理方案对大鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的保护作用及对HSP70表达的影响。方法60只雄性SD大鼠切除右肾、分离出左肾动脉后随机均分为四组。1）缺血再灌注（I/R）组;2）单循环缺血预处理（SCP）组;3）多循环缺血预处理（MCP）组;4）假手术（Sham）组。24 h取材行生化、常规病理、免疫组化检查及肾小管损伤评分。结果假手术组未见明显改变;肌酐（Scr）水平、肾小管损伤评分单循环缺血预处理组多循环缺血预处理组低于缺血再灌注组,差异显著;多循环缺血预处理组低于单循环缺血预处理组,差异显著（P〈0.01）。HSP70表达水平多循环缺血预处理组最高。结论缺血预处理可从功能和组织学上减轻肾脏的急性缺血再灌注损伤,多循环预处理方案诱导HSP70表达及保护作用在24 h内强于单循环的方案。     

热休克蛋白在实验性大鼠脑死亡肾中的表达

目的研究热休克蛋白(HO-1、HSP27和HSP70)在脑死亡大鼠肾中的表达。方法将气囊导管插入F344雄鼠大脑硬膜外慢慢充气,诱导脑死亡,未处理组做对照组,4 h后处死大鼠,采用RT-PCR、蛋白印迹和免疫组化检测肾脏HO-1、HSP27和HSP70的表达。结果RT-PCR显示HO-1(P<0.01)和HSP70(P<0.01)基因编码表达增强。蛋白印迹也显示HO-1蛋白水平增加(P<0.01),但HSP70蛋白表达无明显变化。免疫组化显示HO-1蛋白在肾皮质表达增强。HSP27在脑死亡供体肾的表达无变化。结论脑死亡引起的肾应激可诱导细胞保护基因HO-1和HSP70的表达。     

梗阻性黄疸大鼠肾脏缺血再灌注损伤中热休克蛋白70的表达

目的 探讨梗阻性黄疸大鼠在短暂性肾缺血再灌注过程中肾功能改变与脂质过氧化反应及大鼠肾脏热休克蛋白70(Heat-shock protein 70，HSP70)表达之间的关系。方法 实验大鼠分为正常对照组(S组)、正常肾缺血再灌沣组(SRI组)、梗阻性黄疸组(J组)、梗阻性黄疸肾缺血再灌注组(JRI组)。在胆道梗阻1周后行双侧肾动脉夹闭10min后放开，观察再灌注后0、4、12、24h等不同时相点观察肾功能的变化，采用免疫组织化学SP法观察大鼠肾脏HSP70的表达。结果 梗阻性黄疸肾缺血冉灌注组内生肌酐清除率随冉灌注时间延长呈持续性下降，梗阻性黄疸组及梗阻性黄疸肾缺血再灌注组肾组织丙二醛明显升高而超氧化物歧化酶含量下降。JHI组大鼠肾脏HSP70表达主要分布于肾近曲小管上皮细胞胞浆中，其表达量以再灌注后4h最多，12h次之，24h有所减少。结论 梗阻性黄疸状态下大鼠肾脏对缺血再灌注损伤的敏感性明显升高，缺血再灌注损伤可能与梗阻性黄疸术后急性肾功能衰竭的发生有关，脂质过氧化反应参与了这一过程。HSP70的表达是机体对梗阻性黄祖肾缺血再灌注损伤的一种保护性反应。     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70表达及细胞凋亡的影响

[目的]观察亚低温对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,探讨亚低温对脑神经细胞保护作用的机制。[方法]将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。应用大脑中动脉线栓法(MCAO)建立大鼠局灶脑缺血再灌注模型,于缺血2 h再灌注,再灌注后3、6、12、24、72 h和7 d处死。其中亚低温组大鼠于缺血后30 min实施病灶侧脑亚低温并持续4 h。采用HE染色观察神经细胞形态学改变,免疫组化法检测脑组织HSP70表达,TUNEL法检测凋亡细胞。[结果]正常组及假手术组均未见明显病理改变;常温缺血组梗死灶明显,大量神经元坏死消失;亚低温缺血组未见明显梗死灶,但可见神经元固缩。正常组及假手术组未见或偶见HSP70阳性细胞;常温缺血组HSP70阳性细胞较多;与常温缺血组相比亚低温缺血组在相应时间点均明显减少(P<0.05)。常温缺血组TUNEL阳性细胞数随再灌注时间的延长而逐渐增多,至72 h达高峰;与常温缺血组相比,亚低温缺血组各时间点均明显减少(P<0.05)。[结论]亚低温对大鼠缺血再灌注损伤脑有保护作用,通过降低HSP70的表达和减少细胞凋亡可能是其保护机制之一。     

复健片对大鼠脑梗死后不同时间点Nogo-A表达的影响

目的观察束缚应激致亚健康状态大鼠模型的行为学变化以及血清中CORT的含量,脑组织中TChE活性和5-HT含量变化,探讨中药的干预作用及其机制。方法取雄性SD大鼠40只,体重320～360g,随机分成4组,即正常对照组、模型对照组、抗衰老片组、六味地黄丸组,每组10只,采用束缚方法限制活动模拟人类心理应激因素,建立大鼠亚健康状态模型,在造模同时,用抗衰老片、六味地黄丸等中药进行干预,测定亚健康状态大鼠的耐力,学习记忆力及血清中CORT的含量,脑组织TChE活性和5-HT含量。结果与正常对照组比,模型对照组大鼠的挣扎次数明显减少和静止时间明显延长俨〈0．01）,游泳路程和搜索平台的潜伏期明显延长（P〈0．05）;主动回避的潜伏期、电击次数和电击时间均有所延长,但差异不显著（P〉0．05）：血清cORT显著升高p〈0．05）,脑组织TChE活性和5-HT含量明显升高（P〈0．05）。而给予抗衰老片和六味地黄丸后,大鼠的挣扎次数明显增多,静止时间呈缩短趋势,其中抗衰老片组的挣扎次数差异显著（P〈0．01）;大鼠游泳路程显著缩短（P〈0．05）,且搜索平台的潜伏期有减少趋势（P〉0．05）,主动回避的潜伏期、电击次数和电击时间变化不明显。血清CORT含量、脑组织中TChE活性和5-HT含量显著降低俨〈0．05,P〈0．01）。结论束缚应激致亚健康状态大鼠的的耐力和学习记忆力下降,血清CORT含量、脑组织中TChE活性和5-HT含量升高,而抗衰老片、六味地黄丸等中药可有效改善心理应激致亚健康状态大鼠的耐力及学习记忆能力,其机制可能与调节激素含量及神经递质功能有关。