冬虫夏草干预肾小球硬化进展的实验研究

目的:用冬虫夏草对进行性肾小球硬化大鼠模型干预治疗,观察其对细胞外基质的影响并探讨其作用机制。方法:实验大鼠随机分为三组。模型组、冬虫夏草组分别行5/6肾切除制备进行性肾小球硬化模型,每天灌胃给予冬虫夏草(2.5 g/kg)水提取液,进行干预治疗;模型组和正常对照组给予等量的自来水。末次术后4周、9周分别测定大鼠24 h尿蛋白定量;观察肾脏病理变化,用免疫组织化学检测肾组织胶原Ⅳ、纤维连接蛋白(FN)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)。结果:冬虫夏草能降低肾小球硬化指数,减少胶原Ⅳ、FN表达;减少尿蛋白排泄;增加肾组织MMP-2表达,减少TIMP-1和TIMP-2的表达。结论:冬虫夏草能够减少5/6肾切除大鼠尿蛋白排泄量;调节MMP/TIMP之间的平衡;减轻肾小球硬化大鼠细胞外基质的积聚,延缓肾小球硬化的进展。     

扶正化瘀方对纤维化肝脏MMP-2活性及Ⅳ型胶原表达的影响

目的:探讨扶正化瘀方影响基质金属蛋白酶-2活性和Ⅳ型胶原蛋白表达的抗肝纤维化作用机制。方法:二甲基亚硝胺腹腔注射4周诱导大鼠肝纤维化模型,成模后治疗组以扶正化瘀方灌胃4周。检测血清肝功能、肝脏病理学、羟脯氨酸含量;免疫组织化学方法检测肝组织Ⅳ型胶原表达;Western印迹法分析肝组织Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶-2/9(matrix-metalloproteinases-2,MMP-2/9)、金属蛋白酶组织抑制物-2(tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2)表达水平;明胶酶图法检测肝组织MMP-2/9活性。结果:与正常大鼠比较,模型大鼠血清肝功能异常、肝组织炎症明显、肝组织Ⅳ型胶原表达与沉积增加,TIMP-2蛋白表达增加,MMP-2蛋白表达变化不明显,而MMP-2活性水平明显上升。扶正化瘀方显著减轻肝脏炎症和胶原沉积;减少Ⅳ型胶原蛋白表达和沉积;降低TIMP-2蛋白表达;抑制MMP-2活性。结论:扶正化瘀方可通过抑制肝脏Ⅳ型胶原病理增生沉积、下调MMP-2活性水平、减轻肝组织的破坏与重构而发挥抗肝纤维化的作用。     

丹酚酸B盐对心肌肥厚大鼠心肌基膜型胶原酶活性及其调节因子的影响

目的:探讨丹酚酸B盐(SA-B)影响纤维化心脏基膜型基质金属蛋白酶及其抑制物的抗心肌纤维化作用机制.方法:腹主动脉不完全结扎法制备大鼠心肌肥厚模型.大鼠随机分为假手术组、模型组、丹酚酸B盐低、中、高剂量组( 10,20,40mg· kg-1·d-1)和卡托普利组(40 mg· kg-1·d-1).HE和天狼星红胶原染色法观察左心室组织病理和胶原沉积改变;Western印迹法分析心肌组织Ⅳ型胶原,MMP-2/9及TIMP-2蛋白表达;明胶酶谱法测定MMP-2/9活性.结果:SA-B干预组较模型组大鼠心肌炎性减轻,胶原沉积减少,心肌组织Hyp含量显著下降,纤维化程度明显减轻;模型大鼠心肌组织Ⅳ型胶原,MMP-2/9,TIMP-2蛋白表达以及MMP-2活性明显升高,SA-B干预组降低Ⅳ型胶原,MMP-2/9和TIMP-2蛋白表达,降低MMP-2活性,中、高剂量组作用更为明显.结论:SA-B抗心肌纤维化的作用机制之一是抑制TIMP-2的表达,降低基底膜胶原酶的表达及活性,减轻正常基底膜胶原的破坏.     

中药对肾小球硬化大鼠MMP-9、TIMP-1及TGF-β1mRNA表达的影响

目的 探讨肾络癥积中药复方对肾小球硬化大鼠细胞外基质降解调控系统MMP-9、TIMP-1及TGF-β1mRNA的影响.方法 采用切除单侧肾脏同时尾静脉注射阿霉素的方法,建立肾小球硬化大鼠模型,检测各组大鼠24小时尿蛋白定量,ELISA法检测基质金属蛋白酶(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)的表达,计算M...     

金匮肾气丸对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的影响

目的:研究金匮肾气丸对腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。方法:96只SD大鼠随机分成正常组、模型组、氯沙坦组(5 mg·kg-1)和金匮肾气丸高、中、低剂量组(2.4,1.2,0.6 g·kg-1),采用腺嘌呤灌胃(200 mg·kg~(-1)·d~(-1))诱导肾间质纤维化大鼠模型,2 h后灌胃给予相应药物,造模连续9周;给药连续16周。采用生化法测定血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松(Masson)染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠肾脏组组转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),钙黏蛋白(E-cadherin),Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ),Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),基质金属蛋白酶-2(MMP-2),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)mRNA的表达;以免疫组化法测定大鼠肾脏TGF-β1,α-SMA和E-cadherin的表达。结果:与正常组比较,模型组中SCr和BUN显著升高(P0.01),给予金匮肾气丸干预后SCr和BUN水平降低(P0.05);HE染色和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组肾间质损伤严重且肾间质胶原物质大量沉积,给予金匮肾气丸干预后肾间质小管损伤减轻,肾间质胶原物质沉积减少;Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组TGF-β1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA表达上调(P0.05),模型组E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA表达下调(P0.05),给予金匮肾气丸干预后E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA的表达上调(P0.05),TGF-β1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA的表达明显下调(P0.05);免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组E-cadherin蛋白表达下调(P0.01),TGF-β1和α-SMA蛋白表达上调,金匮肾气丸干预后E-cadherin蛋白表达上调(P0.05),TGF-β1和α-SMA蛋白表达下调(P0.05)。结论:金匮肾气丸可有效改善肾间质纤维化并对肾脏有一定的保护作用,其改善肾间质纤维化的机制可能与降低基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1,TIMP-2)活性,TGF-β1蛋白表达,α-SMA蛋白表达,升高基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-2,MMP-9)活性,E-cadherin蛋白表达,从而减少胶原物质的沉积有关。     

七箭方提取物防治糖尿病肾病的机制研究

目的:检测糖尿病大鼠肾脏组织中的纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶(MMP)-2/9、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1/2,以阐明七箭方提取物防治糖尿病肾病的机制。方法:链脲佐菌素腹腔注射造模,七箭方提取物及卡托普利灌胃16周后,免疫组化法、Elisa法检测正常组、模型组、七箭方提取物组、卡托普利组大鼠肾脏组中的FN、Ⅳ型胶原、MMP-2/9、TIMP-1/2。结果:Elisa结果显示模型组Ⅳ型胶原、TIMP-1/2表达升高,MMP-2/9表达降低;七箭方提取物组IV型胶原、TIMP-1/2降低,MMP-2表达升高;卡托普利组IV型胶原、TIMP-1降低。免疫组化结果显示模型组Ⅳ型胶原、TIMP-2表达升高,MMP-2表达降低;而七箭方提取物组与卡托普利组Ⅳ型胶原、TIMP-2表达降低,MMP-2表达升高。结论:七箭方提取物可通过影响Ⅳ型胶原、TIMP-1/2、MMP-2的表达防治糖尿病肾病。     

稳肾颗粒对肾间质纤维化大鼠MMP-9/TIMP-1比值及Ets-1表达的影响

目的观察稳肾颗粒对肾间质纤维化大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)比值及逆转录病毒E26转录因子1(Ets-1)表达的影响,初步探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法将30只大鼠随机分为正常组、模型组、治疗A组和治疗B组。除正常组外,其余组均采用腺嘌呤干预建立肾间质纤维化大鼠模型,造模第22天起,治疗B组给予稳肾颗粒干预直至第42天;造模第29天起,治疗A组给予稳肾颗粒干预直到第42天。第43天处死大鼠,留取标本观察病理。Real time-PCR法检测肾组织中Ⅳ型胶原(ColⅣ)、MMP-9、TIMP-1和Ets-1 mRNA表达量。结果稳肾颗粒可以改善模型鼠肾功能,促进细胞外基质(ECM)降解,下调ColⅣ,上调MMP-9/TIMP-1比值,增加Ets-1表达。结论稳肾颗粒可能通过调节Ets-1蛋白表达而改善降解酶系统的功能紊乱,促进ECM降解,减少ECM沉积,改善肾间质纤维化。     

灵芝对糖尿病大鼠肾组织MMP-2、MMP-9和IV型胶原表达的影响

目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在糖尿病大鼠肾组织中的表达及灵芝的干预作用.方法:40只雄性SD大鼠随机分为正常时照组(C组)、糖尿病未治疗组(DM组)、糖尿病灵芝(1.2g·k-1·d-1)治疗组(GL组),用免疫组化方法(SP法)检测治疗后各组大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9及Ⅳ-C的表达,同时进行光镜、透射电镜观察各组大鼠肾皮质病理改变.结果:DM组大鼠肾小球MMP-2、MMF-9蛋白表达较C组明显降低,Ⅳ-C蛋白表达明显升高,出现糖尿病肾病典型的病理改变.GL组MMP-2、MMP-9蛋白较DM组表达明显升高,Ⅳ-C表达较DM组明显降低,病理改变好转.结论:灵芝通过上调MMP-2、MMF-9蛋白表达,减少细胞外基质Ⅳ-C积聚而对糖尿痛大鼠起到肾脏保护作用.     

灵芝对糖尿病大鼠肾组织MMP-2、MMP-9和Ⅳ型胶原表达的影响

目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在糖尿病大鼠肾组织中的表达及灵芝的干预作用.方法:40只雄性SD大鼠随机分为正常时照组(C组)、糖尿病未治疗组(DM组)、糖尿病灵芝(1.2g·k-1·d-1)治疗组(GL组),用免疫组化方法(SP法)检测治疗后各组大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9及Ⅳ-C的表达,同时进行光镜、透射电镜观察各组大鼠肾皮质病理改变.结果:DM组大鼠肾小球MMP-2、MMF-9蛋白表达较C组明显降低,Ⅳ-C蛋白表达明显升高,出现糖尿病肾病典型的病理改变.GL组MMP-2、MMP-9蛋白较DM组表达明显升高,Ⅳ-C表达较DM组明显降低,病理改变好转.结论:灵芝通过上调MMP-2、MMF-9蛋白表达,减少细胞外基质Ⅳ-C积聚而对糖尿痛大鼠起到肾脏保护作用.     

青蒿素对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制研究

目的探讨青蒿素对糖尿病大鼠肾基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及其抑制物金属蛋白酶-2组织抑制物（TIMP-2）表达的调节作用。方法将大鼠随机分为对照组（A组）、糖尿病非治疗组（B组）及糖尿病青蒿素治疗组（C组）,采用腹腔单剂量注射链脲佐菌素（STZ）65 mg/kg方法以建立糖尿病大鼠模型。C组给予青蒿素300 g/（kg·d）腹腔注射。实验进行到第3周、第6周时3组分别宰杀大鼠6只,检测肾质量/体质量、24 h尿白蛋白排泄率（UAER）及肌酐清除率（Ccr）。用免疫组化染色方法分别检测肾小球Ⅳ型胶原、TIMP-2、MMP-2和纤维连接蛋白（FN）表达情况。结果 C组大鼠Ccr、UAER、肾质量/体质量均显著低于B组（P〈0.05或0.01）。免疫组化染色证明糖尿病大鼠肾小球Ⅳ型胶原、FN和TIMP-2表达都明显上调（P〈0.05或0.01）,C组上述指标的表达都被显著抑制（P〈0.05）。MMP-2在B组大鼠肾小球的表达显著下调（P〈0.01）,C组其表达显著上调（P〈0.05）。结论青蒿素通过抑制糖尿病大鼠肾小球TIMP-2表达及增加MMP-2表达,从而保护糖尿病实验大鼠肾脏功能。     

参芪泄浊饮对腺嘌呤肾间质纤维化模型大鼠肾组织MMP-9、TIMP-1基因表达的影响

目的:观察参芪泄浊饮对慢性肾衰大鼠肾组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)基因表达的影响。方法:采用Yokozawa法复制慢性肾衰大鼠模型,随机分为参芪泄浊饮高剂量组、常规剂量组、氯沙坦组、模型组及空白组,高剂量组、常规剂量组、氯沙坦组分别予参芪泄浊饮水煎液20 m L/(kg·d)、参芪泄浊饮10 m L/(kg·d)、氯沙坦9 mg/(kg·d),模型组与空白组大鼠均予纯净水10 m L/(kg·d),连续给药8周,全部大鼠麻醉后腹腔采血,取左肾,ELLISA法测量血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、丙氨酸转氨酶(ALT)并采用荧光定量PCR检测肾脏MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达。结果:1高剂量组Scr水平明显低于常规剂量组、氯沙坦组及模型组;常规剂量组与氯沙坦组无明显差别,且均低于模型组;2高剂量组MMP-9 mRNA表达水平明显高于常规剂量组、氯沙坦组及模型组;常规剂量组与氯沙坦组无明显差别,且均高于模型组;高剂量组TIMP-1 mRNA表达水平明显低于常规剂量组、氯沙坦组及模型组;常规剂量组与氯沙坦组无明显差别,且均低于模型组;3各组ALT水平较空白组比较均无显著差别。结论:参芪泄浊饮可通过调节MMP-9及TIMP-1表达来缓解慢性肾衰肾脏功能的恶化。     

复方黑骨藤提取物对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中TNF-α、MMP-9和TIMP-1的影响

目的探讨复方黑骨藤50%乙醇提取物对类风湿性关节炎的治疗作用机理。方法构建大鼠完全弗式佐剂性(AA)关节炎模型,通过免疫组化法检测大鼠踝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的含量。结果空白对照组、阳性对照组及复方黑骨藤提取物实验组大鼠滑膜组织中TNF-α、MMP-9及TIMP-1的阳性表达均与模型对照组存在显著或极显著性差异。结论复方黑骨藤提取物能显著减轻佐剂性关节炎大鼠关节肿胀,抑制TNF-α及MMP-9的表达,增强TIMP-1的表达,调整MMP-9/TIMP-1的失衡,从而减轻关节炎的症状和软骨破坏,对实验性类风湿关节炎的滑膜增生具有显著的抑制作用。     

苦瓜提纯液对糖尿病肾病大鼠肾脏MMP-9、TIMP-1 mRNA表达的影响

目的探讨苦瓜对糖尿病肾病大鼠细胞外基质及基质金属蛋白酶9（MMP-9）、组织抑制剂1（TIMP-1）基因表达的影响。方法将60例Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组、苦瓜组及洛汀新组，采用链脲佐菌素一次性腹腔内注射法诱导糖尿病模型，造模1、5周测定各组24h尿蛋白、肾功能及血糖，5周后取各组肾组织用RT—PCR技术检测MMP-9、TIMP-1的基因表达。结果模型组较对照组肾小球MMP-9、TIMP-1 mRNA表达增加，反映肾功能的各项生化指标水平升高。苦瓜组、洛汀新组较模型组MMP-9、TIMP-1 mRNA表达减少，肾功能有所改善。结论苦瓜对糖尿病大鼠肾结构功能具有保护作用，除降低血糖外，调节肾小球MMP-9、TIMP-1表达从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。     

膈下逐瘀汤对免疫性肝纤维化大鼠肝组织MMP-9和TIMP-2表达的影响

目的:观察膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响。方法:大鼠随机分为空白对照组、膈下逐瘀汤组、猪血清组、猪血清+膈下逐瘀汤组。猪血清腹腔注射诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,同时膈下逐瘀汤灌胃给药干预。消化法检测肝组织羟脯氨酸含量,ELISA法检测肝组织MMP-9和TIMP-2蛋白含量,实时定量RT-PCR检测肝组织MMP-9和TIMP-2 mRNA表达。结果:与模型对照组比较,膈下逐瘀汤可显著降低肝组织羟脯氨酸、MMP-9及TIMP-2蛋白含量,下调肝组织MMP-9、TIMP-2 mRNA水平。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与调节MMP-9和TIMP-2的表达有关。     

妇科止血消痛颗粒对产后子宫复旧不全大鼠模型子宫MMP-9、TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察妇科止血消痛颗粒对产后子宫复旧不全大鼠子宫组织基质金属蛋白-9（MMP-9）、组织金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）表达的影响,探讨妇科止血消痛颗粒治疗产后子宫复旧不全的机制。方法建立大鼠产后子宫复旧不全病理模型,随机分为模型组、产妇康组及妇科止血消痛颗粒高、中、低剂量组。造模第1日开始各给药组分别灌胃相应药物,空白组、模型组予蒸馏水灌胃。均每日1次,连续7d。采用原位杂交法检测各组大鼠子宫组织中MMP-9、TIMP-1基因的表达水平。结果各组大鼠子宫内膜中均可检测到MMP-9和TIMP-1的杂交信号。模型组MMP-9表达强度明显超过空白组,TIMP-1表达弱于空白组。妇科止血消痛颗粒高、中、低剂量组及产妇康组,MMP-9 mRNA的表达明显降低（P〈0．05,P〈0．01）;妇科止血消痛颗粒中、低剂量组与产妇康组MMP-9 mRNA的表达强度相似,但均低于妇科止血消痛颗粒高剂量组的表达强度（P〈0．01）。妇科止血消痛颗粒高剂量组及产妇康组TIMP-1 mRNA的表达明显升高（P〈0．05）,且表达相似。结论妇科止血消痛颗粒通过抑制MMP-9的高表达,升高TIMP-1的低表达,从而发挥治疗产后子宫复旧不全的作用。     

川芎嗪对鼠骨关节炎关节软骨MMP-1、TIMP-1表达的影响

目的:观察关节内注射川芎嗪对鼠骨关节炎(Osteoarthritis,OA)模型关节软骨退变及软骨中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)表达的影响,探讨川芎嗪对OA的修复作用。方法:50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、透明质酸钠组、丹参组和川芎嗪组5组:除空白对照组外,其余四组作左侧跟腱切除建立右膝OA模型。造模后第5周开始,川芎嗪组于右膝关节内注射盐酸川芎嗪注射液作为治疗,于第12周末处死动物,取股骨外髁软骨标本,进行HE染色,光镜下观察其病理改变,以免疫组织化学法检测关节软骨中的MMP-1、TIMP-1水平。结果:川芎嗪组关节软骨退变减缓,Mankin’s评分及软骨中MMP-1的水平非常显著低于模型组(P<0.01),TIMP-1水平较模型组显著上升(P<0.01)。结论:川芎嗪能明显降低OA软骨退变的程度,明显降低OA软骨中MMP-1的水平,增加TIMP-1的水平,具有保护和修复早期OA关节软骨的作用,可延缓OA的病理过程,有可能成为防治OA的良好药物。     

莪棱胶囊防治卵巢子宫内膜异位囊肿术后复发及对在位、异位内膜组织MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA作用的研究

目的 探讨术前应用中药莪棱胶囊防治卵巢子宫内膜异位囊肿（ovarian endometriosis, EMA）术后复发的作用和机制。     

和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠MMP-9 TIMP-1基因表达的影响

目的:探讨和络泄浊方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)后大鼠肾脏组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的影响。方法:采用UUO大鼠模型,将48只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组、中药灌胃组。在术后第1天开始,中药灌胃组给予中药15mL/kg,分早晚2次灌胃,假手术组和模型组每天给予等量生理盐水灌胃。在术后3、10、20、30天每组各取4只处死,左肾组织行HE染色,评定各组大鼠肾小管间质损害程度,采用RT-PCR法检测肾脏MMP-9、TIMP-1mRNA的变化。并分析TIMP-1mRNA与肾小管间质损伤指数的相关性。结果:模型组的肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA的表达明显高于假手术组(P<0.01),中药灌胃组的肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达低于模型组(P<0.05或P<0.01)。MMP-9在模型组UUO术后明显升高,第10天时达到高峰,继之出现下降;在中药灌胃组第10天后下降幅度较小,在20天、30天时间点高于模型组(P<0.01)。结论:和络泄浊方通过调节MMP-9/TIMP-1的基因表达,促进了ECM的降解过程,从而减轻肾间质纤维化。