肝内胆管癌多基因变异表型分析

目的：探讨参与肝内胆管癌发生的多基因变异谱系,为了肝内胆管癌的发生机理提供基因水平上的依据。方法：采用显微切割术从石蜡组织切片中提取DNA、聚合酶链式反应（PCR）扩增基础上DNA测序的方法,对22例手术切除的肝内胆管癌标本进行了6种肿瘤抑制基因（APC、MCC、DCC、OGG1、p53和RB1）的杂合性缺失（LOH）和Ki-ras-2癌基因点突变的发生率检测。结果7种肿瘤基因的变异率为APC（68．8％）、DCC（46．2％）、OGG1（41．7%）、p53(37.5%)、Ki-ras-2(27．3％）、RB1（22．2％）和MCC（14．3％）。结论多基因变异的协同作用在肝内胆管癌的多阶段发展发生过程中起着重要作用,其中尤以APC、DCC、OGG1、p53和Ki-ras-2构成了肝内胆管癌相关的基本基因谱系。     

胶质母细胞瘤8号、22号染色体等位基因杂合性丢失的研究

目的：寻找胶质母细胞瘤（GBM）8号，22号染色体上可能存在肿瘤抑制基因的杂合性丢失（LOH）区域。为发展和定位肿瘤抑制基因（TSG）提供线索和依据。方法：应用聚合酶链反应（PCR）方法，采用荧光标记的引物和377型DNA序列自动分析仪，分别分析了21例GBM8号，22号染色体上14个，7个微卫星多态性标记的LOH。结果：本组病例8号染色体LOH率为23．8％，在16．3％能提供信息位点检测到LOH，8P的LOH率明显高于8q，分别为23．8％，14．3％，8q上所有位点的LOH率都在15％以上，以8p22-23上D8S550和D8S549的LOH率较高，分别是27．8％，30．0％，染色体22q的LOH率为47．6％，在30．0％可提供信息位点存在LOH，以22q13.2-13.3上D22S274的LOH率最高（41．2％），结论：8号，22号染色体等位基因杂合性丢失可能在GBM的分子发病机制中发挥着重要作用。在8p22-23上D8S550和D8S549位点间区域以及22q13.2-13.3上D22S274位点所在区域可能存在多个与GBM相关的肿瘤抑制基因。     

p57^kip2在人肝细胞癌中杂和性缺失研究

【目的】研究p57kip2基因在人肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）不同阶段的杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）,以探讨HCC发生的分子生物学机制。【方法】运用PCR聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法对30例肝癌组织p57kip2基因位点上2个微卫星位点（TH01和D11S2359）进行LOH的检测。【结果】30例肝癌组织中有9例至少在1个微卫星位点（30.0%）表现出LOH,且分化好肝癌组织LOH率明显低于和分化差肝癌组织。【结论】p57kip2基因位点频繁的LOH在HCC发生中起重要作用。     

多形性脑胶质母细胞瘤中1p/19q杂合性缺失的表达及其意义

目的探讨多形性胶质母细胞瘤（GBM）中1p/19q杂合性缺失（1p/19q LOH）的表达类型及其意义。方法通过荧光原位杂交法检测29例GBM、17例间变性星形细胞瘤（AA）和12例少突星形细胞瘤（OA）中1p/19q LOH的表达及其差异。结果 GBM、AA和OA中1p/19q LOH的发生率分别为24.1%、35.3%和75.0%,其中同时发生1p和19q LOH的比率分别为13.8%、23.5%和66.7%,GBM中1p/19q LOH的发生率明显低于AA和OA（P＜0.05）。GBM的VEGF阳性表达率和Ki-67增殖指数分别为75.9%和87.66±16.21,AA为47.1%和49.57±4.73,OA为41.7%和41.62±4.25,GBM与后两者比较,均有统计学差异（均P＜0.05）。1p/19q LOH的发生率与VEGF阳性表达和Ki-67增殖指数呈负相关（均P＜0.05）。结论1p/19q LOH的表达可能有助于评估GBM患者对烷化剂类药物治疗的敏感性及其预后。     

乳腺癌组织中染色体8p的杂合性丢失

目的：探讨乳腺癌组织中8号染色体短臂杂合性丢失（LOH）的意义。方法：应用聚合酶链反应技术,检测210例乳腺癌组织中8p上9个及8q上1个座位DNA微卫星多态林记的杂合性丢失。结果：发现在8p11-21.3区域的LOH频率为35％～49％,8p23.1－ter区域的LOH频率为38％～43％,8p22的LOH频率为28％,8q上D8S285的LOH频率仅为24％。结论：研究提示在8p11-21．3及8p23．1－ter区域可能存在与乳腺癌发生发展密切相关的候选抑癌基因。     

胶质瘤中染色体9p21区域D9S319座位的杂合性缺失研究

目的：探讨染色体9p21区域D9S319座位的杂合性缺失（LOH）在胶质瘤的发生发展中的作用。方法：应用微卫星多态标记－PCR法对25例胶质瘤组织进行检测。结果：21例可提供LOH分析信息,杂合性缺失率为57％（12／21）,其中胶质母细胞瘤、间变型星形细胞瘤、星形细胞瘤分别为70％（7／10）、43％（3／7）、50％（2／4）。结论：染色体9p21区域杂合性缺失与胶质瘤发生发展密切相关,该区域可能存在抑瘤基因,抑癌基因失活将影响胶质瘤的发生发展。     

胶质母细胞瘤染色体1p36杂合性缺失的初步研究

目的探讨1p36上可能存在的与胶质母细胞瘤（GBM）发生有关的肿瘤抑制基因的缺失区域，为发现和定位肿瘤抑制基因提供线索和依据。方法运用聚合酶链反应（PCR）技术为基础的杂合性缺失分析（LOH）法对12例胶质母细胞瘤染色体1p36上12个微卫星多态标记序列作了较详细研究。结果12例胶质母细胞瘤至少有一个位点出现杂合性缺失者11例，总缺失率为91．7％（11／12），其中以D1S214-D1S2666位点间区域LOH的频率最高。结论胶质母细胞瘤染色体1p36发生高频率杂合性缺失，提示位点D1S14-D1S2666缺失区域间可能存在着与GBM发生有关的抑癌基因。     

胃癌组织p16基因微卫星DNA的不稳定性

目的：检测胃癌组织中p16基因D9s171、D9s1604微卫星位点杂合性缺失（LOH）,探讨p16基因微卫星不稳定性（MI）与胃癌发生发展的关系。方法：采用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术对20例胃癌和癌旁组织LOH进行分析。结果：癌组织D9s171和D9s1604的LOH分别为3例和10例,癌旁组织分别为2例和4例。两位点LOH发生率差异无显著性（P＞0．05）。胃癌组织较癌旁组织LOH发生率明显增高（P＜0．05）;早期胃癌与进展期胃癌两个微卫星位点LOH的发生率分别为50％（4／8）和58．3％（7／12）（P＞0．05）;两位点LOH发生存在相关性（P＜0．05）。结论：D9s171,D9s1604微卫星位点的LOH与胃癌的发生发展有关,而与癌细胞的分化程度或胃癌的临床分期无显著相关性。     

肝细胞癌患者血浆循环DNA微卫星变异的研究

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者血浆循环DNA微卫星变异的特点及其与肿瘤组织的一致性。方法 选择位于染色体8p上3个具有高度多态性的微卫星标记,对62例肝细胞癌血浆、组织标本的DNA进行了杂合性缺失（LOH）和微卫星不稳定（MSI）检测。结果 在联合检测的3个微卫星位点上,39例发生了LOH的组织标本其对应的血浆标本中有33例在相应位点检测到了相同的改变,一致性为84．6％;在19例MSI阳性的组织标本中,其对应的血浆中有14例检测到了相同的MSI,一致性为73．7％;62例HCC血浆DNA在至少一个位点的LOH阳性率（58．1％,36／62）明显高于MSI（29．0％,18／62）（P〈0．01）;HCC组织、血浆DNA在D8S277位点的MSI阳性率皆明显高于其他两个位点（P均〈0．05）。结论 HCC血浆循环DNA与肿瘤组织微卫星变异有较高的一致性变化,血浆循环DNA可以用来反映肿瘤组织的微卫星变异;LOH方式在HCC的发生发展过程中起着重要作用,MSI的作用次之;D8S277是HCC中对MSI敏感的一个检测位点。     

高加索人和日本人胰腺癌基因组杂合性缺失比较

目的研究胰腺癌细胞基因组范围内的杂合性缺失(LOH),比较高加索人和日本人的异同。方法应用高密度单核苷酸多态性芯片和分析软件,研究12种高加索人和8种日本人胰腺癌细胞株基因组范围内的LOH。结果每一种胰腺癌细胞基因组中都有不同程度的LOH,其中T3M-4细胞频率最高(54.5%);高加索人和日本人胰腺癌细胞株不同染色体臂出现LOH频率不同,高加索人中最常见的LOH是9p(12/12,100.0%),而日本人出现频率最高的是13q(7/8,87.5%)。高频率的(50%以上)共同的LOH出现在染色体臂3p,8p,9p,13q,17p,18q和22q。结论胰腺癌全基因组范围内出现多处LOH。不同种族LOH出现可能频率不同,高频率的杂合性缺失区域可能含有新抑癌基因,为今后胰腺癌的研究提供了新的线索和方向。     

胃癌粘膜基因不稳与染色体端粒长度改变的研究

目的 探讨端粒长度与微卫星不稳定（MSI）和APC/MCC及DCC基因杂合丢失（LOH）的关系。方法 采用Southern杂交检测端粒限制性片段长度;采用PCR为基础的方法对MSI、LOH和移码突变进行分析。结果 68例胃癌中,至少有1个位点发现MSI者17例（25%）。将MSI分为高频率MSI（≥2个位点）8例、低频率MSI（仅为1个位点）9例和MSI阴性51例3组。结果8例高频率MSI中检出TGF-βR Ⅱ移码突变6例,BAX移码突变3例,hMSH6移码突变2例,而低频率MSI和MSI阴性组示见有移码突变者。35例胃癌行TRF分析,其中端粒缩短20例（57.1%）,基本不变12例（34.3%）,延长3例（8.6%）。端粒长度与临床病理参数无关。DCC基因LOH与TRF缩短有关。APC和MCC基因亦有随TRF缩短而LOH率增高的倾向。TRF长度与MSI和移码突变无相关性。结论 胃癌发生涉及二条不同的分子途径。高频率MSI胃癌由于错配修复基因缺陷导致单核苷酸水平突变的积聚和高频率MSI表型,而低频率MSI和MSI阴性胃癌可能涉及LOH病理途径。端粒丢失可能参与了LOH病理途径,而与MSI途径无关。     

原发性肝癌结肠癌缺失基因杂合缺失研究

目的：了解结肠癌缺失基因（ＤＣＣ基因）在原发性肝癌发生发展中作用，方法：采用多聚酶链延伸反应－限制性片生长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法对３０例外科手术切除原肝癌标本ＤＣＣ基因杂合缺失（ＬＯＨ）进行分析，结果：２８例信息个体中检出ＬＯＨ７例，占２５．０％，ＤＣＣ基因ＬＯＨ与临床病理参数和ＨＢＶ感染无显著相关，结论：ＤＣＣ基因ＬＯＨ可能参与了原发肝癌的发生发展。     

STUDY OF LOSS OF HETEROZYGOSITY AT DCC AND APC/MCC GENETIC LOCI OF GASTRIC CANCER

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＩｎｔｈｅｃｏｕｒｓｅｏｆｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｓ,ｔｈｅｌｏｓｓｏｆｃｅｒｔａｉｎｆｒａｇｍｅｎｔｓｏｆａｓｐｅｃｉｆｉｃｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｒｅｇｉｏｎｆｒ...     

Deletion of chromosomes 9p and 17 associated with abnormal expression of p53, p16/MTS1 and p15/MTS2 gene protein in hepatocellular carcinomas

Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ (ＨＣＣ)ｒａｎｋｓｔｈｉｒｄａｍｏｎｇｔｈｅｃａｕｓｅｓｏｆｃａｎｃｅｒｍｏｒｔａｌｉｔｙｉｎＣｈｉｎａ ,ａｎｄａｂｏｕｔ4 2 5%ｏｆｔｈｅｗｏｒｌｄ’ｓｎｅｗｃａｓｅｓｏｆＨＣＣｅａｃｈｙｅａｒｏｃｃｕｒｉｎＣｈｉｎａ 1ＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃｓｔｕｄｉｅｓｐｒｏｖｉｄｅｅｖｉｄｅｎｃｅｔｈａｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｈｅｐａｔｉｔｉｓＢ (ＨＢＶ )ａｎｄ/ｏｒｈｅｐａｔｉｔｉｓＣ (ＨＣＶ ) ,ａｎｄｉｎｇｅｓｔｉｏｎｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢｃｏｎ…     

胃癌组织中抑癌基因APC／MCC杂合性缺失的研究

应用多聚酶链反应与限制性片段长度多态性分析法，对４５例手术切除胃癌组织腺癌性息肉基因／结直肠癌突变基因杂合性缺失进行分析。结果表明ＡＰＣ、ＭＣＣ基因ＬＯＨ率分别为２１．７％和３１．３％，ＡＰＣ／ＭＣＣ缺失率为３０．０％。     

抑癌基因DCC在肺癌中的表达及杂合性丢失

为探讨结肠癌制失基因与肺癌发病的关系，利用半定量的逆转录聚合酶链反应结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析了７例肺癌患者癌组织及正常肺组织中ＤＣＣ基因ｍＲＮＡ的表达，发现４例肿瘤组织中ＤＣＣ基因表达明显低于对照肺组织。     

血清肝功能指标联合检测在鉴别原发性肝癌与肝内胆管癌中的应用

目的:探讨血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)检测在鉴别原发性肝癌(HCC)及肝内胆管癌(ICC)中的应用。方法:对98例HCC患者和125例ICC患者血清ALT、AST、GGT、ALP、TBIL的水平进行检测,并对比分析。结果:ICC组患者的ALT、AST、GGT、ALP、TBIL水平均明显高于HCC组(PPPP结论:ALT、AST、GGT、ALP、TBIL在ICC组均有明显升高,对HCC及ICC的鉴别诊断有重要价值。     

Musashi1正调控肝细胞癌细胞的生长并促进其增殖

目的 Musashi1（MSI1）属于RNA结合蛋白（RBP）家族,可特异性地结合mRNA并对蛋白质的翻译起激活或抑制作用,但它在肝细胞癌（HCC）中的功能还未被深入探究。本课题主要探讨MSI1在HCC细胞生长及增殖中的作用及机制。方法 构建MSI1过表达或敲除细胞系。采用免疫组化和Western blot技术检测MSI1在HCC组织中的表达。采用MTT、流式等方法探讨过表达或沉默MSI1对HCC细胞增殖、细胞活力及细胞周期分布的影响,同时检测细胞内PCNA、Cyclin D1以及Wnt/β-catenin通路关键分子APC和β-catenin的表达。结果 MSI1在HCC组织中的表达比非肿瘤的癌旁组织高。与对照细胞相比,HepG2细胞过表达MSI1不仅显著促进了其生长（7 d时的MTT值从0.52±0.12大幅增加至1.01±0.14,P<0.01）,且处于G0/G1期的细胞比率也从（58.42±3.18）%降至（40.67±1.22）%,而S期细胞比率则从（28.51±1.93）%增加至（40.06±1.92）%（P<0.01）。与此同时,细胞PCNA和Cyclin D1蛋白的表达明显上调。反之,敲除MSI1使Huh7细胞的生长显著受抑,更多细胞停滞于G0/G1期（G0/G1期细胞比率从（43.83±1.57）%增加至（62.84±1.22）%（P<0.01）,同时细胞PCNA和Cyclin D1的表达则显著下调。MSI1的过表达可以降低Wnt/β-catenin信号通路分子APC但增加β-catenin的表达,反之MSI1的敲低却可以增加细胞内APC而降低β-catenin的表达。结论 MSI1可以通过正调控HCC细胞的生长及细胞周期的进程而加速HCC病程的进展,其作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。     

新疆哈萨克族食管癌APC抑癌基因等位基因杂合缺失和点突变研究

目的：探讨抑癌基因在哈萨克族（简称哈族）食管癌发生、发展中的作用,阐明哈族食管癌高发的机理,从分子水平提供依据。方法：应用ＰＣＲ技术并配合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析和银染的单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析法对４１ 例新疆地区原发性食管癌及正常组织中家族性结肠腺瘤样息肉易感基因（ＡＰＣ）第１１ 外显子杂合缺失（ＬＯＨ）及点突变进行检测。结果：３１ 例信息个体中１３ 例显示杂合缺失,杂合缺失率为４１．９％ ,其中哈族的杂合缺失率为５０．０％ （７／１４）,而汉族的杂合缺失率为３５．３％ （６／１７）。点突变率为２４．４％ （１０／４１）,其中哈族食管癌的点突变率为３０．０％ （６／２０）,汉族食管癌的点突变率为１９．０％ （４／２１）。结论：ＡＰＣ抑癌基因第１１ 外显子的ＬＯＨ 存在于食管癌的各个临床分期,ＬＯＨ不是癌症发生的结果,可能是癌症发生的早期因素,且与食管癌的恶性程度有关。