蒺藜中水溶性多糖的研究——杂多糖H的纯化与结构初步确定

从蒺藜(Tribulus terristris L)茎和叶中提出醇溶皂甙后,再提取水溶性粗多糖,其单糖组成及其摩尔比为Ara.,Rha.,Xyl.,GalA.,Gal.,Glc.,Man.,6.0:2.1:1:3.6:3.4:7.7:2.9.粗多糖经分级与纯化得一均一级分H,其单糖组成及其摩尔比为Ara.,Rha,Xyl,GalA,Gal,Glc,1.6:2.4:0.1:3.5:1.3:1。H为酸性杂多糖,分子量约为10万。经果胶酶酶解、β-D-半乳糖苷酶酶解,高碘酸氧化、Smith降解、部分酸水解、甲基化、与GC及GC-MS分析等,表明H为α-D-GalA(1→4)与L-Rha(1→2)可能交替连接构成的主链,一些Rha.上带有分枝。     

蒺藜中水溶性多糖的研究——杂多糖H的纯化与结构初步确定

从蒺藜(Tribulus terristris L)茎和叶中提出醇溶皂甙后,再提取水溶性粗多糖,其单糖组成及其摩尔比为Ara.,Rha.,Xyl.,GalA.,Gal.,Glc.,Man.,6.0:2.1:1:3.6:3.4:7.7:2.9.粗多糖经分级与纯化得一均一级分H,其单糖组成及其摩尔比为Ara.,Rha,Xyl,GalA,Gal,Glc,1.6:2.4:0.1:3.5:1.3:1。H为酸性杂多糖,分子量约为10万。经果胶酶酶解、β-D-半乳糖苷酶酶解,高碘酸氧化、Smith降解、部分酸水解、甲基化、与GC及GC-MS分析等,表明H为α-D-GalA(1→4)与L-Rha(1→2)可能交替连接构成的主链,一些Rha.上带有分枝。     

柱前衍生化HPLC分析蒲公英多糖的单糖组成

目的 合理优化衍生方法测定蒲公英多糖中单糖的组成及摩尔比。方法 采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,用反相高效液相色谱法进行测定。色谱条件为：ZORBAX-C₁₈柱;流动相：0.1 mol·L^-1的磷酸盐缓冲液(pH 6.7)-乙腈(83∶17);流速：1 mL·min^-1;检测波长：245 nm;进样量：20 μL;柱温：室温。结果 蒲公英多糖由D-鼠李糖、葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖和D-阿拉伯糖组成,以不同方法提取的各单糖含量的摩尔比为：水提取法,Rha∶Glc∶Gal∶ Ara=0.088∶0.500∶0.190∶0.340;超声提取法,Rha∶Glc∶Gal∶Ara=0.050∶0.350∶0.080∶0.320;酶提取法,Rha∶Glc∶ Gal∶Ara=0.270∶0.630∶0.330∶0.460;超声协提取同酶法,Rha∶Glc∶Gal∶Ara =0.078∶0.550∶0.130∶0.170。结论 改进后的衍生化方法和等度洗脱的色谱方法具有操作简单、快速、重复性好等特点,可用于蒲公英多糖中单糖组成和摩尔比的测定。     

柱前衍生化HPLC分析蒲公英多糖的单糖组成

目的合理优化衍生方法测定蒲公英多糖中单糖的组成及摩尔比。方法采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生,用反相高效液相色谱法进行测定。色谱条件为：ZORBAX-C18柱;流动相：0.1mol·L^-1的磷酸盐缓冲液（pH6.7）-乙腈（83∶17）;流速：1mL·min^-1;检测波长：245nm;进样量：20μL;柱温：室温。结果蒲公英多糖由D-鼠李糖、葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖和D-阿拉伯糖组成,以不同方法提取的各单糖含量的摩尔比为：水提取法,Rha∶Glc∶Gal∶Ara=0.088∶0.500∶0.190∶0.340;超声提取法,Rha∶Glc∶Gal∶Ara=0.050∶0.350∶0.080∶0.320;酶提取法,Rha∶Glc∶Gal∶Ara=0.270∶0.630∶0.330∶0.460;超声协提取同酶法,Rha∶Glc∶Gal∶Ara=0.078∶0.550∶0.130∶0.170。结论改进后的衍生化方法和等度洗脱的色谱方法具有操作简单、快速、重复性好等特点,可用于蒲公英多糖中单糖组成和摩尔比的测定。     

半枝莲多糖B3-PS2分离纯化及抗补体活性研究

本文提取半枝莲多糖,分别经DEAE-cellulose、Sephacryl S-300柱层析分离纯化后得到均一的B3-PS2组分,并对该组分进行了抗补体活性研究。研究结果表明B3-PS2组分分子质量为1 100 kD,主要由Glc、Gal和Ara三种单糖组成,糖残基摩尔比为2.7∶2.7∶1.0,还含有少量的Man、Rha、Fuc和Xyl。B3-PS2抑制补体活性的经典途径CH₅₀为(0.23 ± 0.03) mg·mL⁻¹,抗补体作用靶点为补体C1r、C1s、C3、C4组分。半枝莲多糖B3-PS2组分体外抗补体活性接近于阳性对照肝素,表明活性较好,这显示了半枝莲多糖治疗补体过度激活相关疾病的潜在价值。     

离子色谱测定多糖的单糖组成的方法学研究及其应用

本文旨在建立一种采用高效阴离子色谱分离和定量分析11种常见单糖的方法。采用Dionex ICS-5000+离子色谱仪,以Carbo PACTMPA 10(2.0 mm×250 mm)阴离子交换柱为分离柱,脉冲安培检测器检测,200 mmol/L Na OH和200 mmol/L的CH3COONa梯度洗脱,建立了可同时检测11种常见单糖的离子色谱-脉冲安培法(HPAEC-PAD),可实现核糖(Rib)、岩藻糖(Fuc)、鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)、木糖(Xyl)、果糖(Fruc)、半乳糖醛酸(Gal A)、葡萄糖醛酸(Glc A)的定性定量分析。该方法在1~50 mg/L范围内具有良好的线性(R2=0.99100~0.99978),精密度RSD值小于3.52%,回收率在97.33%~101.82%,重复性RSD值小于3.04%。采用该方法对牛蒡精制多糖ALP-1的单糖组成进行了测定,结果表明牛蒡多糖ALP-1由岩藻糖(Fuc)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖(Glc)和果糖(Fruc)组成,摩尔比为7.69∶1.00∶34.62∶3.08。对牛蒡多糖单糖组成的成功测定说明该方法成功建立,为常见单糖的定性定量分析及多糖的单糖组成分析提供了快速可靠的方法。     

太白茶多糖的组分研究

经气相色谱鉴定，太白茶多糖由鼠李糖（Rha）、阿拉伯糖（Ara）、木糖（Xyl）、甘露糖（Man）、葡萄糖（Glc）聚合而成，其克分子比为0．77：1．00：0．54：3．39：17．03。     

毛细管气相色谱法测定果胶的单糖组成

目的使用毛细管气相色谱法测定果胶样品的单糖组成及摩尔比。方法采用酸完全水解法水解果胶,糖液乙酰化衍生后,用毛细管气相色谱分析其单糖的组成及摩尔比。结果果胶中鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、木糖(Xyl)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)和半乳糖醛酸(GalA)的摩尔比为7.31∶3.68∶1∶3.09∶21.48∶131.54。结论果胶的单糖组成以半乳糖醛酸和半乳糖为主,同时含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖等单糖。     

基于分子量分布的黄芪多糖抗炎活性组分筛选及代谢组学调控机制研究

黄芪多糖分子量分布广,常规水提醇沉制备的多糖为大分子混合物,虽有研究证明黄芪多糖具有双向免疫调节功能,然而免疫抑制或抗炎活性组分的多糖分子量分布及调控机制并不明确。因此,课题组通过水提醇沉法制备黄芪总多糖,采用凝胶色谱法对其测定分子量分布,结合超滤膜截留法分离制备不同分子量多糖组分,通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7过度炎症模型进行筛选,并采用LC-MS/MS代谢组学技术研究其调控机制。结果表明,黄芪多糖主要由APS-Ⅰ(大于2 000 kDa)和APS-Ⅱ(10 kDa)组成; APS-Ⅰ由Man、Rha、Gal A、Glu、Gal和Ara 6种单糖组成,各单糖组成比例约为0.54∶0.26∶12.24∶17.24∶8.46∶1; APS-Ⅱ由Rha、Gal A、Glu、Gal和Ara 5种单糖组成,各单糖组成比例约为0.26∶0.14∶24.04∶0.62∶1。APS-Ⅰ和APS-Ⅱ在0～100μg·mL^-1对RAW 264.7无毒性;与模型组相比, APS-Ⅰ在0～100μg·mL^-1...     

扁玉螺多糖的提取、分离和结构分析

目的从扁玉螺(Neverita didyma)中提取和分离纯化多糖,并对其基本理化性质和结构组成进行分析。方法依次采用水提和碱提方法从扁玉螺中提取粗多糖,采用DEAE Sepharose FF阴离子交换和Sephacryl S-300凝胶柱层析对粗多糖进行分离纯化,并对其总糖、蛋白、氨基糖、糖醛酸和硫酸根含量,相对分子质量和单糖组成进行分析。对多糖纯化组分采用甲基化、气质联用(GC-MS)、红外光谱(IR)、电喷雾质谱(ESI-MS)和核磁共振波谱(NMR)对其化学结构进行分析。结果扁玉螺水提粗多糖(BYL-S)中不含有糖醛酸和硫酸基,其单糖组成只含Glc,进一步分离得到了4种水溶性多糖组分。碱提粗多糖(BYL-J)单糖组成相对复杂,除含有Glc外,还含有Man、GlcN、GalN、Gal和Fuc,其摩尔比为Glc∶Man∶GlcN∶GalN∶Gal∶Fuc=78.9∶1.7∶3.4∶2.2∶5.2∶5.6,进一步分离得到了3种多糖组分。对水提多糖纯化组分BYL-S2的结构分析表明其是以α-(1→4)为主链,含有少量β-(1→3,4)和β-(1→3)分支的D-吡喃型葡聚糖。结论从扁玉螺中提取分离得到了7种多糖组分,并确定了一种水溶性葡聚糖的结构,为扁玉螺多糖结构和活性的深入研究提供了基础。     

盐藻多糖单糖组成分析的四种色谱方法比较

目的 通过对几种单糖组成分析的色谱方法进行比较,选择一种准确有效的方法测定盐藻多糖(PDS3)的单糖组成.方法 分别采用薄层色谱(TLC)法、糖腈乙酸酯衍生气相色谱(AA-GC)法、离子排阻液相色谱(IEC)法及1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生高效液相色谱(PMP-HPLC)法测定PDS3的单糖组成.结果 TLC法和IEC法无需衍生化处理,操作简便、快捷,但各单糖间的分离效果较差,只适合于单糖组成较为简单的多糖样品的定性分析.AA-GC法测定单糖组成灵敏度高,各单糖具有良好的分离度,并可进行定量分析,与质谱联用还在PDS3中新发现了一种2-甲氧基戊糖,但AA-GC法不适合糖醛酸和氨基糖的分析;PMP-HPLC法不仅灵敏度高,分离效果好,而且还可同时检测PDS3中11种中性、酸性和碱性单糖,该法测得PDS3中各单糖的摩尔比为:Gal:Man:Ara:Glc:Rha:Xyl:GlcUA:GalUA:GlcNAc:GlcN=19.3:10.6:6.9:1.6:1.1:1.0:12.9:6.4:4.1:1.6.另外,本实验还确定了PMP-HPLC法的最适衍生条件为:反应时间60min,反应温度70℃,NaOH与单糖的摩尔比为6:1,衍生试荆PMP与单糖的摩尔比为12:1.结论 PMP-HPLC法较其它色谱方法更适合于PDS3这类复杂样品的单糖组成分析.     

HPLC分析大蒜多糖中的单糖

目的建立一种反相高效液相色谱法（RP—HPLC）分析大蒜多糖中的单糖组成及摩尔比。方法大蒜多糖样品经2mol·L^-1硫酸降解为单糖后,经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化,采用Shimadzu VP—ODS柱（150mm×4．6mm,5μm）分离,以乙腈-醋酸铵缓冲溶液（取醋酸铵7．708g加水溶解并稀释至1000mL,用醋酸调pH5．5（22：78）为流动相,流速为0．8mL．min^-1,在245nm处检测单糖的衍生化产物。结果大蒜多糖中甘露糖（Man）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）半乳糖醛酸（GalUA）、葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、阿拉伯糖（Arab）7种单糖的摩尔比为4．31：4．23：4．19：9．13：27．4：4．99：3．81。结论本方法灵敏度高,结果准确可靠,可用于大蒜多糖的单糖组成测定及质量控制。     

HPLC分析大蒜多糖中的单糖

目的 建立一种反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析大蒜多糖中的单糖组成及摩尔比。方法 大蒜多糖样品经2 mol·L^-1硫酸降解为单糖后,经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮( PMP)衍生化,采用Shimadzu VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)分离,以乙腈-醋酸铵缓冲溶液(取醋酸铵7.708 g加水溶解并稀释至1 000 mL,用醋酸调pH 5.5 (22∶78)为流动相,流速为0.8 mL·min^-1,在245 nm处检测单糖的衍生化产物。结果 大蒜多糖中甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖醛酸(GlcUA)半乳糖醛酸(GalUA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Arab)7种单糖的摩尔比为4.31∶4.23∶4.19∶9.13∶27.4∶4.99∶3.81。结论 本方法灵敏度高,结果准确可靠,可用于大蒜多糖的单糖组成测定及质量控制。     

三斑海马多糖的单糖组成测定影响因素考察D

目的 研究不同因素对三斑海马多糖(HTP)降解的影响,探求适合其单糖组成测定的降解条件。方法 通过设计正交实验,采用三氟乙酸(TFA)对HTP进行降解,结合1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱进行单糖组成分析,比较各实验的降解情况。结果 HTP中主要含有Man、GlcN、Gal和少量的GalN、Glc、GlcA、Ara、Fuc共8种单糖。在考察条件范围内,温度和时间是影响单糖组成分析的主要因素,酸浓度是次要因素。HTP中各单糖的最适降解条件是：氨基糖GlcN和GalN为120 ℃,6 h,4 mol/L TFA;中性糖Man、Glc和Gal为110 ℃,4 h,3 mol/LTFA;糖醛酸GlcA及Ara、Fuc为100 ℃,2 h,3 mol/L TFA。通过对10种单糖标准品的降解也发现氨基糖(GlcN和GalN)较稳定,糖醛酸(GlcA和GalA)稳定性差。结论 HTP中不同结构类型的单糖对降解条件的敏感度不同：糖醛酸易降解释放,但也易被破坏;氨基糖较难降解,但降解后较为稳定;中性糖的降解难易和稳定性介于两者之间。采用同一条件降解不能准确地测定HTP的单糖组成,需要针对不同结构类型单糖的性质采用不同的条件进行降解。     

一种水溶性茶多糖的单糖组成及糖醛酸含量的测定

目的 研究一种水溶性茶多糖中的中性糖组成及其对糖醛酸含量测定的影响,为准确测定茶多糖中糖醛酸含量提供参考依据.方法 采用气相色谱法分析了10种茶多糖样品单糖组成,考察了其主要的三种单糖组分组成的混合中性糖(1∶1∶0.5,摩尔比)对硫酸咔唑法、间羟联苯法两种方法 测定糖醛酸含量的影响.结果 10种水溶性茶多糖样品的主要单糖组成为阿拉伯糖(Ara)、半乳糖(Gal)以及葡萄糖(Glc).结论 在测定茶多糖中糖醛酸含量时,这3种中性糖对间羟联苯法的干扰远小于硫酸咔唑法.     

白木通多糖的研究

用碱液从白木通(Akebia trifoliate)茎中提取所得的粗多糖ATB经DEAE-Celulose及SephadexG-200柱层析后得到一多糖纯品ATBB 2,其分子量为2.3×10⁵。糖组分分析ATBB-2中各糖残基的摩尔比为Rha∶Ara∶Xyl∶Gal∶Glc∶GalA=1.22∶1.00∶1.10∶0.85∶0.24∶0.82。经甲基化,高碘酸氧化,Smith降解,部分酸水解,¹H和¹³CNMR谱的分析揭示ATBB-2是一个结构复杂的杂多糖。     

鹰嘴豆多糖的分离纯化及其抗氧化作用研究

目的对鹰嘴豆果实多糖进行分离纯化得到均一多糖,对分离得到的均一多糖的抗氧化活性进行研究。方法利用热水对鹰嘴豆多糖进行提取,乙醇沉淀得到粗多糖;粗多糖经DEAE-Cellulose 52和Sephacryl S-300柱层析纯化,得到均一多糖CA-1b;高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)验证CA-1b纯度和相对分子质量;酸水解、GC-MS对CA-1b进行糖组分分析;DPPH·清除评价均一多糖的体外抗氧化活性。结果鹰嘴豆果实中分离得到的多糖CA-1b为均一多糖,相对分子质量为1.33×106 Da,由阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)组成,其摩尔比为2.2∶3.1∶6.2∶1.0。DPPH·清除实验表明,CA-1b具有良好的抗氧化活性,且呈现一定的量效关系,半数清除质量浓度IC50为18.2μg·mL-1。结论研究结果可为鹰嘴豆的深加工和进一步研究开发奠定理论基础。     

红景天多糖的组成及摩尔比分析

用气－质联用鉴定红景天多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和一有待确证的组份组成。红景天多糖组成单糖的摩尔比为鼠李糖：阿拉伯糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖＝1．15：2．60：0．44：4．71：1．00。     

枸杞子中免疫活性成分的分离、纯化及物理化学性质的研究

从宁夏枸杞子提取得到的糖缀合物LBP经DEAE-celulose柱色谱得到5个组分,其中Lbp3,Lbp4和Lbp5分别经CM-SephadexC-50,SephadexG-100,SephadexG-50柱色谱得到均一组分LbGp3,LbGp4和LbGp5。N含量:LbGp30.83%,LbGp41.72%,LbGp59.58%。总糖含量:LbGp393.6%,LbGp485.6%,LbGp58.6%。分子量:LbGp39.25×10⁴,LbGp4 21.48×10⁴,LbGp52.37×10⁴。糖组成为:LbGp3:Ara∶Glc=1∶1,LbGp4:Ara∶Gal∶Rha∶Glc=1.5∶2.5∶0.43∶0.23,LbGp5:Rha∶Ara∶Xyl∶Gal∶Man∶Glc=0.33∶0.52∶0.42∶0.94∶0.85∶1。初步分析表明LbGp4是O-连接的糖蛋白。     

一种水溶性茶多糖的单糖组成及糖醛酸含量的测定

目的研究一种水溶性茶多糖中的中性糖组成及其对糖醛酸含量测定的影响,为准确测定茶多糖中糖醛酸含量提供参考依据。方法采用气相色谱法分析了10种茶多糖样品单糖组成,考察了其主要的三种单糖组分组成的混合中性糖（1∶1∶0.5,摩尔比）对硫酸咔唑法、间羟联苯法两种方法测定糖醛酸含量的影响。结果10种水溶性茶多糖样品的主要单糖组成为阿拉伯糖（Ara）、半乳糖（Gal）以及葡萄糖（Glc）。结论在测定茶多糖中糖醛酸含量时,这3种中性糖对间羟联苯法的干扰远小于硫酸咔唑法。