马钱子碱对一氧化氮诱导软骨细胞凋亡的影响

目的:观察中药马钱子碱对一氧化氮(nitricoxide,NO)在体外诱导的兔软骨细胞凋亡的影响。方法:取体外培养的新西兰兔软骨细胞,分别加入硝普钠(SNP)培养12,24,48h,用透射电镜和流式细胞仪观察软骨细胞凋亡的变化,并以不同剂量马钱子碱加入NO诱导的软骨细胞凋亡体系培养24h,采用annexinV/PI方法检测凋亡情况。结果:在体外培养兔软骨细胞加入硝普钠24h,流式细胞仪检测早期凋亡率为(38.7±6.5)%。空白对照组为(2.4±1.4)%(t=10.90,P<0.01),透射电镜可见典型软骨细胞早期凋亡形态改变,并有一定时间依赖性,加入不同剂量马钱子碱,其凋亡率明显下降,并以高剂量最为显著为(2.9±1.1)%。马钱子碱高剂量组加入硝普钠后与正常软骨细胞组比较,二者凋亡率无显著差异性(t=0.51,P>0.05)。结论:硝普钠在体外能诱导软骨细胞凋亡,马钱子碱能明显降低NO诱导的软骨细胞早期凋亡,提示马钱子碱能有效治疗骨关节炎,可能与抑制软骨细胞早期凋亡有关。     

阿司匹林对兔晶体白内障形成的抑制作用

背景：研究发现晶体上皮细胞的凋亡是白内障发生的共同细胞学基础。目的：观察阿司匹林对平阳霉素诱导培养兔晶体白内障形成的抑制作用，研究阿司匹林对晶体上皮细胞凋亡的抑制作用。设计：随机对照实验设计。地点和对象：实验在江西医学院第二附属医院眼科完成，对象为健康家兔，1．5～2．5kg，雌雄不拘，由江西医学院动物室提供。干预：采用兔晶体体外培养方法，观察阿司匹林对不同培养时间(24，48，72，96h)平阳霉素诱导兔晶体混浊形成的影响。在透射电镜下观察晶体上皮细胞超微结构的改变。通过免疫组织化学S-P染色检测不同培养时间(12，2，4，36h)晶体上皮细胞Bcl-2表达的情况。主要观察指标：晶体混浊度、上皮细胞超微结构和Bcl-2表达。结果：阿司匹林可延缓和减轻平阳霉素诱导的兔晶体混浊的形成。培养24h透射电镜下平阳霉素组和平阳霉素+阿司匹林组均检测到凋亡细胞。阿司匹林+平阳霉素组和平阳霉素组Bcl-2染色的积分吸光度在12h分别为251．01&;#177;75．27和122．23&;#177;40．74(P&;lt;0．05)，在24h分别为178．63&;#177;16．84和96．15&;#177;15．76(P&;lt;0．05)，在36h分别为114．14&;#177;29．86和64．71&;#177;15．53(P&;lt;0．05)。结论：阿司匹林可抑制平阳霉素诱发的兔晶体上皮细胞凋亡，延缓和减轻平阳霉素诱导的兔白内障的发生和发展。     

碱性成纤维细胞生长因子转染兔关节软骨细胞的研究

背景：软骨细胞体外培养困难和表型难以维持是软骨组织工程研究的一大难题。目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic Fibroblast Growth Factor，bFGF)基因转染兔关节软骨细胞后对培养的关节软骨细胞形态、分裂增殖及代谢等方面的影响。设计：完全随机对照实验研究。地点和方法：实验在解放军第一军医大学热带军队卫生学系完成，对象为兔软骨细胞(3周龄新西兰新生兔购于第一军医大学实验动物中心)。干预：将bFGF基因克隆于真核表达载体pHβ0AP-1中，构建重组真核表达载体pHβ-bFGF，转染兔关节软骨细胞。G418筛选阳性克隆，检测阳性细胞bFGF基因的表达水平。测定培养软骨细胞的DNA含量、糖醛酸含量、软骨细胞增殖情况及进行细胞周期分析。主要观察指标：DNA含量、糖醛酸含量、软骨细胞增殖情况及细胞周期分析。结果：bFGF基因转染软骨细胞表型未见显著变化；bFGF基因转染组、载体对照组、空白对照组DNA含量分别为(77．37&;#177;6．21)，(40．39&;#177;4．33)，(33．77&;#177;4．25)μg／瓶(P&;lt;0．01)，糖醛酸含量分别为(308．8&;#177;10．2)，(77．9&;#177;8．7)，(80．2&;#177;10．5)μg／瓶(P&;lt;0．01)，软骨细胞G1期分别为59．3&;#177;2．1，69．5&;#177;4．0，73．1&;#177;3．9(P&;lt;0．05)。结论：bFGF转染关节软骨细胞后，可显著促进细胞分裂增殖并缩短细胞周期，为软骨组织工程研究提供新的技术路线及理论基础。     

超低频电磁场对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的:研究超低频电磁场对硝普钠诱导的SD大鼠肋骨骨骺软骨细胞凋亡的影响。方法:不同浓度硝普钠诱导软骨细胞凋亡,检测不同时间软骨细胞半数致死量(LD50)的硝普钠浓度;观察超低频电磁场对软骨细胞凋亡的影响。结果:半数软骨细胞致死的硝普钠浓度呈时间依赖性下降;经超低频电磁场和硝普钠同时作用后的细胞凋亡率明显低于单纯硝普钠作用的细胞凋亡率(P<0.05);单纯硝普钠诱导的细胞在超微结构上有典型的凋亡改变,超低频电磁场能在一定程度上恢复软骨细胞的正常结构。结论:超低频电磁场能抑制硝普钠诱导体外培养的大鼠软骨细胞的凋亡。     

不同浓度氟对兔成骨细胞细胞周期及凋亡的影响

目的：建立成骨细胞体外培养模型，并观察不同浓度的氟对成骨细胞增殖行为的影响，为氟治疗骨质疏松的研究提供实验依据。方法：用幼兔肋骨培养成骨细胞，并纯化、鉴定。用不同浓度的氟化钠处理(20，160，240，400μmol／L)，MTT法测定氟对成骨细胞增殖活性的影响：流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡的改变。结果：低浓度的氟(20μmol／L)在体外可显著促进成骨细胞增殖(作用24h后A值为：0．089&;#177;0．012，P&;lt;0．01)，不引起成骨细胞的凋亡，可使S期和G2／M期的细胞明显增多；高浓度的氟(160，240，400μmol／L)则抑制成骨细胞的增殖。(作用24h后的A值分别为：0．055&;#177;0．010，0．054&;#177;0．006，0．023&;#177;0.010，P&;lt;0．01)，引起成骨细胞的凋亡(9．53&;#177;2．10，24．43&;#177;3．03，P&;lt;0．01和32．63&;#177;1．17，P&;lt;0．05)，G2／M期细胞明显减少。结论：低浓度的氟可以促进成骨细胞的增殖；高浓度的氟抑制成骨细胞的增殖，诱导细胞的凋亡，抑制细胞由S期向G2／M期转化。低浓度的氟可用于对骨质疏松的治疗。     

吲哚美辛诱导视网膜色素上皮细胞凋亡的实验研究

背景：一些与视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞凋亡相关的疾病均与炎症刺激有关。目的：探讨用吲哚美辛诱导体外培养的人胚胎视网膜色素上皮细胞的凋亡。设计：随机对照、单盲法的前瞻性研究。地点和对象：实验在中南大学湘雅二院实验中心进行，胎儿标本来源于中南大学湘雅二院妇产科。干预：加入终浓度分别为100，200，400，600umol／L的吲哚美辛作用24h；600umol／L作用6，12，24后用透射电镜定性观察凋亡细胞，并用吖啶橙荧光染色进行定量和定性分析。主要观察指标：凋亡RPE细胞形态和数量的变化。结果：经200，400，600umol／L吲哚美辛作用24h后RPE细胞凋亡数为(2．7000&;#177;1．3375)，(5．1000&;#177;1．3703)，(6．8000&;#177;1．6865)，与对照组(0．2000&;#177;0．4216)相比，差异有显著性意义(t值分别为4．624，9．062，12．206，P&;lt;0．01)，随着吲哚美辛浓度的增加，RPE细胞凋亡数逐渐增多；600p,mol／L吲哚美辛作用12，24h后RPE细胞凋亡数为(4．4000&;#177;0．8433)，(6．4000&;#177;1．2649)，与对照组(0．2000&;#177;0．4216)相比，差异有显著性意义(t值分别为8．617，13．274，P&;lt;0．01)。结论：吲哚美辛能诱导体外培养的人胚胎RPE细胞的凋亡，并且RPE细胞的凋亡呈现出随浓度增加和时间延长凋亡细胞数明显增多。     

幼鼠持续惊厥状态脑损伤时托吡酯的神经保护作用

目的：研究托吡酯对惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法：制作毛果芸香碱惊厥持续状态动物模型，给予托毗酯干预，检测海马区神经元坏死、凋亡、凋亡蛋白表达和胶质细胞增生变化情况。结果：毛果芸香碱惊厥持续状态模型鼠病理损伤特点为神经元坏死、细胞凋亡、凋亡蛋白表达增多，胶质细胞增生。托吡酯可减少海马区细胞坏死：CA3区坏死细胞百分比由(72．1&;#177;13．4)％降至(20．6&;#177;7．2)％(P&;lt;0．05)；CA1区由(67．1&;#177;9．3)％降至(18．3&;#177;4．8)％(P&;lt;0．05)；减少细胞凋亡：CA1区单位面积凋亡细胞数由9．4&;#177;6．1降至1．7&;#177;0．8(P&;lt;0．05)；减少凋亡蛋白表达：单位面积caspase-3阳性面积由1．49&;#177;0．25降至0．71&;#177;0．12(P&;lt;0．05)；缓解胶质细胞增生：单位面积胶质细胞数由47．3&;#177;3．6降至19．5&;#177;3．9(P&;lt;0．05)。结论：托吡酯对幼鼠惊厥性神经变性，可减少神经的死亡和凋亡，缓解胶质细胞增生。     

构建体外联合培养条件下抗原诱导淋巴细胞反应的抑制模型

目的：观察在体外混合培养条件下，抗原能否诱导外周淋巴细胞反应抑制．建立体外淋巴细胞反应抑制模型。方法：实验于2003-10／2004—04在解放军第四军医大学西京医院心脏外科研究所实验室进行。取健康自愿者新鲜血液用于分离外周淋巴细胞。在体外条件下，以同种异体外周淋巴细胞分作供体和受体进行混合培养，采用四甲基偶氮唑盐比色法、电镜、姬姆萨一瑞氏染色、流式细胞仪检测对照组[D组：首次混合培养淋巴细胞(PMLC)，即受体淋巴细胞(R)+用丝裂霉素处理过的供体淋巴细胞(DBm)混合培养72h所得]，A组(PMLC+DBm)、B组(PMLC+白细胞介素2中和单抗)、C组(PMLC+DBm+白细胞介素2中和单抗)等4组淋巴细胞的活性变化、活性变化的原因及其数量的变化。结果：①4组混合培养淋巴细胞在电镜、显微镜下变化：均可见细胞质染色浓集、核固缩裂解，凋亡小体形成。②四甲基偶氮唑盐比色法检测4组细胞活性即刺激指数：B组和C组比A、D组明显减弱(3．152&;#177;0．322，1．802&;#177;0．115，4．293&;#177;0．269．3．709&;#177;0．278，P&;lt;0．05)：C组细胞活性比B组也明显减弱(P&;lt;0．05)。③流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率：单向混合淋巴细胞培养后的T淋巴细胞的凋亡率Br组和Cr组高于Dr对照组和Ar组[(11．25&;#177;0．78)％，(31．65&;#177;1．33)％。(5．95&;#177;0．24)％，(2．15&;#177;0．04)％，P&;lt;0．01]；Cr组细胞凋亡率明显高于Bf组(P&;lt;0．01)。结论：在体外混合培养条件下，实现抗原诱导外周淋巴细胞凋亡，从而构建体外淋巴细胞反应抑制模型是可行的。     

不同剂量γ射线照射对体外培养胶质瘤细胞系的影响及对神经功能的保护作用

目的：比较不同剂量γ射线对胶质瘤细胞系C6和SHG-44的影响，建立γ射线诱导胶质瘤细胞系C6和SHG-44凋亡研究的生物模型，探索γ射线照射对胶质瘤细胞周期的影响。方法：采用对数生长期的C6和SHG-44胶质瘤细胞经4，8，16，32和64Gy的γ射线照射后培养48h，用流式细胞仪进行细胞凋亡检测并分析细胞周期的改变。结果：不同剂量γ射线照射均可诱导C6和SHG-44胶质瘤细胞凋亡。C6细胞对照组、4，8，16，32和64Gy组照射后48h的凋亡百分数分别为(3．1&;#177;0.5)，(16．7&;#177;0.6)，(27．9&;#177;0.8)，(27．3&;#177;0.4)，(33．8&;#177;0.7)和(36．7&;#177;0.7)，照射组凋亡率均高于对照组(t=30．16～67．65，P&;lt;0.01)。SHG-44细胞对照组，4，8，16，32和64Gy组照射后48h的凋亡率均高于对照组(t=35．51～103．79，P&;lt;0.01)，但两组细胞的坏死比例均无明显增加(P&;gt;0.05)。SHG-44细胞对电离辐射更加敏感。两种细胞G0／G1期的细胞比例与γ射线照射剂量呈正相关；S期的细胞比例与照射剂量呈负相关。结论：以γ射线照射C6和SHG-44胶质瘤细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型，γ射线照射可引起两种胶质瘤细胞系G1期阻滞和S期延迟。     

HD02对新生大鼠海马神经干细胞增殖分化和细胞周期的影响

目的：观察HD02对新生大鼠体外培养神经干细胞(neural stem cell，NSC)增殖、分化和凋亡的影响。方法：分离、培养新生大鼠海马NSC，采用免疫荧光双标技术检测NSC增殖分化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化。结果：HD02的中低剂量组BrdU阳性细胞数、BrdU+Nestin,BrdU+NeuroD，BrdU+NF200,BrdU+GFAR，BrdU+Oli阳性细胞数和S期细胞比率明显高于空白对照组和EGB761组(P&;lt;0．01)，G0／G1期比率(51．12&;#177;3．66)％明显低于正常对照组(68．23&;#177;3．30)％；细胞凋亡率(5．18&;#177;0．80)％与EGB761(4．98&;#177;0．40)％相比差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，但却明显低于正常对照组(6．43&;#177;0．55)％(P&;lt;0．01)。结论：HD02能显著促进NSC增殖分化。其机制可能与缩短G0／G1期、减少凋亡、促进S期比率有关。     

神经生长因子对多巴胺能神经元凋亡的保护作用

目的：观察6-羟基多巴(6-OHDA)诱导PC12细胞凋亡的作用，探讨神经生长因子(NGF)对PC12细胞凋亡的保护作用。方法：将6孔培养板中的PC12细胞分别加入不同浓度的6-OHDA(0，25，50，100，150和200μmol／L)；同样6-OHDA各组，每孔均加入终浓度为100μg／L的NGF。分别干预24h后终止培养，观察PC12细胞凋亡的程度。用Hoechst33258细胞核染色法、凋亡细胞的DNA裂解分析一琼脂糖凝胶电泳、TUNEL原位凋亡检测和计算机自动图像分析等方法进行凋亡检测。结果：6-OHDA50，100，150和200μmol／L均不同程度地诱导了PC12细胞凋亡，表现剂量效应。NGF对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用[NGF组比8KNG组：细胞核面积：(56.48&;#177;3.06）比（36．19&;#177;2.15)μm^2，光密度：0.38&;#177;0．03比0．53&;#177;0.3，t=2．36、3.07、P&;lt;0．05。结论：支持6-OHDA在体外能够诱导PC12细胞凋亡的观点，并且有剂量效应。NGF对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

大鼠颈椎间盘退行性交后软骨细胞凋亡及形态学改变

背景：椎间盘软骨终板是椎间盘营养渗透的主要途径，又是维持脊柱生物力学的重要结构之一。对其重要性的认识及相关研究日益深入，但对椎间盘退行性变的确切原因仍不清楚。目的：动态观察大鼠颈部动静力失去平衡后颈椎间盘软骨细胞凋亡的形态学改变以及凋亡率。设计：采用完全随机对照设计。地点和对象：实验在上海中医药大学脊柱病研究所完成，对象为8月龄清洁级SD大鼠60只，雌雄各30只。干预：将雌雄大鼠分别按随机数字表法分为3，5，7月对照组与模型组，每组10只，雌雄各5只。取大鼠颈背部正中纵向切口，切开皮肤后，充分游离各层肌肉，横向切断深群颈夹肌和头、颈、寰最长肌，完全切除颈髂肋肌与头半棘肌，然后再依次切断C2～C7棘上和棘间韧带，建立的动静力失衡性颈椎间盘退行性变模型。主要观察指标：3，5，7月后椎间盘软骨细胞凋亡程度。结果：退行性变椎间盘内有典型凋亡的软骨细胞。与对照组比较，各个模型组软骨细胞凋亡指数明显升高(P&;lt;0．01)；模型组间比较，TUNEL法5，7月软骨细胞凋亡指数分别为36．59&;#177;5．93和36．36&;#177;5．13较3月(27．73&;#177;4．12)明显升高(P&;lt;0．01)，流式细胞仪PI法5，7月细胞凋亡指数分别为37．56&;#177;3．82和28．02&;#177;3．48较3月(21．45&;#177;2．23)明显升高(P&;lt;0．01)。结论：退行性变椎间盘软骨终板内软骨细胞凋亡数目增多，这可能是椎间盘退行性变的重要机制之一。     

钙三醇和甲状旁腺素对鼠心肌细胞凋亡的影响及机制

目的：研究甲状旁腺素(parathyroid hormone，PTH)对心肌细胞内游离钙和细胞凋亡的影响，以及钙三醇的修复作用。方法：利用培养的新生SD大鼠(n=25)心肌细胞，以F1uo-3／AM负载，通过激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙浓度([Ca^2+],)；采用透射电镜和流式细胞仪观察细胞凋亡的变化。结果：PTH1-34 0．01μmol／L和0．1μmol／L刺激7d后，心肌细胞内钙荧光强度分别为186．0&;#177;43．6，217．9&;#177;22．2，、细胞凋亡率分别为(6．97&;#177;1．00)％和(12．58&;#177;1．75)％较对照组[(77．7&;#177;19．9)％，(0．12&;#177;0．11)％]显著增加，差异有显著性意义(F=158．52,54．19．P&;lt;0．01)。若以PTH1-34 0．1 μol／L刺激，并同时加入0．001μmol／L的钙三醇干预上述指标明显降低[分别为(114．3&;#177;29．9)％，(3．43&;#177;0．40)％]，差异有显著性意义(F=158．52，54．19，P&;lt;0．01)；但同时应用0．1μmol／L钙三醇干预，则无显著改善。结论：PTH1-34可以浓度依赖性增加心肌细胞内[Ca^2+]i，诱导细胞肥大和凋亡；适宜浓度的钙三醇干预，具有修复作用。     

甘精胰岛素干预游离脂肪酸诱导RIN-m细胞凋亡的变化

目的：观察甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的β细胞(RIN—m细胞)凋亡是否具有保护作用，并与普通胰岛素及胰岛素样生长因子1的干预效果进行对比。方法：本实验于2004—05／2004—10在中山大学附属第二医院林百欣医学科学研究中心完成。RIN—m细胞被培养并常规培养传代。诱导凋亡接种于6孔板或者96孔板后常规培养2d，待细胞长至70％满左右时，吸去培养基，加入含10g／L血清白蛋白，10mL／L乙醇，20mL／L胎牛血清的培养基(正常对照组)，或者含10g／L血清白蛋白，体积分数为0．01乙醇、体积分数为0．02胎牛血清和0．3mmol／L棕榈酸的培养基(凋亡对照组)，或者含10g／L牛血清白蛋白，体积分数为0．01乙醇、体积分数为0．02胎牛血清，0．3mmol／L棕榈酸以及100nmol／L甘精胰岛素(甘精胰岛素组)或者100nmol／L普通胰岛素(普通胰岛素组)或者10nmol／L胰岛素样生长因子1组的培养基，孵育24h后，将细胞接种于6孔板，诱导细胞凋亡。采用Hoechst33342染色、流式细胞仪以及酶联免疫吸附反应方法检测各组RIN-m细胞的凋亡，吸光度值代表细胞裂解液中核小体的数量，即DNA断裂的数量。结果：0．3mmol／L棕榈酸孵育后RIN-m细胞出现核皱缩、碎裂等典型凋亡表现。①甘精胰岛素组、普通胰岛素组、胰岛素样生长因子1组亚二倍体细胞比率[(32．00&;#177;3．08)％，(35．97&;#177;3．14)％，(25．25&;#177;1．66)％]明显高于正常对照组[(3．28&;#177;1．44)％](P&;lt;0．01)；但明显低于凋亡对照组(42．10&;#177;4．24)％(P&;lt;0．01)。②甘精胰岛素组、普通胰岛素组、胰岛素样生长因子1组细胞裂解液中核小体的数量(A值)(2．372&;#177;0．21，2．758&;#177;0．20，1．704&;#177;0．16)明显高于正常对照组(0．341&;#177;0．023)(P&;lt;0．01)；但明显低于凋亡对照组(3．333&;#177;0．23)(P&;lt;0．01)。甘精胰岛素组和胰岛素样生长因子1组裂解液中核小体的数量(A值)明显低于普通胰岛素组(P&;lt;0．05)。结论：甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的B细胞凋亡具有抑制作用，该种作用强于普通胰岛素。     

乌龙丹对多梗死性痴呆模型大鼠血液黏度、内皮素及一氧化氮的影响

背景：乌龙丹是在长期临床用于缺血性脑血管病治疗中总结出来的经验方，该方以“益气健脾补肾，活血通络化痰”立法。以前的研究表明该方具有改善大脑微循环，调节神经内分泌和抗脑缺血损伤等作用。血液黏度升高，血管及神经细胞等分泌的内皮素、一氧化氮(NO)失调参与了多梗死性痴呆(multi-infarct dementia，MID)病理发展过程，且相互影响。目的：通过复制MID大鼠模型，探讨乌龙丹对MID模型大鼠血液黏度、NO及内皮素的影响。设计：以实验动物为研究对象的随机对照实验研究。单位：一所军医大学的中医系。材料：实验于2002-01／08在解放军第一军医大学中医系实验室和附属珠江医院神经内科实验室完成。选用清洁级SD大鼠雄性大鼠，体质量(270&;#177;30)g(合格证号2000337)。实验分为空白对照组、模型组、乌龙丹低剂量组、乌龙丹高剂量组。方法：在分离一侧颈内动脉后，推注1：200比例的同种属的大鼠干血悬液0．8mL制作MID大鼠模型。血液黏度测定采用锥板法，内皮素测定采用放射免疫法，NO测定采用镉还原比色法．乌龙丹的制剂采用水煮醇提法。主要观察指标：主要指标：各实验组全血黏度和血浆黏度、血浆内皮素、NO浓度。次要指标：学习记忆测试结果。结果：模型组大鼠全血黏度(mPa&;#183;s)显著升高(200s^-1:7．21&;#177;1．02：5s^-1：11．24&;#177;0．93，P&;lt;0．01），血浆内皮素(ng／L)含量(167．91&;#177;46．87，P&;lt;0．01）和内皮素／NO增高(64．94&;#177;11．14，P&;lt;0．01)，NO(μmol／L)则下降(2．60&;#177;0．43，P&;lt;0．01)；给药组大鼠全血黏度(mPa&;#183;s)与模型组比较差异有显著性意义(高剂量200s^-1：4．28&;#177;081；5s^-1:8．84&;#177;0．79．P&;lt;0.01；低剂量200s^-1：5．22&;#177;0．92，5s^-1：9．18&;#177;0．81，P&;lt;0．05)，血浆内皮素(ng／L)(高剂量120．18&;#177;34．51，P&;lt;0．01）、NO(μmol／L)含量(6．84&;#177;0．79，P&;lt;0．01)及内皮素／NO(31．26&;#177;8．41，P&;lt;0．01)与模型组比较差异均有显著性意义。结论：血液黏度升高，血管及神经细胞等分泌的内皮素、NO失调参与了MID病理发展过程，且相互影响。乌龙丹的健脾补肾、活血化痰通络对MID模型大鼠血液黏度升高、NO和内皮素分泌异常有对抗和调节作用。     

葛根素对糖尿病患者血液相关因子及血管内皮功能的影响

目的：通过观察葛根素对血内皮素、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)水平的影响，初步探讨其对糖尿病患者血管内皮的保护作用。方法：将2002-01／2004-01抚顺市中医院内分泌科收治的76例单纯糖尿病患者随机分为单纯糖尿病葛根素治疗组(给予葛根素注射，39例)，丹参对照组(给予复方丹参注射液，37例)，同时选20名糖尿病并血管病变的患者作为糖尿病并血管病变葛根素治疗组(给予葛根素注射)，选20名健康成年人作为健康对照组。葛根素治疗30d，治疗前后检测内皮素、NO，NOS水平。结果：治疗后，单纯糖尿病葛根素治疗组和糖尿病并血管病变葛根素治疗组血内皮素浓度降低，治疗前后的值分别为(107．33&;#177;29．31)，(85．04&;#177;23．62)pg／L和(119．67&;#177;30．73)，(88．12&;#177;27．29)pg／L(P&;lt;0．05)，NO，NOS上升，NO为(50．49&;#177;20．31)，(59．51&;#177;21．19)μmol／L(P&;lt;0．05)；(50．67&;#177;21．19)，(56．88&;#177;22．11)μmol／L(P&;gt;0．05)；NOS为(109．02&;#177;21．84)，(116．86&;#177;16．34)nkat／L和(118．86&;#177;23．34)，(137．19&;#177;22．84)nkat／L(P&;lt;0．05)，以糖尿病并血管病变葛根素治疗组为明显；丹参对照组与治疗前比较，血内皮素略下降(P&;gt;0．05)，血NO，NOS水平稍升高(P&;gt;0．05)。结论：葛根素通过降低内皮素浓度，升高NO，NOS水平而发挥保护糖尿病患者血管内皮的作用。     

缺血缺氧及再灌注后海马神经元损伤的时间窗特性

目的：探讨缺血缺氧及再灌注损伤后大鼠海马神经元在伤后不同时间的凋亡及死亡特性，阐明神经元损伤发生的时间窗特征。方法：实验于2004—05／06在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所进行。体外培养胚胎大鼠海马神经元，模拟临床缺血过程致神经元缺氧损伤，采用Annexin V联合PI标记和流式细胞检测技术观察伤后不同时间点的凋亡与死亡情况。结果：海马神经元缺氧损伤后，其细胞损伤的形式为凋亡和坏死同时存在；模拟缺血15，30min，1．0，1．5，2．0，2．5和3．0h，其坏死率分别为(1．37&;#177;0．12)％，(3．71&;#177;0．34)％，(16．47&;#177;1．27)％，(18．73&;#177;2．02)％，(19．77&;#177;2．32)％，(22．13&;#177;2．12)％和(28．78&;#177;2．69)％，相互间差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，各时间点的凋亡率分别为(6．23&;#177;1．67)％，(6．56&;#177;2．38)％，(6．73&;#177;2．42)％，(6．95&;#177;1．89)％，(7．16&;#177;2．82)％，(6．93&;#177;2．56)％和(7．23&;#177;2．89)％，凋亡率无明显变化(P&;gt;0．05)。各时间点再恢复糖和氧供应后至24h，海马神经元存活率进一步明显下降，坏死率进一步增多，各时间点神经元坏死率分别为(6．98&;#177;1．23)％，(8．46&;#177;1．37)％，(17．68&;#177;2．97)％，(20．79&;#177;3．16)％，(21．67&;#177;3．05)％，(35．53&;#177;3．33)％和(50．22&;#177;4．19)％，差异亦有显著性意义(P&;lt;0．05)；凋亡率亦逐渐增多，模拟缺血15，30min，1．0，1．5和2．0h时间点的再灌注24h，其神经元凋亡率分别为(11．89&;#177;2．06)％，(14．92&;#177;2．64)％，(28．67&;#177;3．05)％，(44．67&;#177;3．78)％和(61．67&;#177;4．89)％，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，但模拟缺血2．5h和3．0h时间点再灌注24h的神经元凋亡率为(27．76&;#177;3．15)％和(12．67&;#177;2．27)％，其凋亡率反而显示明显下降。结论：凋亡是延迟性神经元死亡的重要通路，脑缺血缺氧的干预治疗时间窗可以提前至2h内。     

一氧化氮对大鼠局灶性脑缺血再灌注所致神经细胞损伤的影响

目的：观察应用硝普钠和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME对大鼠局灶性脑缺血再灌注所致神经细胞损伤的影响。方法：取SD大鼠44只，按随机数字表法分为4组：假手术组，脑缺血再灌注组，脑缺血再灌注加侧脑室微量注射L-NAME组，脑缺血再灌注加侧脑室微量注射硝普钠组。用栓线法复制大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型，自颈内、外动脉分叉处起始，假手术组的尼龙栓子插入13mm，其余3组插入(18．0&;#177;0．5)mm造成大脑中动脉完全缺血30mm，缓慢拔出尼龙栓子形成再灌注状态，L-NAME组和硝普钠组侧脑室微量注射L-NAME和硝普钠进行干预，假手术组和脑缺血再灌注组侧脑室注射等量生理盐水。于再灌注术后12，24h，2，4d分别处死动物取材，紫外分光光度计检测各脑组织一氧化氮含量，免疫组化法测脑组织NOS活性，TUNEL法检测调亡细胞。结果：脑缺血再灌注急性期(术后12h)，脑组织一氧化氮含量迅速增高[(10．14&;#177;1．97)mol／g]，L-NAME明显降低脑组织一氧化氮的含量[(3．86&;#177;1．35)mol／g]，硝普钠能明显增加脑组织一氧化氮的含量[(12．46&;#177;1．57)mol／g]，SPSS10．0统计分析软件LSD法统计结果，各组间比较，F=24．07，P&;lt;0．05，有明显显著性意义。术后12h L-NAME抑制NOS的活性[(16．0&;#177;1．2)个／视野]，硝普钠组NOS的表达增强[(62．0&;#177;42)个／视野]，组间比较，F=21．3，P=0．003，有显著的统计学意义，术后24h，L-NAME进一步抑制NOS的活性，硝普钠组NOS的表达仍高，组间比较差异有显著性意义(F=16．18，P=0．023)，再灌注2d，各组间NOS的活性表达无统计学意义。再灌注2d TUNEL法显示L-NAME组调亡细胞增多，硝普钠组调亡细胞减少，组间比较差异有显著性意义(F=123，P=0．019)。结论：一氧化氮能明显抑制神经细胞的调亡。     

螺旋藻多糖对衰老小鼠肺细胞凋亡与超微结构的影响

目的：研究螺旋藻多糖(polysaccharide from spirulina platensis，PSP)对衰老模型肺细胞凋亡、超微结构的作用及作用机制。方法：实验选用2月龄健康ICR品系小鼠50只，雌雄各半。随机数字表法随机分为模型组和PSP高、中、低3个剂量组及对照组，每组10只。取2月龄小鼠在常规条件下饲养11个月，制成自然衰老模型，应用PSF20，40，80mg／kg剂量分别灌服衰老小鼠6周，借助荧光显微镜研究肺组织细胞凋亡、电子显微镜下的形态学变化。结果：衰老可诱导肺组织细胞凋亡及肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的改变，PSP可明显抑制肺组织细胞凋亡，使凋亡细胞数减少，改善肺泡上皮细胞的结构与功能。PSP明显减轻衰老引起的肺细胞凋亡，PSP高剂量组对凋亡改变相应减轻，细胞凋亡率呈下降趋势且明显[(14．2&;#177;2．24)％]，与模型组[(23．7&;#177;5．53)％]比较，差异有非常显著性意义(t=4．6721，P&;lt;0．01)；PSP中、低剂量组[(16．3&;#177;3．79)％，(19．6&;#177;4．61)％]与模型组比较，差异有显著性意义(t=3．2054，P&;lt;0．01；t=1．6219，P&;lt;0．05)；PSP高中剂量与对照组[(12．8&;#177;3．54)％]比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，PSP低剂量与对照组比较，差异有显著性意义(t=3．5193，P&;lt;0．01)。结论：螺旋藻多糖对衰老小鼠肺组织细胞的退行性变化具有改善或延缓作用。     

转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞体外构建纤维蛋白胶软骨模块

目的：观察体外构建骨髓间充质千细胞、改良纤维蛋白胶及生长因子的组织工程软骨模块的可行性。方法：实验于2004-07／12在南方医科大学附属珠江医院中心实验室进行。选取新西兰兔10只，密度梯度法分离培养兔骨髓间充质干细胞，在培养系统中加入生长因子（含10μg/L转化生长因子β1，100mol／L地塞米松，50mg／L维生素C，以及1％ITS-A。培养第2,4，6，8天采用四甲基偶氮噻唑法在酶标仪上检测吸光度值表示细胞增殖。于培养7，14d行细胞爬片甲苯胺蓝染色及Ⅱ胶原免疫组化。诱导后骨髓间充质干细胞种植于改良纤维蛋白胶支架上，加入生长因子诱导培养，于培养7，14，21d行形态组织学及透射电镜检查。结果：实验兔10只均进入实验结果分析。①四甲基偶氮噻唑法测定培养第6和8天后，实验组骨髓间充质干细胞增殖的吸收度值高于对照组（实验组：0．4554&;#177;0．0206，0．5348&;#177;0．0169；对照组：0．4270&;#177;0．0255，0．5057&;#177;0．0368，P〈0．05）。②细胞爬片甲苯胺蓝染色细胞周围有蓝色基质。Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。③诱导后骨髓间充质干细胞在改良纤维蛋白胶支架中培养，Masson染色可见胞浆及细胞周围有胶原的形成；Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。透射电镜可见细胞代谢旺盛。结论：骨髓间充质干细胞、改良纤维蛋白胶及生长因子的组织工程模块体外培养系统中，改良纤维蛋白胶支架相容性好，转化生长因子β等生长因子促进骨髓间充质干细胞在改良纤维蛋白胶支架增殖，诱导分化成软骨细胞表型。