一种高通量自动化血浆miRNA文库构建方法及其跨批次性能评估

 目的 建立一种适用于低起始量血浆样本的高通量(96样本/批次)、自动化miRNA文库构建方法,并系统评估该方法的可靠性与跨批次一致性。方法 基于PerkinElmer公司的NEXTFLEX^? small RNA-seq试剂盒和Sciclone^? NGSx液体工作站,建立自动化miRNA文库构建方法。制备3类血浆参考物质(分别来自健康男性、健康女性和糖尿病患者)模拟临床血浆样本,并使用自动化建库方法进行4个批次文库构建实验。从miRNA检出种类、绝对定量、不同样本间相对定量及差异表达分析等层面评估方法性能及跨批次一致性。结果 miRNA检出种类一致性：批次内和批次间并交比(Jaccard index)分别为0.61和0.62;miRNA表达水平绝对定量一致性：批次内和批次间Pearson相关系数平均值均为0.96;两个不同样本间相对定量水平在不同批次间的相关系数平均值为0.74,且超过60%的差异表达miRNA可在多个批次中检出。结论 本研究建立了一种高通量自动化血浆miRNA文库构建方法,具有良好的批次内性能和跨批次一致性,可用于大型队列血浆miRNA文库构建实验。     

代谢组学研究冠心病中医分型的体内物质基础

目的：研究冠心病不同中医证型的体内物质基础以探索中医分型的科学内涵。方法：采用基于GC-TOF/MS 测定技术的代谢组学研究手段对痰阻心脉和气阴两虚型冠心病患者血浆中小分子化合物进行全面检测,利用多变量数据分析和方差分析等统计方法研究血浆内源性化合物在各组间差异。结果：代谢组学分析不但可把痰阻心脉型和气阴两虚型冠心病患者区别分开,还可以与健康组明显区分。利用PLS_DA 建立的痰阻心脉和气阴两虚组数学模型参数与临床中医症状分级量化指标具有显著的相关性。两证型间多个内源性代谢物的含量存在明显差异并与能量代谢、氨基酸代谢和核苷酸代谢异常相关。结论：代谢组学的整体数据和标志物信息均显示出痰阻心脉和气阴两虚型冠心病的差异,提示代谢组学所研究的体内小分子化合物可能正是中医分型的物质基础     

三七总皂苷对抗H_2O_2所致大鼠脑微血管内皮细胞损伤的物质基础研究

目的研究三七总皂苷对H2O2致大鼠脑微血管内皮细胞损伤产生保护作用的物质基础。方法分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC),以MTT和LDH的释放为指标,观察三七总皂苷(TPNS)、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rd、Re和Rb1对RBMEC损伤的保护作用。结果500μmol·L-1的H2O2对原代培养的RBMEC产生明显的损伤。20～200mg·L-1的TPNS,16·0μmol·L-1的R1,37·5～75·0μmol·L-1的Rg1,8·0～16·0μmol·L-1的Rd及5·4～54·0μmol·L-1的Rb1对H2O2致RBMEC的损伤具有明显的保护作用(P<0·05或P<0·01),Re则无此作用。结论TPNS对H2O2所致原代培养的RBMEC损伤具有明显的保护作用,产生这一作用的主要物质基础可能为Rb1、Rg1和Rd。     

人血浆中伊立替康及其活性代谢物7-乙基-10羟基喜树碱浓度高效液相色谱-荧光测定方法的建立

目的:建立人血浆中伊立替康(CPT-11)及其代谢物7-乙基-10羟基喜树碱(SN-38)的浓度测定方法并进行方法学考证。方法:用Luna 5u CN100A(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,乙腈与醋酸铵缓冲溶液(50 mmol.L-1,pH4)为流动相梯度洗脱,CPT-11的检测波长为Ex/Em=368 nm/432 nm,SN-38的检测波长为Ex/Em=368 nm/535 nm。结果:CPT-11保留时间为(9.3±0.3)min,SN-38保留时间为(4.8±0.3)min。空白样品在CPT-11、SN-38及内标喜树碱出峰位置均无干扰。CPT-11在46.9～6 000.0nmol.L-1的范围内线性良好,SN-38在2.0～250.0nmol.L-1的范围内线性良好,r值均为0.998。低浓度点RSD均在20%内,其余浓度点的RSD均在15%内,准确度均在85%～115%之间。血浆样品长期冻存稳定性良好,反复冻融3次及提取后室温放置24 h条件下,样品浓度均无显著变化。结论:使用高效液相色谱-荧光检测方法简便,准确,灵敏,适用于伊立替康及其活性代谢物SN-38的血药浓度检测。     

K-Ras基因型对抗肿瘤药物临床疗效预测作用的研究进展

K-Ras蛋白是细胞膜表面的小G蛋白,能将胞外信号通过一系列信号通路转导到细胞内,参与调控细胞的生存、分化和增殖.当K-Ras的基因发生突变时,持续活化的K-Ras导致下游信号的过度激活,进而促进细胞恶性转化和抗肿瘤药物的耐药.各类型肿瘤中存在K-Ras突变的比例超过20％,在胰腺癌中高达61％.用药方案和肿瘤类型的不同,K-Ras基因突变与抗肿瘤药物临床药效之间的关系尚存在一定的争议.本文系统综述了在各类肿瘤中K-Ras基因突变与细胞毒类化疗药物、表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）单克隆抗体及EGFR酪氨酸激酶抑制药临床疗效关系的研究进展,为K-Ras突变的肿瘤患者的临床个体化用药提供参考.     

药物代谢毒性体外预测新方法的研究进展

建立一种合理、准确、快速的体外代谢致毒预测模型,在临床前预测化合物及其代谢物的毒性对于新药研发具有非常重要的意义。该文主要综述了新型的预测方法(转基因肝细胞、共培养技术、3D培养法、高通量代谢装置以及代谢灌流模型等),这些方法都已成功的应用于相关代谢物的毒性预测,为药理、毒理研究提供新思路。     

临床药学教育新模式的探索与实践

依靠复旦大学综合性大学优势,建立“2＋2＋2”本硕连读临床药学教育新模式,从办学基础、培养目标与要求、培养方式、课程建设、实习实践、教学方法、国际合作交流等方面对该模式进行探索与实践,并与美国Phann．D．教育进行比较,指出目前临床药学教育中存在的主要问题,提出改进措施,促进我国临床药学教育改革与发展。     

代谢组学研究冠心病中医分型的体内物质基础

目的：研究冠心痛不同中医证型的体内物质基础以探索中医分型的科学内涵。方法：采用基于GC～TOF／MS测定技术的代谢组学研究手段对痰阻心脉和气阴两虚型冠心病患者血浆中小分子化合物进行全面检测，利用多变量数据分析和方差分析等统计方法研究血浆内源性化合物在各组间差异。结果：代谢组学分析不但可把痰阻心脉型和气阴两虚型冠心病患者区别分开，还可以与健康组明显区分。利用PLSDA建立的痰阻心脉和气阴两虚组数学模型参数与临床中医症状分级量化指标具有显著的相关性。两证型间多个内源性代谢物的含量存在明显差异并与能量代谢、氨基酸代谢和核苷酸代谢异常相关。结论：代谢组学的整体数据和标志物信息均显示出痰阻心脉和气阴两虚型冠心病的差异，提示代谢组学所研究的体内小分子化合物可能正是中医分型的物质基础。     

三七总皂苷多效应成分整合药代动力学研究

目的:以三七总皂苷为模型药物,探讨中药多组分整合药代动力学研究新思路与方法.方法:SD大鼠分别灌胃及静脉注射刺量为300及10 mg·L-1 的三七总皂苷,LC-ESI-MS法测定三七皂苷R1、人参皂苷皂苷Rg1、Rd、Re、Rb1在大鼠血浆中的药物浓度,计算上述成分在大鼠体内的药动学参数,利用各成分曲线下面积(AU C0-∞)百分率作为自定义权重系数,计算三七总皂苷大鼠体内综合血药浓度并建立整合药动学研究模型,进一步估算三七总皂苷大鼠体内整合药动学参数.结果:灌胃给药后三七总皂苷在体内吸收迅速但二醇型和三醇型皂苷之间药动学参数差异很大.其中二醇型皂苷Rb1和Rd的t1/2远大于三醇型皂苷Rg1、Re和R1;整合药动学研究结果显示综合浓度药-时曲线符合灌胃或静脉给药的药物消除规律.三七总皂苷大鼠体内吸收迅速,灌胃和静注给药后整合药动学t1/2、AUC分别为18.88,19.15 h和25.33,84.83 mg·h·L-1.结论:基于三七总皂苷各成分曲线下面积(AUC-∞)自定义权重系数的整合药动学研究模型符合经典药代动力学模型特征,所获参数能够最大程度上表征中药的整体处置规律,为建立符合中医药特点的中药药代动力学研究提供了一种新的研究思路与技术方法.