基于UPLC/Q-TOF-MS研究代谢综合征痰瘀互结证的物质基础

目的:采用基于超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪(UPLC/Q-TOF-MS)联用的代谢组学技术,研究代谢综合征痰瘀互结证动物模型血清中小分子代谢物的变化。方法:模型组大鼠复制成痰瘀互结证代谢综合征,运用UPLC/Q-TOF-MS技术检测空白对照组和模型组血清样本中的小分子代谢产物,对所得到的代谢指纹图谱进行判别分析,找出具有差异的特征代谢物并追溯其来源。结果:鉴定出的潜在生物标志物主要有溶血磷脂酰胆碱、苯丙氨酸、酪氨酸、十四烷酸、硬脂酸、D-葡糖酸、前列腺素B1等内源性代谢物。结论:痰瘀互结证代谢综合征的发生与糖类、脂类、氨基酸代谢紊乱有关,这些体内的小分子化合物可能是痰瘀互结证代谢综合征中医证候的物质基础。     

基于代谢组学的广陈皮治疗脾虚痰湿证大鼠模型的研究北大核心CSCD

该研究采用代谢组学方法分析广陈皮对脾虚痰湿证内源性代谢产物的影响,并探究广陈皮治疗脾虚痰湿证的相关作用机制。采用多因素造模法建立脾虚痰湿证大鼠模型。通过观察大鼠肝组织病理变化,并测定血浆中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等病理生化指标含量,初步评价广陈皮对脾虚痰湿证模型大鼠的干预作用。采用免疫组化技术检测大鼠肾AQP2、结肠AQP3、颌下腺AQP5的表达,评估陈皮对脾虚痰湿证大鼠的水通道蛋白表达作用。进一步采用UHPLC-ESI-MS/MS技术对大鼠血浆样本进行代谢轮廓分析,应用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)等多种方法进行模式识别,结合t检验和变量投影重要性(VIP)筛选差异代谢物,并基于MetaboAna-lyst 5.0进行通路分析。实验表明广陈皮可改善脾虚痰湿证大鼠肝组织病理变化,升高大鼠血浆中HDL-C水平,并降低TG、TC、LDL-C水平,增强对脾虚痰湿证大鼠肾AQP2、结肠AQP3以及颌下腺AQP5的表达。此外,UHPLC-ESI-MS/MS共筛选出脾虚痰湿证差异代谢物87个(其中39个代谢物水平明显上调升高,48个代谢物水平显著下降),差异最大的代谢物依次为甘氨酸、L-异亮氨酸、N-乙酰-L-酪氨酸、黄嘌呤、次黄嘌呤、葫芦巴碱等。差异代谢物主要富集于类固醇激素生物合成、亚油酸代谢、嘌呤代谢等通路。该研究采用代谢组学方法能区分并揭示脾虚痰湿证的特征性代谢模式,OPLS-DA判别模型的初步构建为脾虚痰湿证的中医证候辨识提供了客观辨证依据,为从小分子层面及整体水平探究中医证候的生物学基础提供思路与方法。     

代谢综合征痰浊郁阻证患者的血清代谢组学特征

目的寻找代谢综合征痰浊郁阻证患者内源性代谢物,探讨代谢综合征痰浊郁阻证血清代谢组学特征。方法收集代谢综合征患者324例,随机抽取代谢综合征痰浊郁阻证、非痰浊郁阻证患者血清样本各20例,并以健康志愿者8例为对照,运用液相色谱-质谱联用技术,检测并分离各组血清相关代谢物,采用主成分分析与偏最小二乘法判别分析进行数据处理,寻找差异性代谢产物。结果经代谢组学技术检测,代谢综合征血清相关代谢物有鞘氨醇、45-脱氢二十二碳六烯酸、尿酸等23种。代谢综合征痰浊郁阻证血清相关代谢物有磷脂(20∶4)、棕榈酰左旋肉碱、黄嘌呤、磷脂(18∶3)等27种。结论代谢综合征痰浊郁阻证和非痰浊郁阻证患者血清的代谢物存在差异,代谢综合征痰浊郁阻证血清相关代谢物27种。     

大鼠肾阳虚证的代谢组学研究

目的 利用代谢组学技术观察糖皮质激素所造的肾阳虚证大鼠模型的内源性代谢物特征.方法 将24只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和模型给药组各8只;肌注氢化可的松琥珀酸钠造模;造模成功后,给予模型给药组大鼠白附片溶液灌胃,连续14 d;末次给药24 h后取血制备血浆;采用高效液相色谱-质谱联用的代谢组学技术检测内源性代谢物.结果 正常组与模型组相比,溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)和468.4m/z的未知化合物的谱峰峰形改变较为明显.发生改变的代谢物可作为肾阳虚证的生物标志物做进一步研究.结论 从代谢组学分析中找出特异的标志性代谢产物,以利于深入研究中医证候的生物学本质.     

代谢组学研究冠心病中医分型的体内物质基础

目的：研究冠心痛不同中医证型的体内物质基础以探索中医分型的科学内涵。方法：采用基于GC～TOF／MS测定技术的代谢组学研究手段对痰阻心脉和气阴两虚型冠心病患者血浆中小分子化合物进行全面检测，利用多变量数据分析和方差分析等统计方法研究血浆内源性化合物在各组间差异。结果：代谢组学分析不但可把痰阻心脉型和气阴两虚型冠心病患者区别分开，还可以与健康组明显区分。利用PLSDA建立的痰阻心脉和气阴两虚组数学模型参数与临床中医症状分级量化指标具有显著的相关性。两证型间多个内源性代谢物的含量存在明显差异并与能量代谢、氨基酸代谢和核苷酸代谢异常相关。结论：代谢组学的整体数据和标志物信息均显示出痰阻心脉和气阴两虚型冠心病的差异，提示代谢组学所研究的体内小分子化合物可能正是中医分型的物质基础。     

代谢组学研究冠心病中医分型的体内物质基础

目的：研究冠心病不同中医证型的体内物质基础以探索中医分型的科学内涵。方法：采用基于GC-TOF/MS 测定技术的代谢组学研究手段对痰阻心脉和气阴两虚型冠心病患者血浆中小分子化合物进行全面检测，利用多变量数据分析和方差分析等统计方法研究血浆内源性化合物在各组间差异。结果：代谢组学分析不但可把痰阻心脉型和气阴两虚型冠心病患者区别分开，还可以与健康组明显区分。利用PLS_DA 建立的痰阻心脉和气阴两虚组数学模型参数与临床中医症状分级量化指标具有显著的相关性。两证型间多个内源性代谢物的含量存在明显差异并与能量代谢、氨基酸代谢和核苷酸代谢异常相关。结论：代谢组学的整体数据和标志物信息均显示出痰阻心脉和气阴两虚型冠心病的差异，提示代谢组学所研究的体内小分子化合物可能正是中医分型的物质基础     

代谢综合征178例辨证分型及相关性研究

目的:研究代谢综合征(MS)患者的中医辨证分型与体重指数、瘦素等指标的相关性。方法:收集178例代谢综合征病人的临床资料,辨证分为4种证型:气滞湿阻证、痰瘀互地证、气阴两虚证、脾肾气虚证,对相关资料进行研究。结果:气滞湿阻型及痰瘀互结型患者所占比例明显高于其他两个证型,其他两证所占比例相似。痰瘀互结证的腹围及体重指数明显高于其他三证,而气滞湿阻证又高于气阴两虚证及脾肾气虚证。气滞湿阻证和痰瘀互结证的TC、LDL-C、INS、2hINS和瘦素均明显高于其他二证。结论:气滞湿阻型及痰瘀互结型患者所占比例明显高于其他两个证型。气滞湿阻证和痰瘀互结证的胆固醇升高更为明显,胰岛素抵抗更加严重,且由脂肪细胞分泌的瘦素升高更多。     

应用代谢组学探讨脾气虚大鼠血清小分子代谢谱群特征变化

目的:运用代谢组学技术探究脾气虚模型大鼠血清小分子代谢谱群特征变化,从而探索脾气虚证的生物学本质。方法:14只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组和脾气虚证模型组各7只,模拟中医病因建立脾气虚大鼠模型。运用LC-Q/TOF-MS质谱技术对2组大鼠血清样本进行检测,通过主成分分析(PCA)、最小二乘判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘分析(OPLS-DA)比较2组大鼠血清代谢图谱,寻找差异性表达代谢物。结果:脾气虚大鼠与正常大鼠的血清代谢图谱间存在显著差异。与正常大鼠比较,脾气虚大鼠血清中葡萄糖、琥珀酸等小分子代谢物含量显著上升,雄酮、亚油酸等含量显著下降,通过OPLS-DA分析得到一些脾气虚证的潜在生物标志物。结论:脾气虚大鼠呈现出不同于健康大鼠的血清代谢谱群特征,该证型存在多种代谢通路异常,可能伴随机体能量供应障碍,也可能诱发糖尿病及心血管疾病。     

2型糖尿病血瘀证患者血浆代谢组学特征

目的探讨2型糖尿病血瘀证患者血浆代谢组学特征。方法收集血瘀证与非血瘀证2型糖尿病患者各25例,观察两组患者基本情况、血瘀证证候积分,运用核磁共振波谱技术(NMR)定量检测血浆代谢物含量,通过主成分分析方法分析造成两组患者代谢组分不同的主要因素,并以此推断两组患者可能存在差异的代谢通路。结果血瘀证2型糖尿病患者血瘀证证候积分明显高于非血瘀证(P0.05);通过NMR共检测出47种代谢物,两组患者代谢物组成有重叠,但能相互区分;血瘀证2型糖尿病患者丙酮、乙酰乙酸、α-羟基丁酸、α-羟基异戊酸、β-羟基丁酸、α-酮基异己酸盐、3-甲基-2-氧代戊酸甲酯、3-羟基异丁酸、甘氨酸水平均高于非血瘀证组(P0.05),而延胡索酸、柠檬酸、N-乙酰鸟氨酸、焦谷氨酸、蛋氨酸水平低于非血瘀证组(P0.05),其他32种代谢组分在两组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论血瘀证2型糖尿病患者可能存在更为严重的脂肪代谢、氨基酸代谢紊乱以及能量代谢障碍。     

基于代谢组学技术分析四物汤治疗原发性痛经证的作用机制

目的:从内源性代谢物的角度研究四物汤治疗原发性痛经证的作用机制。方法:构建苯甲酸雌二醇-缩宫素联用致大鼠痛经模型;采用UPLC-Q-TOF-MS技术分析痛经大鼠血浆中代谢物的指纹图谱,电喷雾正离子模式(ESI+)和负离子模式(ESI-)对样品进行检测,m/z 50~1 000,结合质谱信息和公共数据库检索对检测到的代谢物进行鉴定;运用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)筛选正常组、痛经模型组和四物汤组之间的差异代谢物;对差异代谢物进行KEGG(京都基因与基因组百科全书)代谢通路分析。结果:痛经模型大鼠中检测鉴定23种内源性代谢产物;其中痛经模型组与正常组相比,黄体酮,11-脱氧皮甾醇,牛磺熊去氧胆酸和溶血磷脂酸为差异代谢物[变量重要性投影值(VIP)1,P0.05]。四物汤组与痛经模型组相比,L-苯丙氨酸,L-酪氨酸,N-苯甲酰甘氨酸,L-蛋氨酸,11-脱氧皮甾醇和硬脂酸甘氨酰胺为差异代谢产物(VIP1,P0.05)。结论:四物汤对原发性痛经证大鼠体内差异代谢物有一定的回调作用,其作用机制主要与影响类固醇激合成、溶血磷脂酸代谢、氨基酸代谢相关。     

基于代谢组学的代谢综合征痰湿证生物标志物研究

目的寻找代谢综合征痰湿证潜在生物标志物及相关的代谢通路,探讨其内在的生物物质基础。方法运用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪(UPLC/Q-TOF-MS)联用技术检测模型组和空白组生物样本血清的代谢轨迹,采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘方判别分析(PLS-DA)寻找各组代谢物差异,筛选潜在内源性标志物。结果发现与疾病相关的代谢物变化涉及氨基酸代谢17条,脂质代谢11条,磷脂代谢7条,碳水化合物代谢6条,氧化应激损伤3条,能量代谢3条,胆汁酸代谢2条。结论代谢综合征痰湿证生物模型存在氨基酸代谢、脂质代谢、胆汁酸代谢、氧化应激、磷脂代谢、碳水化合物代谢以及能量代谢紊乱,代谢组学研究方法有助于揭示代谢综合征中医证候的微观物质基础。     

基于血清代谢组学研究苍术苷A治疗湿阻中焦大鼠作用机制

目的:研究苍术麸炒后增量成分苍术苷A对湿阻中焦大鼠血清内源性代谢物的影响,分析苍术苷A治疗湿阻中焦证的可能机制。方法:雄性SD大鼠24只,分为正常对照组、模型对照组、苍术苷A 5 mg/kg组、香砂养胃丸0.93 g/kg组各6只。正常对照组正常饲养,其余组构建湿阻中焦大鼠模型。造模成功后,各组灌胃生理盐水或相应药物。给药1 w后,检测小肠推进率并进行HE染色;检测血清中胃动素、胃泌素含量;血清衍生化处理;采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术检测血清样本。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠小肠推进能力显著受损,胃动素、胃泌素含量显著降低,炎性浸润明显(P<0.01);而苍术苷A 5 mg/kg能明显增强大鼠的小肠推进能力(P<0.05),升高胃动素、胃泌素含量,减少炎性细胞浸润(P<0.01)。模型对照组大鼠血清中13种代谢产物含量显著降低,6种代谢产物含量显著升高(P<0.05);与模型对照组相比,给予苍术苷A 5 mg/kg能明显回调9种代谢产物变化(P<0.05)。结论:苍术苷A能够显著回调湿阻中焦大鼠代谢异常,其机制可能是调节甘油酯代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等途径。该结果为进一步阐释麸炒苍术增效机制提供依据。     

慢性心力衰竭不同证型的代谢组学研究

目的研究慢性心力衰竭不同证型的代谢组学差异。探讨代谢组学方法在中医证候微观物质基础研究中的应用。方法收集慢性心力衰竭加重期和缓解期患者各10例,并选择10例健康人作为正常对照组,采集受试者血液样本,应用超高效液相色谱/串联四级杆-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF)技术,分析慢性心力衰竭不同证型患者与健康人血浆中的内源性小分子代谢物,从质谱中得到潜在生物标记物的精确分子量,并用标准品进行比对鉴定,分析慢性心力衰竭不同证型患者与健康人之间代谢途径存在的差异,探索其微观物质基础。结果与正常人比较慢性心力衰竭不同证型患者存在2-羟基丙三羧酸(柠檬酸)、丙氨酸和组胺3种差异性代谢物质,其中丙氨酸和组胺的代谢水平呈上升趋势,而2-羟基丙三羧酸(柠檬酸)的代谢水平呈下降趋势。结论慢性心力衰竭患者存在脂肪酸代谢、氨基酸代谢和组胺代谢途径的紊乱。代谢组学研究方法与中医的整体观念具有一致性,有助于揭示中医证候的微观物质基础。     

代谢综合征中医证素与血脂、BMI、腰臀比及生活质量相关性研究

目的:研究代谢综合征的中医证素特点。方法:对206例代谢综合征患者进行调查,同时检测血脂、BMI、腰臀比及生活质量评分。结果:代谢综合征基本证素为湿,痰,气滞,血瘀;肾,肝,脾;阴虚,气虚,阳虚,津亏;血脂与中医证素脾、湿、痰呈相关性,腰臀比、BMI与中医证素脾、肝、肾、痰、湿相关,生活质量量表与中医证素脾、肝、肾,气滞、血瘀,气虚、津亏、阴虚、阳虚均相关。结论:代谢综合征病位证素以脾、肝、肾有关,病性证素以痰、湿表现突出。     

"肝郁证"方证的代谢组学研究

目的 在肝郁证大鼠模型代谢组学研究基础上,进行逍遥散治疗肝郁证大鼠模型的方证代谢组学研究,探讨逍遥散治疗机制及进一步明确肝郁证的代谢组学特征.方法 24只Wistar大鼠随机分为逍遥散+模型组、逍遥散+空白组、模型组、正常对照组,每组6只.逍遥散+模型组和模型组采用慢性束缚的方法造模,逍遥散+模型组和逍遥散+空白组同时用逍遥散灌胃,第22天采血检测血浆皮质酮,运用1H NMR技术对4组大鼠血清进行代谢组学分析.结果 模型组大鼠第15天,22天体质量增长缓慢,显著低于其它三组(P均<0.01);4组血浆皮质酮存在差异(P<0.001),浓度从高到底依次为模型组、逍遥散+模型组、逍遥散+空白组和正常对照组,组间比较模型组显著高于逍遥散+模型组及其它两组(P<0.01).代谢组学分析表明,4组样本间沿第1主成分(t1)方向有明显的分组差异,其中逍遥散+空白组与正常对照组之间稍有差异,而逍遥散+模型组与正常对照组样本的差别较大,模型组与正常对照组样本的差别最大,且物质的变化大多呈单向改变.结论 逍遥散对肝郁证的治疗作用在代谢物水平并非仅仅简单的上调、下调从而中和模型造成的代谢物变化,而可能是通过对机体的整体调节发挥治疗作用.通过方证整体研究,找出随证候模型和相应方剂治疗后变化一致并趋于正常的物质,可能较好地代表证候的代谢组学特征,从而更适合于中医证候研究.     

代谢组学与中医证候标志物

中医证候与代谢组学研究技术通常先进行疾病中医辨证分型,然后通过采集证候样本或模型动物血浆、尿样品或其他体液并进行代谢产物分析,得到各自代谢产物图谱,找出特异标志性代谢产物,用生物信息学方法分析生物标志物功能,筛选、鉴定与各证型相关生物标志物群,以确定证候相关代谢谱群,探讨中医证候与代谢组学的关系。代谢组学为研究中医证候提供新思路,并从客观本质上解释二者关系,为中医药现代化搭建了重要平台。     

代谢综合征中医证型与颈动脉内-中膜厚度及血浆脂蛋白磷脂酶A2的关系研究

目的探究代谢综合征(MS)常见中医证型与颈动脉内-中膜厚度(IMT)及血浆脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)的关系,为MS中医辨证论治提供客观依据。方法选取MS患者60例作为研究组,经中医辨证分为气滞湿阻型、痰瘀互结型、气阴两虚型、脾肾气虚型4种证型,同时纳入健康体检者30人作为健康对照组,比较2组及研究组各型患者颈动脉IMT、血浆Lp-PLA2水平。结果研究组颈动脉IMT、血浆Lp-PLA2水平高于对照组(P<0.05)。研究组4种证型颈动脉IMT、血浆Lp-PLA2水平依次为:痰瘀互结型>气阴两虚型>脾肾气虚型>气滞湿阻型。痰瘀互结型、气阴两虚型颈动脉IMT高于脾肾气虚型、气滞湿阻型(P<0.05)。气阴两虚型、脾肾气虚型、气滞湿阻型血浆Lp-PLA2水平均低于痰瘀互结型(P<0.05);脾肾气虚型、气滞湿阻型血浆Lp-PLA2水平均低于气阴两虚型(P<0.05)。结论MS患者痰瘀互结型颈动脉IMT和血浆Lp-PLA2水平较高,颈动脉IMT、血浆LP-PLA2可以作为MS患者中医辨证分型的参考。     

冠心病心绞痛痰浊证、血瘀证的血浆代谢组学研究

目的:研究冠心病心绞痛痰浊痹阻证(痰浊证)、心血瘀阻证(血瘀证)患者的血浆代谢组学特征,探讨代谢组学方法在研究冠心病心绞痛中医证型中的应用。方法:对10例痰浊证患者和10例血瘀证患者的血浆样本进行氢核磁共振(1HNMR)检测。用主成分分析(PCA)与偏最小二乘判别分析(PLS-DA)处理图谱数据,研究2组血浆代谢物图谱的差异。结果:1HNMR图谱模式识别分析显示,2组血浆样本代谢物差异显著。痰浊证组乳酸含量较高,血瘀证组丙氨酸含量较高,说明2组都存在能量代谢紊乱;痰浊证组低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、脂类化合物、酮体含量均高于血瘀证组,高密度脂蛋白、不饱和脂肪酸含量均低于血瘀证组,说明痰浊证组比血瘀证组存在更严重的脂代谢紊乱;痰浊证组葡萄糖、半乳糖、N-乙酰糖蛋白含量均高于血瘀证组,说明痰浊证组比血瘀证组存在更严重的糖代谢紊乱;痰浊证组天门冬氨酸、异亮氨酸、谷氨酞胺、白蛋白赖氨酰含量均高于血瘀证组,丙氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸含量均低于血瘀证组,说明2组氨基酸代谢紊乱程度相当。结论:2组血浆样本的1HNMR代谢物图谱存在差异,能从代谢组学分析中找出特异的标志性代谢物。血浆代谢物变化能在一定程度上区分冠心病心绞痛的不同中医证型。     

高脂血症及动脉粥样硬化痰瘀演变的代谢组学研究

目的探讨痰瘀证候的动态演变、时相特点和由痰致瘀在代谢方面的变化。方法选用SPF级雄性Wistar大鼠72只，随机分为正常对照组和模型组，每组36只。以高脂饲料喂饲法复制大鼠高脂血症模型。分别于第2周、第4周和第8周腹主动脉取血，采用核磁共振波谱仪检测并进行主成分分析。结果大鼠血浆’HNMR谱的主成分分析结果显示，各组大鼠代谢谱各不相同。随着造模时间的延长，不同时点模型组大鼠的代谢谱亦各不相同，表明高脂血症前期以脂质代谢紊乱为特点，随着病程进展，参与血液凝固过程的乙酰糖蛋白的出现，说明凝血机制出现异常，同时酮体及乳酸的升高说明脂质代谢紊乱进一步加重，这与同时检测的血脂、血液流变学结果相一致。结论可能从代谢组学分析中找出痰瘀演变过程特异的标志性代谢产物，以阐释中医痰瘀证候的生物学本质。     

基于代谢组学的脾气虚证本质研究

目的：通过分析血浆小分子代谢组成分,发现脾气虚证代谢综合征组不同于其它组的血浆代谢图谱,并发现脾气虚证代谢综合征的生物标志物,从而揭示中医脾气虚证本质,为临床诊断和治疗脾气虚证提供客观依据和指导。方法：通过收集体检者的基本资料、结合代谢综合征及脾气虚证诊断标准,将受试人员分为正常对照组、代谢综合征组和脾气虚证代谢综合征组;由超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF-MS）分离血浆代谢产物。结果：3 组血浆代谢产物得到良好区分;代谢综合征组中lysoPC C16颐0、GPCho（32颐2）、GPCho（32颐1）比正常组浓度明显升高（P<0.05）;脾气虚证代谢综合征组中carnitine C8颐0、GPCho（38颐6）和分子量341.282 的未知化合物比代谢综合征组的浓度明显降低（P<0.05）。结论：脾气虚证代谢综合征组呈现出不同于正常对照组和代谢综合征组的代谢图谱;发现3 种化合物可能为代谢综合征的潜在标志物,3 种化合物可能为脾气虚证代谢综合征的潜在标志物。