钙激活中性蛋白酶在肝癌细胞迁移能力中的作用

目的:观察不同转移能力肝癌细胞中钙激活中性蛋白酶(calpain)的表达情况,利用抑制剂抑制calpain活性,评价calpain对肝癌细胞迁移能力的影响.方法:用蛋白质印迹(Western blotting)检测不同转移能力肝癌细胞或肝细胞中calpain-1、calpain-2和Src的表达和酶解情况;用划痕法观察...     

依钙蛋白酶及其抑制剂的研究近况

依钙蛋白酶（Ｃａｌｐａｉｎ）作为一种钙激活中性蛋白酶,广泛地分布于绝大多数动物细胞中,最初描述为在毫摩尔钙离子存在条件下,不可逆性地激活兔骨骼肌内的磷酸激酶的一类蛋白酶［１］。而在过去的３０多年里,依钙蛋白酶越来越引起人们的重视,仅１９８１～１９９８年间因特网上有关依钙蛋白酶及其抑制剂方面的文献就多达１９００多篇。 Ｃａｌｐａｉｎ及其抑制剂的生物学特性、可能的生理功能和病理生理的作用机制的研究受到国际学术界的广泛重视。在实验性脑外伤、脑缺血、脊髓损伤等神经元的退变过程中,细胞内钙离子内稳态的破坏…     

钙激活中性蛋白酶家族潜在治疗作用的新发现

钙激活中性蛋白酶（卡配因，calpain）家族是一组与钙浓度有关的半胱氨酸蛋白酶类，它参与细胞与钙浓度有关的一些功能，如信号转导、细胞增殖和分化及细胞凋亡。在一些人类疾病中发现了钙激活中性蛋白酶活性的改变。特异性钙激活中性蛋白酶抑制剂能够治疗神经肌肉及神经退行性疾病。而钙激活中性蛋白酶活化剂可以治疗一些钙激活中性蛋白酶活性降低导致的疾病，如2型糖尿病及代谢综合征。     

钙敏感受体及钙蛋白酶在大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中的表达及其意义

目的: 探究大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中钙敏感受体及钙蛋白酶的表达变化及其意义。方法: 将原代培养的新生SD大鼠脊髓神经元随机分成4组：正常对照组、缺氧复氧组、激活组、抑制组。后3组神经元均制备缺氧复氧损伤模型,激活组加入钙敏感受体激动剂GdCl3,抑制组加入受体抑制剂NPS2390。应用Hoechst 33258染色观察各组脊髓神经元凋亡;应用免疫荧光技术分析钙敏感受体及钙蛋白酶蛋白在脊髓神经元的表达定位;采用蛋白质印迹法检测各组钙敏感受体、钙蛋白酶以及Bax蛋白的表达水平。结果： 与对照组比较,缺氧复氧组脊髓神经元凋亡增加,并且钙敏感受体、钙蛋白酶、Bax蛋白的表达明显升高（均P<0.01）;GdCl3可明显增强上述作用,而NPS2390可明显抑制上述作用。结论： 在缺氧复氧损伤过程中,脊髓神经元凋亡增加,钙敏感受体及钙蛋白酶表达增多。     

大鼠弥漫性脑损伤中基质金属蛋白酶-9通过激活钙蛋白酶导致细胞凋亡

目的 探寻弥漫性脑损伤后酶原型基质金属蛋白酶-9(pro-MMP-9)与细胞凋亡的关系及其机制.方法 84只大鼠随机分为3组;空白组(不做脑室注射)、盐水组(脑室注射生理盐水)和实验组(脑室注射基质金属蛋白酶抑制剂),分别在伤后30min、1 h、3 h、6 h、1 d、3 d和7 d处死大鼠,断头取脑.用TUNET法检测细胞凋亡,明胶酶谱法检测酶原型基质金属蛋白酶-9(pro-MMP-9)表达;酶学法测定钙蛋白酶活性.结果 pro-MMP-9在30min就有表达,1d时达到高峰,其与细胞凋亡形式相近;钙蛋白酶活性呈现单峰形式,峰值在1d.基质金属蛋白酶抑制剂可调高pro-MMP-9的表达和抑制钙蛋白酶活性(p<0.01),减少细胞凋亡(P<0.01).结论 酶原型基质金属蛋白酶-9 升高可导致细胞凋亡,激活钙蛋白酶可能是其通路之一.     

活性氧在钙蛋白酶诱导血小板GPIbα酶切中的调控作用

目的探讨活性氧在血小板酶切中的调控作用。方法健康人洗涤血小板N-乙酰半胱氨酸(NAC)、二硫苏糖醇(DTT)、钙调蛋白酶抑制剂I(CII)和钙蛋白酶抑制剂II(MDL28170)和钙离子载体(A23187)凝血酶、钙蛋白酶活化剂(dibucaine)单独或联合处理。流式细胞仪分别进行血小板内ROS水平的变化和细胞膜表面GPIbα表达量的检测。处理好的血小板进SDS-PAGE电泳,NC膜转膜,用针对GPIbα的抗体SZ-2孵育,用胶片显影结果。SPSS软件对实验数据进行统计分析,不同组之间的比较采用one-way ANOVA进行统计分析,P0.05表示有统计学差异。结果 1Dibucaine介导GPIbα酶切的同时,引起了血小板ROS水平的升高。2 DTT和NAC能够明显抑制Dibucaine诱导血小板内ROS水平,同时对Dibucaine诱导GPIbα胞外域的酶切产生抑制作用。3钙蛋白酶抑制剂显著降低A23187、凝血酶、Dibucaine诱导活性氧的产生。结论活化的血小板通过产生内源性活性氧诱导血小板GPIbα的酶切,该通路是依赖钙调蛋白酶的活化而实现的。     

钙蛋白酶在缺血性脑损伤中的作用和FNS对其活性的调节及机制的研究

为了探讨钙蛋白酶在脑缺血损伤中的作用及电刺激小脑顶核 (ＦＮＳ)对其活性的调节及其机制 ,本研究采用免疫组化、免疫电镜、ＷｅｓｔｅｒｎＥＰ迹、ＲＴ ＰＣＲ及神经病理学等方法 ,动态观察了脑缺血及再灌注后钙蛋白酶表达、转位及激活 ,Ｃａｌｐａｓ ｔａｔｉｎ(钙蛋白酶抑制蛋白 )的表达及神经病理损伤情况 ,并观察了应用ＦＮＳ后对上述指标的影响。结果显示 ,钙蛋白酶的异常激活在脑缺血及再灌注损伤中起重要作用 ;ＦＮＳ可通过促进钙蛋白酶抑制蛋白的表达 ,抑制钙蛋白酶的活性 ,在脑缺血及再灌注过程中起神经保护作用钙蛋白酶在缺血性…     

缺氧对细胞膜ABCA1降解的影响及其机制研究

摘要：目的  探讨缺氧对细胞膜三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）降解的影响及其与钙蛋白酶的相关机制。方法  肝X受体激动剂TO-901317刺激RAW264.7细胞24 h,实时定量聚合酶链反应检测ABCA1 mRNA表达水平。生物素标记法提取细胞膜蛋白,Western blot检测细胞膜ABCA1蛋白水平表达。Western blot检测在放线菌酮存在或不存在条件下,TO-901317干预的RAW264.7细胞经过12 h缺氧（1%氧气O2）处理后细胞膜ABCA1蛋白水平,Suc-LLVY-氨基虫荧光素法检测缺氧细胞内钙蛋白酶活性。RAW264.7细胞给予钙蛋白酶抑制剂ALLN干预,检测细胞膜ABCA1蛋白表达及钙蛋白酶活性。结果  TO-901317上调ABCA1 mRNA及细胞膜蛋白水平表达。无论放线菌酮存在或不存在情况下,缺氧均能降低细胞膜ABCA1蛋白水平,升高钙蛋白酶活性。钙蛋白酶抑制剂ALLN能部分逆转缺氧诱导细胞膜ABCA1蛋白水平降低。结论  缺氧可能通过增加钙蛋白酶活性,从而加速细胞膜ABCA1蛋白降解。

     

羊膜移植对急性碱烧伤角膜中MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的 :探讨羊膜移植对角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶 (MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)在小鼠角膜中的表达影响及意义。方法 :将 4 0只昆明小鼠随机分为实验组和对照组 ,采用 1mol·L-1氢氧化钠溶液烧伤小鼠角膜 ,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型 ;对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术 ;对照组不行羊膜移植。然后在羊膜移植术后第 2 ,7,14 ,2 1d处死动物。用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜烧伤后基质金属蛋白酶在角膜中的分布及其平均光度值。结果 :在对照组 ,角膜中MMP 9在第 2d出现表达 ,第 7d达高峰 ,以后逐渐降低。TIMP 1开始表达不明显 ,第 7d出现表达 ,14d达高峰 ,以后逐渐降低。羊膜移植组各时间点MMP 9表达低于对照组 ,而TIMP 1表达高于对照组。结论 :羊膜移植术可通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达平衡 ,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展。     

脑膜瘤MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达及其意义

目的 :研究基质金属蛋白酶 2和基质金属蛋白酶 9(matrixmetallo proteinase ,MMP 2、MMP 9)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制剂 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase ,TIMP 1)mRNA在脑膜瘤组织中的表达及其与肿瘤浸润性的关系。方法 :用原位杂交法检测 35例脑膜瘤组织中MMP 2、MMP 9、TIMP 1mRNA的表达。比较肿瘤浸润组与非浸润组的差异。结果 :脑浸润组MMP 2、MMP 9表达阳性率较无脑浸润组明显增高 (P <0 .0 5 ) ;MMP 2、MMP 9的表达与硬膜浸润、颅骨浸润无关 (P >0 .0 5 ) ;TIMP 1在各组肿瘤中均高表达 ,但与肿瘤浸润性无关 (P >0 .0 5 )。结论 :MMP 2、MMP 9和TIMP 1在脑膜瘤的脑浸润中起关键作用     

基质金属蛋白酶及其抑制剂在乳腺癌中的表达及意义

目的 :探讨乳腺癌组织中基质金属蛋白酶 2 ( MMP- 2 )、基质金属蛋白酶 9( MMP- 9)及金属蛋白酶 1组织抑制剂 ( TIMP- 1 )、金属蛋白酶 2组织抑制剂 ( TIMP- 2 )的表达及它们与乳腺癌生物学行为的关系。方法 :应用免疫组织化学 SP法 ,检测 49例乳腺癌、1 0例癌旁正常组织中MMP- 2、MMP- 9、TIMP- 1及 TIMP- 2的表达及分布。结果 :乳腺癌组织中 MMP- 2、MMP- 9、TIMP- 1及 TIMP- 2的表达明显高于癌旁正常组织 ,二者之间差异具有显著性 ( P<0 .0 1 ) ;乳腺癌组织中 MMP- 2、MMP- 9及 TIMP- 1主要在肿瘤细胞胞质内表达 ,而 TIMP- 2表达于瘤细胞和间质细胞胞质 ;乳腺癌组织中 MMP- 2、MMP- 9的表达与组织学分级、淋巴结转移密切相关( P<0 .0 5 ) ,能促进乳腺癌的侵袭和转移 ,而 TIMP- 1、TIMP- 2的表达与肿瘤生物学行为无相关性( P>0 .0 5 )。结论 :基质金属蛋白酶可成为判定乳腺癌生物学行为和指导临床治疗的可靠指标     

MMP-9及其抑制剂TIMP-2在非小细胞肺癌中的表达与病理特征的相关性

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)在人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与肺癌分期、分化程度和淋巴结转移等病理特征的相关性。方法通过免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌组织和癌周组织中MMP-9和TIMP-2的蛋白表达,进行统计学处理。结果 MMP-9和TIMP-2在肺癌组织中的表达强于癌周肺组织,在腺癌中的表达强于鳞癌,在合并淋巴结转移的肺癌组织中表达较高。结论 MMP-9或TIMP-2表达失衡是NSCLC发生发展的关键。     

钙蛋白酶对房颤犬心房结构及功能的影响

目的观察钙蛋白酶在心房颤动（房颤）心房结构重构和收缩功能失调中的作用。方法健康杂种犬,假手术组、对照组、抑制剂组各5只,右心耳起搏600次／min持续3周。静脉给予钙蛋白酶抑制剂（ALLM）。免疫组织化学技术观察钙蛋白酶1蛋白表达,荧光光度法测定钙蛋白酶活性;HE染色观察肌溶解程度,Western印迹技术测定心房肌肌钙蛋白Ⅰ（TnⅠ）、肌球蛋白含量。超声测定左心房容积及功能变化。结果3周后,对照组左心房肌溶解比率为（724-10）％,抑制剂组为（124-16）％,差异有统计学意义（P〈0．01）。钙蛋白酶活性与肌溶解比率呈高度正相关（rs=0．90961,P〈0．01）。抑制剂组钙蛋白酶蛋白表达（62％±12％）低于对照组（79％±18％,P〈0．01）。TnI、肌球蛋白含量在钙蛋白酶抑制剂组高于对照组（P〈0．01）。抑制剂组左心房容积及功能的变化比对照组有显著改善。结论钙蛋白酶1活性和表达增高参与了房颤犬心房肌的结构重构和收缩功能失调,为房颤结构重构机制的研究提供了新的实验依据。     

空卵泡内卵母细胞:一种存在争议的综合征

目的:评价空卵泡综合征(EFS)的病因及患病率。设计:纵向观察研究。机构:三级生育中心。患者:在2002年12月至2004年11月开始体外受精(IVF)治疗的所有患者,同时将采用供体卵母细胞IVF或参与IVF试验研究的夫妇排除在外。干预:确定EFS周期,将EFS周期的卵巢超排卵方案,卵泡数和终末卵母细胞成熟所需人绒毛膜促性腺激素(hCG)的时机与正常IVF周期进行比较。主要观察指标:穿刺卵泡数,获取卵子数,先前和将来的IVF尝试及血清激素水平。结果:在总计1849例患者中确定25例具有EFS周期。出现EFS周期的原因是终末卵母细胞成熟时hCG分泌时机不…     

PD-1在器官移植患者T细胞上的表达及其意义

目的:检测共刺激分子PD-1在应用免疫抑制剂的器官移植患者外周血单个核细胞(PBMCs)和T细胞上PD-1的表达,并对其表达的意义以及抗PD-1单克隆抗体与免疫抑制剂的协同作用进行探讨。方法:采用流式细胞分析技术,应用单标记和双标记的方法,对应用免疫抑制剂的肝移植和肾移植患者的外周血单个核细胞和T细胞上PD-1的表达进行检测。以混合淋巴试验在体外模拟移植模型,应用MTT法,观察PD-1单抗与免疫抑制剂的协同作用。结果:PD-1在应用免疫抑制剂的器官移植患者PBMCs和T细胞上有特异性高表达,环孢素A(CsA)能诱导PD-1在PBMCs上的表达,且抗PD-1单克隆抗体与CsA联用具有协同作用。结论:PD-1可作为抗移植排斥作用的免疫干预新靶点。     

MMP14在胰腺癌中的表达及其与肿瘤免疫微环境特征的相关性研究

目的 ·探究基质金属蛋白酶14(matrix metalloproteinase 14,MMP14)在胰腺癌组织中的表达及其与临床特征的相关性,并分析其与胰腺癌肿瘤免疫微环境特征的相关性.方法 ·通过GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据平台分析M...     

组织蛋白酶L及其抑制剂Cystatin C在人腹主动脉瘤中的表达

目的 研究组织蛋白酶L(Cat L)及其抑制剂Cystatin C在人腹主动脉瘤(AAA)中的表达情况,以探讨其在AAA中的作用.方法 对23例AAA患者(AAA组)和12例正常腹主动脉尸体(正常腹主动脉组)的腹主动脉血管标本行苏木精-伊红染色和免疫组化技术染色,研究组织蛋白酶L及其抑制剂Cystatin C在血管壁中的表达情况.结果 免疫组化染色可见AAA平滑肌细胞中表达的a-平滑肌肌动蛋白比正常动脉明显减少;AAA动脉壁可见所有细胞类型(平滑肌细胞、内皮细胞和巨噬细胞)均有组织蛋白酶L阳性表达,但主要聚集在巨噬细胞丰富的区域,平滑肌细胞聚集区域相对较少;正常动脉壁高表达Cystatin C,AAA动脉壁则低表达Cystatin C.AAA组平滑肌细胞中Cat L阳性细胞平均光密度值明显增高,而Cystatin C明显降低,与正常组间比较差异有显著性.结论 AAA血管壁中的Cat L表达增强,Cystatin C表达下降;组织蛋白酶L及其抑制剂Cystatin C间的失衡可导致AAA的发生与破裂.     

茵陈五苓散对梗阻性黄疸大鼠肝组织中钙蛋白酶的干预作用

目的：探索梗阻性黄疸时钙蛋白酶在大鼠肝组织中的表达变化及其意义;探讨梗阻性黄疸术后中药茵陈 五苓散对肝脏的保护作用及与钙蛋白酶表达的关系。方法：建立梗阻性黄疸SD大鼠肝损害模型,并将成年SD大鼠分 为假手术对照组(S组),梗阻性黄疸组(O组),梗阻性黄疸+中药茵陈五苓散组(OC组),梗阻性黄疸+生理盐水组(OW 组)。检测血清中TBIL,ALT,AST等生化指标含量;肝组织切片行HE染色观察肝组织的病理改变;免疫组织化学 和Western印迹测肝组织中钙蛋白酶表达变化;Real-time PCR检测大鼠肝组织钙蛋白酶基因表达量,观察梗阻性黄疸 时钙蛋白酶在大鼠肝组织中的表达变化。结果：随着造模时间的延长,钙蛋白酶蛋白及基因表达水平呈逐渐增加趋 势。梗阻性黄疸大鼠给予中药茵陈五苓散可以抑制钙蛋白酶的表达,减少因钙蛋白酶高表达引起的肝细胞损伤,改 善肝脏因梗阻引起的肝功能异常。钙蛋白酶基因表达水平与梗阻性黄疸肝损伤程度变化一致。结论：梗阻性黄疸患 者辩证使用茵陈五苓散可促进术后肝脏功能恢复,降低并发症发生率,从而为临床围手术期合理应用中药提供理论 依据。     

金属蛋白酶2组织抑制剂在乳腺癌组织中的表达

目的:探讨金属蛋白酶2组织抑制剂(TIMP-2)在乳腺癌组织中的表达特点及其与临床病理参数的关系。方法:采用免疫组织化学SP法,检测62例乳腺癌组织中TIMP-2的表达情况。结果:乳腺癌组织中TIMP-2阳性表达率为64.52%。TIMP-2阳性表达率在≤50岁年龄组(51.52%)比>50岁患者年龄组阳性率(79.31%)明显偏低(P<0.05)。浸润性导管癌的阳性表达率(71.15%)明显高于导管内癌局部浸润的阳性表达率(30.00%)(P<0.05)。无淋巴结转移组阳性率(78.38%)明显高于有淋巴结转移组(44.00%)(P<0.05)。TIMP-2阳性表达与癌的左右乳分布及临床分期没有显著性差异(P>0.05)。结论:在乳腺癌组织中TIMP-2表达降低,可能促进了乳腺癌的浸润进展及转移,金属蛋白酶抑制剂的研治将为乳腺癌的临床治疗开辟新途径。     

MMP-2和TIMP-2在大肠癌中的表达及临床意义

目的　研究基质金属蛋白酶 - 2 (MMP - 2 )和组织基质金属蛋白酶抑制剂 - 2 (TIMP - 2 )在人大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法　通过免疫组织化学的方法检测 6 0例大肠癌组织中MMP - 2和TIMP - 2的表达情况。结果　MMP - 2和TIMP - 2在大肠癌中表达的阴性率分别为 6 6 7%和 30 0 % ;MMP - 2的表达与淋巴结转移呈正相关 ,而TIMP - 2的表达则相反。结论　MMP - 2和TIMP - 2的表达与大肠癌淋巴结转移密切相关 ,可作为判断大肠癌转移的指标