橙皮苷诱导人非小细胞肺癌A549/DDP细胞凋亡的实验研究

目的 观察橙皮苷对人非小细胞肺癌A549/DDP细胞凋亡的影响.方法 培养耐顺铂的人非小细胞肺癌A549/DDP细胞,分别用6,12,24,48和96 mg/L橙皮苷作用A549/DDP细胞24 h,在荧光显微镜下观察细胞形态变化,采用流式细胞计量仪检测细胞凋亡情况.结果 经不同浓度的橙皮苷作用A549/DDP细胞24h后,镜下见A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染,荧光成团块分布;流式细胞计量仪检测结果显示,6mg/L橙皮苷即可促使A549/DDP细胞出现早期凋亡,且凋亡率随橙皮苷剂量增大而逐渐增加,呈现出明显的剂量依赖关系(P＜0.05).结论 橙皮苷可以诱导A549/DDP细胞凋亡.     

半枝莲提取物对人肺癌A549细胞的凋亡作用及其对凋亡相关基因表达的影响

目的:了解半枝莲提取物对人肺癌A549细胞的凋亡作用及其对凋亡相关基因表达的影响,探讨半枝莲提取物的抗肺癌作用及其分子生物学作用机制。方法:采用70%乙醇水溶液制备半枝莲提取物;实验组的半枝莲提取物浓度为3mg/L、6mg/L、12mg/L,对照组不加药物。采用MTT法测定药物对细胞生长的抑制率;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用RT-PCR法测定细胞凋亡相关基因Survivin、Caspase-3和内对照β-actin的表达水平。结果:3mg/L、6mg/L、12mg/L浓度实验组的OD值均低于对照组;实验组的抑制率分别为(23.53±5.84)%、(39.71±6.77)%和(66.18±8.45)%。对照组3mg/L、6mg/L、12mg/L浓度实验组的细胞凋亡率分别是(3.76±0.82)%、(16.61±3.19)%、(21.34±4.52)%、(35.19±5.80)%;3mg/L、6mg/L、12mg/L浓度实验组的细胞凋亡率均高于对照组。3mg/L、6mg/L、12mg/L浓度实验组的Survivin/β-actin均低于对照组;3mg/L、6mg/L、12mg/L浓度实验组的Caspase-3/β-actin均高于对照组。结论:半枝莲提取物可通过诱导细胞凋亡作用抑制人肺癌A549细胞的生长,其分子机制为下调Survivin的表达水平和上调Caspase-3的表达水平。     

灯盏花素对非小细胞肺癌A549细胞的作用及机制研究

目的:探讨灯盏花素(BVP)对非小细胞肺癌A549细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法:将非小细胞肺癌A549细胞分为对照组、BVP低剂量组(20 μmol/L)、BVP中剂量组(40 μmol/L)、BVP高剂量组(80 μmol/L),使用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞12、24、48 h细胞存活率,使用AnnexinV-FITC /PI双染法检测各组细胞24 h细胞凋亡情况,使用蛋白印记法检测各组细胞细胞周期、凋亡相关蛋白表达。结果:BVP低、中、高剂量组A549细胞12、24、48 h时的细胞存活率依次呈降低趋势(P<0.05),作用相同时间时,BVP低、中、高剂量组A549细胞存活率均明显低于对照组(P<0.05),存在剂量效应(P<0.05); BVP低、中、高剂量组24 h细胞凋亡率和Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达均明显低于对照组(P<0.05),而p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),存在剂量效应。结论:BVP可降低非小细胞肺癌A549细胞存活率和促进细胞凋亡,其机制可能与调节细胞增殖、凋亡相关蛋白表达有关。     

丹参水提液对肺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的:探讨不同浓度的丹参水提液对体外培养的人肺癌细胞系A549细胞增殖及凋亡的影响。方法:不同浓度的丹参水提液作用于人肺癌细胞A549细胞株24,48,72h后,MTT法观察药物对肺癌A549细胞生长的抑制效应;作用于细胞48h后倒置显微镜观察细胞形态学的改变;应用AO/EB荧光染色法观察不同浓度丹参水提液作用细胞48h后对细胞凋亡的影响;AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测经药物作用24h后A549细胞凋亡情况。结果:丹参水提液可剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖,抑制增殖作用以48h效果最佳;通过倒置显微镜可观察到细胞的形态学改变;细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞,表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征性的形态学改变;流式细胞仪检测结果显示丹参水提液可诱导细胞凋亡。结论:丹参水提液可对人肺癌细胞系A549细胞具有显著的体外增殖抑制作用,其主要作用可能与诱导细胞凋亡有关。     

白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas／FasL基因表达的影响

目的探讨白英提取液（STE）对人肺癌A549细胞凋亡及fas／fasL基因表达的影响。方法体外培养肺癌A549细胞，以0（正常对照组），10，20和40mg／ml STE处理A549细胞48h，并以25mg／L顺铂（DDP）作为阳性对照、采用MTT法检测细胞增殖抑制率，TUNEL法检测凋亡率，半定量RT—PCR检测fas和fasLmRNA表达。结果与正常对照组比较，STE各浓度组细胞增殖抑制率显著上升（P〈0．01），细胞凋亡率明显升高（P〈0．01），基因fasmRNA表达显著上升（P〈0．05或P〈0．01），而fasLmRNA表达明显下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论STE通过上调fas基因和下调fasL基因表达，诱导细胞凋亡，从而抑制A549细胞增殖。     

小白菊内酯对人肺癌A-549细胞周期变化和凋亡通路的影响

目的:研究小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用及其机制,为研发新型抗肿瘤中药奠定坚实的基础。方法:应用MTT法测定小白菊内酯对肺癌细胞的毒性作用和抑制增殖作用;应用倒置显微镜、Annexin V-FITC/碘化丙锭(PI)染色荧光显微镜观察药物作用前后人肺癌A-549细胞的形态学变化;应用活性氧(ROS)检测药物作用后细胞内活性氧的水平,以及活性氧含量与细胞凋亡之间的关系;应用免疫细胞化学技术检测药物作用前后蛋白阳性表达变化的情况并进一步探讨小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株抑制增殖和诱导凋亡的作用机制。结果:(1)MTT法检测结果显示:小白菊内酯在不同浓度(5mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、55 mg/L、60 mg/L、65 mg/L)对人肺癌A-549细胞有不同程度的生长抑制作用,并呈现出浓度和时间梯度依赖性,当药物终浓度为55 mg/L作用时间为48h时,对A-549细胞的抑制率为51.02%。(2)Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜观察发现实验组细胞可见大量绿色荧光细胞和红色凋亡细胞。(3)活性氧检测发现:实验组细胞内活性氧的水平出现明显升高。(4)免疫细胞化学检测法结果显示对照组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax分别为10.07%、11.42%、14.09%、9.75%和11.87%,加入小白菊内酯后(实验组)细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax蛋白的表达为89.24%、85.75%、84.46%、85.14%和84.09%,与对照组相比明显增加,有显著差异。结论:小白菊内酯作用于人肺癌A-549细胞株后,诱导其出现细胞凋亡的改变,它通过死亡受体通路和线粒体通路来完成诱导凋亡的机制,小白菊内酯作用后活性氧水平的增加可能参与诱导细胞凋亡的机制。     

花椒抗肺癌A549细胞作用及其机制的研究

目的：研究花椒挥发油抗肺癌A549细胞作用及其可能的机制。方法：花椒挥发油按不同时间（24h、48h、72h）及不同浓度（0.5～8mg/ml）分别处理A549细胞,MTS法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期。结果：4mg/ml花椒挥发油处理A549细胞72h可显著地抑制A549细胞增殖,1mg/ml花椒挥发油处理A549细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现。结论：花椒挥发油可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

重组TRAIL诱导肺腺癌细胞系细胞凋亡的实验研究

 目的研究重组可溶性TRAIL作用于人肺癌系A549细胞培养物后,细胞凋亡的形态变化和凋亡率测定。方法MTT比色法测定重组TRAIL对肺腺癌A549细胞的生长抑制率。TRAIL处理前后细胞核、质的形态学变化。经不同浓度重组TRAIL处理后A549细胞的双色荧光变化。定量重组TRAIL与亚毒性浓度的CDDP联合使用,对肺腺癌A549细胞生长抑制率和凋亡率的影响。结果重组TRAIL对A549细胞生长有明显的抑制作用,TRAIL100μg·L^-1作用24h后,抑制率达到41.6%。细胞形态学观察显示,A549肺腺癌细胞经50μg·L^-1 TRAIL处理24h后,可观察到典型的细胞凋亡特点。3.3mg·L^-1的CDDP与50μg·L^-1重组TRAIL合用,A549细胞凋亡率高达75.2%。结论重组TRAIL具有明显的诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡的作用;化疗药物CDDP能加强重组TRAIL的抗肿瘤活性。     

刺梨果多糖对肺腺癌A549 细胞增殖、凋亡的作用及机制研究

探讨刺梨果多糖对肺腺癌A549 细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法 在0、2、4、6、8、 10 g·L-1 刺梨果多糖干预A549 细胞24、48、72 h 后,采用CCK-8 法检测A549 细胞增殖情况。在0、2、6、 10 g·L-1 刺梨果多糖干预A549 细胞24、48 h 后,采用细胞划痕实验测定A549 细胞的迁移情况;Transwell 实 验测定A549 细胞侵袭情况。在0、2、6、10 g·L-1 刺梨果多糖干预A549 细胞48 h 后,采用流式细胞术（PI 单 染法）测定A549 细胞周期;流式细胞术（Annexin V-FITC/PI 双染法）测定A549 细胞的凋亡情况;Real-Time PCR 法测定A549 细胞的周期、凋亡相关基因表达水平;Western Blot 法测定A549 细胞的周期、凋亡相关蛋白 表达水平。结果 （1）干预24、48、72 h 后,与对照组（0 g·L-1）比较,刺梨果多糖2、4、6、8、10 g·L-1 组的 A549 细胞生长受到显著抑制,细胞的存活率显著降低（P＜0.05,P＜0.01）,刺梨果多糖干预48 h 的IC50 值为 6.109 g·L-1,后续实验采用2、6、10 g·L-1 浓度作为刺梨果多糖低、中、高剂量。（2）干预48 h 后,与对照组比 较,刺梨果多糖2、6、10 g·L-1 组的A549 细胞迁移距离显著增加（P＜0.05,P＜0.01）,细胞侵袭数量显著减少 （P＜0.05,P＜0.01）;刺梨果多糖6、10 g·L-1 组的G0/G1 期、G2/M 期细胞比例均显著升高（P＜0.05,P＜0.01）, S 期的细胞比例显著降低（P＜0.01）;刺梨果多糖2、6、10 g·L-1组A549 细胞的G0/G1、G2/M 期相关调控因子 CDK-4、CDK-6、CyclinD1、CDK-1、CyclinB1 mRNA 及蛋白表达水平均显著下调（P＜0.05,P＜0.01）;A549 细胞的凋亡率均显著升高（P＜0.01）;凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA 表达显著上调 （P＜0.05,P＜0.01）;促凋亡Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 蛋白表达显著上调（P＜0.05,P＜0.01）, 抗凋亡Bcl-2 蛋白表达显著下调（P＜0.05,P＜0.01）。结论 刺梨果多糖能够抑制A549 细胞的增殖、迁移和 侵袭,阻滞细胞周期于G0/G1 和G2/M 期,并通过线粒体通路和死亡受体通路诱导A549 细胞凋亡。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

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??OBJECTIVE To illustrate and evaluate the properties of folate-targeted liposomes loaded with quantum dots (folate-QDs-liposomes) nanoprobes in vitro and in vivo, such as cytotoxicity, the targeting of folate-QDs-liposomes nanoprobes for tumor cells mediated by the folate-folate receptor pathway, their toxicity in vivo and so on. METHODS Firstly, the inhibitory effects of folate-QDs-liposomes on cell growth and apoptosis were investigated by MTT and flow cytometry. Secondly,the targeting of folate-QDs-liposomes for folate receptor-positive tumor cells was verified by fluorescence staining. Finally, the epidermal infiltration method was adopted to examine the toxicity and distribution in vivo. RESULTS Under the same concentration,folate-QDs-liposomes and QDs-liposomes had similar cytotoxicity, and QDs had the most obvious cytotoxicity, which verified that the cytotoxicity of QDs was significantly reduced after liposome coating. In the fluorescence experiment, it was observed that folate-QDs-liposomes targeted at Hela cells, but did not target at A549 cells. Free folic acid could block the specific binding of folate-QDs-liposomes to folate receptors on tumor cells. It was proved that folate-QDs-liposomes could enter tumor cells positively expressing folate receptors through the path of folic acid and folate receptors. In vivo, folate-QDs-liposomes nanoprobes could spread throughout the zebrafish body through the blood circulation system. They were distributed from head and excreted from the tails. CONCLUSION Folate-QDs-liposomes have potential biomedical application prospects, and can be expected to play an important role in the early detection and diagnosis of tumors.     

塔斯品碱诱导肺癌细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨塔斯品碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法:进行人肺腺癌细胞株A549细胞培养,不同浓度塔斯品碱干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,研究不同浓度塔斯品碱对其增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果:塔斯品碱可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,且呈时间剂量依赖性;FCM检测发现塔斯品碱阻滞细胞周期于S期;电镜下可见塔斯品碱能够诱导细胞出现核固缩、细胞核内染色质凝聚和凋亡小体等凋亡现象。结论:塔斯品碱有抗肿瘤和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

应用量子点纳米探针研究丹酚酸B与肿瘤细胞间的直接作用

 目的应用量子点纳米荧光探针示踪中药有效成分与细胞之间的直接作用,为该技术成为一种研究平台提供实验依据。方法丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)经1-乙基-3(3-二甲基胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐[1-ethyl-3(3-dimethylamino propyl)-carbodiimide,EDC]活化,以巯基乙胺(mercaptoethylamine,ME)为连接剂,与水溶性量子点(quantum dots,QDs)进行共价连接,将获得的QDs-SAB与肺腺癌细胞(SPCA-1)和肝癌细胞(7721)进行培育,通过QDs荧光直接观察SAB与细胞的结合情况,进而根据细胞形态观察、MTT和DNA电泳结果考察SAB是否对这些细胞有作用。结果QDs可清晰地示踪SAB与SPCA-1和7721细胞之间结合情况,通过常规方法首次证实了SAB对这两种细胞有增殖抑制作用。结论应用量子点纳米荧光探针直观发现中药有效成分与细胞之间的作用是可行的。     

番荔枝内酯对肺腺癌A549细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨番荔枝内酯 Bullatacin 诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用 MTT 法检测不同浓度（6.25、12.5、25、50、100μg/mL）Bullatacin对A549细胞的抑制增殖作用,依照MTT结果取浓度25μg/mL Bullatacin作用于A549细胞0、12、24、48 h,流式细胞仪分析其对A549细胞增殖周期的影响,观察其对细胞凋亡的干预作用。Western Blot 检测不同实验组 ERK、JNK、p38磷酸化与总蛋白的表达。结果不同浓度Bullatacin作用于A549细胞后,呈明显的剂量依赖性;25μg/mL Bullatacin能将A549细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡;与空白组比较,P-ERK、P-JNK、P-p38的蛋白表达均明显增强。结论 Bullatacin明显抑制A549细胞增殖,并诱导其凋亡,其机理与Bullatacin通过磷酸化各蛋白激酶而激活MAPK通路有关。     

白头翁汤对人肺腺癌细胞增殖及周期调控的影响

目的观察白头翁汤对人肺腺癌细胞增殖及周期阻滞、促凋亡的影响,初步探讨其抗癌作用机制。方法以人肺腺癌细胞株A549、H1975细胞为研究对象,不同浓度白头翁汤干预后,运用CCK8法检测A549、H1975细胞增殖,细胞克隆形成实验观察A549、H1975细胞克隆形成,流式细胞术检测A549细胞周期,Western blot检测A549细胞周期相关蛋白CDK1、CyclinB1和细胞凋亡相关蛋白Caspase 8、9、3及PARP、Bcl2的表达。结果与对照组比较,不同浓度白头翁汤均能抑制A549、H1975细胞增殖和细胞克隆形成,不同浓度白头翁汤G2/M期细胞比例明显增加,且将A549肺腺癌细胞周期阻滞在G2/M期,0.2mg/mL白头翁汤均明显降低CDK1、CyclinB1和Caspase8、9、3及PARP、Bcl2蛋白的表达。结论白头翁汤有促进人肺腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与其降低细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达有关。     

丫蕊花甾体皂苷YB16促进A549细胞凋亡及其机制研究

目的观察丫蕊花甾体皂苷YB16对人肺癌细胞A549凋亡的影响,并探讨其促凋亡的作用机制。方法体外培养A549细胞,给予不同浓度的YB16干预,采用MTT比色法检测A549细胞增殖;荧光显微镜观察吖啶橙(AO)、5,5′,6,6′-四氯-1,1′,3,3′-四甲基咪唑并羰花青碘化物(JC-1)染色的细胞荧光变化;流式细胞术检测碘化丙啶(PI)单染、Annexin V-FITC/PI双染、细胞线粒体膜电位(JC-1染色)的变化;采用2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)法检测细胞活性氧(ROS)量的变化,免疫印迹法(Western blotting)检测YB16对细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果丫蕊花甾体皂苷YB16显著抑制A549细胞的生长(P0.05),呈量效关系;随着药物浓度的增加,与对照组相比,细胞形态有显著变化;不同浓度YB16作用A549细胞后,细胞凋亡率上升(P0.05);细胞线粒体膜电位下降明显;细胞内ROS水平上升,具有显著性差异(P0.05);YB16作用A549细胞24 h后,抗细胞凋亡蛋白Bcl-2表达下降,促细胞凋亡蛋白Bax的表达增加,激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)表达增加(P0.05)。结论丫蕊花甾体皂苷YB16能抑制细胞增殖,降低细胞线粒体的膜电位,提升细胞ROS水平,促进细胞凋亡,具有良好的抗肿瘤活性。     

猫爪草总皂苷体外抗人非小细胞肺癌A549细胞活性研究

目的：观察猫爪草总皂苷体外对人非小细胞肺癌A549细胞活性的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法：采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法和集落形成实验观察猫爪草总皂苷对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对A549细胞凋亡和周期的影响。结果：猫爪草总皂苷对A549细胞增殖和集落形成均有较好的抑制作用,呈现较好的量效关系,可促进A549细胞的早期凋亡,细胞周期出现G0/G1期的阻滞。结论：猫爪草总皂苷能较好的抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导凋亡、G0/G1期阻滞有关。     

姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法：采用MTT法检测姜黄素对A549细胞存活率的影响。运用吖啶橙染色方法,观察细胞形态变化。利用TUNEL染色,检测DNA断裂情况。采用Western blot技术,检测P53蛋白表达变化。结果：姜黄素显著抑制A549细胞增殖。吖啶橙和TUNEL染色显示姜黄素可以诱导A549细胞凋亡。Western blot结果显示姜黄素提高了A549细胞中P53蛋白的表达。结论：姜黄素通过激活P53蛋白,抑制A549细胞增殖和诱导A549细胞凋亡。     

仙慈丹有效部位对人肺癌细胞A549增殖的抑制作用

目的:探讨仙慈丹(XCD)有效部位对肺癌细胞A549增殖抑制作用及其作用机制.方法:XCD有效部位为XCD水提滤液通过AB-8型大孔树脂柱收集80％乙醇洗脱液所得,得率为0.90％.体外培养A549细胞至对数期,分别以质量浓度为5,10,15,25,50,100,200 mg·L-1的仙慈丹有效部位作用,应用MTT法测定其对A549细胞的抑制率,进而求出半数抑制浓度(IC50).运用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术及PI单染流式细胞术测定XCD有效部位对A549细胞凋亡及周期的影响.结果:通过MTT实验,经过统计计算得出XCD有效部位在对A549作用24,48,72 h后的IC50分别为136.550,56.671,55.322 mg·L-1;通过流式细胞仪测定XCD作用下A549在24,48,72 h的凋亡率分别为(17.98 ±0.11)％,(23.34 ±0.23)％,(29.54±0.78)％;XCD作用A549细胞24 h后,细胞周期被阻滞在S期,在48 h后细胞周期被阻滞在G0/G1期.结论:XCD有效部位对A549细胞增殖抑制作用明显,通过诱导肿瘤细胞凋亡,同时调节细胞周期抑制A549细胞生长.